抗病毒劑在治療醫學病症中的用途的製作方法

2023-07-12 19:14:31 5

專利名稱：抗病毒劑在治療醫學病症中的用途的製作方法
抗病毒劑在治療醫學病症中的用途
該申請涉及醫學病症的治療或免疫反應的改善。更具體而言，它涉及抗病毒化合
物在製備藥物中的用途，所述藥物用於治療多種醫學病症或改善免疫反應。 用於具體病症的現有醫學治療典型地應該試圖通過物理和/或化學方法除去所 述病症的原因。例如，治療由細菌感染引起的膿腫可能涉及膿腫排液(draining)連同抗生 素的使用。通常，醫學治療限於特定的醫學病症，並且可以被諸如病原體的藥物耐受性削 弱。因此，將許多研究努力花費在開發關於以前認為的不治之症的新式治療，以提高恢復速 度，或克服藥物耐受性或需求中的其它改變。 身體的天然免疫系統能夠處理一定範圍的否則將導致醫學病症的病原體，異物， 等。 一般地，被免疫系統採用的方法分成先天反應(其包括發炎，補體蛋白質與外來細胞的 結合，和吞噬細胞對細胞的攻擊，並且能夠對新類型的感染迅速地反應)和靶定特定的抗 原的適應反應(包括抗體和T細胞)。雖然對於新的感染反應相對緩慢，但適應系統具有 巨大特異性並且還能建立免疫記憶，從而允許對隨後的由相同病原體引起的再感染迅速反 應。 認為某些醫學病症包括免疫反應的部分或完全失活。例如，免疫反應有時可以被 有意抑制，諸如在移植患者情況下以防止移植排斥。這樣的抑制通常通過施用糖皮質激素， 細胞抑制劑，或其它免疫抑制藥物實現。許多病症諸如AIDS (由HIV感染所引起)，某些惡 性疾病，藥物濫用和營養不良也引起有害的免疫機能缺陷。在兩種情況下，失去免疫功能可 以導致嚴重的疾病，因此必須採用另外的行為防止這個。在免疫反應已經受到有意抑制的 情況下，則必須直接靶定潛在的感染源，諸如通過抗生素的預防性施用。在免疫機能缺陷不 是醫學程序的先決條件的情況下，例如在嚴重的飲食缺陷或晚期HIV感染中，則適合於試 圖通過使用試劑諸如熱增加或抗反轉錄病毒處理而增加免疫功能。 然而，還需要在患者(或貌似健康個體)中最優化免疫反應的活性，並且因此改善 其它疾病的症狀，在所述患者(或貌似健康個體)中，免疫功能不是顯著抑制的，但是免疫 系統沒有在最佳水平運轉。這些病症在常規意義上不被認為是免疫缺陷的，並且患有該病 症的患者不易受到與充分免疫抑制有關的典型機會感染的影響。因而這些個體一般被認為 是免疫活性的，並且最優化它們的免疫功能的潛在優點沒有被預先重視。本發明已經被構 思成至少部分地解決該問題。為了本發明的目的，因此將這樣的個體在下文稱為免疫活性 的。 根據本發明的第一方面，提供有效針對巨細胞病毒(CMV)的化合物在製備藥物中 的用途，所述藥物用於改善CMV-血清反應陽性的免疫活性個體的免疫反應。
用於本文中時，術語"有效針對CMV"意欲指的是針對CMV的化合物的ID5。小於 1000 iiM。 用於本文中時，"改善免疫反應"意欲指的是減少特異於巨細胞病毒的效應子和/
或記憶T細胞的數目，和/或增加幼稚(naiVe)T細胞數目。在一個實施方案中，所述減少 (CMV-特異性效應子和/或記憶T細胞)和增加(幼稚T細胞)的至少之一至少是20% 。 在另一個實施方案中，所述減少和增加的至少之一至少是40% 。在又一個實施方案中，所述減少和增加的至少之一至少是60%。據信，在血流和淋巴系統中，通過吸收過量的淋巴系統 資源，通過抑制幼稚T細胞數目和通過分泌可溶性因子，這些特異性於CMV的效應子和記憶 T細胞有助於免疫功能的減少。 用於本文中時，"血清反應陽性的"具有指示血液中特異於CMV的抗體的可檢測存 在的普通含義，並且指示過去感染的歷史。 在一個實施方案中，將CMV特異性記憶或效應子T細胞數目取成由CD4+T細胞數 目表示，所述CD4+T細胞在其表面上已經失去了 CD28分子的表達。根據van Leeuwen等的 出版物，免疫學雜誌(J. Immunology) ， 2004，這些CD4+CD28-T細胞是CMV-特異性CD4+T細 胞反應的特有特性。因而，將這些細胞在外周血中的比例或數量取成表示用於確定CMV-特 異性免疫反應的有價值方式。該值可以用於確定這樣的個體，在所述個體中CMV-特異性免 疫反應的大小指示它們特別有可能受益於所述治療。另外，該測量可以用於監測對於治療 的反應，並且因此可以用於指導反應功效和潛在的需要以修正治療劑量。
