包含活性成分和磺基甜菜鹼的藥物組合物的製作方法

2023-07-06 12:26:26 1

專利名稱：包含活性成分和磺基甜菜鹼的藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種包含非去汙劑型磺基甜菜鹼(NDSB)的藥物組合物。
現有技術包含活性藥物成分的藥物組合物是眾所周知的。所述的常見藥物組合物包含各種可藥用的賦形劑，這些可藥用的賦形劑因其不同的性質(例如穩定活性藥物成分、調節和/或維持pH、影響活性藥物成分的溶解度、維持藥物組合物的等滲性等等)使得活性藥物成分可以以藥物組合物的形式被應用。已經對可藥用的賦形劑進行了廣泛描述；例如可參見藥用賦形劑手冊(Handbook of Pharmaceutical Excipients)，Ainley Wade和Paul J.Weller，American Pharmaceutical Association，1994。
已經描述了有治療活性的蛋白可作為藥物組合物中的活性藥物成分。這些藥物組合物還包含各種因其性質使得可以製備穩定的包含有治療活性蛋白的藥物組合物的賦形劑。對該類藥物組合物進行了廣泛描述；例如可參見Yu-Chang John Wang和Musetta A.Hanson(1988)，J of ParenteralScience Technology，42S4-S26；Wong D.和Parasrampuria J.(1997)，BiopharmNovember 52-61。
在EP 373679中公開了包含治療性蛋白——粒細胞集落刺激因子(G-CSF)的穩定藥物組合物，並且在其中描述了主要在具有低電導率和2.75至4.0的酸性pH的溶液中來穩定G-CSF。為了改善其穩定性，向其中加入各種糖、胺基酸、聚合物和去汙劑。其特別強調了包含G-CSF的組合物的pH應低於4以降低聚集體的形成和增加該方法的穩定性。在pH超過4.0時形成聚集體和穩定性降低與得自現有技術的數據(Kuzniar等人(2001)，Pharm Dev Technol 6(3)441-7；Bartkowski等(2002)，J Protein Chem21(3)137-43；Narhi等人(1991)，J Protein Chem 10(4)359-367；Wang W(1999)，Int J Pharmaceut 185129-188)是一致的。
在專利和科技文獻中的其它藥物組合物中描述了通過添加各種穩定劑，如例如硫酸根離子(EP 1129720)、各種防腐劑、胺基酸和表面活性的混合物(EP 607156)、存在表面活性劑情況下的各種緩衝系統(磷酸鹽、枸櫞酸鹽、精氨酸、醋酸鹽)(EP 674525)、高分子化合物，如羥丙基纖維素、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮等(GB 2193621)、表面活性劑(EP1060746)、各種緩衝系統(TRIS、HEPES、TRICINE)(EP 0988861)、糖類，如纖維二糖、龍膽二糖、異麥芽糖、棉子糖、海藻糖等(EP 0674524)、以及一種或多種胺基酸(EP 1197221、WO51629、EP 1260230和EP 1329224、EP 0975335)來獲得G-CSF的穩定性。雖然對於包含G-CSF的藥物組合物而言優選低離子強度，但是在已經描述的用於穩定G-CSF的大多數情況中均使用了各種表面活性劑和其它穩定劑來穩定G-CSF。此外，在大多數情況中，為了維持pH還使用各種緩衝系統。
在文獻中描述了在蛋白復性中使用非去汙劑型磺基甜菜鹼類物質(NDSB)作為增溶劑(以約1M溶液的高濃度被使用)(Chong Y和Chen H.(2000)，Biotechiques 29(6)1166-7；Vuillard L等人(1995)，Biochem J 305337-43；Vuillard L等人(1995)，Electrophoresis 16(3)295-7；Vuillard L等人(1998)，Eur J Biochem 256128-135；Goldberg M E等人(1995)，Folding Design 121-27)。
