抗感染劑及其用途的製作方法

2023-07-27 14:16:36

專利名稱：抗感染劑及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗感染劑組合物的用途，特別涉及免疫刺激微粒作為抗感染劑用於增 強對抗病原體的固有和/或特異免疫應答的用途。本發明首先被開發用作具有廣泛作用的抗感染劑，其能夠作用於免疫細胞以抵禦 由病原體引起的疾病。下文將引入該申請來描述本明。然而，應理解，本發明不限於這個特 定的應用領域。
背景技術：
說明書中的任何對現有技術的描述都絕不應當理解為承認該現有技術廣為人們 所知或構成了該領域的一般公知常識的部分。免疫系統包括2個主要分類固有(非特異)免疫系統和適應(特異)免疫系統。 兩個系統協調產生有效的應答，然而它們在很多方面不同。適應免疫系統需要時間來對病 原微生物作出反應、抗原特異性和表現免疫記憶。相比之下，固有免疫系統提供對病原體更 快的應答，非抗原特異性且不表現免疫記憶。適應(特異)免疫系統有2個分支。它們包括體液免疫和細胞介導免疫。體液免 疫涉及對外來抗原產生抗體。抗體由B淋巴細胞產生。細胞介導免疫涉及激活T淋巴細胞， 其或作用於帶有外來抗原的感染細胞，或刺激其它細胞對感染細胞發生作用。哺乳動物免 疫系統的兩個分支在防治疾病中均具有重要意義。體液免疫是防止細菌病原體和毒素的主 防線，然而，輔助性T淋巴細胞和細胞毒性T淋巴細胞的誘導似乎對於長壽命的保護性免疫 非常關鍵。固有免疫是防止感染的第一道防線，利用對許多微生物來說常見的病原分子模式 識別受體(PRRs)來迅速誘導前炎症性及抗病毒細胞因子。這些途徑的特定活化劑對於健 康的和免疫能力受損的宿主的病毒感染均具有潛在的治療作用。對PRRs配體的辨別，伴隨 對它們的信號級聯繫統的了解的增加，已致使開發出選擇性PRR配體作為對給定的病原體 優先免疫應答的誘導劑。對於使用非特異免疫刺激劑或佐劑作為增強/誘導非特異免疫的手段的興趣在 不斷增加。術語「佐劑」被廣泛用於描述在施加給個體或原位試驗中時，通過誘導免疫細胞 特異免疫活性的一般上調來發生作用的化合物。儘管很多材料已被表明具有佐劑活性，唯一被許可用於一般醫用的佐劑為50年 前被首次使用的明礬。僅次於明礬，含有礦物油和滅活的結核桿菌的弗氏完全佐劑(FCA)， 開始時被廣泛使用並被視為「金牌標準」，但後來由於它形成肉芽腫而被停止使用。對胞壁醯二肽(MDP)-—種革蘭氏陽性和革蘭氏陰性類細菌的肽聚糖(Inohara， 2003 ；Kufer, 2006)常見的二肽的免疫刺激/調節性質的確認，引發了旨在將MDP作為化學 成分明確的、全面活性的免疫佐劑應用於臨床的免疫功能研究。這些期望很快受挫，意識到 MDP自身不適於臨床使用，主要因為它的毒性和差的藥動力學特徵，也即從MDP身體中迅速 清除(Lidgate，1995 ;TraUb，2006)。反之，為減少或消除熱源性的嘗試導致衍生物的形成，其中的一些以可溶解的單體形式例如莫拉丁酯(Audibert，1984 ；Bahr, 1995 ；Vidal, 2001) 已經被使用於臨床試驗中。與上述提及的MDP劑形成對比，開發出不具有MDP所具有的不期望的副作用且實 現了增強的免疫刺激性質的MDP類似物(澳大利亞專利號732809)。MDP的該非毒性形式 起先被開發，大多數作為佐劑來增強對天然蛋白質、重組蛋白質、合成肽以及其它免疫物質 的特異免疫應答，也即將它與相關抗原聯合使用作為傳統的佐劑_抗原複合物。