一種減輕藥物心臟毒性的甘草提取物及應用的製作方法

2023-08-04 15:20:41

專利名稱：：一種減輕藥物心臟毒性的甘草提取物及應用的製作方法
技術領域：
：本發明屬中藥提取物，涉及從中藥甘草中提取的糖苷類物質，主要包括黃酮苷和三萜皂苷成分，該提取物與蒽環類抗腫瘤藥物聯合使用時，能夠減輕其心臟毒性，同時並不減弱蒽環類抗腫瘤藥物(如阿黴素)的抗腫瘤效果。
背景技術：
：自1957年分離出第一個蒽環類抗癌藥柔紅黴素(Daunorubicin)以來，蒽環類抗癌藥已經成為臨床上廣泛使用的一類化療藥物。阿黴素(Doxorubicin,DXR;Adriamycin，ADM)自70年代進入臨床試驗以後，因具有抗瘤譜廣、臨床療效好等顯著特點、尤其對乏氧腫瘤細胞有效，已成為蒽環類抗癌藥的代表藥物。ADM對多種腫瘤有效，包括血液系統腫瘤、惡性淋巴瘤、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、卵巢癌、宮頸癌、睪丸癌、頭頸部腫瘤和骨軟組織腫瘤等。ADM價格低廉，療效-費用比較高，是當前臨床上常用的抗腫瘤藥物之一。但由於其主要毒副反應心臟毒性的限制，尤其是劑量累積性心臟毒性，嚴重限制了其在臨床上的廣泛和長期使用。目前，已發現了多種阿黴素結構類似物。如臨床得到廣泛使用的吡柔比星和表阿黴素心臟毒性均低於阿黴素。而阿黴素通過劑型改變，如製成脂質體阿黴素，也可有效降低毒性。但是，這些藥物價格較高，且並不能完全克服心臟毒性的問題，臨床使用劑量仍然受到限制。最近，FDA批准了右雷佐生(dexrazoxane)作為化學保護劑能有效地預防蒽環類抗腫瘤藥物如阿黴素等誘發的心臟毒性，且不影響化療藥物的抗腫瘤活性。它通過在細胞內水解成螯合劑，與鐵離子結合，幹擾Fe^-蒽環類藥螯合物的形成，進而降低了氧自由基產生。此外，右雷佐生也抑制了這類螯合物對心脂質的過氧化，因而對心臟具有獨特的保護作用。該藥現己在北美和歐洲國家上市，主要用於晚期乳腺癌患者。該品作為唯一上市的對蒽環類抗腫瘤化學藥品心臟毒性有預防作用的保護劑，已在臨床上取得了顯著的療效。但是，右雷佐生的用藥劑量很大，通常是阿黴素的10倍，而且有一定的腎毒性。如果採用右雷佐生與阿黴素合併給藥的方案，病人的經濟負擔將提高5-10倍。因此，開發新的抗阿黴素毒性心臟保護劑具有現實意義。
發明內容本發明的目的是提供一種減輕藥物心臟毒性的甘草提取物，該提取物來源於豆科植物甘草，如烏拉爾甘草(G^c_y/r/n'zawra/era^)、脹果甘草(G/"y7"to^^.)及光果甘草(G(/Wra丄.)的乾燥根及根莖。其主要活性成分為三萜皂苷和黃酮糖苷類物質，其中三萜皂苷類成分的含量在1030%，黃酮類成分含量在2040%。本發明的另一個目的是提供甘草提取物在製備減輕蒽環類抗腫瘤藥心臟毒性的藥物中的應用。本發明的甘草提取物與蒽環類抗腫瘤藥物聯合使用時，能夠減輕其心臟毒性，同時並不減弱蒽環類抗腫瘤藥物(如阿黴素)的抗腫瘤效果。體內、外實驗研究證明，甘草總黃酮對阿黴素誘導的心臟損傷有顯著的保護效果，同時並不減弱蒽環類抗腫瘤藥物(如阿黴素)的抗腫瘤效果。可以用於預防和減輕蒽環類藥物心臟毒性，從而擴大阿黴素的臨床應用。本發明提供的甘草提取物，可以添加到其它藥物中，組合成新的放化療輔助藥物。該提取物可以製成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、滴丸及其他口服劑型；經過精製處理，也可製成經皮下、肌肉或靜脈給予的注射劑。甘草是最常用的中藥之一。現代藥理和臨床研究表明，甘草具有抗炎、保肝、強心、抗腫瘤、增強免疫功能等作用。但迄今沒有抗阿黴素心臟毒性作用方面的報導。目前，臨床上使用和正在開發的心臟保護劑均為注射劑，如dexrazoxane，monohydroxyethlyrutoside等。——般而言，注射齊U製造成本較高，安全性不及口服藥物。