仍然需要提供穩定的藥物組合物。在科技或專利文獻中都沒有發現有關在藥物組合物中使用NDSB的描述。


圖1在40℃(±2℃)下儲存1個月(40)的本發明樣品和參比樣品的SE-HPLC。
圖2在40℃(±2℃)下儲存1個月(40)的本發明樣品的SE-HPLC。
本發明的描述在本發明中，發現NDSB可用作藥物組合物中的賦形劑。通過使用NDSB，可以提供穩定的藥物組合物。
因此，本發明涉及一種包含NDSB的藥物組合物。
本發明第一方面提供了一種包含活性藥物成分和非去汙劑型磺基甜菜鹼(NDSB)的藥物組合物。
本發明的活性藥物成分選自治療上有效的合成或天然有機分子(例如水溶性差的合成和天然有機分子)和治療上有效的蛋白(例如水溶性差的和/或疏水性蛋白)和/或具有治療作用的其它活性藥物成分。所說的活性藥物成分優選地以有效量被包含。這裡所用的術語「治療有效量的活性藥物成分」指的是具有治療作用的量的活性藥物成分。
本發明的藥物組合物包含非去汙劑型的磺基甜菜鹼(NDSB)。
這裡所用的術語「非去汙劑型磺基甜菜鹼」指的是在水溶液中不形成膠束的磺基甜菜鹼。
在本發明藥物組合物的一個優選的實施方案中，NDSB是其中基團R1、R2、R3和R4-SO-3都被結合到中央氮原子上的季銨鹽，並且其中R1是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基或其衍生物；R2是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基或其衍生物；R3是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基或其衍生物，以及R1、R2和R3的所有組合，R4是(CH2)n，其中n為1至6；n最優選地為3。
季氮原子也可以是脂族或芳族環結構的一部分。
因此，在本發明藥物組合物的一個優選的實施方案中，NDSB是式1的季銨鹽， 式1
其中R1、R2和R3可以相同和/或不同並選自甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基或其衍生物，R4是(CH2)n，其中n為1至6；n最優選地為3。
在本發明的藥物組合物中，優選使用選自下列的NDSB二甲基乙基-(3-磺基丙基)-銨鹽(SB195，Vuillard等人(1994)FEBS Letters，353，294-296；Goldberg等人(1995/1996)Folding Design，1，21-27)、3-(1-吡啶基)-1-丙磺酸鹽(SB201)、丙磺酸二甲基苄銨(SB256)、二甲基-叔丁基-(3-磺基丙基)銨鹽(SB222t)、3-(1-甲基哌啶)-1-丙磺酸鹽(SB221)和二甲基-(2-羥基乙基)-(磺基丙基)-銨鹽(SB211；Vuillard等人(1995)Anal Biochem，230，290-294)的。還可以以各種可能的組合使用兩種或多種所示的NDSB。優選使用二甲基-叔丁基-(3-磺基丙基)銨鹽(SB222t)、二甲基乙基-(3-磺基丙基)-銨鹽(SB195)和3-(1-甲基哌啶)-1-丙磺酸鹽(SB221)。最優選使用二甲基-叔丁基-(3-磺基丙基)銨鹽(SB222t)。
所用NDSB的濃度取決於需要調節和/或維持的pH。其濃度範圍為1至1000mM，優選地為5至100mM。本發明藥物組合物的pH範圍為2至9，優選地為3至8，並且最優選地為3.5至7.5。
本發明第二方面提供了包含治療上有效的蛋白和非去汙劑型磺基甜菜鹼(NDSB)的藥物組合物。