傳統的細菌佐劑本身不使用於刺激非特異免疫系統以防治感染的免疫治療。一部 分這是因為現有技術的佐劑不能特異地激活相關免疫細胞類型和因此激活相關免疫應答。 現有技術佐劑通過不合適的細胞類型誘導細胞因子，導致大量各種細胞因子的全身表達， 引起反過來阻止它們作為獨立的免疫治療法的嚴重和不期望的副作用。幾種固有免疫應答被認為有利於控制病毒感染。這些效應機制是多面的，包括直 接抗病毒活性和在感染宿主的免疫細胞上有助於清除這些細胞的免疫調解效應。直接抗 病毒活性可以包括可溶性因子，例如CD8抗病毒因子(CAF)和IFN-α，其能夠直接影響病 毒轉錄。由巨噬細胞和樹突固有免疫細胞分泌的免疫調節/前炎症細胞因子，例如TNF (與 IFN-Y相配合)能夠作用於對由TNF調節的細胞裂解表現增加的敏感性的病毒感染細胞。 此外，細胞機制例如自然殺傷細胞(NK)介導的對病毒感染細胞的殺害包括固有抗病毒免 疫的另一重要方面。儘管各式各樣的其它固有細胞因子能夠介導控制抗病毒免疫性方面的生物功能， 高水平的IFN-α/β似乎在病毒感染中起主導作用並且控制其它固有應答。IFN-α在治療 各種病毒紊亂例如慢性B肝/C肝以及廣泛的人類癌症中的臨床應用，在於其能夠誘導抗 病毒基因的顯性陣列，其驅動防止病毒複製的多效宿主防禦途徑。目前臨床應用的IFN-a 產品是重組蛋白或高度純化單一異構體蛋白，其用作藥單治療或與其它抗病毒劑共同使 用。然而這些治療沒有良好的耐受性且應答率低。這增加了對不僅能夠誘導生理相關水平 的自然發生的多重IFN-α異構體，而且還能夠調動很有可能與IFN-α發生協同作用的固 有抗病毒免疫的其它方面的新方法的需要。NK細胞是功能上不同的固有防禦病毒感染的貢獻者。通過免疫刺激性化合物來加 強NK細胞的內在活性是另外一種臨床上相關的抗病毒治療方法。此外，由於NK細胞能夠 通過與IFN-α不同的機制識別和破壞病毒感染細胞，它們能夠靶向那些對IFN-α的直接 效應具有抗性的病毒。IFN-α在激活NK殺害中起中心作用，並進一步與其它關鍵的固有 免疫細胞因子例如TNF- α和IL-12協同來向上調節NK細胞功能和提升適應性細胞介導的 免疫性。因此，為了充分利用NK抗病毒機制，其它固有免疫細胞例如漿細胞樣樹突狀細胞 (PDC)和單核細胞的免疫刺激是期望的。對於細菌感染，其它固有免疫功能，特別是當吞噬病原體遭受活性氧和氮種物種 或被溶酶體酶破壞時的吞噬細胞的功能很重要。巨噬細胞然後可以將退化抗原呈遞至T細 胞並誘導適應性免疫應答。根據致病菌在巨噬細胞中的宿命可以將它們分為二類，胞外菌 在被吞噬後立即被殺死，而除非吞噬細胞被免疫激活，兼性細胞內細菌對細胞內殺害具有 抗性。胞外菌引起化膿性感染，而兼性細胞內細菌引起肉芽腫性感染。體液免疫機制(抗 體，補充物)主要處理胞外菌，而細胞免疫機制(T細胞，巨噬細胞)處理兼性細胞內細菌。仍然有很多細菌和病菌感染難以採用目前可獲得的治療方法來治療。例如，結核(TB)是一種最古老的人類病原，是人由於單一細菌劑死亡的最主要的起因。據估計有將近 三分之一的人口感染結核桿菌(Mtb)-病原體。每年有接近800萬新的TB病例和約200萬 的死亡。多重抗藥性(MDR)和非常耐藥性(XDR)結核對死亡率和發病率的控制提出了嚴峻 的挑戰。結核能夠以不明顯的小數量存在，並且偶發性地重新激活產生甚至對於藥物敏感 株都難以治療的疾病。由於在藥物治療上的難題，用於限制MDR-Mtb的預防性和治療性疫 苗成為越來越可行的一套策略。從歷史上看，瘤型麻風的細菌的重負載能夠通過BCG疫苗 來減少。