本發明的有益之處是提供了一種口服有效的抗蒽環類抗腫瘤藥心臟毒性的保護劑，尤其是抗阿黴素心臟毒性的保護劑，從而提高阿黴素的療效，擴大其臨床應用的範圍，幫助患者減輕由此帶來的毒副作用。本發明首次提供了一個從甘草中獲得的口服有效的心臟保護劑，在減輕蒽環類抗腫瘤藥物的心臟毒性的同時，並不減弱其抗腫瘤效果，從而也能夠減輕患者經濟負擔。具體實施方式為了更好地理解本發明，以下結合實施例作進一步的說明。實施例l甘草藥材用10倍量70%乙醇提取兩次，每次1.5小時。濃縮至無醇後，D101樹脂分離，以三個柱體積的水衝洗，然後以70。/^乙醇衝洗，收集流出物，濃縮乾燥，即甘草總苷提取物，得率10.8%。以甘草苷為對照品，採用紫外-分光光度法測定，提取物總黃酮含量在25.8%。按照《中國藥典2005年版一部》的規定，以甘草酸為對照品，經HPLC法測定，甘草酸含量為15.1%。實施例2甘草藥材用8倍量水煮沸回流提取兩次，每次1.5小時。合併後冷卻，加乙醇至60%，醇沉過夜，離心取上清，濃縮至無醇後，AB-8樹脂分離，依次以三個柱體積的水和20%乙醇衝洗，然後以80%乙醇衝洗，收集流出物，濃縮乾燥，即甘草總苷提取物，得率9.2%。以甘草苷為對照品，採用紫外-分光光度法測定，提取物總黃酮含量在33.4%。按照《中國藥典2005年版一部》的規定，以甘草酸為對照品，經HPLC法測定，甘草酸含量為25.5%。實施例3大鼠心肌細胞系H9C2，種入96孔板。細胞密度lxl05個/L。以DMEM+10XFBS培養液培養24小時後，進行藥物處理。分別設對照組，模型組(含lpM鹽酸阿黴素)，以及不同濃度(0.1，0.5，1，5，10，50，100|ig/ml)的甘草提取物(在加入阿黴素前30min加入)。培養24小時後，以MTT法進行測定，以550nm比色值反映心肌細胞活力。實驗表明，^M鹽酸阿黴素能造成心肌細胞活力降低23.4%(PO.01)，而甘草提取物l50^g/ml的濃度預先給藥，顯示一定的保護作用，細胞活力相對於模型組提高11.214.2%，其中IO，50pig/ml的濃度下，具有顯著性差異(P<0.01)。說明甘草總苷提取物在體外實驗中能預防和減輕阿黴素導致的心肌細胞損傷。實施例440隻ICR雄性小鼠，體重20士2g，共分為4組，每組10隻。腋下接種小鼠肝癌瘤株H22(3XlS個細胞/只)。接種後第2天分組。設對照組，每日灌胃給予生理鹽水，第5天和第6天給予0.2ml生理鹽水；阿黴素治療組，每日灌胃給予生理鹽水，在接種後第5天和6天，分別注射阿黴素7.5mg/kg(i.p.);甘草提取物處理組，每日灌胃給予甘草提取物IOOmg/Kg，第5天和第6天同法給予阿黴素，之前30min分別提前給予甘草提取物。甘草對照組，每日灌胃給予甘草提取物IOOmg/Kg，第5天和第6天給予等體積生理鹽水代替阿黴素。動物在接種腫瘤後第10天，用戊巴比妥麻醉後，固定，打開胸腔，用22號針頭插入左心室，連接壓力傳感器，以生理記錄儀進行監控。記錄心率、最大心室內壓、最小心室內壓、心室內壓上升最大速率等數據。解剖取出肉瘤和心臟稱重。如表1所示，動物給予阿黴素後，心率，左心室峰壓，心室內壓上升最大速率(+dp/dtmax)和最大降壓速率(-dp/dtmax)均顯著降低，而心室舒張期末壓顯著升高。說明心臟做功能力嚴重削弱。事先給予甘草提取物後，各項指標明顯改善，說明對心功能具有保護作用。如表2所示，阿黴素的抑瘤率為47.2%，同時給予甘草提取物，抑瘤率沒有明顯變化，說明甘草提取物並不影響阿黴素的抗腫瘤作用。表l甘草提取物對阿黴素致心功能降低的保護作用tableseeoriginaldocumentpage6^，與正常對照組相比，具有非常顯著差異PO.01;%與正常對照組相比，具有顯著差異P0.05。bb，與模型組相比，具有非常顯著差異PO.01;b，與模型照組相比，具有顯著差異P<0.05。