這裡所用的術語「治療上有效的蛋白」指的是具有治療作用的蛋白。本發明藥物組合物中所用的治療上有效的蛋白選自粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、幹擾素類(IFN)，如IFN-α2a、INF-α2b、IFN-β、IFN-γ1b；白介素類(IL)，如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5至IL-10；粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)；巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)；表皮生長因子(EGF)；紅細胞生成素(EPO)；促卵泡成熟激素(FSH)；人血清白蛋白(HSA)；脫氧核糖核酸酶(DNAse)；成纖維細胞生長因子(aFGF或bFGF)；腫瘤壞死因子α(TNF-α)和腫瘤壞死因子β(TNF-β)；降鈣素；造血蛋白(hematoprotein)；纖溶酶原激活物以及其前體(t-PA、尿激酶、尿激酶前體、鏈激酶、蛋白C)；細胞因子；TNF配體族(TRAIL、FasL、骨保護素)；可溶性受體(p55，p75)、生長激素，例如人生長激素、牛生長激素和甲狀旁腺激素；脂蛋白；α-1-抗胰蛋白酶；胰島素、胰島素原、胰島素的亞單位A、胰島素的亞單位B；胰高血糖素；血液凝固因子，如，例如第VIII因子、第IX因子、組織因子、von Willebrand因子；bombasine；凝血酶；腦啡肽酶；巨噬細胞炎症蛋白(MIP-1-α)；鬆弛素A亞單位、鬆弛素B亞單位、鬆弛素前體(prorelaxin)；抑制素；活化素(activin)；血管內皮生長因子(VEGF)；激素受體或生長因子受體；整聯蛋白；蛋白A、蛋白D；類風溼因子；骨衍生神經營養因子(BDNF)、神經妥樂平(neurotropin)-3、-4、-5、或-6；神經生長因子(NGF)；血小板衍生的生長因子(PDGF)；成纖維細胞生長因子(aFGF和bFGF)；轉化的生長因子(TGF-α和TGF-β)；胰島素樣生長因子(IGF1和IGF2)；血小板生成素(TPO)；骨形態發生蛋白(BMP)；超氧化物歧化酶；上述蛋白的生物學活性片斷、以及其它治療上有效的蛋白。
本發明的治療上有效的蛋白以治療有效量使用。
這裡所用的術語「蛋白的治療有效量」指的是具有治療作用的蛋白的量。
最優選的活性藥物成分是優選以治療有效量使用的G-CSF。
在本發明中，提供了包含G-CSF和非去汙劑型磺基甜菜鹼(NDSB)的藥物組合物。
這裡所用的術語「G-CSF」指的是調節哺乳動物造血細胞的分化和增殖以及造血系統成熟細胞的活化的蛋白。其選自人G-CSF以及下面所定義的其衍生物及類似物。G-CSF優選指的是通過在大腸桿菌中表達而製備的重組人G-CSF。
本發明的藥物組合物可用於所有類型的G-CSF；其還可用於G-CSF的衍生形式的分離，例如蛋氨醯基G-CSF(Met-G-CSF)、糖基化(glycolised)、酶-和化學改性的(如，例如聚乙二醇化的)G-CSF、G-CSF類似物以及包含G-CSF的融合蛋白。
這裡所用的術語「G-CSF的治療有效量」指的是可確保G-CSF的治療作用的G-CSF的量。
本發明的藥物組合物還任選地包含多元醇。
術語「多元醇」指的是任何多羥基醇，即每個分子包含一個或多個羥基的化合物。
該多元醇優選選自山梨醇、甘油、肌醇、海藻糖和甘露醇。優選的多元醇濃度為1％至10％(m/v)。
本發明的藥物組合物還任選地包含一種或多種可藥用的賦形劑。
