治療糖尿病及糖尿病併發症的藥物、製備方法及其新用途的製作方法

2023-07-13 01:19:56 2

專利名稱：治療糖尿病及糖尿病併發症的藥物、製備方法及其新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物或保健品、製備方法及其新用途，特別是涉及一種含有苦蕎麥總黃酮的藥物製劑、製備方法及其新用途。
背景技術：
苦蕎麥屬蓼科雙子葉植物，俗稱苦蕎，學名韃靼蕎麥(F.tataricum)。苦蕎麥喜涼爽，耐瘠薄，多生長在高寒山區，籽粒供食用。分布在我國西南山區，四川省涼山彝族自治州。《本草綱目》記載苦蕎麥性味苦、平、寒，有益氣力，續精神，利耳目，有降氣寬腸健胃的作用。現代臨床醫學觀察表明，苦蕎麥粉及其製品具有降血糖、調節血脂，增強人體免疫力的作用，對糖尿病、高血壓、高血脂、冠心病、中風等病人都有治療或輔助治療作用。這些作用都與苦蕎麥中含有的活性成分苦蕎麥總黃酮有關。以往苦養麥研究主要局限於複方及保健食品使用，少見單方使用，未見使用苦蕎麥殼與全草的報導和研究，對於其有效成分的提取研究則更少。
糖尿病是一個發病過程複雜，難於控制的代謝性疾病，其發展到一定程度，會並發多種合併症也叫併發症，目前其治療主要表現為控制血糖及對症治療。對糖尿病合併症，尤其是微血管合併症還缺少有效的藥物進行調節，奧地利在1971年，開發出世界上第一個醛糖還原抑制劑Doxium，主要用於治療糖尿病微血管合併症中眼合併症。但其活性較弱，而用藥時間常常較晚，所以效果不甚顯著，1984年，日本開發出另一個醛糖還原酶抑制劑依泊斯他，用於糖尿病微血管合併症中的神經合併症的治療，雖然它的醛糖還原酶抑制活性不強，對晚期病症無顯著效果，但對於早期控制糖尿病微血管合併症的發展有積極作用的，因此也廣泛用於臨床。九十年代初美國又上市醛糖還原酶抑制活性很強的新藥Tolrestat，此藥對多種糖尿病微血管合併症的早期，中期都有顯著療效，但其肝毒性太大，FDA不得不宣布停止使用。國內尚未開發出類似產品。

發明內容
本發明目的之一在於提供一種苦蕎麥的提取物，即苦蕎麥總黃酮。
本發明目的之二在於提供一種苦蕎麥總黃酮的製備方法及精製方法。
本發明目的之三在於提供把苦蕎麥總黃酮製成任何一種臨床上或藥學上可接受的製劑或保健食品。
本發明目的之四在於提供該苦蕎麥總黃酮在治療糖尿病及糖尿病合併症的藥物中的應用。
苦蕎麥總黃酮的提取方法可以選自如下方法中的一種A、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥(種子)，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加3～10倍量水，加熱煎煮，在攪拌條件下緩慢加入鹼溶液，調水煎液pH值為7.5～10.5，在此條件下浸提，趁熱抽濾；殘渣同上再加3～8倍量水，按上述方法再提取一次，趁熱抽濾；合併濾液，加入酸溶液，調水煎液pH值為3～6，攪拌後靜置，過濾；沉澱物用水洗至中性，乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品。
B、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥(種子)，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入滲漉器中，加入pH值為10～12的鹼水溶液，該鹼水溶液中溶有0.5～3‰亞硫酸鈉，緩慢滲漉，檢測滲漉液無黃酮化合物時，停止滲漉；滲漉液加酸溶液，調pH值為2～6；靜置，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品。
C、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥(種子)，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入回流提取器中，加入3～8倍量50～95％乙醇或甲醇回流提取，提取液過濾，回收乙醇或甲醇；冷藏，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品。
D、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥(種子)，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入3～10倍量水，煎煮提取，合併提取液，提取液經高速離心後，濃縮至相對密度在50℃時為1.1～1.30；冷藏，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品。
E、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥(種子)，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入3～8倍量50～95％乙醇或甲醇，回流提取1～6小時；提取液放至室溫，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至檢查上清液無黃酮反應時為止；過濾，收集吸附苦蕎麥總黃酮的活性炭，依次用沸水，沸甲醇，3-10％酚～水溶液，10-20％酚～醇溶液進行洗脫；對各部分洗脫液進行定性檢查，用PPC鑑定，大部分黃酮苷類可用3-10％酚～水溶液洗下；洗脫液濃縮至相對密度在50℃時為1.2～1.3；再加乙醚振搖除去殘留的酚，餘下水層減壓濃縮，冷卻，析出結晶；過濾，乾燥，即得苦蕎麥總黃酮粗品。
F、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥殼，苦蕎麥(種子)，粉成粗粉；加入滲漉器中，加入50～95％的乙醇，緩慢滲漉，檢測滲漉液無黃酮化合物時，停止滲漉；滲漉液過濾，回收乙醇至無醇味；冷藏，析出結晶，過濾、乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品。
苦蕎麥總黃酮的精製方法可選自下述方法中的一種A、取本發明的苦蕎麥總黃酮粗品用沸水或50～95％的乙醇，回流1-3小時，趁熱過濾、冷卻，析出結晶；乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