表2甘草提取物對阿黴素抗腫瘤作用的影響_tableseeoriginaldocumentpage6，與正常對照組相比，具有非常顯著差異PO.01;a，與正常對照組相比，具有顯著差異P〈0.05。實施例540隻ICR雄性小鼠，體重30土2g，共分為4組，每組8隻。設正常對照組，每日灌胃給予生理鹽水，連續5天，第5天腹腔注射0.2ml生理鹽水；阿黴素造模組，每日灌胃給予生理鹽水，連續5天，第5天腹腔注射阿黴素20mg/kg;甘草處理組，每日灌胃給予甘草提取物IOOmg/Kg，連續5天，第5天給予甘草提取物lh後腹腔注射20mg/kg阿黴素；甘草對照組，每日灌胃給予甘草提取物100mg/Kg，連續5天，第5天給予甘草提取物lh後腹腔注射等體積生理鹽水代替阿黴素。48h後，下腔靜脈取血，得血清測定生化指標乳酸脫氫酶(LDH)、激酸激酶(CK)和激酸激酶同功酶(CKMB);另取心臟勻漿得5%組織勻漿，測定超氧化物歧化酶(SOD)、穀胱甘肽氧化酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)及蛋白含量。表3甘草提取物對阿黴素致心肌損傷的保護作用tableseeoriginaldocumentpage7，與正常對照組相比，具有非常顯著差異PO.01;a，與正常對照組相比，具有顯著差異PO.05;bb，與模型組相比，具有非常顯著差異PO.01;b，與模型照組相比，具有顯著差異P<0.05。如表3所示，大劑量阿黴素導致血清心肌酶譜指標成倍上升，說明心肌組織受到嚴重損傷。其中CK-MB在心肌組織中特異性表達，升高了3倍左右。心肌組織中SOD，GSH-Px，CAT等指標顯著下降，說明心肌組織抗氧化能力受到明顯削弱。事先給予100mg/kg甘草提取物，相對於阿黴素處理組，LDH、CK和CK-MB水平分別降低34X(P0.05)和25%(PO.05)。而組織中抗氧化酶活均有一定上升。尤其是SOD和GSH-Px與模型組相比，提高了24%和42%(p<0.01)。說明甘草提取物能夠提高心肌組織抗氧化酶活力，同時減輕心肌組織的損傷。也進一步說明甘草提取物對阿黴素心臟毒性具有保護作用。權利要求1.一種減輕藥物心臟毒性的甘草提取物，該提取物來源於豆科植物甘草的乾燥根及根莖，其特徵是甘草提取物主要活性成分為三萜皂苷和黃酮糖苷類物質，其中三萜皂苷類的含量在10～30％，黃酮類含量在20～40％。2.根據權利要求書l所述的一種減輕藥物心臟毒性的甘草提取物在製備減輕蒽環類抗腫瘤藥心臟毒性的藥物中的應用。3.根據權利要求書2所述的應用，其特徵是在製備減輕阿黴素心臟毒性的藥物中的應用。4.根據權利要求2或3所述的應用，其特徵是所製備的藥物製劑形式為膠囊、片劑、口服液、顆粒劑或滴丸。5.根據權利要求2或3所述的應用，其特徵是所製備的藥物製劑形式為注射劑等多種劑型的藥物，或與其他藥物組合使用。全文摘要本發明提供一種減輕藥物心臟毒性的甘草提取物，該提取物來源於豆科植物甘草，如烏拉爾甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)、脹果甘草(G.InflataBat.)及光果甘草(G.GlabraL.)的乾燥根及根莖，其主要活性成分為三萜皂苷和黃酮糖苷類物質，其中三萜皂苷類含量在10～30％，黃酮類含量在20～40％。本發明經體內、外實驗研究證明，對阿黴素誘導的心臟損傷有顯著的保護效果，同時並不減弱蒽環類抗腫瘤藥物的抗腫瘤效果，可預防和減輕蒽環類藥物心臟毒性，從而提高其療效，擴大其臨床應用範圍。可在製備減輕蒽環類抗腫瘤藥心臟毒性的藥物中的應用。文檔編號A61P39/00GK101229222SQ20081005954公開日2008年7月30日申請日期2008年1月31日優先權日2008年1月31日發明者靂劉,玲張,水文波,瞿海斌,程翼宇,葛志偉,楊霍申請人:浙江大學