迫切需要類似的方法來減少或消除MDR-結核的細菌負載。對結核的有效控制似乎包括二個階段的治療對初步接觸(初種)後感染的建立 的預防和為預防疾病的重新激活對接種BCG的個體的免疫激活(免疫接種)。MDR-Mtb控制 中的一個主要缺口在於缺少能夠滿足這些免疫模式的有效疫苗。此外，藥物對治療MDR-Mtb 沒有效果，因此，需要治療性疫苗接種。來源於野生型結核分枝桿菌的減毒活疫苗和BCG疫 苗的保護性一樣好，但是受到安全問題的限制。已鑑定出很多依賴增效劑、在較短的時間期 限內提供保護的重組抗原和DNA疫苗。很遺憾地，BCG疫苗對兒童結核的成效不一，而對於成人結核或再感染無效。 MDR-結核通常是再感染的結果，因此，BCG疫苗對於控制這種藥物敏感或MDR-Mtb株無能為 力。而且，Mtb隱藏在巨噬細胞中，暗中破壞免疫識別。甚至減毒BCG疫苗隔離在減少免疫 識別的巨噬細胞(ΜΦ8)和樹突細胞(DCs)的特定隔離室內。因此，BCG具有至少二個重要 的不足。第一，它不含所有潛在保護性抗原以及第二，它積極地暗中破壞免疫應答。結核由強的Thl免疫性控制，Thl免疫性同時被抗體主導的Th2應答和由Mtb衍 生產物誘導的抑制性T-調節細胞反調節。因此，對MDR結核的疫苗介導免疫控制要求以犧 牲其它T細胞應答為代價，使用優先誘導Thl免疫性的疫苗，突出了將能夠影響T細胞分化 的佐劑作為理性的疫苗設計的重要成分的作用。遺憾地，對以最少增效劑的劑量就能誘導 長久持續的免疫性的佐劑的機制的理解還有很大的距離。流感感染導致了兒童和老年人群的主要發病率和死亡率。與流感感染相關的嚴重 併發症包括肺炎，呼吸衰竭，非呼吸條件例如休克和腦病，以及潛在慢性疾病的加重。與流 感有關的死亡能夠直接與初始病毒感染相關或能夠由次級的併發症導致。在某些例子中， 從疾病開始到死亡的進程能夠迅速發生。雖然接種疫苗可以提供一些保護，每年的遺傳漂 變的程度意味著疫苗與循環病毒株之間錯配的可能性很高。一個優選的疫苗劑型將是不要 求每年重新形成以適應每年發生的快速流感株突變的疫苗。雖然疫苗是控制流感的必要工 具，當疫苗失敗或流感在沒有接種疫苗的個體或沒有接種疫苗的人群(流行病)中突發時， 固有免疫治療方法可具有特別的優勢。鼠疫由從假結核桿菌的腸道致病菌變體而來的鼠疫桿菌引起，其通常導致慢性和 相對輕微的疾病。鼠疫菌自然寄生在跳蚤上，但對於老鼠和人類也高度毒性，導致系統性流 行病且常常為致命疾病。雖然鼠疫感染在西方世界相對稀少，在欠發達國家它仍然威脅到 公眾健康。它能夠以氣溶膠在人與人之間傳播，因此被列為A類生物恐怖劑。鼠疫病能夠 導致動物發病部分是由於它能夠內在地減弱對感染的正常的、非傳染性免疫應答。在沒有 目前預防性接種策略下，能夠刺激固有免疫應答的治療方法可以防止肺鼠疫。同樣的，期望的具有廣泛作用的抗感染劑將是能夠對多個免疫細胞亞群有特異作
5用、誘導多種細胞因子的協調釋放的抗感染劑。所需要的是該種作用模式將對於預防和/ 或治療病毒和/或細菌感染(特別是那些難以治療的)。本發明的目的之一是克服或減輕現有技術的不足的至少一個或提供一種有益的替代。

發明內容
