用於預防或治療腎炎的含有藥草提取物的藥物組合物的製作方法

2023-08-10 15:24:51

專利名稱：用於預防或治療腎炎的含有藥草提取物的藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於預防和/或治療腎炎的藥物組合物和保健食品，其包含至少一種選自山楂(Crataegi Fructus)提取物、肉桂(Cinnamomi Cortex)提取物、夏枯草 (Prunella Spica)提取物和木賊(Equiseti Herba)提取物的藥草提取物，和使用所述藥草提取物預防和/或治療腎炎的方法，以及所述藥草提取物在製備用於預防和/或治療腎炎的組合物中的用途。
背景技術：
腎是行使多種功能的器官，是代表性的排洩器官之一。腎不僅作為排洩器官，調控體液量、排洩廢物和調節電解質含量，而且作為內分泌器官，分泌激素例如促紅細胞生成素 (用於紅細胞產生)和凝乳酶(用於血壓控制)並且調節維生素D3的代謝以調節甲狀旁腺功能和鈣代謝。而且，腎還作為代謝器官，破壞肽激素、重吸收低分子量蛋白和調控葡萄糖/ 脂代謝。腎病的實例為腎炎、腎衰竭、腎癌等，其中腎炎是最典型的腎病。當腎炎患者持續患有腎炎時，由於腎功能的喪失而導致慢性腎衰竭或高血壓等疾病，也導致其他器官的破壞、 代謝異常等併發症。腎功能的喪失不引人注意，直至70%或更多的腎功能喪失。如果腎衰竭一直未引起注意而未得到合適的治療，那麼透析或腎移植是對所述患者的僅有的治療手段。在韓國，進行透析的患者數量每年增加4，000到5，000,腎移植患者的人數也在增加。 在腎移植完成之前需要連續進行透析，這對患者造成極大的痛苦或經濟負擔。對於腎移植， 缺少腎捐獻者導致長時間的等待，甚至引起涉及器官交易的社會問題。對於在70%的腎炎患者中發現的免疫複合體介導的腎炎，體內/外的抗原與體內產生的抗體結合以形成抗原-抗體複合體，其沉積在腎小球基底膜和腎小球膜細胞內，引起炎症而導致腎小球的破壞。對於類似的免疫反應引起的抗腎小球基底膜抗體腎炎的情況，體內形成的抗腎小球基底膜抗體沉積在腎小球基底膜而導致急性炎症，並5%的腎炎患者屬於這種情況。尿道、膀胱等泌尿器官被其他鏈球菌等病原菌或病毒所感染，由此病原進入腎以引起腎炎。腎炎的藥物包括免疫抑制藥物、抗炎藥物、高血壓/血管作用藥物、抗生素等。免疫抑制藥物抑制促使腎炎發生的抗體的形成，從而抑制抗原-抗體複合體在腎小球的沉積，由此改善腎炎的症狀；抗炎藥物抑制炎症的發生從而改善腎炎症狀。用作高血壓/血管作用藥物的血管緊張素II拮抗劑加快基底膜的產生以激活腎功能，所述基底膜是作為腎小球過濾器的血管細胞壁。對於感染引起的腎炎，喹諾酮類抗生素用於殺死引起腎炎的病原細菌。腎炎患者大部分患有自免疫腎小球性腎炎，其主要用免疫抑制藥物、抗炎藥物和高血壓/血管作用藥物治療。感染引起的腎盂腎炎用喹諾酮類抗生素治療。用於腎炎的免疫抑制藥物的實例包括他克莫司(tacrolimus)、依庫珠單抗(eculizumab)、麥考酚酸莫酯(mycophenolate mofetil)、環孢黴素A(cyclosporine A)等。所述抗免疫藥物的實例包括地塞米松(dexamethasone)、潑尼松龍(prednisolone)等。用於腎小球性腎炎的高血壓/血管作用藥物為例如具有抗腫瘤活性的坎地沙坦(candesartan)、利妥昔單抗 (Iituximab)和阿巴西普(abatac印t)。另外，用於腎盂腎炎的代表性藥物為基於喹啉的左氧氟沙星(levofloxacin)和加替沙星(gatifloxacin)。韓國以外的其他國家的腎炎患者大部分用免疫抑制藥物，特別是佔高市場佔有率的他克莫司(tacrolimus)、麥考酚酸莫酯 (mycophenolate mofetil)或依庫珠單抗(eculizumab)等。但在韓國，抗生素是最常用的用於腎炎的藥物，近年來也在增加用於腎炎的免疫抑制藥物的使用。然而，免疫抑制藥物或抗生素的長期使用導致包括潰瘍、浮腫、感染加重、高血壓、 肝性毒血病等的副作用。因此，需要開發副作用比現有的用於腎炎的藥物的小、並且安全性有保證的用於腎炎的新藥。為此原因，最近已開發了使用天然物質的用於腎炎的新藥。

發明內容
發明要解決的課題在開發用於預防和治療腎炎的組合物的嘗試中，本發明的發明人發現至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物對腎炎具有預防性和治療性作用，從而完成本發明。本發明的一個實施方案提供用於預防和/或治療腎炎的組合物，所述組合物含有至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物作為有效成分。本發明的另一實施方案提供用於預防和/或治療腎炎的方法，所述方法包括對需要預防和/或治療腎炎的患者給予治療有效量的至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、 夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物。本發明的另一實施方案提供至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物用於預防和/或治療腎炎的用途。