一種潤膚外用製劑的製作方法
2023-07-23 18:56:51 1
專利名稱：一種潤膚外用製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及來自石斛屬植物的未確定結構的醫用配製品，具體涉及鐵皮石斛多糖的外用製劑。
背景技術：
鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是蘭科石斛屬藥用植物。現代研究證明，鐵皮石斛具有增強免疫功能、促進消化、護肝利膽、抗風溼、降低血糖血脂、抗腫瘤、保護視力、滋養肌膚和抗衰老等功效。鐵皮石斛多糖屬於活性多糖的一種，是鐵皮石斛中一種主要成分。現代醫學研究表明，鐵皮石斛多糖具有免疫調節、抗腫瘤、抗基因突變、降血壓、降血脂、降血糖、病毒、抗氧化、抗輻射、抗潰瘍和抗朽邁等功能和作用。現代生物醫學研究表明，水通道蛋白AQP3在角質形成細胞中是一個完整的跨膜蛋白通道，由於AQP3的存在，細胞才可以快速調節自身體積和內部滲透壓，而且也能轉運尿素和甘油等物質進出皮膚，因此皮膚的保水與角質細胞中AQP3基因的表達密切相關。另有林青等在闡述了水通道蛋白AQP1、AQP3、AQP4、AQP5、和AQP8與乾燥症候群發病機制有關基礎上，舉例說明了主要成分是生物鹼和多糖的石斛有增強T細胞及巨噬細胞免疫活性和免疫調節作用，可用於治療乾燥症候群(林青，張前德.中醫藥對乾燥症候群唾液腺水通道蛋白的研究進展.中華醫實踐雜誌，2009，8 (3):140-142.)。由林青等文章所報導的技術信息結合現代醫學研究結果 可見，石斛多糖可通過上調AQP3的表達到皮膚保水和滋養皮膚的作用。然而，石斛多糖是多種單糖的混合物，其藥理活性的強弱不僅與其中各種單糖的種類及其含量有關，而且與多糖的分子量也有密切的聯繫。而據現代中藥化學研究表明，鐵皮石斛多糖分子量範圍為15.7kDa 157kDa，因此，將從鐵皮石斛中分離出的多糖不加選擇地製成潤膚製劑，顯然保水效果不理想。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種潤膚外用製劑，該製劑可上調角質形成細胞中AQP3的表達量，顯著提高保水效果。本發明解決上述技術問題的方案如下所述。一種潤膚外用製劑，該製劑由有效成分和醫學上可接受的輔料組成，特徵在於，所述的有效成分是分子量為85-90KDa的鐵皮石斛多糖。更進一步地，所述的有效成分在所述外用製劑中的質量百分含量為0.01 5%。更具體地，上述潤膚外用製劑為潤膚水、潤膚乳或潤膚霜。上述的潤膚水由以下質量配比的原料組成:分子量為85_90KDa的鐵皮石斛多糖
0.01% 10%，羥甲基甘氨酸鈉0.5 5%，其餘為去離子水；上述的潤膚乳由以下質量配比的原料組成:分子量為85_90KDa的鐵皮石斛多糖0.01% 5%，聚二甲基矽氧烷1.0 15.0%，棕櫚酸乙基己酯1.0 10.0%，角鯊烷1.0
10.0%，杏仁油1.0 5.0%，蔗糖椰油酸酯1.0 10.0%，羥苯丙酯0.001 1.0%，卡波姆
0.01 1.0%，丙二醇1.0 10.0%，羥苯甲酯0.001 1.0%，甘油1.0 10.0%，乳清分離蛋白0.1 2.0%,其餘為去離子水。上述的潤膚霜由以下質量配比的原料組成:分子量為85-90KDa的鐵皮石斛多糖
0.01% 5%，二甲矽油1.0 10.0%,液體石蠟1.0 10.0%,白油1.0 10.0%,卡波姆ultra-1010.0 30.0%，甘油 1.0 5.0%，PEG_4001.0 5.0%，丁香油 0.1 3.0%，卵磷脂