本發明一部分基於出於意料的發現即交聯到微粒上的胞壁醯二肽含有免疫刺激 性的核酸序，其可以解釋為什麼還發現，如本文所描述的，MDP微粒能夠激活對很多固有抗 細菌和抗病毒免疫應答的誘導關鍵的幾種不同的免疫細胞亞群。下文中，包括核酸序的MDP 微粒將被稱為「MDP/DNA微粒」。進一步地，MDP/DNA微粒可以被一個或更多個能夠增強固有抗感染免疫應答的附 加配體和/或細菌或病毒抗原功能化，以進一步刺激/集中免疫應答。根據第一方面，本發明提供一種由病毒和/或細菌引起的感染的預防或治療方 法，其包括向需要它們的對象施加有效量的MDP/DNA微粒。優選地，MDP/DNA微粒激活固有免疫應答。更優選地，固有免疫應答包括NK細胞，漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)或單核細胞的 固有免疫應答。優選地，MDP/DNA微粒進一步誘導和/或刺激至少一種細胞因子的釋放。細胞因子優選為免疫/前炎性和/或調節性細胞因子。優選地，免疫/前炎性和/或調節性細胞因子為幹擾素-α (IFN-α)、幹擾 素-Y (IFN- γ )、白細胞介素10 (IL-10)、白細胞介素6 (IL-6)、白細胞介素1 β (IL-1 β )、腫 瘤壞死因子α (TNF-α)、白細胞介素12(IL_12)以及⑶8抗病毒因子等。優選地，MDP/DNA微粒調動固有抗病毒和/或抗細菌免疫性的其它方面。更優選地，上述固有抗病毒和/或抗細菌免疫性的其它方面能夠與IFN- α協同作 用。為了增強固有抗病毒和/或抗細菌免疫應答的功效，可以將MDP/DNA微粒與至少 一種結合在微粒上或內、能夠刺激在病毒和/或細菌細胞損傷和/或銷毀中有效的特異免 疫細胞亞群的免疫刺激配體組合。優選地，配體選自TLR1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，N0D-1, N0D-2等或它們的任意組合。能夠將MDP/DNA微粒設計為支持優先誘導Thl或Th2型免疫性。此外，吸收除了 進一步佐劑配體之外的一系列免疫原的能力允許建立能夠優選同時輸送抗原和佐劑至接 種疫苗的靶向細胞的單劑。在一個實施方式中，MDP/DNA微粒包括至少一種病毒和/或細菌抗原。合適的抗原 的例子包括但不限於結核桿菌抗原例如抗原-85A，抗原-85B，ESAT和CFP-10。也可以使用 這些抗原的任意組合。優選的流感抗原來源於循環株的紅血球凝集素和神經氨酸酶基因。 鼠疫抗原可從毒素成分Fl，V或二者的組合-所謂的Fl-V融合抗原中獲得。其它可以與本 發明的組分一起使用的病毒和細菌抗原對於本領域所屬技術人員來說是已知的。優選地，MDP/DNA微粒的直徑為約0. 05至3. 0微米。更優選直徑為0. 2至2. 0微 米。最優選地，直徑為0. 2至1. 0微米或者直徑為0. 5to 1. 0微米。
優選地，MDP/DNA微粒在包含一種或更多種製藥或獸醫輔料，載體或溶劑的組合物中。優選地，由病毒和/或細菌引起的感染的預防或治療方法進一步包括施加另外一 種有效預防或治療由病毒和/或細菌引起的感染的治療劑。優選地，上述另外一種治療劑為同時或順序施加的疫苗和/或抗生素。對象優選為哺乳動物或更優選地為人。優選地，待治療的感染選自但不限於流感，鼠疫和結核。優選地，MDP/DNA微粒能夠作為NK細胞的趨化劑。優選地，MDP/DNA微粒能夠作為NK細胞毒素的趨化劑。MDP/DNA微粒還能夠作為抑制病毒和/或細菌複製的可溶性因子的趨化劑。根據第二方面，本發明提供具有抗感染活性的藥物組合物，包括MDP/DNA微粒，其 中MDP/DNA微粒包括核酸和選擇性的藥學上可接受的載體。根據第三方面，本發明提供一種具有抗感染活性的藥物組合物，包括MDP/DNA微 粒，其中，MDP/DNA微粒包括核酸，組合一種或更多種能夠刺激有效損傷和/或破壞和/或 抑制細菌和/或病毒的免疫細胞亞群的配體，以及選擇性的藥學上可接受的載體。