解決課題的方法本發明的發明人發現至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物對慶大黴素誘導的或順鉬誘導的腎炎模型具有良好的治療效果並且對腎的腎小球膜細胞的生長具有優秀的抑制效應，從而完成本發明。因此，本發明的特徵在於組合物用於預防和治療腎炎的用途，所述組合物含有至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物作為有效成分。下文將對本發明做如下進一步詳述。首先，依照本發明的一個實施方案，提供用於預防和/或治療腎炎的組合物，所述組合物含有至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物作為有效成分。在本發明的另一實施方案中，提供用於預防和/或治療腎炎的方法，所述方法包括對需要預防和/或治療腎炎的患者給予治療有效量的至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物。在本發明的另一實施方案中， 提供至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物用於預防和/或治療腎炎的用途，或在製備用於預防和/或治療腎炎的組合物中的用途。
山楂(Crataegi Fructus)是薔薇科(Rosaceae)山楂樹(Crataegus pinnatifida)及其同屬物種的果實，在英語中通常稱為「Hawthorn」。在高地生長、具有灰色樹皮和有刺枝條、高度為3-6米。樹葉近似蛋形，在莖上按互生葉序排列，長6-8cm，寬 5-6cm。葉緣以羽毛狀裂開，在基部劃分得更深。樹葉在兩側的中脈上都有毛，並且邊緣呈不規則的鋸齒狀，葉柄長2-6cm。已知山楂具有例如血管舒張、降低血壓、抗微生物作用、抗氧化等藥效。肉桂(Cinnamomi Cortex)是樟禾鬥(Lauraceae)肉桂(Cinnamomum cassia)及其同屬物種的樹皮。肉桂樹為觀賞樹，高度為8m以上，枝葉茂盛，樹枝呈綠色，花色為淺綠色， 花萼分成短的6個萼片而排列成兩行。已知此藥草具有例如血管舒張、加快血液循環、刺激胃活動、消除疼痛、抗氧化等治療作用。作為藥草，其已被用於治療頭痛、發熱、神經性心悸、 劇痛、感冒等。韓國專利申請公開2006-0030535(2006年4月11日提交)公開了一種具有抗焦慮活性的肉桂提取物以及含有所述提取物的組合物，其中所述肉桂提取物被報告作為用於預防和治療由腦神經系統病變引起的焦慮的醫療產品或保健食品使用。夏枯草(PrnellaSpica)是唇形科(Labiatae)夏枯草(Prunella vulgaris)及其同屬物種的多年生草本。此藥草全身被白毛覆蓋，高度為20-30cm，莖呈方形。在花落後開始生出枝條，葉一直生長至約2-5cm長，葉緣是光滑的或略微為鋸齒形。在夏天，將半枯萎的草切斷並在陽光下乾燥而使用、是無毒藥草。已知此藥草具有例如利尿作用、抗微生物作用、降低血壓、抗腫瘤、抗氧化等治療效果。作為藥草，其已被用於治療慢性膿腫、痂病、急性乳腺炎、結核性淋巴結炎等。其還已被用於破壞下腹中由液體阻滯或血塊引起的腫塊、治療腳氣和治療麻木和麻刺。木賊(Equiseti Herba)是木賊科(Equisetaceae)木賊(Equisetum hiemale)及其同屬物種的多年生草。此草高度為20cm以上，並具有短的地面匍匐的根莖，根節點長出長的深褐色根。其莖剛硬且圓，直徑為4-8cm，在節點之間具有10-20條線，並且直立而無枝條。此草外表面呈灰綠或黃綠色，具有8-30個豎向槽，組織鬆軟，重量很輕。已知其具有例如利尿作用、抗氧化等治療效果。作為藥草，其已被用於治療頭痛、發熱、腸出血和止血劑。然而，山楂、肉桂、夏枯草和木賊的藥草提取物各自對腎炎的預防和/或治療效果尚未弄清。本文使用的術語「提取物」是包括性地指選自山楂、肉桂、夏枯草和木賊中的至少一種的提取物，以及通過常規方法經濃縮和/或乾燥該提取物獲得的濃縮物和/或乾燥產物。當所述提取物為至少兩種選自山楂、肉桂、夏枯草和木賊的藥草的提取物時，可以是通過用相同或相互不同的溶劑提取至少兩種所述藥草、並混合所得提取物而獲得的「藥草提取物的混合物」，或通過混合至少兩種所述藥草並提取所述藥草混合物而獲得的「藥草混合物的提取物」。從下面的實驗實施例1可看出，藥草提取物的混合物和藥草混合物的提取物均對腎炎表現出良好的預防和/或治療效果而無任何顯著差異，因此可納入本發明的範圍。本發明界定的提取物優選地通過用水、直鏈或支鏈C1-C6醇、直鏈或支鏈C1-C6醇的水溶液或其混合物提取而製備。用於提取的溶劑可為10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ ν)、更優選50-70% (ν/ν)的直鏈或支鏈C1-C6醇的水溶液。更特別地，用於提取的溶劑可為10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選50-70% (ν/ν)的乙醇的水溶液。
