卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑及其製備方法和應用的製作方法

2023-07-22 07:35:26 2

專利名稱：卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種鐵離子傳遞蛋白，特別是卵鐵離子傳遞蛋白，具體屬於一種卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑及其製備方法和應用。
背景技術：
缺鐵性貧血(IDA)是最常見的貧血，嚴重影響人類的健康。世界衛生組織2002年發布的嚴重影響人類健康的危險因素中第九位即為缺鐵。IDA至今仍是世界各國普遍而嚴重的健康問題，改善鐵營養狀況，是世界也是我國迫切需要解決的公共衛生問題。
鐵營養強化劑的發展經歷了三個階段是以硫酸亞鐵為代表的無機鐵鹽，即第一代強化劑產品。其副作用如噁心、嘔吐、腹瀉、金屬異味等，甚至鐵中毒等發生率為10％-15％，甚至大於70％，多數病人難以忍受。
包括乳酸亞鐵、葡萄糖酸亞鐵等有機酸鐵鹽的第二代產品。但此類藥物依賴胃酸釋放鐵，所以胃酸缺乏患者吸收較差，個體對於藥物的生物利用度差異較大，同時亞鐵鹽性質較不穩定，生產或儲存都很困難，可溶性鐵化合物和食品中某些物質結合，引起食品顏色改變，易產生異味，導致補鐵效果仍然不太理想。
目前較多使用的是螯合物配體如EDTA，因為EDTA可以形成具有較高穩定性常數的鐵螯合物。然而，儘管鐵EDTA螯合物可以從腸順利地吸收入血，但是，高的穩定性產生了與鐵EDTA螯合物相關的問題，穩定性過高以至於機體不能輕易的將鐵從配體上分離出來。而且，即使金屬離子和EDTA配體能夠分開，但由於EDTA是很強的螯合劑，該物質也會對身體造成損害。
基於現有的技術，合成一種比現有無機鐵化合物、具有更強生物活性的有機鐵化合物是非常必要的。而且，合成一種結構穩定、配體對身體小或無副作用，同時能使鐵輕易的釋放，被組織和器官利用的化合物，更加能夠滿足廣大臨床的需求。
據錢忠明主編的《鐵代謝—基礎與臨床》(科學出版社2000年)，轉鐵蛋白(Transfeerins)是脊椎動物體內Fe3+的運輸者，通過與細胞表面轉鐵蛋白受體的結合，將其攜帶的鐵轉入細胞內。轉鐵蛋白是一大類遺傳相關、基本結構和生物功能相似的鐵結合蛋白。典型轉鐵蛋白如在脊椎動物血漿、脊髓液、精液以及鳥類和哺乳動物的神經元中存在的血清轉鐵蛋白(Serotansferrin)，一般簡稱轉鐵蛋白(用Tf表示)，在禽蛋和爬蟲蛋蛋白中存在的卵轉鐵蛋白(Ovotransferrin，用OTf表示，也稱卵鐵離子傳遞蛋白)，以及哺乳動物乳汁、胰腺液、淚液和白細胞胞漿內存在的乳轉鐵蛋白(Loactofeerin用LTf表示)。
從鐵的代謝來看，藥物口服後，從胃腸道吸收，但在胃(批pH1.6～7)內滯留時間較短，故主要的吸收部位在小腸(十二指腸pH6.0～6.5，空腸pH6.5～7)。作為補鐵劑釋放的鐵離子，如Fe2+必須通過細胞膜才能進入血漿，氧化成Fe3+，與去鐵轉鐵蛋白(apotransgerrin，簡稱apo-Tf)結合形成鐵轉鐵蛋白(transferrin)，這樣，以apoTf為載體的Fe(血漿鐵)被分別運送到骨髓以製造血紅蛋白及到肝、脾、骨等儲鐵組織中與去鐵鐵蛋白結合稱為鐵蛋白而儲存之。排列在腸壁上的細胞象一層混合溶劑(脂質和蛋白質)，細胞膜也是帶電荷的大分子類脂體，蛋白質和粘多糖所組成，他們會吸收或排斥離子，使離子不易通過細胞膜。所以，按照藥理學和生物化學的觀點，Fe2+和Fe3+必須首先為腸溶液中的配體配合，生成具有適當穩定性的非解離形式而具有脂溶性才易透過黏膜進入血漿。進入血漿後，Fe2+和Fe3+必須被釋放，Fe2+在血液pH7.4條件下氧化成Fe3+，才能與apoTf結合，根據這種觀點，不管是Fe2+還是Fe3+，只要有適當的配體與之結合形成相當穩定的配合物，能有效防止或抑制Fe3+(在腸pH條件下)聚合，又能與apoTf順利交換鐵離子，作為補鐵劑即鐵代謝中的鐵離子給予體的設想是合理可行的。