在一個實施方案中，將CMV特異性記憶或效應子T細胞數目取成由CD4+T細胞數 目表示，所述CD4+T細胞在其表面上已經失去了 CD27分子的表達。根據Pourgheysari等 的出版物，J. Virology (病毒學雜誌)，2007， CD4+CD27-T細胞是CMV-特異性CD4+T細胞反 應的特有特性。因而，將這些細胞在外周血中的比例或數量取成表示用於確定CMV-特異性 免疫反應的有價值方式。該值可以用於確定這樣的個體，在所述個體中CMV-特異性免疫反 應大小指示它們特別有可能受益於所述治療。另外，該測量可以用於監測對於治療的反應， 並且因此可以用於指導反應功效和潛在的需要以修正治療劑量。 在一個實施方案中，將CMV特異性記憶或效應子T細胞數目取成由CD4+T細胞數 目表示，所述CD4+T細胞在其表面上已經獲得了 CD57分子的表達。根據Pourgheysari等 的出版物，J. Virology (病毒學雜誌)，2007， CD4+CD57+T細胞是CMV-特異性CD4+T細胞反 應的特有特性。因而，將這些細胞在外周血中的比例或數量取成表示用於確定CMV-特異性 免疫反應的有價值方式。該值可以用於確定這樣的個體，在所述個體中CMV-特異性免疫反 應大小指示它們特別有可能受益於所述治療。另外，該測量可以用於監測對於治療的反應， 並且因此可以用於指導反應功效和潛在的需要以修正治療劑量。 應當理解，CMV-特異性記憶或效應子T細胞數目可以通過CD4+T細胞表面上的 CD27、CD28或CD57的任何組合的表達模式測量。備選地或另外地，CMV-特異性記憶或效應 子T細胞數目可以通過CD8+T細胞表面上的CD27、 CD28或CD57的任何組合的表達模式測 量。已經失去CD27或CD28表達的CD8+細胞在外周血中的比例或數目在CMV血清反應陽 性的個體中增加。表達CD57分子的CD8+T細胞數目在CMV血清反應陽性的個體中增加。
用 於本文 中 時，如Crumpacker等，Growth inhibition by acylogimnosineofherpesviruses isolated from human infections (由從人感染分離的 皰疹病毒的醯基鳥苷引起的生長抑制)，Antimicrobial Agents and Chemother即y (抗微 生物劑和化學治療)，1979， 15巻，第5號，642-645頁的測定中所限定，測量ID5。值。
在一個實施方案中，所述藥物用於改善患有本發明第二方面中列出的至少一種病 症的CMV血清反應陽性的免疫活性個體的免疫反應。 在一個實施方案中，改善免疫反應包括減少CMV-特異性免疫反應，和因此改善總 的免疫反應。
根據本發明的第二方面，提供有效針對CMV的化合物在製備藥物中的用途，所述 藥物用於治療免疫活性個體中的CMV。 用於本文中時，"CMV的治療"意欲表示更多CMV感染效果之一的改善，並且不應該 被認為需要從感染個體完全除去CMV。在一個實施方案中，CMV的治療可以通過特異於巨細 胞病毒的效應子和/或記憶T細胞的比例減少來表示。如上，CMV-特異性記憶或效應子T 細胞的數目可以由CD4+T細胞或CD8+T細胞數目表示，所述CD4+T細胞或CD8+T細胞已經 失去了 CD28或CD27的表達，或獲得了 CD57表達，或這些的任何組合。
根據本發明的第三方面，提供有效針對CMV的化合物在製備藥物中的用途，所述 藥物用於改善選自下列病症的症狀HIV感染；情緒失調，包括抑鬱，疲勞或焦慮；精神分裂 症；慢性疲勞症候群；炎性病症諸如類風溼性關節炎，全身性紅斑狼瘡，結節病，關節強直 性脊柱炎，牛皮癬關節病，Wegener肉芽腫病，及其它血管炎；自身免疫病症諸如多發性硬 化，Sjorgen症候群，糖尿病，原發性膽硬化，和全身硬化；惡性疾病；結節病或澱粉樣變；慢 性細菌、病毒或寄生物感染，包括病毒性肝炎和Chagas病；瘧疾；慢性肺病諸如支氣管擴張 症或囊性纖維變性；急性冠狀症候群諸如不穩定性心絞痛；動脈(例如主動脈的)動脈瘤； 動脈粥樣硬化；和腦血管閉塞("中風")。 根據本發明的第四方面，提供具有針對CMV的ID5。大於20 ii M(如在Crumpacker 等的測定中所限定)的核苷類似物在製備藥物中的用途，所述藥物用於治療免疫活性患者 中CMV-介導的病症。 在一個實施方案中，核苷類似物具有至少50iiM的針對CMV的ID5。。在另一個實