1.0 5.0%，其餘為去離子水。上述組合物中有效成分為分子量為85_90KDa的鐵皮石斛多糖是由按常規方法提取得到的鐵皮石斛多糖經納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜、聚碸_Fe304磁性複合膜或陶瓷超濾膜分選獲得。由於本發明所述的有效成分是鐵皮石斛多糖中選擇性地分選出分子量為85-90KDa的一部分，它顯著提高了皮膚角質形成細胞中AQP3的表達量，更好地促進了角質形成細胞的進一步增殖，因此用其製得的潤膚外用製劑中對皮膚保水的功效有明顯改善。
圖1:各組人永生化角質形成細胞中AQP3表達的電泳圖，圖中標記a為空白對照組；標記b為添加分子量為95.3 157kDa鐵皮石斛多糖潤膚水；標記c為添加分子量為85 90kDa鐵皮石斛多糖潤膚水；標記d為添加分子量為35.3 74.4kDa鐵皮石斛多糖潤膚水；標記e為添加分子量為15.7 20kDa鐵皮石斛多糖潤膚水。圖2:各組人永生·化角質形成細胞中β-actin表達的電泳圖，圖中標記a為空白對照組；標記b為添加分子量為95.3 157kDa鐵皮石斛多糖潤膚水；標記c為添加分子量為85 90kDa鐵皮石斛多糖潤膚水；標記d為添加分子量為35.3 74.4kDa鐵皮石斛多糖潤膚水；標記e為添加分子量為15.7 20kDa鐵皮石斛多糖潤膚水。圖3有效成分在製劑組合中的含量對保水活性的影響。
具體實施例方式例I (分子量為85 90kDa鐵皮石斛多糖的製備)1.1鐵皮石斛總多糖的提取1、水提醇沉提取方法將鐵皮石斛乾燥莖粉碎，過50目，得鐵皮石斛粉末；向鐵皮石斛粉末中加入為粉末質量50倍的水，煎煮提取兩次，每次2小時；合併兩次提取液，濃縮至原體積的十分之一，向濃縮液中加入4倍體積的體積濃度為95%的乙醇，靜置過夜，離心，取下層沉澱物，冷凍乾燥後用適量的水充分溶解，加入Sevage試劑除蛋白6次，每次加入溶解液一半體積量的Sevage試劑，搖勻，靜置30min分層，收集下層水相溶液，濃縮，得到鐵皮石斛總多糖。所述的Sevage試劑是由正丁醇和氯仿按正丁醇:氯仿=3:1的體積比混合製成。2、超聲波提取方法將鐵皮石斛乾燥莖粉碎，過50目，得鐵皮石斛粉末；按1: 30的固液比往鐵皮石斛粉末中加水，於50°C下超聲提取時間1.5h ；5000r/min離心去渣，得上清液，濃縮至十分之一，加4倍體積的體積濃度為95%乙醇，靜置過夜，離心，取下層沉澱物用適量的蒸餾水溶解,加入Sevage試劑除蛋白6次,每次加入蒸懼水溶解液一半體積量的Sevage試劑,搖勻，靜置30min分層，收集下層水相溶液，濃縮，得到鐵皮石斛總多糖。所述的Sevage試劑是由正丁醇和氯仿按正丁醇:氯仿=3: I的體積比混合製成。3、酶解提取方法將鐵皮石斛乾燥莖粉碎，過50目，得鐵皮石斛粉末；將鐵皮石斛粉末混懸於10倍的石油醚中，加熱回流脫脂，過濾，收集濾渣；向濾渣中加入溫水，再緩緩加入鐵皮石斛質量
0.6%的已活化的纖維素酶液，輕輕攪拌，50°C恆溫酶解1.5h後立即升溫至90°C滅酶，迅速冷卻過濾，收集濾渣；往滅酶的濾渣中加入50倍水，在50°C溫度下浸提2h，過濾，再往所得濾洛中加入25倍水於50°C溫度下浸提2h，過濾；合併加50倍水浸提和加25倍水浸提的二次濾液，濃縮，加入無水乙醇，使體系中乙醇的體積濃度達到80%，在冰箱中靜置過夜，過濾，濾渣經真空乾燥得石斛多糖。