該可藥用的賦形劑選自金屬陽離子清除劑(例如EDTA以及類似的螯合劑)、溶劑和自由基清除劑(例如DMSO)、各種酸(例如醋酸、枸櫞酸、甲磺酸、磷酸、鹽酸等)、各種鹼(例如NaOH或有機N鹼，例如Good′s緩衝劑，如TRIS、TES、HEPES)、各種緩衝系統(例如醋酸/醋酸鹽、穀氨酸/穀氨酸鹽、馬來酸/馬來酸鹽、枸櫞酸/枸櫞酸鹽、磷酸/磷酸鹽等)、用於維持溶液的等滲性的各種可藥用的賦形劑(例如無機鹽，如CaCl2和NaCl)、蛋白穩定劑，選自表面活性物質，如二醇和甘油酯類、聚乙二醇酯類和醚類、脫水山梨醇衍生物或聚山梨醇酯類(聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80)、胺基酸、泊洛沙姆(Pluronic F68)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等。可藥用的賦形劑優選地選自EDTA和DMSO。
本發明藥物組合物中的NDSB可以與一種或多種上述可藥用的賦形劑相結合。
這裡所用的術語「穩定劑」指的是可以穩定活性藥物成分(例如蛋白，例如G-CSF)的可藥用的賦形劑。
這裡所用的術語「蛋白穩定劑」指的是可以穩定蛋白(例如G-CSF)的可藥用的賦形劑。
這裡所用的術語「蛋白穩定性」(例如G-CSF)指的是維持蛋白(例如G-CSF)的含量以及維持蛋白(例如G-CSF)的生物學活性。其中，下面的過程可降低蛋白(例如G-CSF)的穩定性蛋白被吸附到容器壁上、蛋白的變性或降解、以及形成聚集體，例如蛋白二聚物(例如G-CSF二聚物)和/或蛋白多聚體(例如G-CSF多聚體)和/或具有較高分子量的類似分子。這些過程可能是由於許多因素造成的，例如溫度增加、容器不合適、使用了不合適的蛋白穩定劑、接觸了光、冷凍/解凍、製造方法不合適和/或儲存不當。
本發明的藥物組合物可在高於冰箱溫度(2-8℃)的溫度下穩定蛋白(例如G-CSF)，並且也能在室溫下(即低於25℃)並且甚至能在更高的溫度(例如約40℃)下穩定蛋白。
本發明的藥物組合物可僅包含一種可藥用的賦形劑，即NDSB來穩定蛋白(例如G-CSF)和維持該溶液的適宜的pH。
因此，本發明另一方面提供了一種包含活性藥物成分(如上所述)和作為唯一的另外的賦形劑的NDSB的藥物組合物。
藥物組合物中的NDSB代表了一種可以穩定蛋白並因此可代替用於其它藥物組合物的蛋白穩定劑(例如糖類、胺基酸等)的保護性分子以及可以調節該溶液的適宜的pH並且因此可以代替用於在其它藥物組合物中調節溶液的適宜pH的酸(例如醋酸、枸櫞酸、甲磺酸、磷酸、鹽酸等)的分子。NDSB也可維持適宜的pH並因此可代替其它藥物組合物中所用的各種緩衝系統和/或其組合(例如醋酸/醋酸鹽、穀氨酸/穀氨酸鹽、馬來酸/馬來酸鹽、枸櫞酸/枸櫞酸鹽、磷酸/磷酸鹽等)。與使用兩種或多種具有不同功能的分子相比，使用一種具有一些不同功能的分子在製備的經濟性、降低成本、以及更容易更迅速地製備所說的藥物組合物方面更加有利，並且因為吸收到體內的額外的物質更少，所以對於患者本身而言也更有利。NDSB的特性代表了一種另外的優點，因為它是對光、溫度、各種氧化劑(例如空氣中的氧)以及水解不敏感的簡單分子，是無化學反應性的分子，在寬pH區域中具有兩性離子性，這意味著在很寬pH範圍中的相互作用機理基本不變。
本發明的一個方面是NDSB在藥物組合物中作為穩定劑的應用。
本發明的一個方面是NDSB在藥物組合物中作為蛋白穩定劑的應用。
本發明的一個方面是NDSB在藥物組合物中作為pH調節劑的應用。
本發明的一個方面是NDSB在藥物組合物中作為緩衝劑的應用。
本發明優選的藥物組合物是液體藥物組合物；但是，這並不限制NDSB在本發明的包含蛋白的冷凍乾燥的藥物組合物中的應用。
本發明的藥物組合物可以通過皮下、靜脈內或肌內途徑進行胃腸外給藥而無需進行重組、稀釋或另外的在先製備(其可導致藥物活性成分例如蛋白如G-CSF的活性降低並且在給藥時會導致另外的技術問題)。
本發明的藥物組合物優選不包含可能含有病毒汙染物的人血清蛋白。這樣便降低了由於使用人血清白蛋白而可能發生的各種變態反應的概率。其是在可藥用並且不會造成不希望的副作用的等滲溶液中進行製備的。