施方案中，核苷類似物具有至少100 ii M的針對CMV的ID5。。 在一個實施方案中，核苷類似物具有小於1000 ii M的針對CMV的ID5。。 根據本發明的第五方面，提供一種醫學治療方法，所述方法包括將有效針對CMV
的化合物施用到CMV-血清反應陽性的免疫活性患者以減少針對CMV的免疫反應。 下列要點適用於本發明的全部方面。 在優選實施方案中，所述化合物或核苷類似物選自阿昔洛韋，泛昔洛韋和伐昔洛 韋。 巨細胞病毒(CMV)是人皰疹病毒，皰疹病毒科(Herpesviridae)家族中的一種。其 它人皰疹病毒導致疾病諸如口部的和/或生殖器皰疹(單純性皰疹病毒)，水痘和帶狀皰疹 (水痘帶狀皰疹病毒)，和Burkitt淋巴瘤(Epstein-Barr病毒)。 CMV感染在免疫活性個體中是非常普遍的並且一般認為是無症狀的。感染率(基 於身體中抗體的可檢測的存在)根據地理區域改變在非洲，非常大多數的人群在五歲年 齡以前感染；在日本，大部分人群在二十歲的年齡以前感染；而在歐洲和北美，大約70%的 人在六十歲的年齡以前感染。 在可能發生在任何年齡的原發感染以後，CMV典型地在免疫活性的人中保持潛伏； 這被認為是CMV-特異性免疫反應作用的結果，其一般能限制溶胞病毒的複製。雖然目前準 確的細節是不清楚的，但是相信病毒可以在原發感染以後進入"潛伏"狀態，但是經歷再激 活的事件，其間免疫反應對於控制廣泛的病毒傳播很關鍵。 該再激活可以頻繁發生的事實是由下列事實揭示的，即接受強烈免疫抑制治療的 患者經常在數周之內遭受臨床CMV病毒再激活。CMV再激活，和由此引起的組織損傷，是重免疫抑制患者諸如已經接受異源移植或具有晚期HIV感染的那些患者中充分公認的問題。 在這樣的情況下，已知CMV導致疾病諸如肺炎、結腸炎、和視網膜炎。 在CMV感染潛伏期間，被感染的人保持血清反應陽性，並且這裡所描述的治療藥 物和方法保持可適用。 本發明由這樣的發現而產生，即與像以前認為的無症狀不同，免疫活性的人中的 CMV感染事實上對某些醫學病症的嚴重性有貢獻。這些可以廣泛分成兩個類別(在本文中 共同稱為CMV-介導的病症)
1)繼發於CMV感染的免疫功能損傷 被CMV感染可以產生天然免疫功能的改變和損傷，這是由於發展CMV-特異性免疫 反應的緣故。這可以採取多種形式，包括-減少的免疫功能，特別是在生理學或心理應激的時期；-增加的免疫衰老發展，如例如通過記憶T細胞的積累或幼稚T細胞的加速損失所 示；-減小的針對其它免疫原的疫苗反應。 這對於其中免疫系統已經被損害或處於損害風險的那些是特別相關的，諸如-已過中年的個體；-經歷腎滲析的患者；-處於瘧疾感染風險中的患者； _已經接受同種異源移植的患者；-已經經歷冠狀動脈放支架或外科代管的患者；-具有可識別的危險因素的患者中腦血管閉塞("中風")的預防；-經歷太空探險的個體，諸如太空人。 2)其它醫學病症症狀嚴重性的增加 這些可以發生在許多醫學病症中，包括-在疾病任何階段的HIV感染；-情緒失調，包括抑鬱，疲勞或焦慮；-精神分裂症；-慢性疲勞症候群； _炎性病症諸如類風溼性關節炎，全身性紅斑狼瘡，結節病，關節強直性脊柱炎，牛 皮癬關節病，Wegener肉芽腫病，及其它血管炎；-自身免疫病症諸如多發性硬化，Sjorgen症候群，糖尿病(包括併發症諸如勃起
功能障礙)，原發性膽硬化，和全身硬化；-惡性疾病；-結節病或澱粉樣變；-慢性細菌、病毒或寄生物感染，包括病毒性肝炎和Chagas病；
-症疾；-慢性肺病諸如支氣管擴張症或囊性纖維變性；
-急性冠狀症候群諸如不穩定性心絞痛； _動脈(例如主動脈的)動脈瘤；
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-動脈粥樣硬化；-腦血管閉塞("中風")；-阿爾茨海默病；-大粒性淋巴細胞增多； _Guillan_Barre症候群；-炎性腸病諸如局限性迴腸炎或潰瘍性結腸炎；