發明內容
本發明的目的在於提供一種卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑，這種補鐵劑不僅使用安全、效果明顯，而且補鐵劑製備方法簡單。
本發明的目的是這樣實現的一種卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑，其中含有卵鐵離子傳遞蛋白和三價鐵離子形成的配合物，該配合物中卵鐵離子傳遞蛋白與鐵離子的摩爾比為1∶0.5--2，最佳為1∶2；該配合物在465nm處有最大吸收峰(見圖1、圖2)。
本發明卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑的製備方法，包括如下步驟(1)將禽蛋清經10-40MPa均質後，用1-6倍生理鹽水稀釋，均勻攪拌，用濾布過濾除去其中的不溶物；(2)配置質量比0.1％-5％鐵鹽溶液，在室溫下滴定到上述稀釋後的蛋清溶液中，均勻攪拌，直至蛋清溶液中的卵鐵離子傳遞蛋白完全飽和；
(3)待反應溶液澄清後，經透析或超濾，得到初品；(4)初品經冷凍乾燥得到補鐵劑原粉，並在4-8℃條件下密封保存，防止吸潮並隔絕氧氣。
所述的禽蛋清可以是雞蛋清、鴨蛋清、鵝蛋清或鵪鶉蛋清。
所述的鐵鹽，為三價鐵鹽，可以選自三氯化鐵、硫酸鐵或檸檬酸鐵等。
以本發明中的補鐵劑原粉為主要活性成分，可以和醫藥上可接受的輔料配置成片劑、膠囊、口服顆粒劑等劑型。各種劑型的本發明補鐵劑可通過本領域常規方法製備得到。
本發明補鐵製劑的原粉以及用原粉進一步製備的各種劑型，可用於製備治療或輔助治療鐵缺乏症以及與缺鐵有關的其它疾病藥物中的應用。使用此製劑可以滿足生命體對鐵的需求。
與現有技術相比，本發明補鐵劑中含有Fe3+與卵鐵離子傳遞蛋白合成的蛋白鐵配合物，它結構穩定、直接對機體補充三價鐵，無刺激性氣味，具有在動物體內不沉澱和易吸收的特點，配體不僅對身體無副作用，而且能提高機體的免疫力，促進核酸和蛋白質的代謝，減少機體內氧化導致的副作用，對機體的細胞損傷具有保護作用。本發明補鐵劑可用於治療鐵缺乏症，並可輔助治療與鐵有關的其它疾病如缺鐵性貧血等。


圖1卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑的紫外吸收光譜，它在465nm處有最大吸收峰。
圖2Fe3+滴定卵鐵離子傳遞蛋白的曲線，該配合物中鐵離子與卵鐵離子傳遞蛋白的摩爾比為2∶1。
圖3質量比1％三氯化鐵溶液滴定雞蛋清溶液的曲線。
具體實施例方式
以下結合實施例進一步說明本發明。
實施例1卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑原粉的製備原料三氯化鐵、雞蛋清製備方法包括如下步驟(1)將雞蛋清經30MPa均質後，用4倍生理鹽水稀釋，均勻攪拌，用濾布過濾除去其中的不溶物；(2)配置質量比1％三氯化鐵溶液，在室溫下將0.44ml三氯化鐵溶液滴加到10ml上述稀釋後的蛋清中，均勻攪拌，卵鐵離子傳遞蛋白可使鐵離子飽和(見圖3)；(3)待反應溶液澄清後，用玻璃紙透析，得到初品，其中鐵的含量0.465mg/ml；(4)初品放入冷凍乾燥機乾燥，製得補鐵劑原粉。
實施例2卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑動物試驗(對貧血模型小鼠紅細胞數量(RBC)及肝臟SOD、血清MDA活性的影響)實驗材料昆明種小鼠，8周齡，體重(20.0±2.0)g，雌雄各半；本補鐵劑含Fe量為3.1mg/ml；紅細胞稀釋液；超氧化物歧化酶(SOD)測試盒和丙二醛(MDA)測試盒。
實驗方法將50隻小鼠隨機分為陽性對照組(I)、陽性對照組(II)、實驗組及陰性對照組等四組，每組雌雄對半。按0.04ml/kg體重計量進行皮下注射2％苯肼，小鼠活動正常無死亡，從而建立小鼠貧血模型。分組、灌服方法及劑量，見表1。注射2d後測定小鼠紅細胞含量。10天後，檢測了小鼠肝臟SOD和血清MDA的活性。各組上述指標的變化如下(見表2、表3)表1、小鼠分組、飼養、灌服方法與劑量