B、取本發明的苦蕎麥總黃酮粗品加水2～6倍，攪拌混勻，緩慢加入鹼溶液，調至pH值為7.5～10；加2～6倍的乙醇或甲醇，攪拌約1～4小時，過濾；濾液加酸溶液，調pH值為3～6，充分攪拌加熱至50～100℃，靜置，過濾；沉澱，用水洗滌；棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
C、取本發明的苦蕎麥總黃酮粗品加水2～6倍，攪拌混勻，緩慢加入鹼溶液，調至pH值為7.5～10；攪拌均勻，過濾；濾液加酸溶液，調至pH值為2～6，充分攪拌，加熱至50～100℃，靜置，過濾；沉澱用水洗滌；棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
D、取本發明的苦蕎麥總黃酮粗品加50～95％的1～6倍的乙醇，加熱攪拌1～4小時，過濾，靜置，過濾，濾液加酸溶液，調pH值為2～6，充分攪拌加熱至50～90℃，靜置，過濾；沉澱用水洗滌；棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
本發明苦蕎麥總黃酮(亦稱苦蕎麥黃酮)來自於苦蕎麥植物的苦蕎麥(即苦蕎麥種子或苦蕎麥種子去皮)、苦蕎麥種皮(苦蕎麥殼)、苦蕎麥全草(包括苦蕎麥的葉和莖)。
本發明苦蕎麥總黃酮可以製成任何一種臨床上或藥學上可接受的製劑，包括口服製劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、注射劑、凍乾粉針等劑型和保健食品。
本發明中使用的乙醇可用甲醇或其他有機溶劑代替，甲醇也可以用乙醇代替。
本發明中使用的鹼溶液可為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、飽和石灰水、Na2CO3、K2CO3溶液；加入的酸溶液可為鹽酸、硫酸、硝酸溶液。
用上述方法及精製方法製得苦蕎麥總黃酮的純度可達95％以上。本發明對苦蕎麥總黃酮製劑的研究，證明其性質穩定、質量可控、療效顯著、毒性極低；具有改善神經傳導速度，降低山梨醇含量，增加神經血流量，增加血管開放的數量，抑制血管基底膜的增厚，逆轉糖尿病引起的穀胱甘肽降低，過氧化脂質升高，且能夠升高Na+-K+-ATP酶活力，對糖尿病及糖尿病合併症引起的腎、眼、神經病理改變明顯減輕的功能，臨床研究證明對糖尿病及糖尿病合併症有很好的療效。
下面實驗例用於進一步說明本發明。
實驗例1苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素糖尿病大鼠的影響實驗方法1、血糖和糖化血紅蛋白含量測定大鼠禁食12小時後，眶靜脈取血，分離血清，吸取血清10μl，用葡萄糖氧化酶法測定血糖含量。另取大鼠眶靜脈血，EDTA抗凝，用智能凝血分析儀測定糖化血紅蛋白。
2、尿糖和尿蛋白的測定取大鼠尿用尿8項測定儀測定尿糖和尿蛋白含量。
實驗結果1、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素模型大鼠血糖的影響苦蕎麥總黃酮膠囊給藥前測定各組大鼠血糖，由於鏈脲黴素造型，模型組大鼠血糖比正常對照組大鼠血糖顯著升高，其餘各組動物血糖與模型對照比沒有顯著差異，說明各組造型情況相同。在此基礎上開始給藥，在給藥期間至苦蕎麥總黃酮膠囊給藥結束時，再測定各組大鼠血糖，結果表明模型動物血糖顯著升高，苦蕎麥總黃酮膠囊可使血糖顯著下降，苦蕎麥總黃酮膠囊低劑量組大鼠血糖與給藥前比有所降低，但與同時測定的模型對照組大鼠血糖相比沒有顯著差異；苦蕎麥總黃酮膠囊中、高劑量組大鼠血糖無論與給藥前比還是與模型對照組比均有顯著性降低。苦蕎麥總黃酮膠囊的降血糖作用呈現一定劑量反應關係。對照組對鏈脲黴素大鼠血糖無顯著影響。
2、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素模型大鼠糖化血紅蛋白的影響糖化血紅蛋白可以反映蛋白糖基化水平，鏈脲黴素造成糖尿病模型後，動物的糖化血紅蛋白顯著升高，大鼠服用苦蕎麥總黃酮膠囊可使糖化血紅蛋白顯著下降，苦蕎麥總黃酮膠囊低劑量組大鼠糖化血紅蛋白與給藥前比有所降低，但與同時測定的模型對照大鼠的值相比沒有顯著差異；苦蕎麥總黃酮膠囊中、高劑量組大鼠糖化血紅蛋白無論與給藥前比還是與模型對照組比均有顯著性降低。苦蕎麥總黃酮膠囊對糖化血紅蛋白的抑制作用呈現一定劑量反應關係。對照組對鏈脲黴素大鼠糖化血紅蛋白無顯著影響。
3、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素模型大鼠體徵的影響實驗期間觀察各組大鼠的狀態，對照組大鼠毛色光亮，體重增長、攝食、飲水及活動正常。模型組大鼠毛髮蓬鬆、枯槁，體重下降，攝食、活動減少，飲水增加，雄性大鼠在用藥第四周開始體重明顯降低。苦蕎麥總黃酮膠囊低劑量組大鼠毛髮蓬鬆，體重增長緩慢，攝食、飲水增加，活動也減少。許多大鼠左眼有白內障。隨著苦蕎麥總黃酮膠囊給藥時間的延長和劑量的增加，動物狀態有所改善，與模型對照組相比，體得顯著增加。各給藥組在用藥第六周大鼠體重比模型組明顯增重。中、高劑量苦蕎麥總黃酮組大鼠未見白內障發生。對照組組有些動物毛髮蓬鬆，攝食、飲水及活動較模型對照組增加。苦蕎麥總黃酮膠囊給藥期間，測定各組大鼠體重，苦蕎麥總黃酮膠囊可使鏈脲黴素導致的大鼠體重下降顯著回升。說明苦蕎麥總黃酮膠囊給藥後動物的糖尿病狀態明顯減輕，對照組對鏈脲黴素大鼠體重下降亦產生對抗作用。
4、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素模型大鼠尿的影響實驗期間觀察大鼠的尿量、尿糖和尿蛋白的變化。正常大鼠的日尿量在13ml左右，糖尿病模型組大鼠24小時尿量達到120ml，大鼠的飲水量和尿量是正常大鼠的十倍，糖尿病大鼠毛髮蓬鬆、枯高、體重下降，呈現多種典型糖尿病症狀。苦蕎麥總黃酮膠囊給藥後動物的狀態好轉，於給藥第四周測定大鼠尿量，模型組大鼠尿量持續升高，苦蕎麥總黃酮膠囊使大鼠的尿量減少，苦蕎麥總黃酮給藥第8周再測定尿的變化，苦蕎麥總黃酮給藥組大鼠的尿量已接近正常水平。尿糖和尿蛋白也呈現類似的變化。對照組大鼠的中只檢出痕量的尿糖和蛋白，模型組大鼠的尿糖和尿蛋白顯著增加，苦蕎麥總黃酮對糖尿病大鼠的尿糖、尿蛋白增加有顯著對抗作用。