-醇攝取繼發的臨床病症。 不希望受限於理論，相信上面列出的醫學病症在CMV-感染患者中是加重的。這被 認為與臨床後遺症的發展有關，所述臨床後遺症由CMV感染產生的不成比例地大免疫反應 的免疫調製效應產生。因此可能在不需要根除感染的條件下，通過使用抗病毒藥物，減少該 免疫反應來改善醫學病症的治療。 巨細胞病毒感染可以加重這些疾病的臨診症狀的證據來自兩個觀察。上面列出的 病症與增加的CMV血清陽性流行程度(和對照組對比)有關或經常與升高的CD28-T細胞 水平有關，可以用其表示升高的CMV-特異性免疫反應。因此，針對CMV的免疫反應在患有 這些病症的患者中放大，並且可能反映和/或促進輕微的免疫抑制或免疫失調狀態，所述 免疫抑制或免疫失調狀態可以通過本發明的方面至少部分逆轉。 已知某些抗病毒藥物用於治療皰疹病毒感染。具體地，已知核苷類似物諸如阿昔 洛韋(也稱為aciclovir(9-(2-羥基乙氧基甲基)鳥嘌呤-GB 1 523865)用於治療人皰疹 病毒，其最有效針對單純性皰疹病毒(HSV-1和HSV-2)和水痘帶狀皰疹病毒(VZV)。阿昔洛 韋在體外具有針對CMV複製的最小活性，其ID5。(藥物將病毒蝕斑形成減少50%或以上的 濃度)大於100 iiM，分別與針對HSV-1 、HSV-2和VZV的值0. 15 ii M、 1. 62 ii M和3. 75 ii M相 比(根據Crumpacker等的測定)。伐昔洛韋是阿昔洛韋的L_纈氨酸酯並且起阿昔洛韋前 藥的作用，並且因此具有相同作用機理。這兩種藥物都在通常劑量產生許多副作用，包括惡 心、嘔吐、腹瀉和/或頭痛。 更昔洛韋和纈更昔洛韋分別是阿昔洛韋和伐昔洛韋的同源物，其已經由於它們針 對CMV顯著改善的活性而被開發。這些藥物廣泛用於在免疫抑制患者中處理CMV疾病。然 而，更昔洛韋被認為是潛在的人類致癌劑，致畸劑，和誘變劑，並且被認為可能導致精子發 生的抑制。已知的副作用包括粒性白細胞減少，中性白細胞減少，貧血，血小板減少，發燒， 噁心，嘔吐，消化不良，腹瀉，腹痛，脹氣，食慾缺乏，升高的肝酶類，頭痛，意識混亂，幻覺，癲 癇發作，在注射位點的疼痛和靜脈炎(由於高pH)，出汗，皮疹，癢病和增加的血清肌酸酐和 血脲濃度。 噴昔洛韋是阿昔洛韋的類似物，其能夠在較少副作用情況下治療皰疹病毒感染。 噴昔洛韋的抗病毒譜類似於阿昔洛韋的抗病毒譜，並且它因此具有最小的針對CMV的活 性。泛昔洛韋是噴昔洛韋的前藥，具有改善的生物利用率。 因此在本領域中存在針對免疫活性患者中的CMV治療的偏見，其基於下列看法
-大多數抗病毒藥物不能有效治療CMV ;-能治療CMV的那些藥物具有不可接受的高毒性和副作用水平； -CMV感染是近於普遍存在的，並且已經被認為是在免疫活性患者中無症狀的。 然而，發明人已經發現，CMV感染不是完全無症狀的，而且意外地是，事實上在用抗病毒藥物治療CMV感染患者中存在益處，所述抗病毒藥物具有針對巨細胞病毒的低活性，如通過體外測定所估算。當對患者給藥時，這些藥物導致對於巨細胞病毒免疫反應的大量減少，最可能通過它們減少CMV再激活的亞臨床事件，並且由此限制CMV-特異性免疫反應的周期性剌激的能力。 施用到患者的劑量正常應該由處方醫師確定並且通常應該根據個體患者的年齡、體重和反應，以及患者症狀的嚴重性而變化。然而，在大多數情況下，有效的治療劑每日劑量應該在200-2000mg範圍內，且優選地，在400-1000mg範圍內(例如對於伐昔洛韋或阿昔洛韋)，其以單劑量或分劑量施用。然而，在一些情況下，可能必需使用這些限度以外的劑 雖然有效成分可以作為原始的化學藥品單獨施用，但是優選地，其以藥物製劑的形式存在。本發明的製劑包含有效成分及其藥用載體，和任意其它治療成分。所述載體在與製劑的其它成分可相容和對其受體無害的意義上必須是"可接受的"。
為了避免疑問，本發明有效成分的活性可以受藥物製劑的其它成分的影響。有效成分可以與藥物製劑的任何其它成分形成"聯合治療"。例如，一種可能的這樣的聯合治療涉及在本發明任何方面的製劑的一種中使用鋅。備選的聯合治療可以包括在本發明製劑的一種中使用"抑制素"藥物諸如辛伐他汀，或在用於處理肌骨胳疾病的製劑中包含抗腫瘤壞死因子(TNF)藥物諸如英夫利昔單抗。 便利地，製劑的單位劑量含有200mg和800mg之間的有效成分。優選地，所述製劑
