一種室內大量飼養遲眼蕈蚊的方法與流程

2023-07-06 16:35:21 2

本發明涉及一種室內大量飼養遲眼蕈蚊的方法，屬於植物保護和昆蟲養殖技術領域。

背景技術：

眼蕈蚊科(sciaridae)屬於雙翅目(diptera)長角亞目(nematocera)眼蕈蚊總科(sciaroidea)，種類豐富，分布廣泛，喜歡潮溼陰暗的環境，適應能力強。大部分種群的幼蟲生活在枯死的樹木、真菌和動物的糞便中，有的幼蟲也生活在洞穴、菜地、溫室中。眼蕈蚊生活周期通常為3～4周，成蟲壽命3～5天，卵期4～7天，幼蟲期9～l7天，蛹期3～5天；雌蟲一般可產卵70～200粒，卵多產於土縫間的縫隙、植株基部與葉鞘縫隙中。

遲眼蕈蚊(bradysiaspp.)是眼蕈蚊科中研究較多、危害最嚴重的屬之一，全世界已知的有455種，中國已記錄的有131種；分布廣泛、取食範圍廣，可為害多種蔬菜和食用菌，嚴重時可導致作物絕收。幼蟲多在植物根莖及根部周圍土壤縫隙中群集越冬，北方越冬期為10月中下旬～11月中下旬，於翌年3月中下旬開始化蛹，4月上中旬達到羽化高峰；南方越冬期為12月中下旬，於翌年2月下旬開始化蛹，3月中旬達到羽化高峰。4～6月、9月下旬～11月蟲量多，呈春秋2季為危害高峰，7～8月因高溫乾旱導致蟲量驟減。

遲眼蕈蚊幼蟲主要取食為害植物的地下部分和食用菌的菌絲體、子實體等，還可傳播病害；成蟲具有較強的趨光性，雖不取食但可傳播病原菌、線蟲和蟎類等，造成間接為害。遲眼蕈蚊個體小、繁殖速度快、為害隱蔽，防治困難且寄主範圍廣，已經成為農業生產上亟需解決的問題。尤其是在食用菌生產上，遲眼蕈蚊可為害平菇、茶樹菇、雙孢菇等多種食用菌，嚴重影響食用菌的產量和品質。而且目前國內已登記的能在食用菌上使用的殺蟲劑較少；食用菌生長周期短，長期不合理的使用農藥易造成產品農藥殘留超標，使害蟲產生抗藥性。因此需要開展試驗篩選出對食用菌遲眼蕈蚊效果較好的生物農藥和高效、低毒、低殘留的化學農藥來指導生產用藥。而在藥劑篩選和綜合防治研究中，需要大量蟲齡一致、發育整齊的幼蟲作為試蟲。目前遲眼蕈蚊的人工飼養多以新鮮的寄主植物或離體根莖為飼料，有季節限制且成本較高，也有採用人工飼料或花生、土豆、大豆等食物為飼料進行規模飼養遲眼蕈蚊的，但操作較複雜，費時費工。

技術實現要素：

針對現有的遲眼蕈蚊的飼養方法，為了更好的滿足食用菌遲眼蕈蚊研究的試驗需求，實現遲眼蕈蚊的大規模飼養，發明人經過長期實驗，提供了一種利用平菇菌絲作為飼料飼養遲眼蕈蚊的方法。本發明能夠實現遲眼蕈蚊的周年大量飼養，而且操作簡單，節省工時、節約成本，適合在實驗室內獲得大量發育一致的遲眼蕈蚊幼蟲供試驗研究。

本發明提供的一種室內大量飼養遲眼蕈蚊的方法，利用培養皿培養的平菇菌絲飼養遲眼蕈蚊，實現繼代繁殖，包括培養基製作-平菇菌絲培養-遲眼蕈蚊種蟲獲得-遲眼蕈蚊繼代飼養的步驟，其中培養基製作和平菇菌絲培養是在超淨工作檯上完成。具體步驟如下：