實驗例2苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠糖尿病合併症的影響實驗方法1、大鼠尾神經傳導速度測定大鼠戊馬比妥鈉麻醉後，置於37℃恆溫水浴上固定，用電刺測定尾神經傳導速度，將刺激電極放在尾部近端、記錄電極插在尾部遠端，用Pclab生物信號採集處理系統給出刺激並記錄電位信號，刺激採用5伏方波刺激，波寬0.55ms，刺激間隔3.75ms，計算刺激信號到電位信號的傳導時間，用刺激電極到記錄電極之間的距離除以傳導時間求出神經傳導速度。再插上另一記錄電極，量取兩記錄電極間距離，用刺激信號通過兩電極的時間除電極間距離求出神經傳導速度。以兩種方式計算取得的均值作為該動物的神經傳導速度。
2、坐骨神經山梨醇含量的測定取大鼠坐骨神經，稱重後置勻漿管中，加蒸餾水2.0ml製備勻漿，離心後取上清液，煮沸20min，加入0.2mil/LZnSo40.2ml0.2mol/L Ba(OH)20.2ml，離心沉澱，取上清液於清潔試管中快速濃縮乾燥，加入吡啶0.1ml溶解殘留物，再加入矽烷化試劑BSTFA20μl，搖勻，加熱15min，冷卻，加入內儲備液0.3ml。爾後取0.5μl進行所相色譜分析。用垂直切割峰面積定量。色譜條件530nmlD5m長毛細管色譜柱，柱溫155℃氣化室溫度250℃，檢測室溫度250℃，N2流速10ml/min，H2流速20ml/minAIR流速20ml/min，衰減指數3，進樣量0.3μl。以山梨醇計算理論塔板數為393。山梨醇的檢測限為45.23ng。回歸方程式為Y＝0.0077X-0.0527，r＝0.9994(n＝6)。濃度範圍0.0167～0.1667μg範圍內線性良好，變異係數1.75％。日內變異係數為1.19％，日間變異係數2.34％。回收率為100.8％實驗結果1、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠神經傳導速度的影響用Pclab系統的刺激電極施加刺激後，記錄裝置的一通道記錄到電位信號，二通道指示刺激信號，記錄神經傳導速度。在苦蕎麥總黃酮膠囊給藥前後分別測定大鼠尾神經傳導速度，結果表明，鏈脲黴素造型後尾神經傳導速度比空白對照組顯著減慢，即P＜0.01。並隨造型時間的延長而加劇，在此基礎上給苦蕎麥總黃酮膠囊，神經傳導速度隨給藥時間的延長而改善，苦蕎麥總黃酮高劑量組大鼠的神經傳導速度幾科達到正常對照組水平，苦蕎麥總黃酮的作用呈一定的劑量反應關係，提示苦蕎麥總黃酮對糖尿病引起的神經功能損害有顯著的對抗作用。
2、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠坐骨神經山梨醇含量的影響氣相色譜法測定大鼠坐骨神經山梨醇含量的標準圖譜和樣品測定圖譜，以此系統測定苦蕎麥總黃酮膠囊給藥結束時大鼠坐骨神經山梨醇含量，結果表明，鏈脲黴素模型大鼠坐骨神山梨醇含量明顯升高，苦蕎麥總黃酮膠囊20-80mg/kg三個劑量均可顯著降低出梨醇水平，且呈一定的劑量反應關係。
實驗例3苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠微循環功能的影響實驗方法1、大鼠坐骨神經血流量的測定大鼠用35mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，分離左腿坐骨神經，將神經嵌入塑料凹槽中，在國窩上1cm處用都卜勒血流儀測定暴露的坐骨神經幹內的血流量。連續記錄10次血流量的變化，取其平均值作為該大鼠的神經血流量數值。
2、大鼠腸繫膜微循環測量大鼠用35mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，拉出上段空腸，將空腸腸繫膜第一個袢的中央對準顯微鏡的鏡頭，在顯微鏡下觀察不同組大鼠的腸繫膜循環，計數每平方毫米內可見的血管條數。
實驗結果1、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠坐骨神經血流量的影響用多譜勒血流儀測定暴露的坐骨神經幹內的血流量，記錄瞬時血流量的變化，取其平均值作為每隻動物的血流量數據，再經統計處理計算神經血流量。測定結果表明鏈脲黴素糖尿病模型大鼠坐骨神經血流量明顯減少，苦蕎麥總黃酮膠囊20-80mg/kg三個劑量均可顯著增加神經血流量，苦蕎麥總黃酮膠囊高劑量組大鼠神經血流量甚至達到正常大鼠水平。
2、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠腸繫膜微循環的影響在顯微鏡下觀察不同組大鼠的腸繫膜微循環，計數每平方毫米內可見的血管條數，反映毛細血管開放的頻度。結果表明糖尿病模型大鼠血管開放的條數明顯減少，苦蕎麥總黃酮膠囊20-80mg/kg三個劑量均可顯著增加糖尿病大鼠血管開放的數量。
3、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素模型大鼠坐骨神經血管基底膜的影響糖尿病大鼠坐骨神經HE染色片上可見身件軸索及神經內的微血管，模型組血管壁較厚，血管閉塞。苦蕎麥總黃酮膠囊20mg/kg劑量組HE染色體上可見血管閉塞現象，苦蕎麥總黃酮膠囊中劑量組還可見微血管壁增厚，高劑量組未出現血管閉塞現象。對照組的HE染色體上可見血管壁輕度增厚，也見閉塞現象。
為進一步觀察坐骨神經內微血管的形態學變化，採用6胺銀染色法選擇性著色血管基底膜，可以清楚觀察微血管基底膜的變化。選擇直徑在10微米大50微米之間的微血管，每組選5隻動物的坐骨神經6胺銀染色片，觀察其中10根血管，在顯微鏡下每根血管按X-Y軸的交點取4個點，量取微血管基底膜的厚度，取其平均值作為該血管基底膜的厚度。結果可見正常對照組微血管基底膜處染成微微的黑色，其厚度在0.2-0.8微米之間，以0.8微米為界，0.8微米以下認為是正常基底膜厚度，0.8微米以上認為是基底膜增厚。模型對照組血管大面積染成黑色，血管基底膜比對照組明顯增厚，正常血管只佔5％，與正常組比p＜0.01，血管出現血栓，血管壁厚度不均，血管內膜邊界不齊。苦蕎麥總黃酮膠囊20mg/kg劑量組血管基底膜輕度增厚，正常血管佔30％，與模型組比p＞0.05。苦蕎麥總黃酮膠囊中劑量組微血管基底膜輕度增厚，正常血管佔93％，與模型組比p＜0.01，說明血管的狀態有顯著改善。高劑量組血管基底膜的厚度與正常對照接近，且未見血管閉塞現象。對照組組可見血管壁輕度增厚，基底膜厚度與模型組比較顯著減少，正常血管佔60％-70％，與模型組比p＜0.01。以上結果說明苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素模型大鼠坐骨神經血管基底膜的增厚有抑制作用。