根據第四方面，本發明提供一種具有抗感染活性的藥物組合物，包括MDP/DNA微 粒，其中，MDP/DNA微粒包括核酸，組合一種或更多種細菌和/或病毒抗原，以及選擇性的藥 學上可接受的載體。合適的藥學上或獸醫載體和劑型對於本領域所屬技術人員是已知的。MDP/DNA微粒的核酸成分優選為DNA。更優選的是細菌非甲基化富含CpG的DNA。根據第五方面，本發明提供包括MDP/DNA微粒的組合物，其中，MDP/DNA微粒包括 DNA。優選地，MDP/DNA微粒誘導Thl-型免疫應答。應當理解，可以將其它治療和/或抗感染劑與MDP/DNA微粒組合使用或結合到 MDP/DNA微粒上。能夠同時或順序施加MDP/DNA微粒和/或其它抗感染劑。順序施加可以 為任何合適的分鐘，小時，天或星期的時限所隔開。因此，根據本發明的第六方面，提供包含有效量MDP/DNA微粒的疫苗組合物。還應當理解，本文描述的MDP/DNA微粒組合物可以等同有效地使用於適於人類給 藥的藥學劑型和適於獸類應用的劑型。優選地，劑型供人類使用。根據第七方面，本發明提供MDP/DNA微粒在製造用於細菌和/或病毒感染的預防 或治療處理藥物中的用途。除非上下文明確要求，說明書和權利要求書中，詞「包括」，「包含」等取與排他的或 詳盡的意義相對的包容性的意義，也即是說，具有意義「包括但不限於」。在本發明的上下文中，「胞壁醯二肽微粒」可以與「微粒」，「MA」，"MDP微粒」，MDP/ DNA微粒，「MIS-416」以及「MIS」可交換地使用。在圖中，術語「MIS」，「MIS416」和「MDP，，相 互交換使用，並描述本發明的MDP/DNA微粒。本文中使用的術語「抗感染」旨在包括MDP/DNA微粒組合物的殺菌活性(即殺害 細菌和/或病毒)和抑菌活性(即抑制/防止細菌和/或病毒的生長，繁殖和/或複製)
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圖1 被人外周血髓系樹突狀細胞(mDC)，漿細胞樣樹突狀細胞和單核細胞內化的 螢光標記的MDP/DNA微粒(MISAF488)。圖 2 用 10 μ g/ml MDP/DNA微粒(MIS416)培養後的 72h 的人PBMC分泌的 IFN- γ， IL-10, IL-6, IL-I β 和 TNF-α 細胞因子。圖3 :MDP/DNA微粒(MIS)刺激(通過內涵體/溶酶體抑制劑終止刺激)後的pDC 分泌物。圖4 通過MDP/DNA微粒(MIS)對純化的人⑶56+⑶3-NK細胞的直接免疫刺激。圖5 在使用MDP-DNA微粒刺激後，單核細胞的TNF分泌的誘導。圖6 在使用MDP/DNA微粒(MIS)刺激後，人PBMC同步NK殺害活性的增強。圖7 對HIV-I分支A和BPBMC病毒生物負載的抑制，由從1，5或10 μ g/ml的MDP/ DNA微粒(MA)刺激後的PBMC培養菌中在48h小時收集的培養上清介導。圖8 :MDP/DNA微粒前處理提供抗鼠疫菌氣溶膠圖9 在感染前10天，用MDP/DNA微粒(MDP)對老鼠進行抗鼠疫菌的前處理。圖10 多種劑量的MDP-DNA微粒(MDP)的抗鼠疫菌的比較。圖11 在感染建立後，通過MDP/DNA微粒(MIS416)治療對流感A的發病率和死亡 率的抑制。圖12 :MDP/DNA微粒(NT-MDP)預防法抗炭疽毒素。圖13 MDP/DNA微粒(MIS416)佐劑-OVA免疫原結合物在Thl接種疫苗模式中誘 導保護性細胞免疫。圖14 伴隨HLA-DR下調，MDP/DNA微粒(MIS416)上調免疫共刺激分子人CD83和 CD86的人PBMC mDC和pDC表達。圖15:通過與未治療的動物相比減少的肺Mtb菌落數來衡量MDP/DNA微粒 (MIS416)增強Mtb ESTAT抗原的免疫原性。
