Nos終止子的lamp檢測引物組、試劑盒及檢測方法
2023-07-22 13:18:26 1
Nos終止子的lamp檢測引物組、試劑盒及檢測方法
【專利摘要】本發明涉及NOS終止子的LAMP檢測引物組、試劑盒及檢測方法，其中，LAMP檢測引物組包括下列引物：外引物F3：CTCGATCTATCTATTGGCA；外引物B3：GCGCTTATTATTGATTACTTACG；內引物FIP：TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG；內引物BIP：AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGT。本發明提供的LAMP檢測引物組對NOS終止子具有良好的特異性。
【專利說明】NOS終止子的LAMP檢測引物組、試劑盒及檢測方法
【【技術領域】】
[0001]本發明屬於食品安全領域，涉及環介導等溫擴增技術，具體涉及含有NOS終止子的轉基因作物的LAMP檢測引物組、試劑盒及檢測方法。
【【背景技術】】
[0002]轉基因作物是指利用重組DNA技術將外源基因整合於受體植物基因組、改變其遺傳組成後產生的植物及其後代，也稱為遺傳修飾生物體(Genetically modifiedorganisms, GMOs)。自1983年首例轉基因植物問世以來,全球轉基因作物的種植面積和銷售收入均以倍數增長。但從嚴肅的科學意義上說，轉基因農產品的生物安全性目前尚無確定的結論。雖然我國規定自2002年3月20日起，所有轉基因農作物及其副產品都應加以標誌，但是在轉基因農作物不斷增多的形勢下，仍然很少見到加注轉基因字樣的農產品。因此開發簡便的轉基因大豆檢測技術並對相關產品進行檢測勢在必行。
[0003]目前普遍應用基於DNA的檢測技術對轉基因作物進行檢測。該類技術主要包括傳統定性PCR和定量PCR。這些檢測技術都需要特殊的DNA擴增儀(PCR儀)才能夠完成。而環介導的等溫基因擴增 技術(Loop-Media tedLsothcrmal AmpliFication, LAMP)依賴於能夠識別靶序列上6個特異區域的引物和一種具有鏈置換特性的DNA聚合酶，利用鏈置換DNA聚合酶在恆溫條件保溫幾十分鐘，完成核酸擴增反應；可以在I小時之內，將靶基因DNA片段擴增109-1010倍，並且只要用肉眼觀察白色混濁沉澱，就能鑑定是否擴增，不需要電泳檢測過程。
[0004]查閱轉基因大豆品系M0N89788相關文獻，了解NOS終止子序列信息，部分序列信息具體為:
[0005]TCTCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTA ATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTGTCGAGGGGGGGCCCGGTAC。
【
【發明內容】
】
[0006]本發明要解決的第一個技術問題是提供一種NOS終止子的LAMP檢測引物組，其對NOS終止子具有良好的特異性。
[0007]本發明要解決的第二個技術問題是提供一種NOS終止子的LAMP檢測試劑盒，其便於對NOS終止子進行LAMP檢測。
[0008]本發明要解決的第三個技術問題是提供一種NOS終止子的LAMP檢測方法，其具有靈敏較高、特異性良好、檢測快速可靠、操作簡單的特點。
[0009]上述第一個技術問題通過以下技術方案實現:
[0010]一種NOS終止子的LAMP檢測引物組，其特徵在於，包括下列引物:
[0011]外引物F3:CTCGATCTATCTATTGGCA ；[0012]外引物B3:GCGCTTATTATTGATTACTTACG ；
[0013]內引物FIP:
[0014]TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG ；
[0015]內引物BIP:
[0016]AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGT。
[0017]通過實驗證明，本發明提供的LAMP檢測引物組對白雲豆、玉米、花生、豌豆、燕麥、四季豆、大豆、小麥、於扁豆、番茄、核桃、大杏仁、綠豆、苦蕎麥、蕎麥、土豆、草蝦、芹菜、水稻、豬、西柚、胡蘿蔔、鵝、黃牛、含有NOS終止子的GTS40-3-2、M0N89788、EVENT98140、BT176、M0N810、A5547-127的DNA均無非特異擴增。因此，本發明提供的LAMP檢測引物組對NOS終止子具有良好的特異性。
[0018]上述第二個技術問題通過以下技術方案實現:
[0019]NOS終止子的LAMP檢測試劑盒，其特徵在於，包括以下成分:
[0020]
【權利要求】
1.NOS終止子的LAMP檢測引物組，其特徵在於，包括下列引物:
外引物 F3:CTCGATCTATCTATTGGCA ；
外引物 B3:GCGCTTATTATTGATTACTTACG ； 內引物FIP:
TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG ； 內引物BIP:
AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGTo
2.NOS終止子的LAMP檢測試劑盒，其特徵在於，包括以下成分:
3.根據權利要求2所述的NOS終止子的LAMP檢測試劑盒，其特徵在於，還包括顯色劑。
4.根據權利要求3所述的NOS終止子的LAMP檢測試劑盒，其特徵在於，所述顯色劑為螢光染料SYBR Green I。
5.根據權利要求2所述的NOS終止子的LAMP檢測試劑盒，其特徵在於，還包括對照物:陽性對照為純度為5%、濃度為100ng/ul的含有NOS終止子的轉基因玉米M0N863的DNA溶液，陰性對照為ddH20。
6.NOS終止子的LAMP檢測方法，其特徵在於，包括以下步驟: (101)對待檢樣品提取待檢模板DNA； (102)進行環介導等溫基因擴增反應: 配置LAMP反應體系,每25LLL體積的LAMP反應體系具體為:
【文檔編號】C12N15/11GK103436595SQ201310157326
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年4月29日 優先權日:2013年4月29日
【發明者】馮家望, 鄺筱珊, 胡松楠, 王小玉, 唐食明, 錢振傑, 成曉維 申請人:馮家望, 鄺筱珊, 胡松楠