實驗例4苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠生化指標的影響實驗方法1、腦穀胱甘肽含量測定將大鼠斷頭處死，取腦0.2g在冰浴中，以0.1mol/L pH8.0的磷酸鹽緩衝液和10％三氯乙酸0.8ml製成10％勻漿，室溫下4000rpm離心15分鐘，分離上清液0.5ml，加入0.1mol/L pH8.0的磷酸鹽緩衝液4.5ml稀釋，加入0.4g/L DTNB試液0.02ml，混勻，以不加腦勻漿的對照管調零，5分鐘後用721分光光度計412nm波長處比色，吸光度值除以腦重得出每克腦組織所含的穀胱甘肽量。
2、腦過氧化脂質(MDA)含量測定將大鼠斷頭處死，取腦以0.05mol/LpH7.4磷酸鹽緩衝液製成10％勻漿，依次加入8.1％SD0.2ml，pH3.5的醋酸緩衝液1.5ml，1％TBA1.5ml，蒸餾水浴40分鐘，冷卻後3000rpm離心15分鐘，取上清液，721分光光度計532nm波長處測定吸光度，將吸光度除以腦重得出每克腦組織所含的MDA量。
3、腦Na+-K+-ATP酶含量測定將大鼠斷頭處死，取腦以0.2mmol/LTris-HCL緩衝液(pH7.4)製成勻漿，直接用粗製勻漿加入酶反應管中，反應液中各化合物的濃度NaCL 100mmol/L；MgCl22.5mmol/L；KCL 10mmol/L；EDTA 1.0mmol/L；ATPNa21.0mmol/L或哇巴因0.2mmol/L 37℃水浴中反應30分鐘，速加無機磷顯色劑2.5ml(含0.02％孔雀綠，0.55％鉬酸銨和0.1％吐溫20)再加2.4％檸檬酸鈉0.2ml，室溫反應30分鐘，721分光光度計660nm波長處測定吸光度，計算無機磷含量，Na+-K+-ATP酶火性為不含哇因與含哇巴因兩管之差值，除以腦重得出每克腦組織所含的Na+-K+-ATP酶活力單位。
實驗結果1、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠腦組谷光甘肽含量的影響鏈脲黴素糖尿病大鼠末次給藥後次日，取大鼠端腦測定各組大鼠谷光甘肽(GSH)含量。結果表明糖尿病模型大鼠GSH含量明顯減少，對照組可阻止GSH的降低，苦蕎麥總黃酮膠囊20-80mg/kg三個劑量均可顯著增加糖尿病大鼠GSH含量，且呈一定的劑量反應關係。
2、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠腦組織過氧化脂質含量的影響鏈脲黴素糖尿病大鼠末次給藥後次日，取大鼠左側皮測定過氧化脂質(MDA)含量，結果表明糖尿病模型大鼠MDA含量明顯升高，苦蕎麥總黃酮膠囊20-80mg/kg三個劑量均可顯著降低糖尿病大鼠MDA含量，且呈一定的劑量反應關係。
3、苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素大鼠腦組織Na+-K+-ATP酶活力的影響鏈脲黴素糖尿病大鼠末次給藥後次日，取大鼠右側皮質測定Na+-K+-ATP酶含量。結果表明糖尿病模型大鼠Na+-K+-ATP酶含量明顯減少，苦蕎麥總黃酮膠囊20-80mg/kg三個劑量均可顯著增加糖尿病大鼠Na+-K+-ATP酶活力，且呈一定的劑量反應關係。對照組亦可抑制Na+-K+-ATP酶的降低。
實驗例5苦蕎麥總黃酮膠囊對鏈脲黴素模型大鼠臟器組織病理改變的影響實驗方法1、坐骨神經電鏡標本的製備取大鼠坐骨神經，用2.5％戊二醛固定，0.1M磷酸緩衝液(pH7.2-7.4)漂洗3次，每次5分鐘，1％OSO4(PH7.4)固定20min，0.1M磷酸緩衝液漂洗3次，乙醇-丙酮梯度脫水，Epon812樹脂包埋，700A超薄切片，透射電鏡下觀察坐骨神經的病理變化。
2、坐骨神經組織學染色取大鼠坐骨神經，用福馬林固定，石蠟包埋，切片後分別作HE染色觀察神經組織的一般病理改變Weil法染色選擇正常髓鞘、新鍍銀法染色選擇變形髓鞘，反硝酸銀法染色觀察軸索；6胺銀染色選擇微血管基底膜，觀察神經軸索、髓鞘和神經內微血管的病理變化。
3、眼和腎組織學染色取大鼠左眼球及左側腎臟，用福馬林固定，石蠟包埋，切片後分別作HE染色觀察組織的病理改變。
實驗結果1、HE染色腎臟HE染色片上可見腎小球和腎小管，對照組大鼠腎小球上皮細胞排列整齊規則，腎小管上皮細胞亦排列整齊，腎小管排列均勻。模型組大鼠腎小球萎縮，腎小囊內充滿大量滲出物，度將腎小球擠到一邊，腎小球上皮細胞排列紊亂，腎小管上皮細胞腫脹，甚至將管腔封閉，腎小管排列紊亂。苦蕎麥總黃酮膠囊20mg/kg劑量組HE染色片上可見腎小球萎縮，腎小囊內充滿大量滲出物，腎小囊增大，滲出物將小囊壁蓬起，腎小球上皮細胞排列率亂，腎小管上皮細胞腫脹程度比模型組輕，腎小管排列紊亂。苦蕎麥總黃酮膠囊40mg/kg劑量組HE染色片上見腎小球上皮細胞輕度腫脹，腎小囊沒有滲出，腎小囊增大，腎小管上皮細胞腫脹程度比模型組輕。苦蕎麥總黃酮膠囊80mg/kg劑量組的病理改變明顯減輕，腎小球細胞微微腫脹，腎小囊沒有滲出，腎小管上皮細胞腫脹的程度明顯減輕。對照組組大鼠HE染色體上見腎小球萎縮，腎小囊內充滿大量滲出物，腎小球上皮細胞排列紊亂，腎小管上皮細胞腫脹，腎小管排列紊亂。
眼球壁HE染色片上可見眼底的纖維膜，脈絡膜和視網膜。對照組大鼠眼球壁各層細胞排列整齊規則。模型組大鼠眼底的纖維膜，脈絡膜和視網膜各層細胞腫脹，細胞間充滿大量滲出物，使脈絡膜和視網膜的厚度明顯增加。苦蕎麥總黃酮膠囊20mg/kg劑量組眼底的纖維膜，脈絡膜和視網膜各層細胞腫脹，細胞間充滿大量的滲出物，脈絡膜和視網膜的厚度也明顯增加。苦蕎麥總黃酮膠囊40mg/kg劑量組眼底的纖維膜，脈絡膜和視網膜的厚度略微增加。苦蕎麥總黃酮膠囊80mg/kg劑量組眼底的纖維膜，脈絡膜和視網膜細胞排列規則，幾乎看不到細胞腫脹和滲出。對照組大鼠眼底的纖維膜，脈絡膜和視網膜細胞排列規則，脈絡膜和視網膜各層細胞輕度腫脹，細胞間充滿滲出物，脈絡膜和視網膜的厚度增加。