2.2超濾膜截留分離鐵皮石斛多糖1、納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜分離將上述水提醇沉法得到的鐵皮石斛總多糖用去離子水溶解後，先用截留分子量為9萬Da的納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜來進行分離後得到透過液一和截留液Al，再用截留分子量為8萬Da的納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜對透過液一進行分離，得到透過液二和截留液BI，再用截留分子量為2萬Da的納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜對透過液二進行分離，得到透過液Dl和截留液Cl。將截留液Al、截留液B1、截留液Cl和透過液Dl進行減壓濃縮，冷凍乾燥，得4種分子質量分布範圍的鐵皮石斛多糖。將上述4種分子質量分布範圍的鐵皮石斛多糖分別進行分子量測定，其測定方法和結果如下:將sephadexGlOO裝填於1.6 x 30cm層析柱中，用雙蒸水平衡24h,流速0.2ml/min,將濃度為5mg/ml的Dextran T系列標準多糖0.1ml分別相繼上樣，用雙蒸水洗脫，每管2ml部分收集，硫酸-苯酚法顯色，合併洗脫液，求得洗脫體積(V)，以V為縱坐標，分子量的對數(1gMW)為橫坐標，繪製標準曲線，標準曲線為:1gMW=-0.0124V+1.2496(Mw為分子量；V為洗脫體積；R=0.9994)。將上述保留液Al、B1、Cl和透過液Dl分別按上述條件上柱得洗脫體積(V)，再根據V值按標準曲線，求得各多糖的分子量。按上述實驗測得，截留液Al、截留液B1、截留液Cl和透過液Dl所制的鐵皮石斛多糖的分子量依次為 95.3 157kDa、85 90kDa、35.3 74.4kDa 和 15.7 20kDa。2、聚碸-Fe304磁性複合膜分離將上述超聲波法得到的鐵皮石斛總多糖用去離子水溶解後在25°C條件下，用聚碸-Fe304磁性複合膜，改變壓力、磁場強度將膜截留分子質量調至90kDa，待穩定後進行反覆超濾30min，分別截得截留液A2和透過液一。將透過液一在同樣的條件下，改變壓力和磁場強度將膜截留分子質量調至80kDa，待穩定後進行反覆超濾30min，分別截得截留液B2和透過液二。將透過液二在同樣的條件下，改變壓力和磁場強度將膜截留分子質量調至20kDa,待穩定後進行反覆超濾30min，分別截得截留液C2和透過液D2。將截留液A2、截留液B2、截留液C2和透過液D2進行減壓濃縮,冷 凍乾燥,得4種分子質量分布範圍的鐵皮石斛多糖。
按上述納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜分離方法中分子量的測定方法測得，截留液A2、截留液B2、截留液C2和透過液D2所制的鐵皮石斛多糖的分子量依次為95.3 157kDa、85 90kDa、35.3 74.4kDa 和 15.7 20kDa。3、陶瓷膜分離將上述酶解法得到的鐵皮石斛總多糖用去離子水溶解後，用截留分子量90kDa的陶瓷膜在40°C，跨膜壓差0.20MPa、膜面流速4.5m/s的條件下過濾，分別截得截留液A3和透過液一。將透過液一在同樣的條件下，用截留分子量SOkDa的陶瓷膜截留，分別截得截留液B3和透過液二。將透過液二在同樣條件下，用截留分子量20kDa的陶瓷膜截留，分別截得截留液C3和透過液D3。將截留液A3、截留液B3、截留液C3和透過液D3進行減壓濃縮，冷凍乾燥，得4種分子質量分布範圍的鐵皮石斛多糖。