下文將對製備本發明提取物的方法進行詳細描述。本發明的山楂、肉桂、夏枯草和木賊的每種提取物均可通過以下步驟獲得切碎每種幹藥草；將所述藥草的碎片用量為所述幹藥草重量(g)的約3-20倍、優選約5-15倍的水、直鏈或支鏈C1-C6醇或醇的水溶液(例如，10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選 50-70% (ν/ν)的直鏈或支鏈C1-C6醇的水溶液；優選地，10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ ν)、更優選50-70% (ν/ν)的乙醇的水溶液)或其混合物，在40-110°C、優選55-90°C下，進行約0. 5-20小時、優選1-10小時的滲濾、熱水提取、超聲提取，或回流冷凝提取；然後將所獲得的提取物進行過濾、在減壓下濃縮和/或乾燥。如果提取使用的溶劑的量小於所述幹藥草重量的3倍，則造成難以攪拌而使所述提取物的溶解度降低，並且提取效率也降低；如果使用的溶劑的量大於所述幹藥草重量的 20倍，則導致在後續純化步驟中需要更大量的低級醇，這帶來經濟和處理問題。另外，當使用醇溶液作為用於提取的溶劑時，小於10% (ν/ν)的醇含量可導致從所述藥草提取的極性物質例如糖過量，導致後續過濾步驟出現問題，而醇含量超過90% (ν/ν)可相對增加所述溶劑的非極性，從而降低所需活性物質的提取效率。另外，提取溫度低於40°C時提取效率降低，提取溫度高於110°C時由於有限的提取效率而增加提取成本、不經濟。提取時間少於 30分鐘時會降低提取效率，而提取時間多於20小時會帶來不想要的雜質提取，從而降低最終提取物的純度。將所述提取物進行過濾後收集濾出液，將殘留物浸沒在量為所述藥草重量的約 4-7倍的水、直鏈或支鏈C1-C6醇、醇的水溶液(例如，直鏈或支鏈C1-C6醇的10-90% (ν/ ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選50-70% (ν/ν)的水溶液；優選地，乙醇的10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選50-70% (ν/ν)的水溶液)中。將所得溶液加熱(例如在55_90°C) 並進行再提取(二次提取)2-5小時。二次過濾後，收集濾出液並與之前的濾出液混合以增加提取效率。本發明的一個實施方案包括連續進行第一次提取後再次進行第二次提取的方法，這是為了防止以下情況，大規模生產中即使進行有效過濾，但藥草的含水量高而發生損失，因此只通過第一次提取將會導致提取效率的降低。但所述二次提取的進行只是為了提取效率，而與最終提取物的治療作用無關。因此應理解，作為本發明有效成分的藥草提取物不受上述製備方法的限制。另外，對各步提取效率的評估揭示了佔總量約80-90%的提取物是在二次提取中獲得的，也可進行三次提取但在經濟方面不利。將二次提取後混合的濾出液在50-60°C下減壓濃縮以除去留在樣品中的溶劑。將在減壓下完全濃縮後的樣品濃縮物與所述濃縮物總重的25-50倍的水進行兩次或三次共沸濃縮，然後再與相同量的另外的水混合以形成均質懸浮液。然後將所述懸浮液凍幹為最終提取物。以這種方式使用水進行共沸濃縮是為了有效地控制殘留在所述藥草提取物中的低級醇的含量，從而使用所述藥草提取物作為用於醫藥產品的材料。依照本發明的一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有山楂提取物和肉桂提取物的組合物，所述山楂提取物與肉桂提取物以10 1-1 5、優選5 1-1 5、更優選1 1-1 5的重量比(即山楂提取物的重量肉桂提取物的重量)混合。依照本發明的另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有山楂提取物和夏枯草提取物的組合物，所述山楂提取物和夏枯草提取物以10 1-1 5的重量比(即山楂提取物的重量夏枯草提取物的重量)混合。依照本發明的又另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有山楂提取物和木賊提取物的組合物，所述山楂提取物和木賊提取物以10 1-1 5的重量比(即山楂提取物的重量木賊提取物的重量)混合。依照本發明的又另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有肉桂提取物和夏枯草提取物的組合物，所述肉桂提取物和夏枯草提取物以10 1-1 5、優選 1:1-1: 3的重量比(即肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量)混合。依照本發明的又另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有肉桂提取物和木賊提取物的組合物，所述肉桂提取物和木賊提取物以7 1-1 7的重量比(即肉桂提取物的重量木賊提取物的重量)混合。依照本發明的又另一實施方案，所述藥草提取物包含一種含有夏枯草提取物和木賊提取物的組合物，所述夏枯草提取物和木賊提取物以10 1-1 10的重量比(即夏枯草提取物的重量木賊提取物的重量)混合。依照本發明的再另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物的組合物，所述山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物以 10 1 1-1 1 5的重量比(即山楂提取物的重量肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量)混合。依照本發明的再另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有山楂提取物、肉桂提取物和木賊提取物的組合物，所述山楂提取物、肉桂提取物和木賊提取物以 10 1 1-1 1 5的重量比(即山楂提取物的重量肉桂提取物的重量木賊提取物
