包括透明質酸衍生物的用於預防手術後粘連的生物材料的製作方法

2023-07-27 14:42:16

專利名稱：：包括透明質酸衍生物的用於預防手術後粘連的生物材料的製作方法
技術領域：
：本發明涉及用於手術創面、特別是用於預防手術後粘連的新型生物材料，它主要包括透明質酸的酯化衍生物或主要包括透明質酸的交聯衍生物。手術後粘連的產生是腹部或骨盆手術的常見併發症，它會導致大量發病。有很多因素會影響粘連的發展已知機械創傷、化學劑、漿膜與血液的混合乾燥、局部缺血、感染和外源材料可增加粘連的發生。其它原因有腹內炎性病和先天性畸形。其病理生理學機制尚不清楚，但已提出一種中央共同途徑，在該管徑中腹膜纖蛋白溶解作用起著重要作用。組織的手術創傷會導致血清血液滲出物的釋放，由其形成的纖維蛋白橋可存在幾天時間，在此期間會出現細胞生長。如果在此期間所述滲出液未被吸收或溶解，它就會成為長在內的成纖維細胞，而隨後的膠原沉積會導致連接兩個相鄰表面的永久性疤痕的產生，此即為粘連。總之，粘連的產生似乎是炎性反應的結果。在後一種情形下，研究主要集中在尋找在活體內存在時間短的生物吸收性材料作為抑制粘連發生的屏障，直到傷口癒合；以期克服由非吸收性材料所導致的問題(感染、植入物的鈣化、疤痕產生等)。一種特別有希望的聚合物是透明質酸(HA)，一種普通存在於人體內的胞外基質成分。已證實透明質酸溶液可減少腹腔手術後粘連的發生(Urman，B.等，EffectofHvaluronicAcidonPostoperativeIntra-peritonealAdhesionsFormationintheRatModel，FertilSteril.1991；56563；ShushanA.等，HyaluronicAcidforPreventingExperimentalPostoperative-intraperitonealAdhesions，J.Reprod.Med.1994；39398)和矯形手術後粘連的發生(Hagberg，L，Gerdin，B.，SodiumHyaluronateasanadjunctiveinadhesionpreventionafterflexortendonsurgeryinrabbits，J.Hand.Surg.1992；17A935)。FidiaAdvancedBiopolymers已開發出透明質酸的化學衍生物，即內酯(ACP系列)和與非活性醇的酯(HYAFF系列)(Rastrelli，A.等，HyaluronicAcidEsters，ANewClassofSemisyntheticBiopolymersChemicalandPhysico-chemicalProperties，ClinicallmplantMaterials，AdvancedinBiomaterials，G.Heinrike，V.Sollz和AJCLee(著)，Elsevier，Amsterdam1990；9199-205)，其具有不同於HA的生理化學特性(即較長的駐留時間及較高的進行加工製成器械的能力，但仍具有原始生物學聚合物所特有的耐受性及生物相容特性)。而且，還從化學和毒理學角度對上述衍生物進行了鑑定。本發明的目的在於研製各種ACP凝膠，以評價在預防粘連中的效果。在手術後，在受創傷或局部缺血影響的相鄰組織之間出現的粘連或纖維團，仍然是多種手術過程的最主要的併發症之一。為了避免這種併發症，已提出過多種方法，但這一問題依然未得到解決。所提出的方法之一是在手術後將葡聚糖的懸浮液(diZeregaG.S.，「Contemporaryadhesionprevention」FertilityandSterility，Vol.61，No.2，February′94)注射到腹膜腔內。使用這種葡聚糖溶液的臨床結果很不一致。而且，使用葡聚糖溶液通常會伴有包括水腫、腹痛和呼吸困難在內的併發症。還有人提出過將特定結構形式的屏障(例如，網狀物、膜)(diZeregaG.S.，「Contemporaryadhesionprevention」FertilityandSterility，Vol.61，No.2，February′94)或粘性凝膠(GenzymeU.S.專利4,937,270-U.S.專利5,017,229)放置在受傷的器官之間。不過，這種屏障通常被證實為無效的，因為它們會激發局部缺血性或炎性反應，這是由於外源體的存在所致。目前被批准用於臨床使用的僅有的材料是基於氧化再生的纖維素的屏障(Interceed)和基於膨脹的聚四氟乙烯(e-PTFE)(Goretex-U.S.專利4,478,665和U.S.專利4,482,516)或聚乙烯或聚丙烯的屏障。除了對上述屏障效果的臨床研究已得出很不一致的結果外，還必須指出的是，上述兩種材料均與大的禁忌症相關。e-PTFE或聚乙烯或聚丙烯屏障膜的使用，涉及一種合成材料的植入，該材料對人體來說是外源的，且不能由生物降解，而且由於不希望的炎性反應可需要二次手術以取出所述屏障膜或改變其位置。在臨床前模型和臨床模型中，已證實基於氧化再生的纖維素的網狀物可有效預防粘連的發生，但是，其使用必須在徹底止血之後。因此，已有人提出將高分子量透明質酸(HA)的粘稠溶液用作預防粘連的輔助物(GraingerD.A.等，「Theuseofhyaluronicacidpolymerstoreducepostoperativeadhesions」，J.ofGynecol.Surg.，Vol.7，No.2，1991；HurmanB.等，「Effectofhyaluronicacidonpostoperativeintra-peritonealadhesionformationintheratmodel」，FertilityandSterility，Vol.56，No.3，Sept.1991；ShushanA等，「HyaluronicacidforpreventingexperimentalpostoperativeintraperitonealadhesionsJ.ofReproductiveMed.，Vol.39，No.5，May1994；MitchellJ.D.等，」「Reductioninexperimentalpericardialadhesionsusingahyaluronicacidbioabsorbablemembrane」，Eur.J.Cardio-thorac.Surg.，8,149-152，1994)。不過，透明質酸本身的特徵是非常迅速的吸收時間，這與預防粘連所需的駐留時間不一致。而且，天然透明質酸不能加工，而這樣的透明質酸不能轉化成生物材料形式。為了延長其降解時間，並使其能被加工成用於不同手術創面的各種物理形式，已開發出透明質酸的酯類和透明質酸的交聯衍生物。其中所有或部分羧基被酯化的透明質酸的酯類的製備、其中部分羧基發生交聯的透明質酸的交聯衍生物的製備及其在藥物、整容和手術創面上的應用和在可生物降解的塑料中的應用披露於美國專利US4,851,521和US4,956,353，EP0216453和EP0341745中。本發明提供了用於預防手術後粘連的生物材料。該生物材料包括透明質酸的苄基酯和/或透明質酸的內部交聯衍生物，並可以為凝膠、膜、機織織物或網狀物及非織造織物形式。圖1-10是大鼠動物模型粘連研究結果的圖示。因此，本發明披露了基於透明質酸的苄基酯或基於透明質酸的交聯衍生物的保健和手術用品的製備，將其單獨使用或彼此混合後使用，其特徵是高度的生物相容性及可轉化成物理形式，這使其適於在手術中的多種用途，包括腹腔鏡檢手術(laproscopicalsurgery)。