HE染色處上可見坐骨神經軸索及神經內的微血管，對照組大鼠坐骨神經橫切面上神經束包膜、單根神經纖維排列清晰、整齊，神經纖維的軸索染成深棕色，軸索外面的髓鞘染成淺粉色，著色均勻清晰。神經內的血管亦清晰可見，未見病理性損害。模型組大鼠神經纖維排列紊亂，部分纖維軸索萎縮，甚至消失，部分軸索與髓鞘分離，神經纖維內出現空泡，部分腫脹變形。可見微血管壁較厚，血管閉塞。苦蕎麥總黃酮膠囊20mg/kg劑量組HE染色處上可見神經纖維腫脹變形，髓鞘腫脹擠壓神經軸索及間質，亦可見髓鞘與神經纖維膜之間的水腫，病理改變比模型組和低劑量組輕，苦蕎麥總黃酮膠囊高劑量組個別神經纖維輕度腫脹變形，視野內僅見一個神經纖維髓鞘與纖維膜之間的水腫，多數神經纖維未見病理改變。對照組組大鼠坐骨神經HE染色片上可見神經纖維腫脹變形，髓鞘腫脹擠壓神經軸索及間質，也可見不數髓鞘與神經纖維膜之間的水腫。HE染色的縱切面上觀察坐骨神經標本，對照組大鼠神經纖維排列清晰、整齊、緊密，神經纖維的軸索染成深棕色，軸索外面的髓鞘染成淺粉色，軸索和髓鞘著色均勻清晰。雪旺細胞核清晰可見，未見明顯病理性損害。鏈脲黴素模型大鼠坐骨神經縱切面上神經纖維排列紊亂，部分纖維軸索萎縮，甚至消失，部分軸索與髓鞘分離，神經纖維內出現空泡，部分纖維腫脹變形。髓鞘內可見棉絮樣白班，滿視野見不到正常組織。苦蕎麥總黃酮膠囊低劑量組縱切片上可見神經纖維腫脹變形，髓鞘腫脹擠壓神經軸索及間質，亦可見髓鞘與神經纖維膜之間出現水腫，散見水泡樣滲出物。苦蕎麥總黃酮膠囊中劑量組大鼠神經纖維輕度腫脹變形，髓鞘腫脹擠壓神經軸索及間質，髓鞘內依稀可見棉絮樣白班，其病理改變比模型組輕，苦蕎麥苦蕎麥總黃酮膠囊高劑量組大鼠神經纖維排列清晰、整齊、緊密，軸索和髓鞘著色均勻清晰。個別神經纖維輕度腫脹變形，髓鞘內棉絮樣改變消失。對照組大鼠坐骨神經縱切片上可見神經纖維腫脹變形，神經纖維內出現空泡，部分纖維腫脹變形，彎曲。髓鞘腫脹擠壓神經軸索及間質，也見少數髓鞘與神經纖維膜之間的水腫。
2、正常髓鞘染色採用Weil法選擇性染正常髓鞘，對照組大鼠坐骨神經橫切面上神經軸索不著色，髓鞘染成藍黑色，髓鞘成橢圓形藍黑色、單根神經纖維排列清晰、整齊，髓鞘著色均勻清晰，神經內的血管亦清晰可見。模型組大鼠神經纖維排列紊亂，髓鞘模糊不清，髓鞘腫脹，髓鞘內可見淡染區域。縱切面上對照組大鼠神經纖維排列清晰、整齊、緊密，神經纖維的髓鞘染成藍黑色，髓鞘著色均勻清晰，髓鞘的節段和郎飛清晰可見，未見明顯病理性損害。鏈脲黴素模型大鼠坐骨神經縱切面上神經纖維排列紊亂，神經纖維內出現空泡，散在多數不規則淡染區域。苦蕎麥總黃酮膠囊20mg/kg劑量組的Weil法染色處上可見到神經髓鞘部位的淡染區域，髓鞘著色不規則，其病理改變與模型對照組相似。苦蕎麥總黃酮膠囊40-80mg/kg組Weil法染色片上神經髓鞘部位的淡染區域明顯減少，髓鞘著色仍然不規則，郎飛清晰可見，神經髓鞘部位仍有少量淡染區域，髓鞘著色不十分規則；對照組的Weil法染色片上髓鞘著色不規則，神經髓鞘的淡染區域較少，但可見節段性和散在淡染區域。
3、變形髓鞘染色採用變性髓鞘新鍍銀染色發將正常神經髓鞘染成淺棕色、選擇性將變性髓鞘染成黑色，神經軸索不著色。對照組大鼠坐骨神經橫切面上但根神經纖維排列清晰、整齊、髓鞘著色均勻清晰。橫型組大鼠神經纖維排列紊亂，髓鞘模糊不清。縱切面上對照組大鼠神經纖維排列清晰、整齊、緊密，正常神經髓鞘染成淺棕色，軸脲黴素模型大鼠坐骨神經縱切面上神經纖維排列紊亂，顯示斷續加重的黑色絲狀務，髓鞘部位散在不規則淡染區域，髓鞘染色不均勻，提示發生髓鞘病變。苦蕎麥總黃酮膠囊20mg/kg劑量組可見到神經髓鞘部位的黑染色區域，髓鞘著色不規則。苦蕎麥總黃酮膠囊40-80mg/kg組染色片上神經髓鞘部位有黑色絲狀物，髓鞘部位散在不規則淡染區域，高劑量組神經髓鞘部位有少量淡染區域，髓鞘著色不十分規則；對照組組髓鞘著色不規則，可見波浪形黑色絲狀物。
4、軸索染色採用反硝銀法染色觀察軸索，神經軸索染成棕色、髓鞘染成淺棕色。對照組大鼠神經纖維排列清晰、整齊，髓鞘著色均勻。模型組大鼠神經纖維排列紊亂，軸索和髓鞘均模糊不清，髓鞘腫脹，髓鞘內可見淡染區域，腫脹的神經纖維邊界不清。縱切面上對照組大鼠神經纖維排列清晰、整齊、緊密，正常神經髓鞘染成淺棕色，軸索走行平行，軸索著色均勻，髓鞘密度均勻。模型組大鼠神經纖維的縱切面上可見多處大塊滲出物將軸索和髓鞘擠得混亂，軸索粗細不均，著色深淺不等，髓鞘和神經纖維邊界不清。苦蕎麥苦蕎麥總黃酮膠囊40-80mg/kg劑量組可見到神經軸索粗細不均，軸索精處比正常軸索粗2-3倍，提示軸索腫脹，軸索著色變深淺不等，髓鞘和神經纖維邊界不清，髓鞘處有淡染區域。苦蕎麥苦蕎麥總黃酮膠囊40-80mg/kg組染色片上神經軸索粗細不均，可見軸索腫脹，軸索著色亦深淺不等，髓鞘和神經纖維邊界不清，髓鞘處有淡染區域，高劑量組神經髓鞘部位有多少索腫脹，軸索著色深淺不等，滲出物將軸索和髓鞘擠得混亂，髓鞘和神經纖維邊界不清，髓鞘處有淡染區域，其病理改變的特徵和模型組相似。
5、透謝電鏡觀察電鏡下觀察正常對照組大鼠的坐骨神經軸索內微絲排列規則，軸索周圍沒有滲出或髓鞘擠壓跡象。髓鞘的密度均勻，髓鞘各板層排列緊密規則，髓鞘與軸索之間沒有滲出。雪旺細胞形態正常。模型組大鼠的坐骨神經軸索變形，有的軸索甚模糊不清，被滲透出物擠壓使直徑變小，軸索內微絲排列紊亂，軸索周圍有滲出或髓鞘擠壓跡象。髓鞘的密度不均勻，板層剝離，各層髓鞘排列紊亂呈亂麻狀，髓鞘剝脫，有的髓鞘部分剝脫，髓鞘與軸索之間有滲出。雪旺細胞胞質有液化溶解區域，呈現空泡變性。苦蕎麥總黃酮膠囊用藥組大鼠的神經狀態明顯好於模型對照組，低劑量苦蕎麥總黃酮膠囊組軸索排列規則，髓鞘有部分剝脫，髓鞘的局部有板層分離觀察。髓鞘板層間有滲出，髓鞘滲出物使髓鞘明顯變粗，雪旺細胞亦可見空泡變性。中劑量苦蕎麥總黃酮膠囊組軸索排列規則，髓鞘有部分剝脫，髓鞘的局部有板層分離現象。髓鞘板層有滲出，雪旺細胞可見輕微空泡變性。高劑量苦蕎麥總黃酮膠囊組軸索排列規則，多數髓鞘密度均勻，髓鞘板層排列規則，個別髓鞘有略微板層分離現象。雪旺細胞形態基本正常。對照組組軸索排列規則，髓鞘有部分剝脫，髓鞘的局部有板層分離現象。髓鞘板層間有滲出，對照組神經狀態顯著強於模型對照組。