的重量)混合。依照本發明的再另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有山楂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的組合物，所述山楂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物以 7:1:1-1:1: 5的重量比(即山楂提取物的重量夏枯草提取物的重量木賊提取物
的重量)混合。依照本發明的再另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的組合物，所述肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物以 7:1:1-1:1: 7的重量比(即肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量木賊提取物的重量)混合。依照本發明的再另一個優選實施方案，所述藥草提取物包含一種含有山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的組合物，所述山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物以5 :1:1:1-1:1:1: 5的重量比(即山楂提取物的重量 肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量木賊提取物的重量)混合。所述提取物的重量比以所述提取物的乾重計，「所述提取物的乾重」是指通過從所述提取物去除溶劑得到的幹提取物的重量(下文同上)。本文界定的術語「腎炎」可包括至少一種選自以下的腎病腎小球性腎炎、腎盂腎炎、間質性腎炎、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病、蛋白尿症、腎小管腔萎縮、腎小球硬化症、腎衰竭寸。本發明的用於預防和治療腎炎的組合物包含以所述組合物的總重計0. 001-99wt. %、優選0. l-50wt. %的所述提取物，但不限於此，並可根據要治療的疾病的類型和程度、患者的情況、需要的效果等而進行適當的調節。包含本發明提取物的組合物還可包含常用於製備藥物組合物的合適的載體、賦形劑或稀釋劑。包含本發明提取物的組合物可根據常規方法製劑成口服劑型(例如粉劑、粒劑、 片劑、膠囊劑、懸浮劑、乳劑、糖漿劑、氣霧劑等)、局部用藥劑、直腸製劑或可注射製劑。可納入包含所述提取物的組合物的載體、賦形劑或稀釋劑可為乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘
露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、澱粉、阿拉伯橡膠(0I^FaI0l·衛平)、海藻酸鹽/酯、 明膠、磷酸鈣、矽酸鈣、纖維素、甲基纖維素、無定形纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂、礦物油等。所述組合物的製劑可包括使用常用稀釋劑或賦形劑例如填充料、填充劑、粘合劑、潤溼劑、崩解劑、表面活性劑等。用於口服給藥的固體製劑可包括片劑、丸劑、粉劑、粒劑、膠囊劑等。所述固體製劑可通過將所述提取物與至少一種賦形劑例如澱粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠等混合而製備。另外，除了所述常用賦形劑以外，還可使用潤滑劑例如硬脂酸鎂或滑石。用於口服給藥的液體製劑可包括懸浮劑、 溶液劑、油劑、糖漿劑等。除了常用稀釋劑例如水和液體石蠟以外，還可使用不同賦形劑，例如潤溼劑、調味劑、香料、防腐劑等。非經腸給藥的製劑可包括無菌水溶液、非水溶劑、懸浮劑、油劑、凍幹製劑或直腸製劑。非水溶液和懸浮液可包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄欖油)、可注射酯(例如油酸乙酯)等。直腸製劑的基料可包括witepsol、聚乙二醇