該材料可完全由生物降解，而且無須從使用部位取出，由此避免二次手術。當交聯衍生物被製成凝膠形式時，其產生的材料粘性明顯大於未改性的聚合物，而且，具有可變的降解時間。此外，本發明的基於苄基酯的材料和基於交聯衍生物的材料可以為膜、機織織物或網狀物及非織造織物形式(按照披露於如下專利中的方法製備US4,851,521；US4,956,353；WO93/11804；WO93/11803；WO94/17837和EP0341745)，而且以下列技術參數為特徵—膜的厚度範圍為10μm-1.5mm，特別是20-50μm；—織物或網狀物的厚度範圍為200μm-1.5mm；—非織造織物的基本特徵是定量在20g/m2-500g/m2範圍內，厚度範圍為0.2mm-5mm，特別是＜1mm。上述材料可以單獨使用或彼此結合後使用或與由合成聚合物構成的其它材料結合後使用(例如，基於交聯的透明質酸的凝膠+聚丙烯，或主要由HA的酯化衍生物組成的膜+聚丙烯或由HA的酯化衍生物組成的膜，塗以自身交聯的HA凝膠)。事實上，本發明還涉及凝膠(對於交聯的衍生物)、膜、機織織物或非織造織物形式的複合材料的應用，所述材料主要包括透明質酸的苄基酯或交聯的衍生物與網狀物或膜或非織造織物形式的不能生物降解的材料，如e-PTFE、聚乙烯、聚丙烯、聚酯(Dacron)。因此，本發明涉及用於手術領域的一種新型保健及手術用品，將其用於預防手術後粘連的發生。材料如上所述，本發明的特徵是包括透明質酸衍生物、特別是苄基酯衍生物及內部交聯的衍生物的材料。文中所用術語「透明質酸」(以下稱「HA」)是指具有各種分子量的酸性多糖，它由D-葡糖醛酸和N-乙醯基-D-葡糖胺的殘餘物構成，其天然存在於細胞表面，脊椎動物結締組織的鹼性胞外物質中，關節的滑液中，眼睛的玻璃體液中，人體的臍帶組織中和雞冠狀體(cocks′combs)中。透明質酸在生物體內起著重要作用，首先，它是很多組織的細胞的機械支持體，所述組織如皮膚、腱、肌肉和軟骨，因此，它是胞外基質的主要成分。但是，透明質酸還在生物學過程中起著其它作用，如組織水合作用、潤滑作用、細胞遷移、細胞功能和分化。(例如，參見A.Balazs等，CosmeticsToiletries，No.5/84，P8-17)。透明質酸可從上述天然組織，如雞冠狀體中提取，或是從某些細菌中提取。現在，透明質酸也可以通過微生物學方法製備。通過提取獲得的全透明質酸的分子量為八百萬-一千三百萬。而且，這種多糖的分子鏈相當容易受各種物理和化學因素影響而被降解，如機械影響或輻射、水解、氧化或酶促劑影響。為此，在原始提取物的普通純化方法中，會得到低分子量的降解級分。(見Balazs等，同上)。已將透明質酸、其分子級分及相應的鹽用作藥品，還有人提出將其用於整容術(例如，見上述Balazs的文章，及法國專利2478486)。儘管術語「透明質酸」常以如上述的不恰當定義、含義使用，將其理解為具有不同的D-葡糖醛酸和N-乙醯基-D-葡糖胺殘基、分子量不同的全系列多糖或其降解級分以及複數形式的「透明質酸」似乎更合適，但在本文中仍將繼續使用其單數形式來表示各種形式的透明質酸，包括其分子級分，略語「HA」也常被用於表示這一綜合術語。1.苄基酯衍生物本發明的第一種優選材料基於透明質酸的苄基酯，特別是80-100％酯，其中，80-100％的HA羧基被酯化。那些其中80-99％的HA羧基被苄基所酯化的苄基酯被稱為「偏酯」，因為僅有部分羧基被酯化，其餘羧基是游離的或與鹼金屬或鹼土金屬如鈉、鈣或鉀成鹽。本發明生物材料的最佳形式是所謂的「全」苄基酯，其中，所有的HA羧基均被酯化。在這種全酯中，所有的HA羧基可以被苄基酯化(也被稱為HYAFF11)或者部分(75-99％)羧基可以被苄基酯化而所有剩餘羧基被源於C10-20的脂族醇的脂肪鏈/烷基殘基酯化以形成所謂「混合酯」。所述脂族醇中以棕櫚醇(C16-十六烷基)和硬脂醇(C10十八烷基)為最佳。上述混合酯也可以為偏酯形式，即其中部分(75-99％)羧基被苄基酯化而其餘部分(而非全部)羧基被C10-C20脂族醇所酯化的衍生物。其中，以至少75％的羧基被苄基酯化，至少5％的羧基被C10-C20脂族醇酯化的偏酯為最佳。本發明的透明質酸苄基酯可以用已知的羧酸酯化方法製備，例如，在有諸如強無機酸或酸性離子交換劑這樣的催化物質的條件下用醇(苄基和/或C10-C20醇)處理游離透明質酸，或在有無機或有機鹼的條件下用能夠引入所需醇殘基的醚化劑處理。不過，所述透明質酸苄酯可以用披露於EP0216453中的特殊方法製備。該方法包括用一種醚化劑處理透明質酸的季銨鹽，特別是在非質子傳遞有機溶劑中進行。為了製備所述苄基酯，可以使用任何來源的透明質酸，例如，從上述天然原材料如雞冠狀體中提取的酸。文獻披露了這種酸的製備優選使用純化的透明質酸。根據本發明，特別使用包括全酸的分子級分的透明質酸，所述全酸是通過直接提取有機材料而獲得，該有機材料分子量的變化範圍很寬，例如是分子量為13百萬的全酸的分子量的大約90-80％(M＝11.7-10.4百萬)至0.2％(M＝30,000)，優選在5％-0.2％之間。這種級分可用披露於文獻中的各種方法獲得，如通過水解、氧化、酶解或物理方法獲得，所述物理方法如機械或輻射方法。因此，在上述純化方法中通常會形成原始提取物(例如，參見上文引用的Balazs等的文章，「CosmeticsToiletries」)。所獲得的分子級分的分離和純化是通過已知方法，例如，分子過濾完成的。例如，一種適用於本發明的純化HY級分是被Balazs稱為「非炎性-NIF-NaHA透明質酸鈉的級分(參見一本名稱為「Healon」-AguidetoitsuseinOphthalmicSurgery的小冊子)」D.MillerR.Stegmann，著，JohnWileySons，N.Y.，81983P5。作為苄基酯的原料，特別重要的是兩種可從透明質酸中獲得的純化級分，例如，自雞冠狀體中提取的所述級分被稱作「Hyalastine」和「Hyalectin」。Hyalastine級分的平均分子量大約為50,000～100,000，而Hyalectin級分的分子量為大約500,000～730,000。已分離出上述兩種級分的混合級分，其特徵是平均分子量為約250,000～約350,000。該混合級分可以特定原料中所能得到的總透明質酸的80％的產率獲得，而Hyalectin級分的得率為原始HY的30％，Hyalastine的得率為原始HY的50％。這些級分的製備披露於EP0138572中。以下實施例披露了HA苄酯的製備。例1透明質酸(HY)苄酯的製備。將相當於20m.Eq.單體單位的12.4g分子量為170,000的HY四丁銨鹽溶於620ml溫度為25°的二甲基亞碸中，加入4.5g(25m.Eq.)苄基溴和0.2g碘化四丁銨，將該溶液在30°下保溫12小時。在穩定的攪拌條件下將所得混合物緩慢注入3,500ml乙酸乙酯中。生成一種沉澱，過濾該沉澱，並用500ml乙酸乙酯將其洗滌4遍，最後在30°下真空乾燥24小時。最後得到9g標題中的苄基酯產物。按照披露於SiggiaS.和HannJ.G.所著的「Quantitativeorganicanalysisviafunctionalgroups」(第4版，JohnWileyandSons)一書的第169-172頁上的方法進行酯基的定量測定。例2製備透明質酸(HY)苄酯將3g分子量為162,000的HY鉀鹽懸浮於200ml二甲基亞碸中；加入120mg碘化四丁銨和2.4g苄基溴。將該懸浮液在30℃下在攪拌狀態下保持48小時。在穩定攪拌條件下將所得到的混合物緩慢注入1,000ml乙酸乙酯中。