具體實施例方式沒有安全和有效的病毒和/或細菌感染的預防或治療手段激發了本發明，本發明 部分以交聯到微粒上的胞壁醯二肽(MDP微粒)對刺激固有免疫系統的獨特和有益的性質 為基礎。出乎意料地發現，MDP微粒含有可能具有細菌起源的DNA片段，這可以解釋它對幾 種不同的、對很多固有和適應抗感染免疫應答的誘導關鍵的免疫細胞亞群的選擇性靶向和 激活能力。這種新型包含DNA片段的MDP微粒將在本文中稱為「MDP/DNA微粒」。雖然本發明的MDP/DNA微粒組合物本身能有效靶向和激活有助於細菌和/或病毒 的破壞的免疫系統的相關成分，微粒組合物的功效能夠通過能夠被偶聯到MDP/DNA微粒表 面或之內的配體和免疫原/抗原所增強。本發明的組合物能夠殺死細菌和病毒(即殺菌的)，但同時也能夠預防細菌和病 毒生長/繁殖/複製(也即抑菌的)。二種活性類型在細菌和/或病毒感染的預防或治療 中均是有利的。本文中描述的MDP/DNA微粒已被設計用於誘導高水平的IFN- α和與廣譜固有免 疫特別是抗毒免疫的誘導臨床相關的其它前炎性細胞因子。非常重要地，調解細胞因子例如IL-10的同時產生意味著微粒能夠誘導調解免疫應答因而避免與基於免疫的單一治療 關聯的高免疫刺激。所有這些已通過利用能夠在微粒製劑中誘導期望的廣度和程度的免疫 應答的特定病原識別受體(PRR)配體的免疫刺激性質實現。這限制了關鍵固有免疫細胞亞 群的微粒吸收，因而避免了不相關細胞類型介導的臨床上不能接受的副作用。例如，對MDR-Mtb (耐多藥結核分枝桿菌)的免疫性取決於⑶4和⑶8依賴的強 Thl免疫的誘導，涉及主要細胞因子IFNY、IL-12*TNFa。這些細胞因子通過循環機制激 活感染的ΜΦ8和DCs來藉由氧化氮和超氧化物的合成準備和消除細胞內Mtb。有趣的是， 已知Toll樣受體(TLRs)對樹突狀細胞上的細胞因子的合成進行調節，因而影響保護性Thl 應答的擴增。新興的研究表明TLR信號也可以影響細胞內分枝桿菌的宿命。然而應理解，類似的免疫應答對於防止其它細菌和病毒感染是有益的，因此本發 明的組合物既可以被用作固有或特異免疫刺激劑來對抗廣泛的細菌和病毒感染。本發明組 合物的抗感染活性可以殺菌活性形式(即殺死細菌和病毒)或抑菌活性形式(預防細菌和 病毒的生長複製)出現，二種活性類型均有助於對對象的細菌或病毒感染的治療或預防。為了增強固有抗病毒和/或抗細菌免疫應答的功效，可以將MDP/DNA微粒與至少 一種結合在微粒上或內、能夠刺激在病毒和/或細菌細胞損傷和/或銷毀中有效的特異免 疫細胞亞群的免疫刺激配體組合。合適的配體可以選自描述的病原體分子模式識別受體的 已知配體，包括TLRl，2，3，4，5，6，7，8，9，10，N0D-1，N0D-2等。還能夠使用這些配體的任意 組合。其它有用的受體在本領域中是已知的，能夠為所屬領域技術人員容易辨別。能夠被連接到和保留在MDP/DNA微粒骨架上的功能基團的可獲得性允許高密度 耦合其它佐劑/免疫刺激配體，其能夠以基於它們已知的生物活性的原理方式吸收。例如， N0D-1和N0D-2配體已經被表明與合成磷脂A(TLR4配體)，聚(I C)，(TLR3配體)以及CpG 0DN(TLR-9配體)協同，用於誘導人樹突細胞IL-12p70的產生和T細胞關聯的IFN-γ的 產生。