在本發明的藥物組合物中，蛋白的治療有效量相當於市售蛋白的治療有效量。在使用G-CSF的情況中，G-CSF的治療有效量選自0.3mg/ml至1.2mg/ml，但是本發明不受該範圍的限制。
本發明的藥物組合物可用於製備治療用的藥物並用於治療上面所列舉的治療上有效的蛋白的適應症。
本發明的藥物組合物還可用於治療G-CSF的所有適應症和製備用於治療G-CSF的適應症的藥物。所述的適應症可選自嗜中性白細胞減少症以及其臨床後遺症、降低化療後發熱性嗜中性白細胞減少症方面的住院率、調動造血幹細胞、選擇性輸入供體白細胞、慢性嗜中性白細胞減少症、中性白細胞減少性和非中性白細胞減少性感染、移植接受者、慢性炎性疾病、敗血症和膿毒性休克、降低中性白細胞減少性和非中性白細胞減少性感染的風險、發病率、死亡率和住院天數、預防中性白細胞減少症和非中性白細胞減少症患者的感染和感染併發症、預防醫院內感染和降低醫院內感染的死亡率和頻率、腸應用於新生兒、增強新生兒免疫系統、改善重症監護病房患者和病危患者的臨床結果、燒傷、皮膚潰瘍和損害的接種和管理、增強化療和/或放療、各類血細胞減少、增加抗炎性細胞因子、通過預防性使用G-CSF降低高劑量化療間隔、增強光動力學療法的抗腫瘤作用、由各種腦功能障礙造成的疾病的預防和控制、治療血栓性疾病以及其併發症和紅細胞生成的輻射後恢復。
本發明的一個方面是NDSB用於製備藥物組合物的應用。
本發明的藥物組合物可以被填充到選自安瓿、注射器和小瓶的藥物包裝中。該藥物包裝使得可以以0.2ml至2ml(每個劑量)的體積被應用。
此外，本發明的目的還在於製備本發明藥物組合物的方法。用於製備本發明藥物組合物的方法包括將NDSB與治療有效量的活性藥物成分(例如蛋白，例如G-CSF)進行混合。
用下面的非限制性實施例對本發明進行詳細說明。這些實施例特別是涉及本發明的優選實施方案。
實施例分析方法用下面的方法來對本發明的藥物組合物進行分析分子排阻高效液相色譜法(SE-HPLC)、反相HPLC(RP-HPLC)、十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和體外的生物學活性測量。
SE-HPLC用SE-HPLC來測定G-CSF聚集體、特別是二聚物和更高的聚集體的濃度。測定二聚物和更高的聚集體的檢測限為0.01％。
高效液相色譜法(HPLC)包括UV檢測器，在線脫氣裝置，二元泵組件和恆溫的自動進樣器(例如Waters Alliance HPLC systems)。所說的分析是在下面的條件下進行的色譜條件柱TSK G3000SW，10μm，300×7.5mm內徑柱溫30℃流動相磷酸鹽緩衝液，pH 7.0(5mM磷酸鈉，50mM NaCl)流速0.8ml/min，恆溶劑洗脫方式檢測UV-檢測器，波長為215nm注射體積20μl(注射蛋白的量6-12μg)自動進樣器溫度+2至+8℃運行時間20分鐘。
RP-HPLC用RP-HPLC來測定G-CSF含量和對根據疏水性程度而變化的雜質進行定量。
該HPLC系統包括UV檢測器，在線脫氣裝置，二元泵組件和恆溫進樣裝置以及恆溫柱部件(例如Waters Alliance HPLC系統)。該分析是在下面的條件下進行的色譜條件柱YMC-Pack ODS-AQ，200，球形，3μm，150×4.6mm內徑柱溫65℃流動相相A0.1％三氟乙酸(TFA)和50％乙腈(ACN)的水溶液相B0.1％TFA和95％CAN，在用於HPLC的水中的溶液流速1.0mL/min，梯度

檢測UV-檢測器，波長為215nm注射體積10μL(蛋白的注射量3-6μg)自動進樣器溫度+2至+8℃運行時間25分鐘SDS-PAGE用SDS-PAGE來對存在的蛋白二聚物和其它聚集形式(三聚物和高分子量形式)進行檢測。
上樣的樣品是在不含還原劑的上樣緩衝液中製備的。