(macrogol)、吐溫61、可可脂、月桂精黃油(升早鉭只1 )、甘油明膠等。例如，為獲得所需效果，所述組合物可按照以所述提取物的乾重計l-1000mg/kg、 優選50-500mg/kg、更優選150-300mg/kg的每日劑量給藥。所述給藥一日可進行一次，也可分幾次進行。但所述每日劑量由本領域技術人員根據患者的情況和體重、疾病的嚴重程度、 劑型和給藥途徑及時間可進行恰當的調節。因此，上面規定的每日劑量不欲在任何方面限制本發明的範圍。本發明的組合物可給予所有哺乳動物，優選嚙齒類、家畜、人等，更優選人。所述給藥途徑可包括所有類型的途徑，包括口服途徑，直腸途徑，或者靜脈內、肌肉內、皮下、子宮內、硬膜外或腦室內注射途徑，但不限於此。在另一個實施方案中，本發明提供用於預防和/或改善腎炎的保健食品，所述保健食品含有至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的藥草提取物作為有效成分。含有本發明提取物的組合物可用於多種用途，例如用於預防和改善腎炎的藥品或保健食品。可加入本發明提取物的食品可包括例如任何種類的食品、飲料、口香糖、茶、維生素複合物、保健食品，並可以以粉末、顆粒、片、膠囊或飲料的形式使用。本發明提取物幾乎沒有毒性和副作用，並可用作出於預防目的長期給藥的安全醫藥物質。在此，保健食品中的提取物含量可以是以所述食品總重計0. 01-15wt. %，作為用於本發明保健食品的組合物；或者以IOOml所述食品計0. 02-10g、優選0. 3_lg，作為用於保健飲料的組合物。
用於所述保健食品中的保健飲料的組合物可包含作為必需成分的所述提取物和液體成分，所述液體成分不受具體限制，可額外地包括多種用於常規飲料的調味劑或天然烴類。天然烴類的實例可包括一般糖類例如單糖(如葡萄糖、果糖等)，雙糖(如麥芽糖、蔗糖等)，或多糖(如糊精、環糊精等)以及糖醇類例如木糖醇、山梨醇、赤蘚糖醇等。本文使用的調味劑可優選地包括天然調味劑(例如，奇甜蛋白、甜葉菊(Stevia)提取物、萊鮑迪苷 (rebaudioxide Α)、甘草皂苷等)和合成調味劑(例如糖精、阿斯巴甜等)。所述天然碳水化合物的量為每IOOml的本發明組合物中約l_20g、優選約5-12g。除上述成分以外，本發明組合物還可包含多種營養補充物、維生素、礦物質(電解質)、調味劑(例如合成調味劑、天然調味劑等)、色素、填充料(例如乾酪、巧克力等)、果膠酸及其鹽、藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠體增稠劑、PH調節劑、穩定劑、防腐劑、甘油、醇、用於碳酸飲料的碳酸化劑等。除此之外，本發明組合物還可包含天然果汁，以及用於製備果汁或植物汁的果漿。這些成分可單獨或結合使用。所述添加劑的量並不是很多，但每100重量份的本發明組合物中可為0-20重量份。在本發明的另一實施方案中，提供了用於製備預防和/或治療腎炎的組合物的方法，所述方法包括進行提取至少一種選自山楂、肉桂、夏枯草和木賊的藥草的第一次提取，所述提取用量為所述藥草重量(g)的約3-20倍、優選5-15倍的水、直鏈或支鏈C1-C6醇或醇的水溶液(例如，直鏈或支鏈C1-C6醇的10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選50-70% (ν/ ν)的水溶液；優選地，乙醇的10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選50-70% (ν/ν)的水溶液)或其混合物，在40-110°C、優選55-90°C下，進行0. 5-20小時、優選1_10小時的浸透、熱水提取、超聲提取，或通過加熱回流冷凝提取得到藥草提取物。在本發明的一個優選實施方案中，所述方法還可在所述第一次提取後包括過濾所述第一次提取得到的提取物以收集濾出液；進行提取所述濾出液以外的殘留物的第二次提取，在所述殘留物中再次添加量為所述殘留物重量的4-7倍的水、直鏈或支鏈C1-C6醇或醇的水溶液(例如，直鏈或支鏈 C1-C6醇的10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選50-70% (ν/ν)的水溶液；優選地， 乙醇的10-90% (ν/ν)、優選10-70% (ν/ν)、更優選50-70% (ν/ν)的水溶液)，並進行加溫 (例如55-99°C )，然後進行2-5小時的再提取；並且過濾所述第二次提取得到的提取物並將得到的濾出液與所述第一次提取的濾出液混合。通過進行所述第一次和第二次提取增加了提取效率，這對大規模藥草提取物的生產是有利的。當所述提取物來自至少兩種選自山楂、肉桂、夏枯草和木賊的藥草時，所述提取物可通過獲得各藥草提取物然後混合所述提取物製備；或混合所述至少兩種藥草、然後根據上述方法製備所述混合物的提取物製備。所述各藥草提取物的混合比例如上所述。


圖1示出了單一藥草提取物對慶大黴素誘導的腎炎模型的腎炎抑制活性。圖2示出了對慶大黴素誘導的腎炎模型的組織病理學研究結果。
圖3示出了單一藥草提取物對順鉬誘導的腎炎模型的腎炎抑制活性。圖4示出了對順鉬誘導的腎炎模型的組織病理學研究結果。