以類似的方式，能夠建立MDP/DNA微粒來支持對Thl或Th2型免疫的優先誘導。此 外，吸收除了進一步佐劑配體之外的一系列免疫原的能力允許建立能夠優選同時輸送抗原 和佐劑至接種疫苗的靶向細胞的單劑。可快速清除或在特定條件例如細胞內體/溶酶體pH降低的條件下可逆的連接劑， 對於開發很多生物活性化合物的輸送載體有用。MDP/DNA微粒在現有的型式下被生產用於 向抗原加工/表現細胞提供免疫原的靶向輸送，帶有NOD配體和抗核酸TLR9配體共價結合 入微粒中的。MDP/DNA微粒含有其它功能基團包括氨基和可氧化碳水化合物基團，用於連接 免疫原和TLR配體。能夠採用這些功能基團將期望的免疫原和/或配體連接，使用雙功能 交聯反應劑例如琥珀醯亞胺、馬來醯亞胺和醛連接劑。此外，存在可氧化碳水化合物基團， 其提供直接連接初級和次級氨基基團的化學性質，初級和次級氨基基團可被免疫原和TLR 配體均吸收。在藥物載體的構建中以及連接藥物和載體中，乙縮醛鍵被廣泛用作輸送藥物 的酸不穩定鍵。醛可以作為酸不穩定構件模塊來交聯生物活性化合物至MDP/DNA微粒.上 的自由氨基基團。在一個實施方式中，MDP/DNA微粒包括至少一種病毒和/或細菌抗原。合適的抗 原離子包括但不限於結合桿菌抗原例如抗原-85A、抗原-85AB，ESAT以及CFP-10。也可以 使用這些抗原的任意組合。流感抗原通常來源於紅血球凝集素和神經氨酸酶基因，與目前 循環株一致。鼠疫抗原可以來源於有毒成分Fl，V或二者的組合即所謂的Fl-V融合抗原。
MDP/DNA微粒優選為耐降解。優選地，MDP/DNA微粒劑型耐胃蛋白酶、極限pH和變 性狀態下的處理。特別是，MDP/DNA微粒劑型耐a)在pH3. 5下用胃蛋白酶處理，b)pH，其中 PH小於1 (ImM HCl)或大於11 (ImM NaOH)以及c)變性狀態，例如6M尿素或6M鹽酸胍。MDP/DNA微粒的DNA組分優選耐核酸例如例子DNAse IMDP/DNA微粒組合物可以通過合適的手段給藥。根據本發明，使對象具有對某種 疾病免疫或治療有病的對象的方法可以採用很多方法將將疫苗組合物形成的液體溶液施 加。示例性的給藥方法是肌肉注射、皮下注射、靜脈注射、腹腔內注射、滴眼液、通過飲水、噴 霧，或鼻腔噴霧。到施加給動物時，任何合適的獸藥劑型可以使用。除了上面描述的那些， 劑型還可以是粉或膏形式，可以通常的方式加入到飼料或口服給藥。合適的劑型和賦形劑 能夠在標準文本中找到，例如Remington 科學和藥學實踐，19版本，1995 (Mack Publishing Co. Pennsylvania，美國)，英國藥典，2000 等。雖然不希望收到任何關於本發明如何工作的理論的限制，MDP/DNA微粒劑型的處 理廣譜感染劑的能力起源於對固有殺死細胞(NK)和其它固有免疫細胞例如漿細胞樣樹突 狀細胞(PDC)和單核細胞的激活，以及由MDP/DNA微粒組分中的核酸對多重細胞因子的釋 放的誘導/刺激。僅是通過舉例的方式，參考附圖描述本發明的優選實施方式。儘管通過舉例的方 式描述本發明，應當理解，可以在不背離本發明範圍的情況下作出變形。此外，當特定特徵 存在已知的等同特徵時，這些等同特徵作為在本發明中特別提及的引入。實施例例1-MDP/DNA微粒的製備從丙酸桿菌腺胞分離出來的胞壁醯二肽(MDP)的多個重複形成了本例中MDP/DNA 微粒載體複合物的核結構。優選的單體亞基的化學組分顯示如下
權利要求
一種由病毒和/或細菌引起的感染的預防或治療方法，包括將有效量的MDP/DNA微粒施加給需要它們的對象。