垂直的SDS-PAGE，NuPAGE Bis-Tris 12％凝膠8×8cm，厚1.0mm，15個泳道(Invitrogen)，位於MOPS SDS電泳緩衝液(Invitrogen)中。
電泳在200V的恆定電壓下運行1小時。將樣品用Commassie藍色(0.1％Phast Gel Blue R 350，位於30％甲醇中)染色。
G-CSF的體外生物學活性試驗G-CSF的生物學活性是用已知的方法(Hammerling，U.等人，J PharmBiomed Anal 13，9-20(1995))通過以刺激細胞增生(NFS-60細胞)為基礎的方法並使用國際標準的人重組G-CSF(88/502，酵母細胞衍生的；NIBSCPotters Bar，Hertfordshire，UK；見Mire-Sluis，A.R.等人J ImmunolMethods 179，117-126(1995)來進行測定的。
pH值的測量用MA 5741(Iskra)pH計和Biotrode(Hamilton)電極來測量pH。用適宜的新鮮校準緩衝液將所說的pH計校準至3.0至5.0的pH範圍。pH是在25℃下進行測量的。pH測量的標準偏差為pH值的0.003(0.3％)。
測定藥物組合物中G-CSF穩定性的條件4℃在冰箱溫度(範圍為+4℃至+6℃)下儲存在冰箱中40℃儲存在40℃±2℃下25℃在25℃至30℃的室溫下儲存在1ml的填充注射器中，同時以75rpm在振動器Vibromix 314EVT上振搖。
實施例1穩定性試驗製備下面的液體藥物組合物FP10.3mg/ml G-CSF，39mM NDSB，5mM Na EDTA，pH 4.4FP20.3mg/ml G-CSF，39mM NDSB，5mM Na EDTA，5％DMSO pH 4.4FP30.3mg/ml G-CSF，7mM NDSB，5％山梨醇，pH 4.4FP40.6mg/ml G-CSF，6mM NDSB，8％山梨醇，pH 4.6FP50.6mg/ml G-CSF，13mM NDSB，8％山梨醇，pH 4.3
FP60.6mg/ml G-CSF，10mM NDSB，8％山梨醇，pH 4.5FP70.6mg/ml G-CSF，10mM NDSB，5％山梨醇，pH 4.4FP80.6mg/ml G-CSF，10mM NDSB，10％山梨醇，pH 4.4FP90.6mg/ml G-CSF，10mM NDSB，8％肌醇，pH 4.4FP10 0.6mg/ml G-CSF，10mM NDSB，8％海藻糖，pH 4.4FP11 0.6mg/ml G-CSF，50mM NDSB，8％山梨醇，pH 4.9。
參比藥物組合物A(S16-10ACT)0.3mg/ml G-CSF，10mM醋酸，5％(m/v)山梨醇，0.004％吐溫80，用NaOH將其pH調至4.0(等同於Neupogen)。
將G-CSF濃度為0.6mg/ml的樣品在40℃下儲存1個月。
用SE-HPLC對其進行分析；將6μg G-CSF上樣到該柱上。圖1顯示了相應的結果(AU＝吸收單位)。
圖1的圖例說明1FP12FP2RS16-10ACT將G-CSF的濃度為0.6mg/ml的樣品在40℃下儲存1個月。用SE-HPLC對這些樣品進行分析；上樣到柱上的G-CSF為6μg。結果如圖2(AU＝吸收單位)所示。
圖2的圖例說明4FP45FP59FP9穩定性試驗的結果在40℃下儲存了1個月的樣品FP1和FP2的SE-HPLC分析表明這些樣品是穩定的，沒有發現聚集體和疏水性降解產物的含量增加(表1，圖1)。其穩定性與參比樣品(AS16-10ACT)(其等同於可以從市場上獲得的包含G-CSF的藥物組合物(Neupogen，G-CSF＝0.3mg/ml))相當。還用RP-HPLC分析證明了其穩定性，RP-HPLC分析表明在儲存期後雜質或蛋白含量基本不變。這些結果與SDS-PAGE分析的結果(該結果沒有表示出來)和生物學活性的體外測量結果相一致。在這些研究中所用的G-CSF的體外生物學活性達到了國際標準的水平(Cat.no.88/502；NIBSC，UK)。在試驗條件下，在儲存後樣品FP1和FP2的體外生物學活性沒有變化(結果未表示出)。