具體實施方案下面，根據以下實施例對本發明進行更加詳細的描述，但是所述實施例僅為了說明，而不意圖限制本發明的範圍。[實施例1單一藥草提取物的製備㈧]1.1:山楂提取物的製備用水清洗山楂(Crataegi Fructus，購自韓國的Kyung-dong市場)的葉和花以除去雜質並完全乾燥。在以這種方式得到的250g的山楂中添加將2. OL的60% (ν/ν)乙醇水溶液。在80°C下進行兩次每次3小時的回流，之後將得到的液體提取物過濾並在減壓下濃縮。大部分水已蒸發的狀態下，將0. 2L水加至所述濃縮的提取物，並對其加熱以進行共沸濃縮。將此過程再重複兩次。再次將相同體積的水加至所述共沸濃縮物以形成均質懸浮液，然後將其凍幹以得到45. Og(相對於初始藥草18%的收率)粉末形態的山楂提取物。1.2:肉桂提取物的製備用水清洗肉桂(Cirmamomi Cortex，購自韓國的Kyung-dong市場)以除去雜質並完全乾燥。在以這種方式得到的250g的肉桂中添加2. OL的60% (ν/ν)乙醇水溶液。在 80°C下進行兩次每次3小時的回流，之後將得到的液體提取物過濾並在減壓下濃縮。大部分水已蒸發的狀態下，將0. 2L水加至所述濃縮的提取物，並對其加熱以進行共沸濃縮。將此過程再重複兩次。再次將相同體積的水加至所述共沸濃縮物以形成均質懸浮液，然後將其凍幹以得到28. 5g(相對於初始藥草11. 4%的收率)粉末形態的肉桂提取物。1. 3 夏枯草提取物的製備用水清洗夏枯草(Pimella Spica)以除去雜質並完全乾燥。在以這種方式得到的 250g的夏枯草中添加2. OL的60% (ν/ν)乙醇水溶液。在80°C下進行兩次每次3小時的回流，之後將得到的液體提取物過濾並在減壓下濃縮。大部分水已蒸發的狀態下，將0.2L水加至所述濃縮的提取物，並對其加熱以進行共沸濃縮。將此過程再重複兩次。再次將相同體積的水加至所述共沸濃縮物以形成均質懸浮液，然後將其凍幹以得到27. 3g(相對於初始藥草10. 9%的收率)粉末形態的夏枯草提取物。1. 4 木賊提取物的製備用水清洗木賊(Equiseti Herba)以除去雜質並完全乾燥。在以這種方式得到的 250g的木賊中添加2. OL的60% (ν/ν)乙醇水溶液。在80°C下進行兩次每次3小時的回流，之後將得到的液體提取物過濾並在減壓下濃縮。大部分水已蒸發的狀態下，將0. 2L水加至所述濃縮的提取物，並對其加熱以進行共沸濃縮。將此過程再重複兩次。再次將相同體積的水加至所述共沸濃縮物以形成均質懸浮液，然後將其凍幹以得到52. Og(相對於初始藥草20. 8%的收率)粉末形態的木賊提取物。[實施例2藥草混合物的提取物的製備]用水清洗山楂、肉桂和夏枯草以除去雜質並完全乾燥。在以這種方式得到的山楂 (97g)和肉桂(153g)、或肉桂(92g)和夏枯草(96g)中添加2. OL的60% (ν/ν)乙醇水溶液。 在80°C下進行兩次每次3小時的回流，之後將得到的液體提取物過濾並在減壓下濃縮。大部分水已蒸發的狀態下，將0. 2L水加至所述濃縮的提取物，並對其加熱以進行共沸濃縮。 將此過程再重複兩次。再次將相同體積的水加至所述共沸濃縮物以形成均質懸浮液，然後將其凍幹以得到35. 2g(相對於初始藥草14. 的收率)粉末形態的山楂和肉桂的複合提取物，以及22. Og(相對於初始藥草11. 7%的收率)粉末形態的肉桂和夏枯草的複合提取物。
[實施例3藥草提取物的混合物的製備]
實施例3. 1 山楂提取物和肉桂提取物的混合物的製備
將實施例1. 1的山楂提取物和實施例1.2的肉桂提取物以10 1、5 1、3 1、 1 1、1 3和1 5的重量比(山楂提取物的重量肉桂提取物的重量)混合在一起。為均勻混合，向混合物中加入體積為所述混合物重量2-3倍的水，然後在50-60°C進行減壓濃縮。將相同體積的水加至所得的濃縮物以形成均質懸浮液，然後將其凍幹以得到粉末狀混合物。
實施例3. 2 山楂提取物和夏枯草提取物的混合物的製備
將實施例1. 1的山楂提取物和實施例1.3的夏枯草提取物以10 1、5 1、3 1、 1 1、1 3和1 5的重量比(山楂提取物的重量夏枯草提取物的重量)混合在一起， 並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 3 山楂提取物和木賊提取物的混合物的製備
將實施例1. 1的山楂提取物和實施例1.4的木賊提取物以10 1、5 1、3 1、1 1、1 3和1 5的重量比(山楂提取物的重量木賊提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 4 肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物的製備
將實施例1.2的肉桂提取物和實施例1.3的夏枯草提取物以10 1、5 1、4 1、 3 1、1 1、1 3和1 5的重量比(肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 5 肉桂提取物和木賊提取物的混合物的製備
將實施例1.2的肉桂提取物和實施例1.4的木賊提取物以7 1、5 1、3 1、2 1、1 1、1 3、1 5和1 7的重量比(肉桂提取物的重量木賊提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 6 夏枯草提取物和木賊提取物的混合物的製備
將實施例1.3的夏枯草提取物和實施例1.4的木賊提取物以10 1、5 1、3 1、 1 1、1 3、1 5和1 10的重量比(夏枯草提取物的重量木賊提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 7山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物的製備