2.根據權利要求1所述的方法，其中MDP/DNA微粒激活固有免疫應答。
3.根據權利要求2所述的方法，其中所述固有免疫應答包括NK細胞，漿細胞樣樹突狀 細胞(PDC)和/或單核細胞的激活。
4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述MDP/DNA微粒進一步誘導和/或 刺激至少一種細胞因子的釋放。
5.根據權利要求4所述的方法，其中所述細胞因子選自幹擾素-α(IFN-α)、 幹擾素-Y (IFN- γ),白細胞介素-10 (IL-10)，白細胞介素_6 (IL-6)，白細胞介 素-1 β (IL-1 β )，白細胞介素1 β (IL-1 β)，腫瘤壞死因子- α (TNF- α )，白細胞介 素-12 (IL-12)和/或⑶8抗病毒因子。
6.根據前述權利要求中的任一項所述的方法，其中所述MDP/DNA微粒包括至少一種免 疫刺激性配體。
7.根據權利要求6所述的方法，其中所述配體選自TLR1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，N0D-1 和 / 或 N0D-2。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述MDP/DNA微粒包括至少一種病 毒和/或細菌抗原。
9.根據權利要求8所述的方法，其中所述至少一種病毒和/或細菌抗原選自分支桿菌 抗原-85A、抗原-85B，ESAT, CFP-10，流感血凝素抗原和/或神經氨酸酶，鼠疫抗原Fl，V, Fl-V融合抗原或它們的組合。
10.根據前述權利要求中的任一項所述的方法，進一步包括施加另一種對防止和/或 治療由病毒和/或細菌引起的感染有效的治療劑。
11.根據權利要求10所述的方法，其中所述另一種治療劑為疫苗和/或抗生素，同時或 依次施加。
12.根據前述權利要求中的任一項所述的方法，其中所述對象為哺乳動物。
13.根據前述權利要求中的任一項所述的方法，其中待治療的感染選自流感，鼠疫或結核。
14.根據權利要求1-13中任一項所述的方法，其中所述MDP/DNA微粒包括Thl-型免疫應答。
15.一種組合物，包含MDP/DNA微粒和選擇性的藥物或獸藥賦形劑、載體或溶劑。
16.包含MDP/DNA微粒和至少一種其它抗感染藥物的組合物，。
17.包含有MDP/DNA微粒和至少一種免疫刺激性配體的組合物。
18.包含有MDPP/DNA微粒和至少一種病毒和/或細菌抗原的組合物。
19.根據權利要求15至18中任一項所述的組合物，其中所述組合物為殺菌的。
20.根據權利要求15至18中任一項所述的組合物，其中所述組合物為抑菌的。
21.一種包含權利要求15至20中任一項所述的MDP/DNA微粒組合物的疫苗，其用於治 療或預防細菌或病毒感染。
22.根據權利要求21所述的疫苗，其中所述細菌或病毒感染選自鼠疫，流感和結核。
23.MDP/DNA微粒在製造預防或治療細菌和/或病毒感染的藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及新型免疫刺激微粒組合物以及它們作為細菌和病毒感染治療中的抗感染劑的用途。
文檔編號A61K39/145GK101983063SQ200980112374
公開日2011年3月2日 申請日期2009年4月1日 優先權日2008年4月1日
發明者吉利安·愛力森·韋伯斯特, 弗朗克·B·戈爾德 申請人:伊耐特醫療技術有限公司