生成一種沉澱，過濾該沉澱，並用150ml乙酸乙酯洗滌4遍，最後在30°下真空乾燥24小時。得到3.1g標題中的苄基酯產物。按披露於由Siggia.S和HannaJ.G.所著的「Quantitativeorganicanalysisviafunctionalgroups」(第4版，JohnWiley和Sons)一書的第1698-172頁上的方法進行酯基的定量測定。例3製備一種透明質酸的衍生物，其75％羧基官能團被苄基醇酯化，而其餘的25％被十八烷醇(硬脂醇，CH3-(CH2)16-CH2-OH)酯化。在室溫下將6.21g分子量為180,000Da(10mEq)的透明質酸的四丁銨鹽溶於248ml二甲基亞碸(DMSO)中。上述溶液補充了0.89ml苄基溴(7.5mEq)，並將該溶液在30℃下放置12小時。然後將該溶液冷卻至室溫，並補充0.83g十八烷基溴(2.5mEq)。將該溶液加熱至30℃保持24小時。然後加入2.5％(w/w)的NaCl水溶液，並在攪拌狀態下將所得混合物加入750ml丙酮中。生成一種沉澱，過濾該沉澱，並用100ml5∶1的丙酮/水中洗滌3次，用100ml丙酮洗滌3次，然後在30℃下在高真空中乾燥24小時。由此得到5.1克想要的產品。苄基醇和十六烷基醇的含量的定量測定是通過在鹼解後通過氣相色譜完成的。按照披露於「QuantitativeOrganicanalysisviafunctionalgroup」(第4版，John，WileyandSons出版)一書的第169-172頁上的皂化方法定量酯基的總含量。例4製備透明質酸衍生物，其75％的羧基官能團被苄基醇酯化，其餘的25％被十六烷基醇(鯨蠟醇，CH3-(CH2)14-CH2-OH)酯化。在室溫下，將6.21g分子量為180,000Da(10mEq)的透明質酸四丁銨鹽溶於248ml二甲基亞碸(DMSO)中。向該溶液中補充0.89ml苄基溴(7.5mEq)，並將該溶液在30℃下放置12小時。然後將該溶液冷卻至室溫，並補充0.76g十六烷基溴(2.5mEq)。將該溶液加熱至30℃保持24小時。然後加入2.5％(w/w)的NaCl水溶液，並在攪拌條件下將所得混合物注入750ml丙酮中。生成一種沉澱，過濾該沉澱，並在100ml5∶1的丙酮/水溶液中洗滌3次，用100ml丙酮洗滌3次，然後在30℃下，在高真空中乾燥24小時。由此獲得5克想要的產品。苄基醇和十六烷基醇的定量測定是通過在鹼解之後通過氣相色譜完成的。按照披露於「Quantitativeorganicanalysisviafunctionalgroup」一書(第4版，JohnWileyandSons出版)的第169-172頁上的皂化方法定量酯基的總含量。2.內部交聯的透明質酸衍生物用於本發明材料中的交聯的透明質酸衍生物披露於EP0341745中。該交聯衍生物是透明質酸的分子間和/或分子內酯，其中，部分羧基被透明質酸的同一分子和/或不同分子的羥基酯化，由此形成內酯鍵或分子間酯鍵。其中沒有插入其它醇的OH基的這些「內」酯也可稱作「自身交聯的透明質酸」，因為單或多分子交聯的形成是上述內部酯化的結果。形容詞「交聯的」是指透明質酸分子的羧基與羥基之間的交叉連接。所述自身交聯的產物特別是偏內酯，其中，交聯鍵百分數優選為透明質酸中羧基數的0.5-20％，特別是4.5/5.0％。在所述製備方法中，通過加入能夠引起激活反應的物質激活HA分子的羧基。加入催化劑之後和/或在提高溫度之後，從上述激活反應獲得的不穩定中間產物自發分離，與同一或其它透明質酸分子的羥基形成上述內酯鍵。根據需要的內酯化度，將全部或等分部分羧基官能團激活(所述等分部分是通過使用過量的激活物質或合適的調劑方法得到的)。待轉化成內酯基的羧基可以由含有游離羧基的透明質酸激活，或優選由含有鹽化羧基的HA激活，例如，金屬鹽，優選為鹼金屬或鹼土金屬鹽，特別是季銨鹽，如下文所講述的。不過，還可將與諸如胺的有機鹼的鹽用作原材料。激活游離或鹽化羧基的方法本身是已知的，特別是在肽合成領域，本領域技術人員可輕易確定哪一種方法最為合適，特別是確定是否使用游離或鹽化形式的原材料。例如，已知可用於肽合成方法並在本發明製備方法中有用的激活方法披露於以下文獻中Bodanzkym，M.，InSearchofnewMethodsinpeptidesynthesis，Int.J.PeptideProteinRes.25，1985,449-474；和Gross，E.等，ThePeptides，AnalysisSynthesis，Biology，AcademicPress，Inc.，1979，Vol.1，Chapter2.根據上述方法，將一個羧基部分激活，即將一個羧基轉換成活性形式。這種激活通常涉及一種酸與一種激活劑之間按照下式進行的反應其中，X是吸電子基團。因此，羧酸的大部分激活衍生物是混合酐，廣義地講還包括醯基疊氮和醯基氯，二者可被視為作為活化劑的疊氮酸和HCl的混合酐。另外，羧基組分的激活可通過生成中間「活化酯」而實現。上述「活化酯」可以是各種類型的，但特別有用的「活化酯」是用二環己基碳化二亞胺、對硝基苯酯、三氯苯酯、五氯苯酯，以及羥胺的O-乙醯基衍生物，特別是N-羥基琥珀醯亞胺的酯製備的。上述各種類型的激活方法均可用於製備本發明的交聯的HA，因為上述所有方法的重要特徵涉及羧基與激活劑的反應，該反應主要是導致易與羥基反應的取代基的形成，以便易於產生本發明產物的內酯鍵特徵，可被轉化成內酯的羧基官能團數與活化的羧基官能團數成正比，而該數目取決於所用激活劑的質量。因此，製備交聯HA的優選方法的特徵是，用一種能激活羧基功能的製劑處理具有游離的或鹽化的羧基的HA，可能在有利於中間活化衍生物生成的助劑和/或叔有機或無機鹼的條件下進行；對該混合物進行加熱或輻射(特別是用紫外線)處理；如有必要的話，鹽化游離羧基或游離鹽化的羧基。作為可以激活羧基的物質，可以使用披露於文獻中的常用類型的，例如，常用於肽合成的物質，不過，會改變或破壞起始HA的分子結構的物質除外，如用於產生羧基滷化物的物質。例如，能導致活化酯生成的優選物質有碳化二亞胺、二環己基碳化二亞胺、苄基異丙基碳化二亞胺、苄基-乙基-碳化二亞胺；乙氧基乙炔；Woodward′s試劑(N-乙基-5-苯基異噁唑鎓-3-磺酸)或脂族、環脂族或芳香烴的滷素衍生物，或從通過一個或多個活化基的存在而使其流動的含滷素的雜環化合物得到的滷素衍生物，所述活化基例如氯乙腈基，特別是2-氯-N-烷基吡啶的鹽如2-氯-N-甲基-吡啶的鹽酸鹽或其它具有低級烷基的烷基衍生物，如具有至多6個碳原子的烷基。當然可以使用其它滷素衍生物，如溴化衍生物取代上述氯化衍生物。該活化反應可以在有機溶劑中進行，特別是在諸如二烷基亞碸、二烷基羧基醯胺的非質子傳遞溶劑中進行，如在特別低的烷基二烷基亞碸中進行，特別是二甲基亞碸，聚亞甲基亞碸如四亞甲基亞碸，二烷基或聚亞甲基楓如四亞甲基碸，環丁碸和低級脂族酸的低級烷基二烷基醯胺(其中，所述烷基最多有6個碳原子，如二甲基或二乙基甲醯胺或二甲基或二乙基乙醯胺)。不過，也可使用其它溶劑，並非總是必須為非質子傳遞溶劑，如醇、醚、酮、酯，如低級脂族二烷氧基氫碳化物，如二甲氧基乙烷，特別是脂族或雜環醇和低沸點的酮，如低級N-烷基-吡咯烷酮，如N-甲基吡咯烷酮或N-乙基-吡咯烷酮，六氟異丙醇和三氟乙醇。如果將滷素衍生物，特別是鹽式滷素衍生物，如上述2-氯-N-甲基氯化吡啶鎓用作羧基活化物質，最好使用起始多糖的金屬鹽或有機鹼的鹽，特別是下文披露的季銨鹽之一，如四丁銨鹽。這種鹽的特別優點是極溶於上述有機溶劑，所述交聯反應在該溶劑中可得以最佳實施，由此確保較高的產率。