步驟一：pda培養基製作。

(1)稱取成品pda培養基39g、1000ml水倒入燒杯中，邊倒邊攪拌，得到培養基溶液；

優選的，所述的成品pda培養基和水可以在沸騰的水浴鍋中加熱，促進溶解。

(2)將溶解好的培養基溶液分裝到4個500ml三角瓶中，用封口膜和皮筋封好口，121℃滅菌20分鐘。

(3)滅菌完成後溫度降到50～60℃時，在培養基溶液中加入乳酸。每1000ml培養基溶液中加入乳酸200μl，搖勻。所述乳酸的質量百分比濃度為25％。

(4)將加好乳酸的培養基溶液倒入直徑9cm的培養皿中，將培養皿中培養基溶液吹乾後，得到乾燥培養基備用。

步驟二：平菇菌絲接種、培養。

(1)菌種活化。用接種環刮取試管中的平菇菌絲，接種到具有乾燥培養基的培養皿上。將接種好的培養皿放在25℃培養箱中，24小時黑暗培養，5天左右菌絲長滿可進行擴大培養。

(2)繼代培養。將培養皿中長滿菌絲的乾燥培養基分割成若干小塊，接種到新的具有乾燥培養基的培養皿上，在25℃培養箱中進行24小時黑暗培養。長滿菌絲後的培養皿放入冰箱中冷藏保存(溫度4～6℃)，供遲眼蕈蚊飼養用。

註：培養基製作和平菇菌絲接種過程中注意嚴格無菌條件，避免雜菌汙染。

步驟三：遲眼蕈蚊種蟲獲得。

在菇棚內收集被遲眼蕈蚊為害的菇棒，挑取菇棒上的遲眼蕈蚊四齡幼蟲或蛹，放入步驟二中繼代培養後的長滿菌絲的培養皿內；將接入遲眼蕈蚊的培養皿放入25℃培養箱中黑暗培養，四齡幼蟲培養5～7天後，蛹培養3～4天後，成蟲羽化。讓羽化後的成蟲在長滿菌絲的培養皿內自由交配產卵，孵化的第一代幼蟲作為種蟲。

也可用吸蟲器在遲眼蕈蚊為害嚴重的菇棚內收集腹部較鼓的雌蟲和雄蟲，放入步驟二中繼代培養後的長滿菌絲的培養皿內飼養，在25℃培養箱中黑暗1～2天後成蟲產卵，孵化的第一代幼蟲作為種蟲。

步驟四：遲眼蕈蚊繼代飼養。

(1)用步驟二製備的繼代培養後的長滿菌絲的培養皿飼養步驟三中的遲眼蕈蚊第一代幼蟲即種蟲，幼蟲孵化後8～12天化蛹。

(2)遲眼蕈蚊的第一代幼蟲即種蟲將長滿菌絲的培養皿內的平菇菌絲取食完後，用解剖刀或小鑷子將帶有幼蟲的培養基劃成若干塊，分別放入新的長滿菌絲的培養皿內，繼續飼養。

(3)遲眼蕈蚊化蛹後，用勾線筆將蛹挑入新的長滿菌絲的培養皿內，進行繼代繁殖。

註：25℃條件下，蛹期和卵期分別3～4天，幼蟲期8～12天，可根據試驗需求選取不同時期的遲眼蕈蚊幼蟲進行試驗。

本發明具有如下優點：

(1)本發明利用菌絲飼養遲眼蕈蚊，避免了依靠新鮮寄主植物飼養受季節限制的缺點。

(2)本發明的飼養方法節省人工，操作簡單。遲眼蕈蚊的一個發育周期只需要操作2～3次，極大的節省了工時。

附圖說明

圖1為本發明提供的室內大量飼養遲眼蕈蚊的方法流程圖。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本發明進行詳細說明。

本發明提供一種室內大量飼養遲眼蕈蚊的方法，如圖1所示流程，具體包括如下步驟：

步驟一：pda培養基製作。

(1)用電子秤秤取成品pda培養基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)39g，倒入2000ml燒杯中。取1000ml水倒入燒杯中，邊倒邊攪拌。可放在沸水浴鍋中加熱，促進溶解。