適於每天施用一至六次，諸如二至四次。適於鼻部或口腔施用的製劑，諸如在下文中描述的
自推進粉末分配製劑，可以包含0. 1至20重量％，例如約2重量％的有效成分。 所述製劑包括採用適於口服、眼部、直腸的、腸胃外的(包括皮下的，陰道的，腹膜
內的，肌肉內的和靜脈內的)，關節內的，鼻部的或口腔施用形式的那些。 適於口服施用的本發明製劑可以採用離散單元的形式，諸如膠囊、扁囊劑、片劑或
錠劑，各自含有預定量的有效成分；採用粉末劑或顆粒劑的形式；採用水性液體或非性水
液體中的溶液或懸浮液的形式；或採用水包油乳劑或油包水乳劑的形式。有效成分也可以
採用丸劑(bolus)、藥糖劑或糊劑的形式。對於這樣的製劑，載體中有效成分的一定範圍的
稀釋是適合的，諸如1%至99%，優選5%至50%和更優選10%至25%稀釋。根據稀釋水
平，製劑應該是室溫下在約2(TC的區域)的液體(或低熔化的固體。 直腸施用的製劑可以採用結合有效成分和載體諸如可可油的栓劑形式，或採用灌腸劑的形式。 適於腸胃外施用的製劑包括溶液，混懸劑或乳劑，如上所述，便利地包括，優選與受體血液等滲壓的有效成分的無菌水製劑。 適於關節內施用的製劑可以採用有效成分的無菌水製劑的形式，其可以採用微晶
形式，例如，採用水性微晶混懸劑形式或作為微團分散劑或混懸劑。還可以使用脂質體製劑
或可生物降解的聚合物系統提供有效成分，特別是用於關節內的和眼部施用。 根據本發明的滴劑可以包括無菌的水性或油性溶液。適於包含在滴劑中的
防腐劑，殺細菌劑和殺真菌劑是苯汞鹽(0.002% )，苯扎氯銨(0.01% )和醋酸氯己定
(0.01% )。用於製備油質溶液的適合溶劑包括甘油，稀釋的醇和丙二醇。 適於施用到鼻腔和口腔的製劑包括適於吸入或吹入的那些，並且包括粉末製劑，自推進位劑和噴霧製劑諸如氣溶膠和霧化器。所述製劑在分散時，優選具有在10至200 m範圍內的粒子尺寸。 這樣的製劑可以採用來自粉末吸入裝置或自推進粉末分配製劑的用於肺部施用的精細粉碎粉末形式，其中作為精細粉碎粉末的有效成分可以構成製劑的高達99. 9重 自推進粉末分配製劑優選包括固體有效成分的分散顆粒，和在大氣壓力下具有18°C以下沸點的液體推進劑。 一般地，推進劑構成製劑的50至99. 9重量％，而有效成分構成製劑的0. 1至20重量％，例如約2重量％。 本發明製劑還可以採用自推進位劑的形式，其中有效成分存在於溶液中。
這樣的自推進位劑可以包括有效成分，推進劑和助溶劑(co-solvent)，並且有利地包括抗氧化穩定劑。適合的助溶劑是低級烷基醇及其混合物。助溶劑可以構成製劑的5至40重量％，雖然優選小於製劑的20重量％。抗氧化穩定劑可以結合在這樣的溶液製劑中以抑制有效成分的生物致劣並且方便地是鹼金屬抗壞血酸鹽或亞硫酸氫鹽(bisulphites)。它們優選以所述製劑的高達0. 25重量％的量存在。 本發明的製劑也可以採用用於噴霧器或霧化器中的有效成分的水性的或稀釋的醇溶液，任選是無菌溶液，其中使用加速空氣流產生由溶液的小微滴組成的細霧。這樣的製劑通常含有調味劑諸如糖精鈉和揮發性油。緩衝劑諸如偏亞硫酸氫鈉(sodiummetabisulphite)和表面活性劑也可以包括在這樣的製劑中，其應當也含有防腐劑諸如羥基苯甲酸甲酯。 適於鼻部施用的其它製劑包括具有20至500微米粒子尺寸的粉末，將其以採取鼻吸的方式施用，即通過從保持接近鼻子的粉末容器中經由鼻部通道迅速吸入。
除上述成分外，本發明的製劑可以包括一種或多種另外的成分諸如稀釋劑，緩衝劑，調味劑，粘合劑，表面活性劑，增稠劑，潤滑劑，防腐劑例如羥基苯甲酸甲酯(包括抗氧化劑)，乳化劑等。在本發明製劑中使用的特別優選的載體或稀釋劑是C18至C24單-不飽和脂肪酸諸如油酸的低級烷基酯，例如油酸乙酯。其它適合的載體或稀釋劑包括癸酯或辛酯或甘油三酯，或其混合物，諸如以商品名Miglyol銷售的那些辛/癸甘油三酯，例如Miglyol 810。 現在將僅參考附圖來舉例描述本發明，其中

圖1顯示CMV感染對於外周血中T細胞計數的影響； 圖2顯示CMV感染對於外周血中CD8+T細胞計數的影響； 圖3顯示CMV感染對於外周血中記憶和效應子CD8+T細胞計數的影響； 圖4顯示CMV感染對於外周血中幼稚CD8+T細胞計數的影響； 圖5顯示CMV感染對於脫氫表雄酮(DHEA)和相應的硫酸酯(DHEAS)的血液比例