建議向該混合物中加入能夠扣除酸的物質，如有機鹼、碳酸鹽、碳酸氫鹽或乙酸鹼金屬或鹼土金屬鹽，或有機鹼，特別是叔鹼如吡啶及其同系物，如可力丁，或脂族胺鹼，如三乙胺或N-甲基-哌嗪。最佳方法是使用季銨鹽。這種銨鹽眾所周知，並以與製備其它已知鹽的相同方法製備。其由優選具有1-6個碳原子的烷基衍生而來。優選使用四丁銨鹽。使用季銨鹽的上述方法的變型之一在於，在有催化量的季胺鹽，如碘化四丁銨的條件下使鹼性鹽，如鈉鹽或鉀鹽反應。待加入活化劑中、能催化羧基活化的物質在文獻中有記載，這些物質同樣優選為上文提及的鹼。因此，例如，當羧基被異噻唑啉鹽激活時，優選向反應混合物中加入某些三乙胺。生成活化中間產物，例如，特別是酯的反應是在文獻中推薦的溫度下進行的，不過，該溫度可以因環境不同而改變，正如可由本領域技術人員所輕易確定的。實際上，內酯鍵的生成可在很寬的溫度範圍內進行，例如，在0-150°之間，優選為室溫或略高於室溫，例如20-75°。提高溫度有利於內酯鍵生成，用合適波長的輻射，如紫外線輻射也是如此。透明質酸基質可以為任何來源，並可以為上述各種類型。優選HA原料的平均分子量為150,000-730,000Da，特別是150,000-450,000Da。另外，內部交聯量可以變化，但本發明的優選材料使用有4.5-5.0％的羧基發生交聯的HY。以下的實施例披露了可用於生產本發明材料的交聯HY製品的製備。例5製備1％交聯的透明質酸(HY)產物描述1％羧基用於內酯化。99％羧基與鈉成鹽。將分子量為170,000、相當於10mEq的單體單位的6.21gHY四丁銨鹽在25℃下溶於248mlDMSO中，加入0.01g(0.1mEq)三乙胺。例6製備5％交聯的透明質酸產物描述5％羧基用於內酯化。95％羧基與鈉成鹽。將分子量為85,000、相當於10mEq的單體單位的HY四丁銨鹽在25℃下溶於248mlDMSO中，加入0.051gr(0.5mEq)三乙胺，並將所得溶液攪拌30分鐘。將由0.128gr(0.5mEq)2-氯-1-甲基碘化吡啶鎓溶於60mlDMSO中組成的溶液緩慢滴加進去，用時1小時，並將該混合物在30℃下保持15小時。然後加入由100ml水和2.5grNaCl組成的溶液，再將所得混合物緩慢注入750ml丙酮中，並保持連續攪拌。生成一種沉澱，濾出沉澱，並在5∶1的丙酮水中洗3次，再用100ml丙酮洗3次，最後在30°下真空乾燥24小時。得到3.95gr標題中化合物。按照披露於「QuantitativeOrganicAnalysisViaFunctionalGroups」(第4版，JohnWileyandSonsPublication)一書的第169-172頁上的皂化方法對酯基進行定量測定。例7製備10％交聯的透明質酸(HY)產物描述10％羧基用於內酯化。90％羧基與鈉成鹽。將相當於10mEq單體單位的分子量為620,000的HY四丁銨鹽6.21g在25℃下溶於248mlDMSO中。加入0.101gr(1.0mEq)三乙胺，然後將所得溶液攪拌30分鐘。將由0.255gr(1.0mEq)2-氯-1-甲基-碘化吡啶鎓溶於60mlDMSO中組成的溶液在1小時內緩慢滴加進去，並將該混合物在30℃下保持15小時。然後加入由100ml水和2.5grNaCl組成的溶液，再將所得混合物緩慢注入750ml丙酮中，保持連續攪拌。生成一種沉澱，過濾該沉澱，並用100ml5∶1的丙酮水洗3次，再用100ml丙酮洗3次，最後在30℃下真空乾燥24小時。得到3.93gr標題化合物。按照披露於「QuantitativeOrganicAnalysisViaFunctionalGroups」(第4版，JohnWileyandSonsPublication)一書的第169-172頁上的皂化方法對酯基進行定量測定。例8製備10％交聯的透明質酸(HY)產物描述10％羧基用於內酯化。90％羧基與鈉成鹽。將相當於10mEq單體單位的分子量為170,000的HY四丁銨鹽6.21gr在25℃溶於248mlDMSO中，加入0.118gr(1mEq)氯化吡啶，並將所得溶液攪拌30分鐘。用1小時時間將溶於20mlDMSO中的0.16g(mEq)N-苄基-N-乙基碳化二亞胺溶液緩慢滴加到上述溶液中，並將該混合物在30°下保持45小時。加入由100ml水和2.5NaCl組成的溶液，並將所得混合物緩慢注入750ml丙酮中，保持連續攪拌。生成一種沉澱，過濾該沉澱，並用100ml5∶1的丙酮/H2O洗滌3次，再用100ml丙酮洗3次，最後在30°下真空乾燥24小時。得到3.9gr標題化合物。按照披露於「QuantitativeOrganicAnalysisViaFunctionalGroups」(第4版，JohnWileyandSons出版)一書的第169-172頁上的皂化方法定量測定總酯基。3.製備生物材料以下實施例披露了本發明手術/保健用品的製備，所述用品包括HA的總苄基酯或自身交聯的HA衍生物，或其組合。如上所述，用於製備膜、機織織物、機織網狀物和非織造織物的方法披露於以下專利中US4,851,521；US4,956,353，WO93/11804；WO93/11803；WO94/17837和EP0341745。例9製備一種基於HYAFF11+聚丙烯網狀物的產品製備由HYAFF11溶於DMSO中的溶液(110mg/ml)。一旦溶解結束，通過20μm的濾布過濾該溶液，並將其在真空中放置2小時脫氣。傾出5ml該溶液，並將其塗布在玻璃板上，然後將聚丙烯網狀物(優選6×11cm)放在上面，再將10ml該溶液傾在其上面。將其均勻塗布在網狀物上，並清除所有多餘的溶液。將所述玻璃板浸入含有乙醇/H2O(90∶10)的浴槽中5小時，以使該製劑凝聚並使該玻璃板脫除；然後將該製劑浸入無水乙醇中16小時。然後將其放在一塊板上，在63℃下在真空中乾燥30分鐘。例10製備覆有一層HYAFF11薄膜的基於HYAFF11機織織物的製品製備由HYAFF11和DMSO組成的溶液(110μg/ml)。一旦完成溶解作用，通過20μm濾布過濾該溶液，並將其放置在真空中脫氣2小時。將5ml溶液傾出，並將其塗布在玻璃板上，然後將HYAF11紗布(10×20cm)放在上面，小心使其粘合，不產生任何皺摺或空氣泡，再將另外10ml溶液傾在它上面。將該溶液均勻塗在紗布上，並除去所有多餘溶液。將上述玻璃板浸入裝有乙醇的浴槽中30分鐘，使該製劑凝聚，並使該玻璃板脫除。然後將該製劑在乙醇中放置16小時，並在63℃下，在一塊板上，在真空條件下乾燥30分鐘。例11由HYAFF7加強的HYAFF11膜按照如下方法製備一種複合膜，它包括透明質酸苄酯HYAFF11，即用苄基醇100％酯化的透明質酸，以及包括透明質酸乙酯HYAFF7(即用乙醇100％酯化的透明質酸)的網狀物加強層，該複合膜定量為14mg/cm2，0.25mm厚、在乾燥狀態下的最小斷裂抗拉強度和伸長量分別為400kg/cm2和7％，在溼潤條件下的最小抗拉強度和伸長量分別為50kg/cm2和55％，在乾燥狀態下的撕裂強度為90kg/cm2，在溼潤狀態下的撕裂強度為50kg/cm2。由濃度為125mg/ml的HYAFF7二甲基亞碸溶液獲得HYAFF7網狀物。用一臺齒輪計量泵將所述溶液輸入用於溼擠壓的由100個孔組成的噴絲頭中，每個孔的直徑為65μm。將擠出的多重絲送入含有無水乙醇的紡絲浴(coagulationbath)中，然後通過輸送輥進行3個連續的同樣裝有無水乙醇的漂洗浴中。第3個輥(III)與第1個輥(I)的速度之比被稱作牽伸比，其值為1.05，而單個輥的速度分別為23rpm(輥I)、24rpm(輥II和III)、25rpm(輥IV)。