一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法
2023-07-11 17:28:06
一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，為硫酸銨梯度法，包括：取磷脂、膽固醇和吐溫-80，加入乙醇中超聲混合，使其充分溶解；將混合後的溶液於43.5℃下恆速滴入硫酸銨溶液中，於旋轉蒸發儀減壓蒸發，除去溶液中的乙醇，裝於透析袋中，用100倍體積的PBS溶液透析24h；透析後，過0.45μm微孔濾膜，0.22μm微孔濾膜，即得空白脂質體；取絞股藍皂苷溶液加入空白脂質體中，水浴振蕩載藥，即製得絞股藍皂苷脂質體。該製備方法操作方便，步驟少，當工藝選擇的脂藥比為8：1，膜材比為6:1，載藥溫度為55℃，載藥時間為11min時，包封率可達90.17±0.38%。所製備的脂質體包封率高，載藥量大，粒徑小，形態均一，適合大批量生產，能提高絞股藍皂苷的臨床應用價值。
【專利說明】一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於藥物製備【技術領域】，具體涉及一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法。【背景技術】
[0002]現代藥理學研究證明，絞股藍皂苷具有降低血脂、降血壓、防止衰老、抑制腫瘤、增強免疫力、鎮靜止痛、保護心臟和肝臟、保護血管等作用。但是，絞股藍皂苷味苦，適口性差，口服給藥效果較差，且其水溶液大多會破壞紅血球，有溶血現象，一般不宜製成注射劑，造成給藥困難，生物利用度非常低，大大降低了絞股藍皂苷的臨床應用價值。脂質體作為一種新型藥物載體，可以明顯改善藥物的體內動力學特性和組織分布，達到靶向定位和緩釋的效果，還能減少藥物的用量及降低毒副作用。
【發明內容】
[0003]發明目的:針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法。
[0004]技術方案:為實現上述發明目的，本發明採用的技術方案如下:
[0005]一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，為硫酸銨梯度法，包括如下步驟:
[0006]I)取磷脂、膽固醇和吐溫-80，加入乙醇中超聲混合，使其充分溶解；
[0007]2)將混合後的溶液於43.5°C下恆速滴入硫酸銨溶液中，於旋轉蒸發儀減壓蒸發，除去溶液中的乙醇，裝於透析袋中，用100倍體積的PBS溶液透析24h ；
[0008]3)透析後，過0.45 y m微孔濾膜，0.22 U m微孔濾膜，即得空白脂質體；
[0009]4)取絞股藍皂苷溶液加入空白脂質體中，40~60°C水浴振蕩5~25min載藥，即製得絞股藍皂苷脂質體；
[0010]其中，乙醇與硫酸銨體積比為6~14:10 ;硫酸銨濃度分別為0.15~0.35mol/L ；大豆磷脂與絞股藍皂苷的質量比為2~10:1 ;大豆磷脂和膽固醇的質量比為3~8:1。
[0011 ] 乙醇與硫酸銨體積比優選為8:10。
[0012]步驟4)中，溫度優選為55 °C。
[0013]硫酸銨濃度優選為0.25mol/L。
[0014]大豆磷脂與絞股藍皂苷的質量比優選為8:1。
[0015]大豆磷脂和膽固醇的質量比優選為6:1。
[0016]載藥時間優選為10~llmin。
[0017]優選的工藝參數為:大豆磷脂與絞股藍皂苷的質量比為8: 1，大豆磷脂和膽固醇的質量比為6: 1，載藥溫度為55°C，載藥時間為llmin。
[0018]有益效果:與現有技術相比，本發明的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，操作方便，步驟少，當工藝選擇的脂藥比為8:1，膜材比為6:1，載藥溫度為55°C，載藥時間為I Imin時，包封率可達90.17±0.38% (n=3)，具有很好的工業實用性。所製備的脂質體包封率高，載藥量大，粒徑小，形態均一，適合大批量生產，能提高絞股藍皂苷的臨床應用價值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1是絞股藍皂苷納米脂質體的電鏡圖。
【具體實施方式】
[0020]下面結合具體實施例進一步闡明本發明，本【具體實施方式】在以本發明技術方案為前提下進行實施，應理解這些方式僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。
[0021]以下實施例中所使用的主要藥物、試劑、設備和計算方法具體如下:
[0022]試驗藥物:絞股藍提取物購於西安開來生物工程有限公司(批號K120212)，經檢驗絞股藍阜苷(the total gypenosides in Gynostemma pentaphyllum, GPS)含量高於98%。
[0023]主要試劑:大豆卵磷脂(批號20120728)，上海太偉磷脂有限公司；膽固醇(批號20120908)，天津市博迪化學有限公司；Triton-100(批號9002-93-1 )，上海源葉生物科技有限公司；Sephadex G_50中性(批號9048_71_9)，上海源葉生物科技有限公司；香草醛,天津市科密歐化學試劑開發中心。
[0024]主要儀器設備:旋轉蒸發器RE-52A，上海亞榮生化儀器廠；SHZ_ III型循環水真空泵，上海亞榮生化儀器廠；HH-2數顯恆溫水浴鍋，江蘇省金壇市榮華儀器製造有限公司；KQ5200B型超聲波清洗儀，崑山市超聲儀器有限公司；TDL — 880 一 2B離心機，上海安亭科學儀器廠；754紫外分光光度計，上海精密科學儀器有限公司。
[0025]實施例1