的影響； 圖6顯示通過用CMV-感染細胞的溶胞產物剌激來自八個健康供體的外周血顯示的CMV-特異性CD4+T細胞表型； 圖7顯示通過用含有來自CMV的免疫顯性肽的HLA-肽四聚體染色來自健康供體的外周血而產生的CMV-特異性CD8+T細胞的表型； 圖8顯示CMV血清反應陽性的健康供體和血清反應陰性的那些之間的CD4+T細胞特性的比較； 圖9顯示給藥阿昔洛韋(ACV)或伐昔洛韋(VCV)的患者和對照組之間的CMV-特異性T細胞計數的比較； 圖10顯示使用阿昔洛韋或伐昔洛韋的治療對CD4+T細胞針對CMV反應的時間依賴性影響； 圖11顯示通過Elispot分析測量的給藥阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者和對照組之間抗原特異性T細胞數目的比較； 圖12顯示給藥阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者和對照組之間的CD27-， CD28-，或CD57+CD4+T細胞比例的比較； 圖13顯示在給藥阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者和對照組之間的CD27-CD4+T細胞比例的比較； 圖14顯示在給藥阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者和對照組之間的CD28-CD4+T細胞比例的比較； 圖15顯示在給藥阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者和對照組之間的CD57+CD4+T細胞比例的比較； 圖16顯示在給藥阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者和對照組之間的CD57+CD8+T細胞比例的比較； 圖17顯示在用阿昔洛韋治療以後的一名患者中，如通過用CMV溶胞產物剌激所測量的CMV-特異性CD4+T細胞的比例； 圖18顯示在用阿昔洛韋治療以後的一名患者中，如通過Elispot分析所測量的CMV-特異性CD4+T細胞比例的測量值；禾口 參考圖l，可以看到，被CMV感染在全部年齡中導致增加的T細胞計數。通過利用自動細胞("Coulter")計數器和螢光細胞(FACS)分析，測定外周血樣品中的絕對淋巴細胞計數進行T細胞計數，以確定T細胞在淋巴亞型中的百分比。 參考圖2，可以看出，T細胞的增加主要體現在具有CD8共受體的T細胞增加上，其是造成細胞毒素活性的原因。類似地，從圖3可以看出，存在"抗原經歷的"記憶和效應子CD8T細胞的相應大量增加。最後，由圖4可以看出，CMV感染也與外周血中幼稚T細胞數目減少有關。 而且，從這些與CMV血清反應陽性的個體有關的細胞計數的絕對值可以看出，與
和其它病毒感染有關的免疫反應相比，CMV-特異性免疫反應異乎尋常地高。 圖5顯示對於CMV測試血清反應陽性的或血清反應陰性的個體測量的類固醇特性
(採用DHEA/DHEAS比例的形式)。可以看出，當和對照(CMV血清反應陰性的)組對比時，
CMV感染產生更大差距的比例，和平均比例的增加。增加的DHEA/DHEAS比例是炎性病症特
有的並且與輕微的免疫抑制有關。 參考圖6， CMV-特異性的T細胞是通過響應於用CMV抗原(溶胞產物)剌激而表達幹擾素-Y檢測的，並且這些細胞的表型是通過用針對CD45RA， CD45R0， CD28， CD27或CD57的抗體染色來評估。可以看出，CMV-特異性CD4+T細胞的特徵在於CD27和/或CD28表達的失去，和/或CD57表達的獲得。這些觀察提供關於CMV感染對總CD4+T細胞池上的CD27， CD28和CD57表達的影響的解釋，如圖8和12-15中所記載。