(2)將溶解好的培養基分裝到4個500ml三角瓶中，用封口膜和皮筋封好口，121℃滅菌20分鐘。

(3)滅菌完成後溫度降到50～60℃時，取出培養基，在超淨工作檯中操作，加入乳酸。每1000ml培養基加入乳酸200μl，搖勻。所述乳酸的質量百分比濃度為25％。

(4)在超淨工作檯內，將加好乳酸的培養基倒入直徑9cm的培養皿中，培養基吹乾後得到具有乾燥培養基的培養皿備用。

步驟二：平菇菌絲接種、培養。

(1)菌種活化。在超淨工作檯內用接種環刮取試管中的平菇菌絲，接種到步驟一的具有乾燥培養基的培養皿上，保證無菌環境，避免雜菌汙染。將接種好的培養皿放在25℃培養箱中，24小時黑暗培養，5天左右菌絲長滿可進行擴大培養。

(2)繼代培養。在超淨工作檯內將長滿菌絲的培養基分割成若干小塊，接種到新的乾燥培養基上，在25℃培養箱中進行24小時黑暗培養。長滿菌絲的培養皿放入冰箱中冷藏保存，供遲眼蕈蚊飼養用。

註：培養基製作和平菇菌絲接種過程中注意嚴格無菌條件，避免雜菌汙染。

步驟三：遲眼蕈蚊種蟲獲得。

所述遲眼蕈蚊種蟲獲得通過如下兩種方式中的任意一種實現：

(1)在菇棚內收集被遲眼蕈蚊為害的菇棒，帶回實驗室。挑取菇棒上的遲眼蕈蚊四齡幼蟲或蛹，放入長滿菌絲的培養皿內；將接入遲眼蕈蚊的長滿菌絲的培養皿放入25℃培養箱中黑暗培養，四齡幼蟲培養5～7天後，蛹培養3～4天後，成蟲羽化。讓羽化後的成蟲在長滿菌絲的培養皿內自由交配產卵，孵化的第一代幼蟲作為種蟲。

(2)也可用吸蟲器在遲眼蕈蚊為害嚴重的菇棚內收集腹部較鼓的雌蟲和雄蟲，放入步驟二中繼代培養後的長滿菌絲的培養皿內飼養，在25℃培養箱中黑暗培養1～2天後成蟲產卵，孵化的第一代幼蟲作為種蟲。

步驟四：遲眼蕈蚊繼代飼養。

(1)用長滿菌絲的培養皿飼養遲眼蕈蚊第一代幼蟲，即步驟三中獲得的種蟲，幼蟲孵化後8～12天化蛹。

(2)遲眼蕈蚊幼蟲將長滿菌絲的培養皿內的平菇菌絲取食完後，用解剖刀或小鑷子將帶有幼蟲的培養基劃成若干塊，分別放入新的長滿菌絲的培養皿內，繼續飼養。

(3)遲眼蕈蚊化蛹後，用勾線筆將蛹挑入新的長滿菌絲的培養皿內，進行繼代繁殖。

註：25℃條件下，遲眼蕈蚊的蛹期和卵期分別3～4天，幼蟲期8～12天，可根據試驗需求選取不同時期的遲眼蕈蚊幼蟲進行試驗。

在25℃條件下，用盆栽韭菜苗飼養遲眼蕈蚊，完成一代(從卵到成蟲)需要23～25天，每盆韭菜苗接入5對遲眼蕈蚊成蟲時可獲得150～200頭幼蟲；用新鮮土豆為飼料飼養遲眼蕈蚊，完成一代需要20～23天，每盒接入5對遲眼蕈蚊成蟲時可獲得200～300頭幼蟲。本發明提供的方法飼養遲眼蕈蚊，完成一代需要14～20天，每個培養皿中接入5對遲眼蕈蚊成蟲時可獲得400～500頭幼蟲。

本發明提供的方法飼養材料為平菇菌絲，容易獲得，沒有季節性限制；飼養容器為培養皿，佔空間小，培養箱內可同時做大量培養皿進行周年繁殖；與其他方法相比，本發明提供的方法易操作、省工時，周期短，成活率高，可獲得大量發育一致的幼蟲供試驗。