按上述納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜分離方法中分子量的測定方法測得，截留液A3、截留液B3、截留液C3和透過液D3所制的鐵皮石斛多糖的分子量依次為95.3 157kDa、85 90kDa、35.3 74.4kDa 和 15.7 20kDa。例2 (有效成分分子量為85 90kDa的鐵皮石斛多糖潤膚製劑的製備)潤膚霜1.配方:鐵皮石斛多糖:例I中米用納米SiO2-聚偏氟乙烯複合膜分尚分子量為85 90kDa的鐵皮石斛多糖0.0lg油相:二甲矽油2.5g、液體石蠟3.5g、白油4g ；水相:卡波姆ultra-1019.6g、甘油 2g、PEG_4002g ；抑菌劑:丁香油0.2g;乳化劑:卵磷脂2g。2.製備方法:鐵皮石斛多糖加入到水相中後，水相和油相分別放到60°C水浴中加熱，各自混勻後，將水相慢慢倒入油相中，攪拌均勻後，用18%Na0H調pH至6.5 7.5，加水至IOOg定容。攪拌冷卻到25°C。停止攪拌，靜置30min後製成含鐵皮石斛多糖0.01%的潤膚霜潤膚乳1.配方:鐵皮石斛多糖:例I中採用聚碸_Fe304磁性複合膜分離分子量為85 90kDa的鐵皮石斛多糖lg。油相:聚二甲基矽氧烷6.0g，棕櫚酸乙基己酯3.0g，角鯊烷3.0g，杏仁油2.0g，蔗糖椰油酸酯3.0g。水相:卡波姆0.3g，丙二醇4.0g,甘油5.0go乳化劑:乳清分離蛋白1.0g。抑菌劑:輕苯丙酯0.1g,輕苯甲酯0.lg。2.製備方法:將鐵皮石斛多糖加入到水相中後，水相和油相分別放到80°C水浴中加熱，各自混勻後，將水相慢慢倒入油相中，攪拌均勻後，用三乙醇胺調pH至6.5 7.5，加水至100g定容。攪 拌冷卻到25°C。停止攪拌，靜置30min後製成含鐵皮石斛多糖1.0%的潤膚乳。
潤膚水1.配方鐵皮石斛多糖:例I中採用陶瓷膜分離得到的分子量為85 90kDa的鐵皮石斛多糖5g。抑菌劑:羥甲基甘氨酸鈉0.5g。去離子水:85g。製備方法:將鐵皮石斛多糖和抑菌劑加入到去離子水中，放到50°C水浴中加熱混勻後，攪拌冷卻到40°C。停止攪拌，靜置2h後製成5%石斛生髮水。例3 (以不同分子量鐵皮石斛多糖為有效成分製成的潤膚製劑對皮膚保水的作用)3.1實驗材料實驗製劑:例2所製得的潤膚霜、潤膚乳和潤膚水。實驗動物:實驗動物為紐西蘭兔2.2-2.5kg，共78隻，雌雄各半。實驗儀器:高精度皮膚水分測試儀(GL-1V)。3.2對照潤膚製劑的製備潤膚霜將例I中採用納米 SiO2-聚偏氟乙烯複合膜分離得到的分子量為95.3 157kDa、35.3 74.4kDa、15.7 20kDa的鐵皮石斛多糖樣品Al、Cl、Dl按照例2中潤膚霜樣品的製備方法製備成三種對照製劑潤膚霜，將所得潤膚霜對應的標記為Al、Cl、Dl ;潤膚乳將例I中採用聚碸_Fe304磁性複合膜分離分子量為95.3 157kDa、35.3 74.4kDa、15.7 20kDa的鐵皮石斛多糖A2、C2、D2按照例2中潤膚乳樣品的製備方法製備成三種對照製劑潤膚乳，將所得潤膚乳對應的標記為A2、C2、D2 ；潤膚水將例I中採用陶瓷膜分離分子量為95.3 157kDa、35.3 74.4kDa、15.7 20kDa的鐵皮石斛多糖A3、C3、D3按照例2中潤膚水樣品的製備方法製備成三種對照製劑潤膚水，將所得潤膚水對應的標記為A3、C3、D3 ;3.3分組與給藥將78隻隨機分成13組，每組6隻，雌雄各半。空白組為不塗抹任何製劑組；Al、B1、Cl、Dl組依次分別給予對照製劑潤膚霜Al、例2製得的潤膚霜、對照製劑潤膚霜Cl及對照製劑潤膚霜Dl ；A2、B2、C2、Dl組依次分別給予對照製劑潤膚乳A2、例2製得的潤膚乳、對照製劑潤膚乳C2及對照製劑潤膚乳D2 ；A3、B3、C3、D3組依次分別為給予對照製劑潤膚水A3、例2製得的潤膚水、對照製劑潤膚水C3及對照製劑潤膚水D3。實驗前24h，去除實驗動物背部毛，不可損傷表皮，去毛範圍約3cmX3cm。每塊去毛區給潤膚製劑0.2g，在給藥前先用高精度皮膚水分測試儀測試皮膚基礎水分，給藥後按lh, 3h, 6h, 24h分別測試皮膚水分。3.4 結果