實驗例6苦蕎麥總黃酮含量測定標準曲線的製備稱取蘆丁對照品30.07mg，用30％乙醇溶解至100ml容量瓶中，分別取1ml，2ml，4ml，6ml，8ml，於5隻25ml容量瓶中，用30％乙醇補充至12.5ml，加入0.7ml的NaNO2(1∶20)溶液，搖勻，放置5min後，加入0.7ml Al(NO3)3(1∶10)溶液，6min後加入5ml 1mol NaOH，搖勻，用30％乙醇稀釋至刻度，10min後于波長500nm處測定，試劑為空白參比，結果如下

回歸方程；C＝0.0856A-0.0005 R＝0.9999供試品的製備取苦蕎麥總黃酮約30mg，精密稱定，用30％乙醇溶解至100ml容量瓶中，取5ml，置25ml容量瓶中，用30％乙醇加至12.5ml，加入0.7ml的NaNO2(1∶20)溶液中，搖勻，放置5min後加入0.7ml的Al(NO3)3(1∶10)溶液中，放置6min後，加入5ml的1mol NaOH溶液中，搖勻，用30％乙醇稀釋至刻度，10min後于波長500nm處測定，試劑為空白參比，按回歸方程計算含量，測得苦蕎麥總黃酮的含量可達95％以上。
實施例1苦蕎麥總黃酮的提取方法取苦蕎麥殼，粉碎成粗粉，加8倍水，加熱至90℃，在攪拌條件下緩慢加入氫氧化鈉溶液，直至調水煎液pH值為8.5，在此條件下浸提40分鐘，趁熱抽濾，殘渣同上再加4倍水處理一次，趁熱抽濾，合併濾液，在70℃下加鹽酸溶液，直至調水煎液pH值為5，攪拌後靜置過夜，抽濾，沉澱物用水洗至中性，乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品；取該粗品加3倍量的水，攪拌混勻，加氫氧化鈉鹼溶液，直至調水煎液pH值為8，再加等量乙醇，攪拌約2小時，過濾，濾液加鹽酸溶液，直至調水煎液pH值為5，充分攪拌加熱至80℃，靜置10小時，抽濾，沉澱用水洗，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
實施例2苦蕎麥總黃酮的提取方法取苦蕎麥全草，包括苦蕎麥莖、葉，粉碎成粗粉，加6倍水，加熱至90℃，在攪拌條件下緩慢加入氫氧化鈉溶液，直至調水煎液pH值為8.5，在此條件下浸提40分鐘，趁熱抽濾，殘渣同上再加4倍水處理一次，趁熱抽濾，合併濾液，在70℃下加入鹽酸溶液，直至調水煎液pH值為5，攪拌後靜置24小時並抽濾，沉澱物用水洗至中性，乾燥得苦蕎麥總黃酮粗品；取該粗品加3倍量水，攪拌混勻，加氫氧化鈉溶液，調pH值為8，再加等量乙醇，攪拌約2小時，過濾，濾液加鹽酸溶液，調pH值為5，充分攪拌加熱至80℃，靜置10小時左右，抽濾，沉澱用水洗，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
實施例3苦蕎麥總黃酮的提取方法將苦蕎麥全草，即包括苦蕎麥莖、苦蕎麥葉，苦蕎麥殼粉成粗粉；加入滲漉器中，加入pH值為12的NaOH溶液，再向鹼溶液中加溶1‰亞硫酸鈉，緩慢滲漉，檢測滲漉液無黃酮化合物時，停止滲漉；滲漉液加入HCl溶液，調pH至4.5；靜置過夜，過濾、乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品；再用60％濃度的乙醇溶解回流1小時，趁熱過濾、冷卻，析出結晶，乾燥，得精製的苦蕎麥總黃酮。
實施例4苦蕎麥總黃酮的提取方法將苦蕎麥全草，即包括苦蕎麥莖、苦蕎麥葉，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入回流提取器中，加入4倍量60％濃度的乙醇回流提取3小時，提取液過濾減壓回收乙醇至無醇味；低溫冷藏過夜，析出結晶，過濾、乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品；加水3倍，攪拌混勻，緩慢加入鹼溶液，直至調水煎液pH值為8；再加等量乙醇或甲醇，攪拌約2小時，過濾；濾液加酸溶液，調水煎液pH值為5，充分攪拌加熱至80℃，靜置10小時，過濾；沉澱用水洗滌；棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
實施例5苦蕎麥總黃酮的提取方法將苦蕎麥全草，即包括苦蕎麥莖、苦蕎麥葉，苦蕎麥殼粉成粗粉；加入7倍量水，煎煮提取2次，每次2小時，合併提取液，提取液經高速離心後，減壓濃縮至相對密度50℃時測為1.20；濃縮液冷藏過夜，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮粗品；加水3倍，攪拌混勻，緩慢加入鹼溶液，調pH值為8，攪拌均勻，過濾；濾液加酸溶液，調pH值為5，充分攪拌，加熱至80℃，靜置12小時，過濾；沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
實施例6苦蕎麥總黃酮的提取方法將苦蕎麥全草，即包括苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入5倍量甲醇，回流提取3小時；將提取液放至室溫，分次加入活性炭，攪拌，靜置，用鹽酸-鎂粉反應檢查上清液無黃酮反應時為止；過濾，收集吸附苷的活性炭，依次用沸水，沸甲醇，7％酚溶液，15％酚-醇溶液進行洗脫；對各部分洗脫液進行定性檢查，用PPC鑑定，黃酮苷類可用7％酚-水洗下；洗脫液經減壓蒸發濃縮，再用乙醚振搖除去殘留的酚，餘下水層減壓濃縮即得苦蕎麥總黃酮；加4倍的乙醇，加熱攪拌2小時，過濾，靜置15小時，過濾，濾液加酸溶液，調pH值為5，充分攪拌加熱至80℃，靜置10小時，過濾；沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
實施例7苦蕎麥總黃酮膠囊的製備取按本發明精製的苦蕎麥總黃酮100g，加入賦形劑澱粉140g，糊精50g，充分混勻，用95％的乙醇製成合適的軟材，制粒，乾燥，整粒，裝膠囊，製成1000粒，每粒含有效成份苦養麥總黃酮100毫克。本發明藥物膠囊劑的口服劑量為每次1-3粒，每日2-3次。
實施例8苦蕎麥總黃酮片劑的製備取按本發明精製苦蕎麥總黃酮100g，加入賦形劑澱粉140g，糊精50g，充分混勻，用95％的乙醇製成合適的軟材，制粒，乾燥，整粒，加入外加輔料羧甲基澱粉鈉和硬脂酸鎂，混勻，壓片，製成1000片，每片含有效成份苦養麥總黃酮100毫克。本發明藥物膠囊劑的口服劑量為每次1-3片，每日2-3次。