[0026]絞股藍皂苷脂質體的製備:採用硫酸銨梯度法製備絞股藍皂苷脂質體。精確稱取磷脂240mg、膽固醇40mg和60mg吐溫-80，加入乙醇8mL(乙醇用量按照實際製備的脂質體終濃度計算即可)中超聲混合，使其充分溶解。將混合後的溶液於43.5°C下恆速滴入IOmL硫酸銨溶液(0.25mol/L)中，於旋轉蒸發儀減壓蒸發，除去溶液中的乙醇，裝於透析袋中，用100倍體積的PBS溶液透析24h。透析後，過0.45 ii m微孔濾膜2次，0.22 u m微孔濾膜2次，即得IOmL空白脂質體。精確吸取10mL3mg/mL絞股藍皂苷水溶液加入等體積空白脂質體中，55°C (載藥溫度)水浴振蕩Ilmin (載藥時間)載藥，即製得20mLl.5mg/mL絞股藍皂苷納米脂質體。
[0027]標準曲線的製備:精確稱取乾燥至恆重的絞股藍皂苷標準品10mg，用蒸餾水溶解，使其濃度為2mg/mL，取0、40、80、120、160、200ii L分別置於IOmL具塞試管中，蒸餾水稀釋至0.2mL，分別加入現配製的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，搖勻，置於60°C恆溫水浴加熱15min後取出，流水冷卻，再各加5mL冰醋酸並搖勻，隨行試劑做空白在550nm波長處分別測其吸光值A55tlt5以吸光值(Y)與絞股藍皂苷濃度(X) (mg/mL)做回歸處理，作標準曲線，得回歸方程 Y=0.4585X-0.0013 (R2=0.9997，n=5)。
[0028]Sephadex G-50 —微柱離心法:
[0029]I)微型S印hadex G-50柱的製備:將S印hadex-50 (中性)置於生理鹽水中室溫溶脹5h以上,裝於2.5mL注射器中，1500r ? mirT1離心5min,除去水分,備用。
[0030]2)除去游離的絞股藍皂苷:精密量取0.5mL絞股藍皂苷脂質體混懸液滴入凝膠床頂部，1500r ? mirT1離心5min,游離的絞股藍阜苷吸附於Sephadex G-50微柱上,收集離心液，即包封的絞股藍皂苷納米脂質體。
[0031]樣品包封率及載藥量的計算:精密吸取微柱離心後的脂質體溶液IOOiiL,用20 u L體積分數為10%Triton X-100溶解，加蒸餾水至0.2mL,以同樣處理的空白脂質體做空白對照，按上述方法測定樣品吸光值A55tl，將吸光值求平均數後代入回歸方程，計算。
[0032]包封率=CL/CT
[0033]式中Q為包封的皂苷量；CT為脂質體中包封的皂苷與游離皂苷之和。
[0034]載藥量=ffL/ffP
[0035]式中\為包封皂苷的質量；WP為大豆卵磷脂和膽固醇的質量之和。
[0036]實施例2絞股藍皂苷脂質體製備工藝的優化
[0037]按實施例1的方法製備絞股藍皂苷脂質體。在其他條件不變的情況下，加入的乙醇體積分別為6、8、10、12、14mL，觀察不同體積乙醇對絞股藍皂苷脂質體包封率和載藥量的影響。
[0038]不同體積乙醇對絞股藍皂苷脂質體包封率和載藥量的影響見表1，由表1可知，乙醇與硫酸銨體積比為8:10時包封率與載藥量均為最大值。
[0039]表1成膜有機溶劑對包封率和載藥量的影響
[0040]
【權利要求】
1.一種絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於，為硫酸銨梯度法，包括如下步驟: 1)取磷脂、膽固醇和吐溫-80，加入乙醇中超聲混合，使其充分溶解； 2)將混合後的溶液於43.5°C下恆速滴入硫酸銨溶液中，於旋轉蒸發儀減壓蒸發，除去溶液中的乙醇，裝於透析袋中，用100倍體積的PBS溶液透析24h ； 3)透析後，過0.45 um微孔濾膜、0.22 u m微孔濾膜，即得空白脂質體； 4)取絞股藍皂苷溶液加入空白脂質體中，4(T60°C水浴振蕩5~25min載藥，即製得絞股藍皂苷納米脂質體； 其中，乙醇與硫酸銨體積比為6~14:10 ;硫酸銨濃度分別為0.15^0.35mol/L ;大豆磷脂與絞股藍皂苷的質量比為2~10:1 ;大豆磷脂和膽固醇的質量比為31:1 ;大豆磷脂與吐溫-80的質量比是4:1。
2.根據權利要求1所述的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於:乙醇與硫酸銨體積比為8:10。
3.根據權利要求1所述的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於:步驟4)中，溫度為55°C。
4.根據權利要求1所 述的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於:步驟I)中，硫酸銨濃度為0.25 mol/L。
5.根據權利要求1所述的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於:大豆磷脂與絞股藍皂苷的質量比為8:1。
6.根據權利要求所述的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於:大豆磷脂和膽固醇的質量比為6:1。
7.根據權利要求6所述的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於:步驟4)中，振蕩10~11 min。
8.根據權利要求1所述的絞股藍皂苷納米脂質體的製備方法，其特徵在於:大豆磷脂與絞股藍皂苷的質量比為8: 1，大豆磷脂和膽固醇的質量比為6: 1，載藥溫度為55°C，載藥時間為I Imin。
【文檔編號】A61P9/12GK103520254SQ201310456074
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年9月29日 優先權日:2013年9月29日
【發明者】王德雲, 餘韻, 胡元亮, 劉家國, 黃葉娥, 陶陽, 武毅 申請人:南京農業大學