將實施例1. 1的山楂提取物、實施例1. 2的肉桂提取物和實施例1. 3的夏枯草提取物以10 1 1、2 2 3和1 1 5的重量比(山楂提取物的重量肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 8山楂提取物、肉桂提取物和木賊提取物的混合物的製備
將實施例1. 1的山楂提取物、實施例1. 2的肉桂提取物和實施例1. 4的木賊提取物以10 1 1、2 5 2和1 1 5的重量比(山楂提取物的重量肉桂提取物的重量木賊提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 9 山楂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物的製備
將實施例1. 1的山楂提取物、實施例1. 3的夏枯草提取物和實施例1. 4的木賊提取物以7 1 1、3 2 4和1 1 5的重量比(山楂提取物的重量夏枯草提取物的重量木賊提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 10 肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物的製備
將實施例1. 2的肉桂提取物、實施例1. 3的夏枯草提取物和實施例1. 4的木賊提取物以7 1 1、3 2 5和1 1 7的重量比(肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量木賊提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
實施例3. 11 山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物的製備
將實施例1. 1的山楂提取物、實施例1. 2的肉桂提取物、實施例1. 3的夏枯草提取物和實施例1.4的木賊提取物以5 1 1 1、3 2 2 2和1 1 1 5重量比 (山楂提取物的重量肉桂提取物的重量夏枯草提取物的重量木賊提取物的重量)混合在一起，並以與實施例3. 1相同的方式進行所述過程以製備混合物。
[實驗實施例藥理活性的評估]
實驗實施例1 藥草提取物的混合物與藥草混合物的提取物之間的活性對比
lfligif^^^ (Amin et al. ， Environmental Health Perspectives vol. 112, No. 4，March, 2004,465-479)進行試驗以對比和評估實施例2的來自山楂與肉桂的藥草混合物以及肉桂與夏枯草的藥草混合物的提取物、以及實施例3. 1的山楂提取物與肉桂提取物的1 1混合物、以及實施例3. 4中的肉桂提取物與夏枯草提取物的1 1混合物對腎炎的治療作用。結果示於表1。
無陽性對照組，對正常組進行試驗。對雄性SD大鼠(7周齡，195-205g, Orient) 將M0mg/kg的劑量的腎炎誘導因子慶大黴素(購自Whail Pharma. Co.，Ltd.)進行6天的腹膜內注射以誘導腎炎。在被誘導腎炎的試驗大鼠中，除陰性對照組以外的試驗組以 400mg/kg的每日劑量口服實施例2的2種試驗藥物和實施例3. 1或3. 4的試驗藥物。口服後7天進行屍檢，採集血樣以檢測血液脲氮(B. U. N.，blood urea nitrogen)和肌酸酐 (creatinine)。其結果示於表1。
[表1]
權利要求
1.用於預防或治療腎炎的組合物，包含至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的提取物作為有效成分。
2.如權利要求1所述的組合物，其中所述提取物通過用水、C1-C6醇、C1-C6醇的水溶液或其混合物提取而製備。
3.如權利要求2所述的組合物，其中所述醇的水溶液的濃度為10-90%(ν/ν) 0
4.如權利要求1所述的組合物，其中所述提取物為選自以下混合物的至少一種 重量比為10 1-1 5的山楂提取物和肉桂提取物的混合物；重量比為10 1-1 5的山楂提取物和夏枯草提取物的混合物； 重量比為10 1-1 5的山楂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 1-1 5的肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物； 重量比為7 1-1 7的肉桂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 1-1 10的夏枯草提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物；重量比為10 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為7 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為7 :1:1-1:1: 7的肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物；和重量比為5 :1:1:1-1:1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物。