實施例9苦蕎麥總黃酮顆粒劑的製備取按本發明精製苦蕎麥總黃酮100g，加入賦形劑糖粉5Kg，糊精4Kg，充分混勻，用95％的乙醇製成合適的軟材，制粒，置於沸騰乾燥床中沸騰乾燥或60℃乾燥，整粒，分裝，製成1000袋，每袋含有效成份苦養麥總黃酮100毫克。本發明藥物膠囊劑的口服劑量為每次1-2袋，每日2-3次。
實施例10苦蕎麥總黃酮注射劑的製備取精製苦蕎麥總黃酮100g，加注射用水850ml，攪拌混勻，加氫氧化鈉溶液，調至pH值為8，充分攪拌加熱至80℃，使溶解，加吐溫-80，過濾，攪拌均勻，用10％鹽酸溶液，調pH值為7.5，加注射用水至1000ml，微孔濾膜過濾，灌封，滅菌，包裝，即得。
實施例11含有苦蕎麥總黃酮保健食品的製備取按本發明方法製得提取物100g，加入奶粉或豆粉9.9Kg，充分混勻，分裝，每袋裝10g，製成1000袋，每袋含有效成份苦養麥總黃酮100毫克。本發明的保健食品口服劑量為每次1-2袋，每日2-3次。
權利要求
1.一種苦蕎麥總黃酮，其特徵在於它是由下述提取方法中的任意一種方法製成的A、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加3～10倍量水，加熱煎煮，在攪拌條件下緩慢加入鹼溶液，調水煎液pH值為7.5～10.5，在此條件下浸提，趁熱抽濾；殘渣同上再加3～8倍量水，按上述方法再提取一次，趁熱抽濾；合併濾液，加入酸溶液，調水煎液pH值為3～6，攪拌後靜置，抽濾；沉澱物用水洗至中性，乾燥，得苦蕎麥總黃酮；B、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入滲漉器中，加入pH值為10～12的鹼水溶液，該鹼水溶液中溶有0.5～3‰亞硫酸鈉，緩慢滲漉，檢測滲漉液無黃酮化合物時，停止滲漉；滲漉液加酸溶液，調pH值為2～6，靜置，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮；C、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入回流提取器中，加入3～12倍量50～95％乙醇或甲醇回流提取，提取液過濾，減壓回收乙醇或甲醇，冷藏，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮；D、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥，粉成粗粉；加入3～12倍量水，煎煮提取，合併提取液，提取液經高速離心後，過濾，濃縮至相對密度在50℃時為1.1～1.30，冷藏，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮；E、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖、苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉；加入3～12倍量50～95％乙醇或甲醇，回流提取1～6小時；將提取液放至室溫，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至檢查上清液無黃酮反應時為止，過濾，收集吸附苦蕎麥總黃酮的活性炭，依次用沸水，沸甲醇，3～10％酚～水溶液，10～20％酚～醇溶液進行洗脫；對各部分洗脫液進行定性檢查，用PPC鑑定，大部分黃酮苷類可用3～10％酚～水溶液洗下；洗脫液濃縮至相對密度在50℃時為1.2～1.3；再加乙醚振搖除去殘留的酚，餘下水層減壓濃縮，冷卻，析出結晶，過濾，乾燥，即得苦蕎麥總黃酮；F、將苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖、苦蕎麥葉，苦蕎麥殼，苦蕎麥即苦蕎麥種子，粉成粗粉；加入滲漉器中，加入50～95％的乙醇，緩慢滲漉，檢測滲漉液再無黃酮化合物時，停止滲漉；滲漉液過濾，回收乙醇至無醇味；冷藏，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮。
2.如權利要求1所述的苦蕎麥總黃酮， 其特徵在於該苦蕎麥總黃酮是由下述提取方法中的任一種製成A、取苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖、苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉，加6倍水，加熱至90℃，在攪拌條件下緩慢加入鹼溶液溶液，直至調水煎液pH值為8.5，在此條件下浸提40分鐘，趁熱抽濾，殘渣同上再加4倍水處理一次，趁熱抽濾，合併濾液，在70℃下加入酸溶液，調水煎液pH值為5，攪拌後靜置24小時並抽濾，沉澱物用水洗至中性，乾燥得苦蕎麥總黃酮；B、取苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖、苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉，加入滲漉器中，加入pH為12鹼溶液溶液，該鹼溶液中溶入1‰亞硫酸鈉，緩慢滲漉，檢測滲漉液無黃酮化合物時，停止滲漉；滲漉液加入酸溶液，調pH至4.5；靜置過夜，過濾、乾燥，得苦蕎麥總黃酮；C、取苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉，加入6倍量60％濃度的乙醇，回流提取3小時，提取液過濾，減壓回收乙醇至無醇味；冷藏過夜，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮；D、取苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉，加入8倍量水，煎煮提取2次，每次3小時，提取液經高速離心後，減壓濃縮至相對密度50℃時測為1.20；冷藏過夜12小時，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮；E、取苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉，加入5倍量甲醇，回流提取3小時，將提取液放至室溫，分次加入活性炭，攪拌，靜置，用鹽酸-鎂粉反應檢查上清液無黃酮反應時為止，過濾，收集吸附苷的活性炭，依次用沸水，沸甲醇，7％酚溶液，15％酚-醇溶液進行洗脫；對各部分洗脫液進行定性檢查，用PPC鑑定，黃酮苷類可用7％酚-水洗下，洗脫液經減壓濃縮，再用乙醚振搖除去殘留的酚，餘下水層濃縮即得苦蕎麥總黃酮；F、取苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥即苦蕎麥種子，苦蕎麥殼，粉成粗粉，加入滲漉器中，加入60％濃度的乙醇，緩慢滲漉，檢測滲漉液無黃酮化合物時，停止滲漉；滲漉液過濾，回收乙醇至無醇味；冷藏12小時，析出結晶，過濾，乾燥，得苦蕎麥總黃酮。