一旦複合絲從漂洗浴中通過，用45℃的暖空氣使其乾燥，並卷繞到卷繞架(8)上。所述絲為237旦。然後將該絲每米加捻135次，並在一臺織機上將其織成14號的光滑的針織物。從織機中出來的織物進入一臺壓延機，以使其變薄。圖2表示由上述方法製成的網狀物。通過兩個氣刷塗布聚合物基質，由所述氣刷噴塗濃度為40mg/ml的HYAFF11在二甲基碸中組成的溶液。由此噴塗過的網狀物通過含有無水乙醇的紡絲浴，並通過裝有純蒸餾水的漂洗室，再進入溫度為50℃的特殊乾燥室(17)。例12由HYAFF11組成的非織造織物通過以下方法製備一種含有透明質酸苄酯HYAFF11的非織造織物，其重量為40gr/mq，0.5mm厚。在一個槽中製備濃度為135mg/ml的溶於二甲基亞碸中的HYAFF11溶液，並用一臺齒輪計量泵將其輸入用於溼擠壓的噴絲頭，該噴絲頭由3000個孔組成，每個孔為65μm。擠出的絲團進入含有無水乙醇的紡絲浴中。然後通過輸送輥進入2個連續的裝有無水乙醇的漂洗浴中。第一輥的牽伸比被設定為0，而其它輥之間的牽伸比設定為1.05。一旦其通過了漂洗浴，即用溫度為45-50℃的熱空氣將絲束吹乾，並用輥割刀將其切成40mm長的纖維。由此獲得的纖維團被傾入通向梳理/交叉卷板機的槽裡，當其從上述機器中出來時成為厚1mm，重40mg/mq的織物。然後用由HYAFF11和二甲基亞碸組成的濃度為80mg/ml的溶液噴塗所述織物，放入乙醇紡絲浴中，浸入漂洗室中，並最終放在乾燥室中。該材料的最終厚度為0.5mm。例13由HYAFF11和HYAFF7組成的非織造織物通過以下方法獲得重200gr/mq、厚1.5mm的非織造織物，該織物包括等量的透明質酸乙酯即HYAFF7，和透明質酸苄酯即HYAFF11組成的混合物。在一個螺旋式混合器中充分混合通過例10所述紡絲方法獲得的長3mm的HYAFF7和HYAFF11的纖維。將該纖維混合物輸入梳理機中，由該梳理機出來時成為厚1.8mm、重200gr/mq的織物。將該織物放入針剌機中，將其轉變成厚1.5mm、重200gr/mq的非織造織物，使兩種材料完美地混合在一起。例14偏苄酯和全苄酯的非織造織物通過以下方法製備重40gr/mq、厚0.5mm的非織造織物，該織物包括等百分比的透明質酸苄酯HYAFF11和透明質酸偏(75％)苄酯HYAFF11p75組成的混合物。HYAFF11p75的製備如下。將10g透明質酸四丁銨鹽，MW＝620.76，相當於16.1nmole，溶於由N-甲基吡咯烷酮/H2O，90/10，2.5％(重量)組成的混合物中，得到400ml溶液。將該溶液冷卻至10℃，然後用純化N2鼓泡通過該溶液，歷時30分鐘。然後用1.49ml(相當於12.54mmole)苄基溴酯化該溶液。在15-20℃下將該溶液輕輕振蕩60小時。隨後的純化是這樣進行的加入NaCl飽和溶液後在乙酸乙酯中沉澱，然後用80/20的乙酸乙酯/無水乙醇混合物洗滌。過濾分離出固相，並用無水丙酮處理。由此獲得6.8g產物，相當於產率約為95％。在一個螺旋式混合器中充分混合用例1所述方法獲得的40mm長的HYAFF11和HYAFF11p75纖維。將該混合纖維輸入梳理機中，該梳理機將其製成厚1mm、重40mg/mq的織物。然後用由HYAFF11和二甲基亞碸組成的濃度為80mg/ml的溶液噴塗該織物，將其放入乙醇紡絲浴中，再放入含有水或比例為10-95％乙醇的水和乙醇混合物的漂洗室裡，最後放入乾燥室裡。該材料的最終厚度為0.5mm，並且HYAFF11和HYAFF11p75纖維完美地混合併粘接在一起。例15基於HYAFF11的多層非織造織物通過以下方法獲得一種多層非織造織物，該織物由一層透明質酸苄酯HYAFF11和一層非織造粘膠(得自ORSA的Jettex2005)組成，其定量為80g/mq，厚2mm，吸水百分比為560％(重量)。要接觸皮膚的那層包括由溼紡技術生產的HYAFF11纖維，形式為30g/mq的片材。將纖維製成片材。通過縫合將該層連接於定量為30g/mq的第二層非織造粘膠織物上。由此獲得的最後的非織造產品包括兩個完美的粘合的層，其總定量為80g/mq，厚2mm，吸水百分比為560％(重量)。例16基於HYAFF11的多層非織造織物通過以下方法製備一種多層非織造織物，該織物包括由透明質酸苄酯HYAFF11和藻酸鈣以1∶1的比例組成的混合層，以及一種聚丙烯加強非織造織物(紡粘非織造基，50g/mq，購自NEUBERGER)，其定量為70g/mq、厚1.5mm，吸水百分比為450％(重量)。混合用常規溼紡技術獲得的長40mm的HYAFF11纖維，將其製成20g/mq的片材，通過縫合使其接合於定量為50g/mq的紡粘非織造織物。所得到的材料包括兩層非織造織物，總定量為70g/mq，厚1.5mm，吸水百分比為450％(重量)。例17基於HYAFF11的多層非織造織物通過以下方法得到一種多層非織造織物，其包括一層透明質酸苄酯HYAFF11和一層諸如LYOBEND(得自DELCON)的聚亞胺酯泡沫，其定量為100g/mq，厚6mm，吸水百分比為860％。將與皮膚接觸的那層包括用溼紡技術製成的HYAFF11纖維，並將其製成45g/mq的片材，通過縫合使其結合於第二層聚亞胺酯泡沫上。所得到的非織造產品包括兩個完美粘合在一起的層，其總定量為100g/mq，厚為6mm，吸水百分比為860％。例18製備一種由透明質酸衍生物製成的膜，所述透明質酸80％的羧基官能團被苄基醇(C6H5-CH2-OH)酯化，10％的羧基官能團參與內酯鍵的形成，其餘10％與鈉成鹽。將6.21gr分子量為180,000Da(10mEq)的透明質酸四丁銨鹽在室溫下溶解於248ml二甲基亞碸(DMSO)中。向該溶液中加入0.951ml苄基溴(8.0mEq)，並將該溶液在30℃下放置12小時。加入0.101gr三乙胺(1.0mEq)，並攪拌該溶液30分鐘。將由0.255gr(1.0mEq)2-氯-1-甲基-碘化吡啶溶於60mlDMSO中組成的溶液加入，並在30℃下將該混合物放置15小時。加入2.5％(w.v)的NaCl水溶液，並將所得混合物傾入750ml丙酮中，同時攪拌。生成一種沉澱，過濾該沉澱，並用100ml5∶1的丙酮/水將其洗3次，用100ml丙酮洗3次，並最終在30℃下真空乾燥24小時。由此獲得4.5gr需要的產物。在鹼解後通過氣相色譜定量測定苄基醇的含量。按照披露於「Quantitativeanalysisviafunctionalgroups」(第4版，JohnWileyandSons出版)一書的第169-172頁上的皂化方法測定總酯基含量。將由此製成的酯衍生物在30℃下溶於DMSO中，使其濃度為150mg/ml。通過20μm的網狀物過濾溶解的衍生物，並放入與厚度＜1mm的薄膜擠出機連接的擠壓反應器中。該產品被擠入裝有能從產品中萃取出DMSO的溶劑(如乙醇)的紡絲浴中，並將來自薄膜擠出機的材料卷纏到一系列裝有風扇的輥上，以乾燥所述膜。臨床前研究以下研究報導了顯示本發明製品在預防手術後粘連方面的用途的結果，並給出了表示該製品相對現有製品的改進的結果。研究1該研究證實了在一種大鼠肝中誘發的損傷的模型中觀察到的手術後粘連的高發生率，將其作為陽性對照與源於HA的保健和手術用品在預防粘連發生方面的作用進行比較。在這些實驗中，使用重275-300gr的SpragueDawley大鼠。使21隻動物受傷。在無菌條件下製備氯胺酮100mg/kg和塞拉嗪11mg/kg稀釋液，通過肌內注射麻醉動物，然後切腹對每隻動物施行剖腹術。對其肝臟進行定位並使其外露，通過用無菌止血塞施加輕微壓力在肝的下葉上產生擦傷，直到血被吸出。在對創面止血後用型號為3.0的絲縫線縫合切口。