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參考圖7， CMV-特異性的CD8+T細胞是通過用含有來自CMV的免疫顯性肽的HLA-肽四聚體染色外周血T細胞而檢測的。使用四聚體的陽性染色顯示在y-軸上，並且這些細胞的表型進一步通過用針對CD27， CD28， CD57， CD45RA或CD45R0的抗體染色來表徵，如x-軸上所示。可以再次看出，CMV-特異性CD8+T細胞主要顯示CD27-， CD28-和CD57+表型。這些觀察提供關於CMV感染對總CD8+T細胞池上的CD27， CD28和CD57表達的影響的解釋，如圖16中所記載。 參考圖8，用針對CD27， CD28或CD57的抗體染色來自35位健康供體的外周血的CD4+T細胞。可以看出，表達這些標記物的CD4+T細胞的百分比在CMV-血清反應陽性(n =24)和血清反應陰性(n = 11)個體中是不同的。與血清反應陰性的個體相比，血清反應陽性的個體在CD4+群中具有更大的CD27-，CD28-和CD57+細胞的比例。CD4+CD28-T細胞增加到總的CD4+T細胞群的大約2%以上實際上僅在CMV-血清反應陽性的個體中看到。
實施例1 在服用阿昔洛韋或伐昔洛韋的CMV血清反應陽性或血清反應陰性供體的組中測量CMV-特異性免疫反應。將其與年齡-匹配的對照組比較。給藥於這些供體的劑量典型地是400mg b. d.的阿昔洛韋或500mg o. d.或b. d.的伐昔洛韋。進行了 (1)這些供體的總T細胞特性，和(2)它們的CMV-特異性反應的綜合分析。將結果與CMV血清反應陽性或血清反應陰性供體的年齡相配的對照組對比。結果顯示在圖9至16中。
參考圖9，血液從健康對照CMV血清反應陽性的供體(n = 14)或服用阿昔洛韋(ACV 400mg b.d.)或伐昔洛韋(VCV 500mg o. d.或b. d.)的CMV血清反應陽性的患者(n=15)獲得，並且用葡萄球菌腸毒素B(作為陽性對照)或來自卯65和IE-1的CMV溶胞產物或CMV肽池溫育。抗原-特異性T細胞通過幹擾素_ Y的表達檢測。可以看出，CMV-特異性T細胞的數目在服用ACV或VCV的患者中是減少的。 參考圖10 ，血液從服用阿昔洛韋(ACV 400mg b. d.)或伐昔洛韋(VCV500mgo.d.或b.d.)的患者獲得並且用CMV溶胞產物溫育。抗原-特異性T細胞通過幹擾素-Y的表達檢測。可以再次看出，CMV-特異性T細胞的數目在服用ACV或VCV的患者中是減少的。 參考圖ll，用CMV溶胞產物剌激來自健康CMV血清反應陽性供體或服用阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者的血液並且通過Elispot分析測量抗原-特異性的T細胞的數目。在服用ACV或VCV的患者中觀察到減少的針對CMV的Elispot反應。 在圖12中，用針對CD27， CD28或CD57的抗體染色35位CMV-血清反應陽性或血清反應陰性健康供體的外周血中的CD4+T細胞。將這些顯示在左欄上。對服用阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者進行類似的分析(右手欄)。可以看出，與健康供體相比，已經失去CD27或CD28表達或已經獲得CD57表達的CD4+T細胞的百分比在服用ACV或VCV的CMV-血清反應陽性的患者中較低。 參考圖13，用針對CD27的抗體染色25位健康供體或服用ACV或VCV的患者的外周血中的CD4+T細胞。可以看出，已經失去CD27表達的CD4+T細胞的百分比在服用阿昔洛韋或伐昔洛韋的CMV-血清反應陽性的患者中是減少的。 參考圖14，用針對CD28的抗體染色25位健康供體或服用ACV或VCV的患者的外周血中的CD4+T細胞。可以看出，已經失去CD28表達的CD4+T細胞的百分比在服用阿昔洛
11韋或伐昔洛韋的CMV-血清反應陽性的患者中是減少的。 參考圖15，用針對CD57的抗體染色25位健康供體或服用ACV或VCV的患者的外 周血中的CD4+T細胞。可以看出，已經獲得CD57表達的CD4+T細胞的百分比在服用阿昔洛 韋或伐昔洛韋的CMV-血清反應陽性的患者中是減少的。 在圖16中，用針對CD57的抗體染色健康供體或服用阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者 的外周血中的CD8+T細胞。與健康的對照相比，在CMV血清反應陽性供體中表達CD57的 CD8+T細胞的百分比在服用阿昔洛韋或伐昔洛韋的患者中是減少的。