表2、製劑對貧血模型小鼠RBC的影響(￣±s)×1012/L

注與陰性對照組相比*P＜0.05
表3、製劑對貧血模型小鼠肝臟SOD，血清MDA的影響

注與陰性對照組相比*P＜0.05；與空白對照組相比**P＜0.05結論製劑對貧血模型小鼠補鐵後，通過檢測RBC，可直接反映出各組的恢復情況。比較實驗組與陽性、陰性對照組的RBC含量的差別，反映出實驗組RBC恢復情況較好，結果表明補鐵製劑對缺鐵性貧血有一定的補血作用。通過檢測了小鼠肝臟SOD和血清MDA的活性，結果顯示製劑有較明顯的抗氧化和抗脂質過氧化的作用，可以為其臨床用於治療或輔助治療缺鐵性貧血提供一定依據。
實施例3補鐵製劑口服片劑的製備原料配方補鐵劑原粉 1重量份維生素B12 0.02～0.05重量份硬脂酸鎂0.08～0.2重量份微晶纖維素 0.5～0.6重量份可壓性澱粉 0.5～0.6重量份製法將補鐵劑原粉、維生素B12、硬脂酸鎂、微晶纖維素和可壓性澱粉充分混合以後，加入適量水混後，制粒，乾燥、整粒壓片。
實施例4補鐵製劑口服膠囊的製備(用於治療或輔助治療單純性缺鐵性貧血)原料配方補鐵劑原粉製法將補鐵劑原粉作為活性成份與藥用載體進一步超濾濃縮，粉碎乾燥，加入醫學上可接受的潤滑劑，按重量比為補鐵劑原粉0.01～99.9％與含潤滑劑99.9％～0.01％以任意比例製備而成100％的組成，進行80目篩分，制粒，均勻混合後裝入膠囊填充，拋光。
實施例5補鐵製劑口服液的製備原料配方補鐵劑原粉製法(1)按所需體積及設定的濃度稱取補鐵劑原粉，然後添加注射用水至預配量體積的70-90％；(2)用5％-30％鹼性溶液和5％-10％酸性溶液以滴加或噴灑方式調節pH至7.0-9.0，按設定的濃度加水定容並靜置72小時，即100毫升含設定值的補鐵劑原粉，測滲透壓合格；(3)添加適量矯味劑和防腐劑，攪拌均勻後，進行過濾，在無菌條件下，經過濾除菌，分裝於無菌、潔淨、乾燥的玻璃容器內，密封。
實施例6補鐵製劑顆粒劑的製備原料配方補鐵劑原粉、糊精、蔗糖粉製法將補鐵劑原粉、糊精、蔗糖粉分別過120目篩稱重備用，取補鐵劑原粉、糊精、蔗糖粉充分混合均勻；用蒸餾水製成軟材，用18目尼龍篩網制粒，在溫度40℃以下乾燥，並過12目篩，包裝待用。
權利要求
1.一種卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑，特徵在於，其中含有卵鐵離子傳遞蛋白和三價鐵離子形成的配合物。
2.如權利要求1的補鐵劑，特徵在於，所述的配合物中卵鐵離子傳遞蛋白與鐵離子的摩爾比為1∶0.5-2。
3.如權利要求1的補鐵劑的製備方法，包括如下步驟(1)將禽蛋清經10-40MPa均質後，用1-6倍生理鹽水稀釋，均勻攪拌，用濾布過濾除去其中的不溶物；(2)配置質量比0.1％-5％鐵鹽溶液，在室溫下滴定到上述稀釋後的蛋清溶液中，均勻攪拌，直至蛋清溶液中的卵鐵離子傳遞蛋白完全飽和；(3)待反應溶液澄清後，經透析或超濾，得到初品；(4)初品經冷凍乾燥得到補鐵劑原粉，並在4-8℃條件下密封保存。
4.如權利要求3的補鐵劑的製備方法，特徵在於，所述的禽蛋清是雞蛋清、鴨蛋清、鵝蛋清或鵪鶉蛋清。
5.如權利要求3的補鐵劑的製備方法，特徵在於，所述的鐵鹽是三氯化鐵、硫酸鐵或檸檬酸鐵。
6.如權利要求3的補鐵劑的製備方法，特徵在於，所述的補鐵劑原粉可以和醫藥上可接受的輔料配置成片劑、膠囊、口服顆粒劑劑型。
7.如權利要求1的補鐵劑的用途，特徵在於，在製備治療或輔助治療鐵缺乏症以及與缺鐵有關的其它疾病藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及卵鐵離子傳遞蛋白補鐵劑，該補鐵劑含有卵鐵離子傳遞蛋白和三價鐵離子形成的配合物，該配合物中卵鐵離子傳遞蛋白與鐵離子的摩爾比為1∶0.5－2，該配合物在465nm處有最大吸收峰。其製備方法用生理鹽水稀釋禽蛋清；將三氯化鐵溶液加入其中直至溶液中的卵鐵離子傳遞蛋白完全飽和；然後經透析或超濾得到初品；經冷凍乾燥後得到補鐵劑原粉；進而製得各種製劑產品。這種補鐵劑不僅製備方法簡單，而且補鐵效果明顯、使用安全。
文檔編號A61P7/00GK1850270SQ20061001276
公開日2006年10月25日 申請日期2006年5月26日 優先權日2006年5月26日
發明者黃登宇, 趙艮貴, 宗豔, 楊斌盛, 張立偉, 宋強, 任瑞霞, 劉超, 盧臣 申請人:山西大學