7-21天後殺死這些動物。基於以下指標，按照可用手術鉗將所述肝葉的相鄰表面(上和下表面)分開的難易程度評價粘連0無粘連—可將兩表面分開1輕度—中度粘連，用手術鉗可將兩表面拉開；2兩表面間的明顯粘連，任何將其分離的努力均會導致組織的撕裂；在該動物模型中，被定為2級的粘連被視為臨床上顯著。在該陽性對照組(粘連發生)，21隻動物中的17隻(80.9％)出現2級粘連。研究2該研究證實了當單獨或與止血SurgicelTM和肝素50IU/ml一起使用由交聯的透明質酸(ACP)製成的凝膠或基於HYAFF11(HA的苄酯)時可明顯減少粘連發生。將ACP凝膠塗在待治療的表面。將例1所述手術方案作為誘發粘連生成的動物模型。在表1中示出了肝左葉相鄰表面之間粘連生成的明顯減少。表1可以看出，用這種緩慢的生物可靠的生物材料作為兩相鄰表面間阻隔炎性細胞的屏障，可降低粘連的發生，而例1所述對照組的粘連發生為80.9％。研究3該例證實了在一種大鼠腹壁上誘發的手術損傷模型中觀察到的手術粘連發生的高發生率，將其作為陽性對照，與由本發明HA衍生物(HYAFF11+聚丙烯網狀物)組成的保健品在預防粘連發生方面的作用進行比較。共使24隻動物(12隻對照，12隻試驗)受傷。在無菌條件下製備氯胺酮100mg/kg和塞拉嗪11mg/kg稀釋液，通過肌內注射麻醉動物，然後通過切腹對每隻動物施行剖腹術。用兩個手術鉗支起切口左邊的皮片，以使腹壁外露。用手術剪切除1.5cm×1.5cm的腹膜表面，直到出現滲出液，但不切除肌肉束。在對照組中，為了確保腹壁的抗張能力，必須用型號為6.0的可生物吸收的Vycil縫線將聚丙烯網狀物(大小為損傷部位的兩倍)縫在受傷表面上。在使用材料之前，必須對創面進行徹底止血。在第14天(即例1所述期間的中間時刻)殺死動物，然後按以下等級評價粘連0無粘連發生；1無血管生成的輕度粘連，可輕易分離；2無血管生成的中度粘連，可用手工拉開；3牢固的粘連，不透明且有血管生成，難於分離，需要使用手術刀；4很牢固的粘連，厚、不透明且生成血管，只能用手術剪切開，因此會破壞組織。大於2級的粘連被視為顯著。在陽性對照組(粘連發生)中，所有12隻動物(100％)均出現2級以上的粘連；如表2所示，當使用本發明的產品時，腹壁與內臟之間粘連的發生率顯著降低。表2可以看出，將所述本發明的HYAFF11材料用作受傷的內表面與相鄰器官之間的屏障(不能透過炎性細胞)，可減少粘連的發生，形成對照的是，在僅用聚丙烯網狀物處理的對照組中100％發生粘連。研究4該研究證明了在其盲腸受損的大鼠模型中，凝膠狀的自身交聯透明質酸(ACP)在被用作塗層時可減少手術粘連的發生。正如隨後將要披露的，當僅作鹽水漂洗和止血處理時，這種類型的損傷會導致粘連的發生。與例1一樣，使用重275-300gr的SpragueDawley大鼠。在無菌條件下製備氯胺酮100mg/kg和塞拉嗪11mg/kg稀釋液，通過肌內注射將動物麻醉，然後通過切腹對每隻動物施行剖腹術。定位盲腸並使其外露。用直徑1cm的銅片使帶有一固體的盲腸的表面受到熱損傷，該銅片與一個焊接用具連接，並通電調溫至69.5℃。讓銅片與腸表面接觸15秒。形成一個界限分明的受損部分，有滲出液流出。在用鹽水漂洗受損部位後，用SurgicelTM止血，用型號為3.0的絲縫線縫合切口。在14天(即例1所述期間的中間時刻)殺死動物後，按以下等級評價粘連0無粘連；1輕度粘連，無血管生成，可輕易分離；2中度粘連，無血管生成，可用手工拉開；3牢固粘連，不透明且生成血管，難於分離，需要使用手術刀；4很牢固的粘連，厚，不透明且有血管生成，只能用手術剪切開，結果會損傷組織。在該動物模型中，將2級以上的粘連視為顯著。與僅用鹽水漂洗和止血的對照相比，當把ACP凝膠用作屏障時可明顯減少粘連的發生(表3)。表3可以看出，與僅用鹽水漂洗和止血的對照相比，將所述材料用作屏障可減少粘連的發生。研究5透明質酸衍生物HYAFF-7和HYAFF11p75在預防大鼠肝損傷模型中的手術後粘連方面的作用動物模型雄性HarlanSD大鼠，重250gr。損傷類型用碘液徹底清潔腹面，然後切出約3cm的切口，以露出肝臟。通過摩擦使肝的右下葉受損，並用無菌木製藥刀形成損傷，直至出血。試驗材料實驗1HYAFF11p75，紗布和非織造織物形式的透明質酸75％偏苄酯。實驗2HYAFF7，紗布和非織造織物形式的透明質酸全乙酯。材料的使用在用常規方法進行認真止血後，將試驗和對照材料放在下(創面)與上肝葉(相鄰表面)之間，不使用縫線，以產生屏障作用，並預防粘連發生。評價和觀察在手術後第7-21天之間進行觀察。根據以下目測等級評價粘連的生成0＝無粘連1＝輕度粘連2＝明顯存在粘連除了通過粘連等級評價以外，通過顯微鏡觀察評價發炎程度(對使用材料的組織反應)，用蘇木精/洋紅和Mallory′s三重染劑對組織學樣品進行染色。結果實驗1對基於HYAFF11p75即透明質酸的偏苄酯的材料進行單獨試驗，與Surgicel止血藥混合試驗，並與止血藥加上肝素飽和液(1,000Uml)混合試驗。上述程序是外科學中的常用方法。圖1是表示單獨使用所述生物材料時其性能的圖示。在使用基於HYAFF11p75和Interceed的生物材料時，未發現預防粘連方面的效果，在後一種情況下儘管無顯著差別，但似乎有好轉趨勢，但肝葉完全粘連，並能見到顯著的炎性反應。在進行活組織檢查的組織學觀察時發現了相同的結果。其中，可以見到炎性細胞，嗜中性細胞和巨噬細胞和成熟膠原纖維。在圖2和3中，將所述材料與Surgicel和Surgicel+肝素組合使用。用基於HYAFF11p75的材料證實了圖1中觀察到的傾向，但用肝素飽和的Interceed似乎效果更好。這種現象被組織學觀察所證實。總之，基於HYAFF11p75的材料不能用於預防手術後粘連，因為所述炎性作用可能是由於低分子量透明質酸寡聚體的釋放所至，鑑於該產品的降解時間極短。實驗2在實驗2中，與Surgicel和Surgicel+肝素組合後對基於HYAFF7即透明質酸乙酯的生物材料進行了試驗。在每一種情況下均未見到在預防手術後粘連方面的作用。與Surgicel+肝素一起使用的Interceed似乎更為有效(圖4)。顯微觀察證實了上述結果，並顯示，在用HYAFF7治療時釋放出了大量的炎性細胞和膠原纖維。在這種情況下，基於HYAFF7的生物材料最終不能用於預防手術後粘連，因為似乎有乙醇逐漸釋放到機體內。研究6基於HYAFF11的生物材料在兩種誘發損傷的不同動物模型中在預防手術後粘連方面的效力1)大鼠的肝內擦傷；2)大鼠腹壁損傷動物模型1在用碘和乙醇對腹區進行消毒後，切開一個近中切口，使肝臟外露。在該動物模型中，刮擦下肝葉的內表面，直到開始出現滲出液。用Tabotamp(Ethicon)對受到擦傷的部位進行認真止血，並將所述材料放在受傷的表面上，不使用縫線，因為該產品具有高粘特性。對兩種基於HYAFF11的製品進行試驗，兩種製品的商品形式為20μm厚的連續膜，被稱為Transprocess和Hyalobarrier20。手術後14天進行肉眼檢查，用上述分級系統確定粘連。進一步評價粘連為2級(顯著粘連)的動物的百分比。結果圖5是在上述實驗中獲得的粘連等級的圖示。與未處理的對照和用高-和低-分子量的透明質酸進行的兩種處理相比，Hyalobarrier20可減少粘連發生的發生率。記錄到了類似的結果，不過從統計學上看，與使用另一種HYAFF11基材料即Transprocess無明顯差異。圖6表示在每一處理組中2級粘連(手術上明顯的粘連)的百分比。在這裡再次證實了前面的圖示(圖1)顯示的傾向，2級粘連減少(對於Hyalobarrier20和Transprocess處理來說，其百分比低於50％。)