3.如權利要求1、2所述的苦蕎麥總黃酮的精製方法，其特徵在於該苦蕎麥總黃酮的精製方法選自下述方法中的任一種A、取本發明的苦蕎麥總黃酮用沸水或50～95％的乙醇，回流1～3小時，趁熱過濾，冷卻，析出結晶，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮；B、取本發明的苦蕎麥總黃酮加水2～6倍，攪拌混勻，緩慢加入鹼溶液，調至pH值為7.5～10，加2～6倍的乙醇或甲醇，攪拌約1～4小時，過濾，濾液加酸溶液，調pH值為3～6，充分攪拌，加熱至50～100℃，靜置，過濾，沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮；C、取本發明的苦蕎麥總黃酮加水2～6倍，攪拌混勻，緩慢加入鹼溶液，調至pH值為7.5～10；攪均勻，過濾；濾液加酸溶液，調至pH值為2～6，充分攪拌，加熱至50～100℃，靜置，過濾，沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮；D、取本發明的苦蕎麥總黃酮加3～8倍的50～95％的乙醇，加熱攪拌1～4小時，過濾，靜置，過濾，濾液加酸溶液，調pH值為2～6，充分攪拌加熱至50～90℃，靜置，過濾；沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
4.如權利要求3所述的苦蕎麥總黃酮的精製方法，其特徵在於該苦蕎麥總黃酮的精製方法選自下述方法中的任一種A、取苦蕎麥總黃酮加60％濃度的乙醇溶解回流1小時，趁熱過濾、冷卻，析出結晶，乾燥，得精製的苦蕎麥總黃酮；B、取苦蕎麥總黃酮加3倍量的水，攪拌混勻，加氫氧化鈉鹼溶液，調pH值為8，再加等量乙醇，攪拌約2小時，過濾，濾液加鹽酸溶液，調pH值為5，充分攪拌加熱至80℃，靜置12小時，過濾，沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮；C、取苦蕎麥總黃酮加水3倍，攪拌混勻，緩慢加入鹼溶液，調pH值為8；攪拌均勻，過濾；濾液加酸溶液，調pH值為5，充分攪拌，加熱至80℃，靜置12小時，過濾；沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮；D、取苦蕎麥總黃酮加4倍的乙醇，加熱攪拌2小時，使全部溶解，過濾，靜置12小時，過濾，濾液加酸溶液，調pH值為5，充分攪拌加熱至80℃，靜置12小時，過濾；沉澱用水洗滌，棄去洗滌液，乾燥，即得精製的苦蕎麥總黃酮。
5.如權利要求1或2所述的苦蕎麥總黃酮，其特徵在於在該苦蕎麥總黃酮的提取方法中，加入的鹼溶液可為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、飽和石灰水、Na2CO3、K2CO3溶液；加入的酸溶液可為鹽酸、硫酸、硝酸溶液。
6.如權利要求3所述的苦蕎麥總黃酮的精製方法，其特徵在於在該苦蕎麥總黃酮的精製方法中，加入的鹼溶液可為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、飽和石灰水、Na2CO3、K2CO3溶液；加入的酸溶液可為鹽酸、硫酸、硝酸溶液。
7.如權利要求4所述的苦蕎麥總黃酮的精製方法，其特徵在於在該苦蕎麥總黃酮的精製方法中，加入的鹼溶液可為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、飽和石灰水、Na2CO3、K2CO3溶液；加入的酸溶液可為鹽酸、硫酸、硝酸溶液。
8.如權利要求1或2所述的苦蕎麥總黃酮，其特徵在於在該苦蕎麥總黃酮的提取方法中，不同濃度的乙醇可用與之相對應不同濃度的甲醇替換。
9.如權利要求3所述的苦蕎麥總黃酮的精製方法，其特徵在於在該苦蕎麥總黃酮的精製方法中，不同濃度的乙醇可用與之相對應不同濃度的甲醇替換。
10.如權利要求4所述的苦蕎麥總黃酮的精製方法，其特徵在於在該苦蕎麥總黃酮的精製方法中，不同濃度的乙醇可用與之相對應不同濃度的甲醇替換。
11.如權利要求1或2所述的苦蕎麥總黃酮，其特徵在於該苦蕎麥總黃酮亦稱苦蕎麥黃酮來自於苦蕎麥植物的苦蕎麥即苦蕎麥種子或苦蕎麥種子去皮；苦蕎麥種皮即苦蕎麥殼；苦蕎麥全草包括苦蕎麥葉和苦蕎麥莖。
12.如權利要求1或2所述的苦蕎麥總黃酮，其特徵在於該苦蕎麥總黃酮可製成任何一種臨床上或藥學上可接受的製劑，包括口服製劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、注射劑、凍乾粉針劑型。
13.如權利要求1、2所述的苦蕎麥總黃酮，其特徵在於該苦蕎麥總黃酮可製成保健品。
14.苦蕎麥總黃酮在治療糖尿病或糖尿病合併症的藥物中的應用。
15.苦蕎麥總黃酮具有改善神經傳導速度，降低山梨醇含量，增加神經血流量，增加血管開放的數量，抑制血管基底膜的增厚，逆轉糖尿病引起的穀胱甘肽降低，過氧化脂質升高，升高Na+-K+-ATP酶活力以及對糖尿病及糖尿病合併症引起的腎、眼、神經病理改變明顯減輕的功能的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種治療糖尿病及糖尿病併發症的藥物、製備方法及其新用途，它主要由苦蕎麥全草，即苦蕎麥莖，苦蕎麥葉，苦蕎麥(種子)，苦蕎麥殼，經粉碎、煎煮、提取等步驟得苦蕎麥總黃酮，再經過精製工藝製成臨床上可接受的劑型或保健食品。本發明苦蕎麥總黃酮對治療糖尿病及糖尿病合併症效果顯著。
文檔編號A61K31/7042GK1634953SQ200310112928
公開日2005年7月6日 申請日期2003年12月26日 優先權日2003年12月26日
發明者任武賢, 馮偉, 李明軍, 趙雪瑩 申請人:山西省風陵渡開發區眾力投資發展有限公司