表1

m月；％相對於G-CSF的總量而言二聚物/更高聚集體的量；c＝G-CSF濃度。
這些結果表明，包含NDSB的藥物組合物的穩定性與參比樣品(AS16-10ACT)相當。更高的NDSB濃度顯示了對穩定性更有利的作用。
對在25℃下儲存了1星期和1個月的FP4至FP11的樣品進行的SE-HPLC分析表明這些樣品是穩定的，聚集體含量和疏水性降解產物沒有顯著增加(表2，圖2)。其穩定性與參比樣品(AS16-10ACT)相當，所說的參比樣品等同於市場上的包含G-CSF的藥物組合物(Neupogen，G-CSF＝0.3mg/ml)。還用RP-HPLC分析證明了其穩定性，該RP-HPLC分析表明在儲存期後雜質和蛋白含量基本沒有變化。這些結果與SDS-PAGE分析結果(這些結果沒有表示出來)和體外生物學活性測量的結果相一致。在這些研究中所用的G-CSF的體外生物學活性達到了國際標準的水平(Cat.no.88/502；NIBSC，UK)。在研究條件下儲存後，樣品FP4至FP11的生物學活性發生了變化(結果未表示出來)。
表2


w星期，m月；％相對於G-CSF的總量而言二聚物/更高聚集體的量；％多元醇m/v。
表2的結果表明加入NDSB的藥物組合物是穩定的。與參比樣品相比注意到接觸更極端條件(1個月，40℃)的樣品的穩定性略微降低(表1)。穩定性略微降低還可能是由於高於4.0的pH對G-CSF不利所導致的，這一點也可以從現有技術中得到證明。參比樣品是用pH 4.0來進行製備的。
實施例2本發明G-CSF藥物組合物的組成本發明藥物組合物的組成如表3所示。
表3


原藥濃縮物(bulk concentrate)的製備通過在大腸桿菌中表達來生產用於製備原藥濃縮物的G-CSF的原料。
原藥濃縮物是在含有純酸(醋酸或HCl)的pH為4.4的溶液中以1.5mg/ml的G-CSF濃度來製備的。所說原藥濃縮物的SE-HPLC分析表明二聚物和更高聚集體的含量低於檢測限。用RP-HPLC分析測定的雜質分析範圍為2-4％。(新鮮Neupogen樣品的RP-HPLC分析表明具有與之相當數量的雜質)。
物質品質NDSB分析級NDSB-195(Calbiochem)，山梨醇歐洲藥典質量；甘油Merck；分析級；肌醇肌醇(myo-inositol)(Fluka＞99.5％HPLC)，海藻糖(Fluka＞99.5％HPLC)，EDTA(Sigma99％)，DMSO(Merck＞99.5％)，吐溫80(Sigma，低過氧化物水平，包含BHT作為抗氧劑)；注射用水歐洲藥典質量；分析用水Milli-Q(Millipore)。
參比藥物組合物的製備A(S16-10ACT)匯集包含G-CSF單體的凝膠過濾的級分並代之以在注射用水中包含10mM醋酸和5％山梨醇的緩衝液。用NaOH將該緩衝液的pH調至3.96。用三個Ultracel-5PLCCC膜在LabscaleTMTFFSystem/Millipore上進行置換。向其中加入吐溫80直至得到0.004％的濃度。在置換後最終溶液的pH為4.0，濃度為0.304mg/ml。
本發明藥物組合物的製備一般方法本發明的藥物組合物是通過用預先用0.2PES/Nalgene濾器進行了過濾的無菌緩衝液對原藥濃縮物進行稀釋來製備的。G-CSF的終濃度分別為0.3mg/ml或0.6mg/ml。
將藥物組合物FP1和FP2填充到由1型無色水解玻璃製成的進行了洗滌、滅菌的2ml小瓶中並用配有鋁帽的溴丁橡膠塞封閉。
將其它藥物組合物(FP3至FP11)(手工)填充到注射器(體積為1.3-1.4ml)中從而使得塞子周圍的空氣數量最少。