動物模型2用碘和乙醇對腹區進行消毒，然後切開一個約5cm長的正中切口，以露出腹壁和腹膜。用手術刀切出2cm×2cm的切口，取出腹膜和肌肉層。在這種類型的手術中，必須用一種材料縫合創面，以利於組織生長，同時確保適當的抗拉強度，以防腹膜壁萎陷。通常，使用帶聚合物基質的非降解材料，如聚丙烯、聚酯或膨脹的聚四氟乙烯網狀物。然而，單獨使用上述材料不足以避免與腸環形成粘連，結果造成腸阻塞和慢性疼痛。在手術後14天進行肉眼評價，使用0-4級的粘連分級標準。進一步評價2級以上粘連(明顯粘連)動物的百分比。結果該實驗證實了合成Prolene網狀物(聚丙烯網狀物，廣泛應用於腹部手術)上的HYAFF11塗層和縫合在Prolene網狀物上的一層HYAFF11可減少手術後粘連的發生。圖7表明，與僅用Prolene網狀物相比，被稱為HyalobarrierPlus(HYAFF11塗布並凝聚在Prolene上)的組合製品和縫合在Prolene上的Hyalobarrier薄膜可顯著減少粘連。圖8證實了這一傾向，在用HYAFF11處理後2級以上粘連(顯著粘連)的百分比低於僅用Prolene網狀物處理的。研究7在大鼠肝損傷模型和大鼠腸損傷模型中，ACP凝膠生物材料在預防手術後粘連形成方面的作用。該研究的目的是評價ACP凝膠基生物材料在減輕或預防手術後粘連發生方面的效果。對照高分子量透明質酸和市售生物材料OxidizedRegeneratedCellulose(TC7Interceed*)評價試驗材料在用於腹部骨盆和婦科手術中預防粘連發生時的性能。使用一種大鼠肝損傷模型和大鼠腸燒傷模型，因為它們是實驗粘連誘導的典型模型。通過粗略觀察損傷部位，用粘連等級評價試驗材料和對照材料在預防手術後粘連方面的效果。採用大鼠肝損傷模型(實驗1)和大鼠腸損傷模型(實驗2)，因為它們是實驗粘連誘導的標準化可再生模型。受傷後用ACP基生物材料作為肝葉與內臟相鄰表面之間的屏障。在兩個實驗中，評價ACP凝膠預防或減輕粘連發生的效果，通過與一種廣泛用於臨床實踐的吸收性OxidizedCellulose粘合屏障即TC7Interceed、一種共聚溶液「Thermogel」、一種高分子量透明質酸溶液和一組未處理動物(模擬手術)進行比較。實驗1大鼠肝擦傷試驗材料12以60mg/ml的濃度將ACP凝膠懸浮於水中。通過高壓滅菌對所提供的試驗材料進行滅菌，將入5ml注射器中，並在無菌條件下操作。在用Tabotamp對擦傷的肝葉表面止血後將ACP作為塗層塗在肝葉上。每隻動物接受足以完全覆蓋受損面的量(約2ml)的ACP凝膠，在手術時一次使用。對照材料123在無菌操作條件下切割Interceed，單獨使用並在肝素(500U/ml)中飽和後使用，以便保持肝葉的兩相鄰表面分離，使其尺寸超出受傷面範圍幾個毫米。HYAL即高分子量透明質酸(以10mg/ml的濃度溶於水中)和Thermogel以裝在無菌注射器中的形式購買。直接使用Interceed，無須手術縫合。在止血後用注射器將HYAL即，透明質酸和Thermogel塗在創面上(塗敷)。每隻動物接受足以完全塗敷或覆蓋創面的量的上述製品，在手術時一次使用。實驗設計將SpragueDawley大鼠(275-300g)用於該實驗。根據在前面的實驗中獲得的經驗，14天的時間被認為是評價這些動物模型的粘連生成的適當時間點。提供用於該研究所需的動物數，連續數日預備動物。將總數為78隻的動物用於以下方法預備動物通過肌內注射氯胺酮(GelliniPharmaceutical)/賽拉嗪(Bayer)麻醉動物，剃毛，然後用碘液和乙醇消毒。在左側剖腹，將左肝葉向上翻起，用木質塗布器輕擦左和近中肝葉，直至有出血或血清滲出液的跡象。使用材料在用Surgicel或TabotampTM止血後，將試驗及對照材料放在兩肝葉的表面之間，以便覆蓋所有擦傷部位，並在兩肝葉之間形成屏障。用3.0號的絲縫線將手術部位縫成兩層。在手術結束時服用抗生素(皮下注射30,000I.U/大鼠的Procacillina)和止痛藥(肌內注射0.05mg/kgTemgesic)4天。粘連等級手術後14天用CO2對動物實施安樂死。通過粗略觀察評價粘連等級。採用以下粘連等級0＝無粘連1＝低至中度粘連。通過用鑷子機械牽拉將兩肝葉手術分離。2＝顯著粘連，兩肝葉完全粘連在一起，任何將其分開的企圖都會導致組織的斷裂。通過目測評價所述材料的有無評價材料的再吸收性；並對手術部位照相。在做過粗略觀察之後，手術切除整個肝臟，並放入10％緩衝的福馬林中48小時。固定之後，用解剖刀片從肝上切下包括擦傷部位的2.0mm的橫切片。對由此獲得的樣品進行組織學分析。組織分析組織學分析在中性緩衝的10％福馬林中固定樣品，然後脫水，並用標準技術埋入石蠟中；用Masson′sTrichnome(用於組織炎性反應)並在必要時用甲苯胺藍(用於存在的殘留材料)對8μm切片進行染色。實驗2大鼠腸燒傷試驗材料將批號為3/94的ACP5％高分子量凝膠以20mg/ml的濃度懸浮於水中，批號為101/94的ACP5％以50mg/ml的濃度懸浮於水中。上述所有試驗材料均高壓滅菌，並以5ml注射器形式提供，並在無菌條件下操作。在用Tabotamp止血以後將ACP凝膠塗在燒傷的腸表面上。每隻動物接受足於完全覆蓋受損部位量(約2ml)的上述材料，在手術時以單次劑量使用。對照材料123在無菌操作條件下切割Interceed，將其單獨使用或並在肝素(500U/ml)中飽和後使用，使肝葉的兩相鄰表面保持分離，分離部分的大小超出受損部分幾個毫米。購買裝在無菌注射器中的HYAL即高分子量透明質酸(以10mg/ml的濃度溶於水中)和Thermogel。在無手術縫合的條件下通過直接塗敷使用Interceed。止血後用注射器將透明質酸和Thermogel塗在受傷表面(塗敷)。每隻動物接受的用量足以完全塗敷或覆蓋創面，在手述時通過單一劑量使用。實驗設計將SpragueDawley大鼠(275-300g)用於該實驗。根據在前面的實驗中獲得的經驗，將14天定為評價該動物模型的粘連發生的合適時間點。提供該實驗需要的動物數量，連續數日預備動物。將總數為59隻的動物用於以下方案實驗2預備動物通過肌內注射氯胺酮(GelliniPharmaceutical)/賽拉嗪(Bayer)麻醉動物，剃毛，然後用碘液和乙醇消毒。透過皮膚和肌肉組織在腹部中線切出一個切口，使腸外露。用電控加熱的銅片(直徑1cm)在盲腸表面產生燒傷，用標準壓力在158°F(69.3℃)下灼15秒。使用材料在用Surgicel或TabotampTM止血以後，將試驗和對照材料放在腸表面上，不縫合，以蓋住整個燒傷部位，並在腹膜與內臟之間形成屏障。用連續的3-0絲縫線縫合肌腹膜層，皮層用皮膚和不連續的3-0絲縫線縫合。在手術結束後服用抗生素(皮下注射Procacillina30,000I.U./大鼠)和止痛藥(肌內注射Temgesic0.05mg/kg)4天。觀察與測定粘連等級手術後14天，用CO2對動物實施安樂死。通過粗略觀察評價粘連等級。採用以下粘連等級0＝無粘連1＝輕度粘連，無血管，易於分離2＝中度粘連，無血管，連續的，可手工分離3＝不透明，有血管，難於分離，需要手術刀分離4＝緻密，不透明，有血管，僅能用手術剪解剖，並會導致組織損傷。通過目測估計所述材料的存在來評價該材料的再吸收性；而且，對處理部位照相。結果實驗1在進行麻醉期間有一隻動物死亡，易於放置所述生物材料。發現該材料粘連於下肝葉的組織上。用ACP處理的動物中在手術後未發現有臨床症狀或患病狀態。2隻用透明質酸處理的動物在手術後死去。屍體檢查發現有內出血。