由表I實驗數據可以看出，動物分組的時候因為是隨機分組，所以各組紐西蘭兔皮膚平均水分含量沒有出現顯著性差異(P>0.05)。給予潤膚製劑的試驗組給藥後lh、3h、6h皮膚水分含量均高於空白對照組，具有顯著性差異(P〈0.05)，說明含鐵皮石斛多糖的潤膚製劑均能起到皮膚保水的作用。不同提取方法和超濾膜得到的不同分子量鐵皮石斛潤膚製劑組之間相比較可以看出添加分子量為85 90kDa的鐵皮石斛多糖B1、B2和B3組，皮膚給藥後lh、3h、6h實驗動物皮膚水分含量均顯著高於其餘潤膚製劑組，差異具有統計學意義(P〈0.05)。實驗結果說明分子量為85 90kDa的鐵皮石斛多糖較其他分子量的鐵皮石斛多糖具有更好的皮膚保水潤膚作用。表I不同分子量鐵皮石斛多糖製成的潤膚製劑對皮膚水分含量影響(Ik)
權利要求
1.一種潤膚外用製劑，該製劑由有效成分和醫學上可接受的輔料組成，特徵在於，所述的有效成分是分子量為85-90KDa的鐵皮石斛多糖。
2.根據權利要求1所述的一種潤膚外用製劑，其特徵在於，所述的有效成分在所述製劑中的質量百分含量為0.0l 5%。
3.根據權利要求1或2所述的一種潤膚外用製劑，其特徵在於，所述的製劑為潤膚水，該潤膚水由以下質量配比的原料組成:分子量是85-90KDa的鐵皮石斛多糖0.01% 10%，羥甲基甘氨酸鈉0.5 5%，其餘為去離子水。
4.根據權利要求1或2所述的一種潤膚外用製劑，其特徵在於，所述的製劑為潤膚乳，該潤膚乳由以下質量配比的原料組成:分子量是85-90KDa的鐵皮石斛多糖0.01% 5%，聚二甲基矽氧烷1.0 15.0%，棕櫚酸乙基己酯1.0 10.0%，角鯊烷1.0 10.0%，杏仁油1.0 5.0%，蔗糖椰油酸酯1.0 10.0%，羥苯丙酯0.001 1.0%，卡波姆0.01 1.0%，丙二醇1.0 10.0%，羥苯甲酯0.001 1.0%，甘油1.0 10.0%，乳清分離蛋白0.1 2.0%,其餘為去離子水。
5.根據權利要求1或2所述的一種潤膚外用製劑，其特徵在於，所述的製劑為潤膚霜，該潤膚霜由以下質量配比的原料組成:分子量是85-90KDa的鐵皮石斛多糖0.01% 5%，二甲矽油1.0 10.0%,液體石蠟1.0 10.0%,白油1.0 10.0%,卡波姆ultra-1010.0 30.0%,甘油 1.0 5.0%, PEG-4001.0 5.0%，丁香油 0.1 3.0%,卵磷脂 1.0 5.0%,其餘為去 離子水。
全文摘要
本發明涉及一種潤膚外用製劑，該製劑由有效成分和醫學上可接受的輔料組成，特徵在於，所述的有效成分是分子量為85-90KDa的鐵皮石斛多糖。本發明所述的潤膚外用製劑可上調皮膚水通道蛋白-3基因的表達量，促進角質形成細胞的進一步增殖，對皮膚保水效果顯著提高。
文檔編號A61P17/16GK103239471SQ201310190520
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月21日 優先權日2013年5月21日
發明者魏小勇, 陳丹, 戚輝 申請人:廣州中醫藥大學