FP1、FP2、FP3向1份原藥濃縮物中加入4份適宜的緩衝溶液。得到表3所示的終濃度。不再對pH進行調節。
FP4-FP11向4份濃縮物中加入6份含有適宜緩衝劑的溶液。得到表3所示的終濃度。不再對pH進行調節。
權利要求
1.一種藥物組合物，其包含活性藥物成分和非去汙劑型磺基甜菜鹼(NDSB)。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其中所說的活性藥物成分選自治療上有效的合成或天然有機分子和治療上有效的蛋白。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其中所說的治療上有效的蛋白選自粒細胞集落刺激因子、幹擾素、白介素、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、巨噬細胞集落刺激因子、表皮生長因子、紅細胞生成素、促卵泡生成激素、人血清白蛋白、脫氧核糖核酸酶、成纖維細胞生長因子、降鈣素、造血蛋白；纖溶酶原激活物以及其前體、細胞因子；TNF族的配體、可溶性受體、生長激素、脂蛋白；α-1-抗胰蛋白酶；胰島素、前胰島素、胰島素的亞單位A、胰島素的亞單位B；胰高血糖素；血液凝固因子、bombasine；凝血酶；腦啡肽酶；巨噬細胞炎症蛋白(MIP-1-α)；鬆弛素A亞單位、鬆弛素B亞單位、鬆弛素前體；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；激素受體或生長因子受體；整聯蛋白；蛋白A、蛋白D；類風溼因子；骨衍生神經營養因子、神經妥樂平-3、-4、-5、或-6；神經生長因子、血小板衍生的生長因子、成纖維細胞生長因子、轉化的生長因子、胰島素樣生長因子、血小板生成素、骨形態發生蛋白和超氧化物歧化酶。
4.如權利要求3所述的藥物組合物，其中所說的治療上有效的蛋白是G-CSF。
5.如前面任意一項權利要求所述的藥物組合物，其中所說的NDSB是式1的季銨鹽， 式1其中R1、R2和R3可以相同和/或不同並且選自甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基或其衍生物，R4是(CH2)n，其中n為1至6。
6.如權利要求5所述的藥物組合物，其中所說的NDSB選自二甲基乙基-(3-磺基丙基)-銨鹽、3-(1-吡啶基)-1-丙磺酸鹽、丙磺酸二甲基苄基銨、二甲基-叔丁基-(3-磺基丙基)銨鹽、3-(1-甲基哌啶)-1-丙磺酸鹽和二甲基-(2-羥基乙基)-(磺基丙基)-銨鹽。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，其中所說的NDSB是二甲基-叔丁基-(3-磺基丙基)銨鹽。
8.如權利要求1至7所述的藥物組合物，其中所說的組合物還任選地包含多元醇。
9.如權利要求8所述的藥物組合物，其中所說的多元醇選自山梨醇、甘油、肌醇、海藻糖和甘露醇。
10.如權利要求1至9所述的藥物組合物，其中所說的組合物還任選地包含一種或多種可藥用的賦形劑。
11.如權利要求10所述的藥物組合物，其中所說的可藥用的賦形劑選自EDTA和DMSO。
12.一種製備藥物組合物的方法，其中所說的藥物組合物是通過將NDSB與治療有效量的活性藥物成分進行混合來製備的。
13.NDSB用於製備藥物組合物的應用。
14.NDSB在藥物組合物中作為穩定劑的應用。
15.NDSB在藥物組合物中作為緩衝劑的應用。
16.NDSB在藥物組合物中作為pH調節劑的應用。
全文摘要
本發明涉及包含活性劑和非去汙劑型磺基甜菜鹼(NDSB)的藥物組合物。
文檔編號A61K38/18GK1897967SQ200480038901
公開日2007年1月17日 申請日期2004年12月22日 優先權日2003年12月23日
發明者V·梅納特, V·加貝爾茨波爾卡, B·波多布尼克 申請人:力奇製藥公司