評價粘連的生成在第14天評價組織受傷後在肝葉的兩相鄰表面之間產生的粘連。在觀察時中止一切處理；用ACP5％(批號104/96)生物材料處理的動物的粘連等級(圖9)明顯低於所有對照材料和未處理對照的。在ACP5％(批號101/96)處理中，粘連的減輕優於用肝素飽和的TC7Interceed，但未發現統計學上的差異；不過，與對照和未處理相比，上述兩種處理有顯著差異(p＜0.05)。組織形態學觀察在手術後14天進行顯微鏡檢查時，發現ACP處理具有高度生物相容性，並發現極低的炎性反應，具體地講，僅存在少量炎性細胞，如嗜中性細胞和巨型細胞，在兩肝葉的間隙裡未發現這些細胞的遷移或增多，TC7Interceed*被證實有組織反應性，因此，在很多場合肝表面被部分粘住；通過觀察證實了組織化膠原纖維的存在，如果用肝素溶液飽和該處理的話，似乎可減輕炎性反應。載玻片上的大部分生物材料似乎被完全生物降解。未處理對照產生中-高度炎性反應。實驗2在進行麻醉時共有2隻動物死亡，容易放置生物材料，並且在放置後不會移動。在手術後，在ACP處理組動物中，未發現發病的臨床跡象或患病跡象。用分子量1.2×106的透明質酸處理的4隻動物和用Thermogel處理的3隻動物在手術後2-5天死亡。在所有動物上均可通過屍檢發現內出血。評價粘連發生在該實驗中，手術後14天(圖10)，發現與分子量為1.2×106的透明質酸和未處理對照相比，批號為101/94和3/94的ACP5％凝膠的手術後粘連發生減輕，ACP凝膠的性能可與於肝素飽和的InterceedBarrier相比，在這些處理與未處理對照組之間存在統計學上的差異(p＜0.05)；所有處理及對照均被完全吸收。組織形態學觀察在第14天進行觀察時，ACP處理表現出很輕的組織炎性反應，粒化組織的厚度很薄，未發現腸上有不利反應，如與相鄰的腹膜表面粘連。原纖維膠原開始形成組織，並完成癒合過程。在透明質酸處理中觀察到炎性反應，並有大量誘發粘連的膠原纖維存在；可見厚的粘化組織。在未處理對照組中發現相同的組織形態學特徵。討論粘連的發生是在腹部骨盆手術後導致手術後發病的首要因素，通常會導致小腸梗阻及其它重病。當涉及到骨盆內臟時，這種粘連還會潛在損害生理功能，並導致不育。對於手術後粘連發生及再發生的機理還不十分了解。上述實驗證據表明，在癒合過程中，兩手術創面之間以自然對接形式產生粘連，因為將兩個組織部位修復成單一的癒合部位更為有效，導致兩相鄰表面間的癒合粘連。在該篩選中，發現手術後使用常規手術止血劑(Surgicel)，並接著放置可生物降解的透明質酸衍生物屏障，可避免粘連的生成。另外，該材料可與纖溶劑合併使用。與氧化再生的纖維素TC7Interceed*相比，粘連明顯減輕。HYAFF11生物材料表現出良好的生物相容性和極低的炎性反應。試驗過的FAB生物材料降解速度不同並取決於該處理的物理形式；HYAFF11生物材料可存在幾周時間。用這類透明質酸衍生物可獲得的受控降解速度的範圍可用於預防在不同的解剖部位的手術後粘連，如生殖部位或腹部骨盆部位。上述結果表明，透明質酸衍生物(HYAFF11網狀物和膜)可用於預防手術後粘連的發生。以上是對本發明的說明，很顯然，可以很多方式對本發明加以變化。這種變化不被視為脫離了本發明的實質和範圍，正如本領域技術人員會意識到的，所有這類改進均包括在以下權利要求範圍內。權利要求1.一種用於預防組織的手術粘連的複合生物材料，包括至少一種選自下列的透明質酸衍生物(a)透明質酸苄酯，其中，透明質酸75-100％的羧基被苄基酯化，而至多25％的羧基被C10-C20脂族醇的烷基酯化，條件是至少80％的羧基被酯化；和(b)透明質酸的自身交聯衍生物，其中，透明質酸0.5-20％的羧基與同一或不同透明質酸的羥基交聯。2.如權利要求1的複合生物材料，其中，所述衍生物是一種全苄酯，其中透明質酸的所有羧基被苄基酯化。3.如權利要求1的複合生物材料，其中，所述衍生物是苄酯，其中80％的羧基被苄基酯化。4.如權利要求1的複合材料，其中，所述衍生物是苄酯，其中75％的羧基被苄基酯化，其餘25％的羧基被C10-C20脂族醇的脂族殘基酯化。5.如權利要求4的複合材料，其中，所述醇是十八烷醇或棕櫚醇。6.如權利要求1的複合材料，其中，所述自身交聯的衍生物為透明質酸分子的4.5-5.0％的羧基發生交聯。7.如權利要求1-6中任一項的複合材料，它還包括一種不能生物降解的合成聚合物。8.如權利要求7的複合材料，其中，所述合成聚合物選自聚丙烯、聚乙烯、聚酯和聚四氟乙烯。9.如權利要求1-8中任一項的複合材料，為膜、網狀物或機織織物或非織造織物形式。10.如權利要求1或6的複合生物材料，為凝膠形式。11.將一種生物材料用於預防組織的手術粘連的用途，其中，所述生物材料包括至少一種選自下列的透明質酸衍生物(a)透明質酸苄酯，其中，透明質酸75-100％的羧基被苄基酯化，而至多25％的羧基被C10-C20脂族醇的烷基酯化，條件是至少80％的羧基被酯化；和(b)透明質酸的自身交聯衍生物，其中透明質酸0.5-20％的羧基與同一或不同透明質酸分子的羥基交聯。12.如權利要求11的用途，其中，所述衍生物是一種全苄酯，其中，透明質酸的所有羧基被苄基酯化。13.如權利要求11的用途，其中，所述衍生物是一種苄酯，其中80％的羧基被苄基酯化。14.如權利要求11的用途，其中，所述衍生物是苄酯，其中75％的羧基被苄基酯化，其餘25％的羧基被C10-20脂族醇的脂族殘基酯化。15.如權利要求14的用途，其中，所述醇是十八烷醇或棕櫚醇。16.如權利要求11的用途，其中，所述自身交聯的衍生物為透明質酸分子4.5-5.0％的羧基發生交聯。17.如權利要求11-16中任一項的用途，它還包括一種不能生物降解的合成聚合物。18.如權利要求17的用途，其中所述合成聚合物選自聚丙烯、聚乙烯、聚酯和聚四氟乙烯。19.如權利要求11-18中任一項的用途，其中，所述生物材料為膜、網狀物或機織織物或非織造織物形式。20.一種用於預防組織的手術粘連的方法，包括對與手術相關的組織使用一種生物材料，該材料包括至少一種選自下列的透明質酸衍生物(a)透明質酸苄酯，其中，透明質酸75-100％的羧基被苄基酯化，而至多25％的羧基被C10-C20脂族醇的烷基酯化，條件是至少80％的羧基被酯化；和(b)透明質酸的自身交聯衍生物，其中，透明質酸0.5-20％的羧基與同一或不同透明質酸分子的羥基交聯。21.如權利要求20的方法，其中，所述衍生物是一種全苄酯，其中透明質酸的所有羧基被苄基酯化。22.如權利要求20的方法，其中，所述衍生物是一種苄酯，其中80％的羧基被苄基酯化。23.如權利要求20的方法，其中所述衍生物是一種苄酯，其中75％的羧基被苄基酯化，其餘的25％羧基被C10-20脂族醇的脂族殘基酯化。24.如權利要求23的方法，其中，所述醇是十八烷醇或棕櫚醇。25.如權利要求20的方法，其中，所述自身交聯的衍生物為透明質酸分子4.5-5.0％的羧基發生交聯。26.如權利要求20-25的方法，它還包括一種不能生物降解的合成聚合物。27.如權利要求26的方法，其中，所述合成聚合物選自聚丙烯、聚乙烯、聚酯和聚四氟乙烯。28.如權利要求20-27的方法，其中，所述生物材料為膜、網狀物或機織織物或非織造織物形式。全文摘要用於手術創面,特別是用於預防手術後粘連的新型生物材料,主要由透明質酸的酯化衍生物或由透明質酸的交聯衍生物組成。文檔編號A61P41/00GK1199343SQ96197522公開日1998年11月18日申請日期1996年8月29日優先權日1995年8月29日發明者D·普裡薩託,A·帕維希奧,L·卡萊加羅申請人:菲迪亞高級生物聚合物公司