實施例2 在用阿昔洛韋40mg b. d.治療以前，和在3和14個月以後，從單一個體取外周血， 並且分析其CMV-特異性免疫反應。結果顯示在圖17和18中。 參考圖17，用CMV溶胞產物剌激血液，並且測量響應於抗原而產生幹擾素-Y的 CD4+T細胞的百分比。可以看出，該百分比在處理時是減少的。 最後，參考圖18，用CMV溶胞產物或來自CMV卯65或IE_1的肽池剌激血液，並且利 用幹擾素-Y的Elispot分析檢測CMV-特異性T細胞的數目。可以看出，該反應的量級通 過處理減小。
1權利要求
有效針對巨細胞病毒(CMV)的化合物在製備藥物中的用途，所述藥物用於改善CMV-血清反應陽性的免疫活性個體的免疫反應。
2. 權利要求l的用途，其中改善所述免疫反應包括減少作為CD4+T細胞總數比例的 CD4+CD28-T細胞數目。
3. 權利要求l的用途，其中改善所述免疫反應包括減少作為CD4+T細胞總數比例的 CD4+CD27-T細胞數目。
4. 權利要求l的用途，其中改善所述免疫反應包括減少作為CD4+T細胞總數比例的 CD4+CD57+T細胞數目。
5. 權利要求l的用途，其中改善所述免疫反應包括減少作為CD8+T細胞總數比例的 CD8+CD28-T細胞數目。
6. 權利要求l的用途，其中改善所述免疫反應包括減少作為CD8+T細胞總數比例的 CD8+CD27-T細胞數目。
7. 權利要求l的用途，其中改善所述免疫反應包括減少作為CD8+T細胞總數比例的 CD8+CD57+T細胞數目。
8. 權利要求2至7任一項的用途，其中所述減少至少是20%。
9. 有效針對CMV的化合物在製備藥物中的用途，所述藥物用於治療免疫活性個體中的CMV。
10. 有效針對CMV的化合物在製備藥物中的用途，所述藥物用於改善選自下列病症的症狀HIV感染；情緒失調，包括抑鬱，疲勞或焦慮；精神分裂症；慢性疲勞症候群；炎性 病症諸如類風溼性關節炎，全身性紅斑狼瘡，結節病，關節強直性脊柱炎，牛皮癬關節病， Wegener肉芽腫病，及其它血管炎；自身免疫病症諸如多發性硬化，Sjorgen症候群，糖尿 病，原發性膽硬化，和全身硬化；惡性疾病；結節病或澱粉樣變；慢性細菌、病毒或寄生物感 染，包括病毒性肝炎和Chagas病；症疾；慢性肺病諸如支氣管擴張症或囊性纖維變性；急性 冠狀症候群諸如不穩定性心絞痛；動脈(例如主動脈的)動脈瘤；動脈粥樣硬化；和腦血管 閉塞("中風")。
11. 一種醫學治療方法，所述方法包括將有效針對CMV的化合物施用到CMV血清反應陽 性的免疫活性患者以減少針對CMV的免疫反應。
12. 權利要求1至IO任一項的用途，或權利要求11的方法，其中所述化合物選自阿昔 洛韋、泛昔洛韋和伐昔洛韋。
13. 具有大於20iiM的針對CMV的ID5。的核苷類似物在製備藥物中的用途，所述藥物 用於治療免疫活性患者中CMV-介導的病症。
14. 權利要求13的用途，其中所述核苷類似物具有至少50 ii M的針對CMV的ID5。。
15. 權利要求13或14的用途，其中所述核苷類似物選自阿昔洛韋、泛昔洛韋和伐昔洛韋。
全文摘要
本發明提供有效針對巨細胞病毒(CMV)的化合物在製備藥物中的應用，所述藥物用於改善CMV-血清反應陽性的、免疫活性的個體的免疫反應，或用於改善某些其它的醫學病症。適合的化合物包括核苷類似物阿昔洛韋，泛昔洛韋，和伐昔洛韋。被巨細胞病毒感染是普遍的並且通常被認為在免疫活性個體中是無症狀的並且在不使用高細胞毒性藥物的情況下是不可治療的。本文中提出，事實上，CMV感染產生不成比例地大免疫反應，因此削弱免疫系統響應其它感染的能力(並且由此不是無症狀的)。另外，用相對小劑量的具有低細胞毒性(並且因此類似低功效)的藥物治療可以減少該CMV-特異性免疫反應的量級，從而增加總免疫反應，並且改善其它醫學病症的症狀。
文檔編號A61P31/00GK101765424SQ200880100844
公開日2010年6月30日 申請日期2008年5月30日 優先權日2007年5月30日
發明者保羅·奧斯汀·亨利·默斯 申請人:伯明罕大學