5.如權利要求1-4任一項所述的組合物，其中所述腎炎選自腎小球性腎炎、腎盂腎炎、 間質性腎炎、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病、蛋白尿症、腎小管腔萎縮、腎小球硬化症和腎衰竭。
6.如權利要求1-4任一項所述的組合物，其中所述組合物的每日劑量以所述有效成分的含量計為0. 7-500mg/kg。
7.用於預防和改善腎炎的保健食品，其包含權利要求1-4任一項所述的組合物。
8.至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的提取物用於預防或治療腎炎的用途。
9.如權利要求8所述的用途，其中所述提取物通過用水、C1-C6醇、C1-C6醇的水溶液或其混合物提取而製備。
10.如權利要求9所述的用途，其中所述醇的水溶液的濃度為10-90%(ν/ν) 0
11.如權利要求8所述的用途，其中所述提取物為選自以下混合物的至少一種 重量比為10 1-1 5的山楂提取物和肉桂提取物的混合物；重量比為10 1-1 5的山楂提取物和夏枯草提取物的混合物； 重量比為10 1-1 5的山楂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 1-1 5的肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物； 重量比為7 1-1 7的肉桂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 1-1 10的夏枯草提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物；重量比為10 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為7 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為7 :1:1-1:1: 7的肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物；和重量比為5 :1:1:1-1:1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物。
12.如權利要求8-11任一項所述的用途，其中所述腎炎選自腎小球性腎炎、腎盂腎炎、 間質性腎炎、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病、蛋白尿症、腎小管腔萎縮、腎小球硬化症和腎衰竭。
13.如權利要求8-12任一項所述的用途，其中所述提取物的每日劑量為0.7-500mg/kg ο
14.一種預防或治療腎炎的方法，包括對需要預防或治療腎炎的患者給予至少一種選自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的提取物。
15.如權利要求14所述的方法，其中所述提取物通過用水、C1-C6醇、C1-C6醇的水溶液或其混合物提取而製備。
16.如權利要求15所述的方法，其中所述醇的水溶液的濃度為10-90%(ν/ν) 0
17.如權利要求14所述的方法，其中所述提取物為選自以下混合物的至少一種 重量比為10 1-1 5的山楂提取物和肉桂提取物的混合物；重量比為10 1-1 5的山楂提取物和夏枯草提取物的混合物； 重量比為10 1-1 5的山楂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 1-1 5的肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物； 重量比為7 1-1 7的肉桂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 1-1 10的夏枯草提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為10 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物；重量比為10 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為7 :1:1-1:1: 5的山楂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物； 重量比為7 :1:1-1:1: 7的肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物；和重量比為5 :1:1:1-1:1:1: 5的山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木賊提取物的混合物。
18.如權利要求14所述的方法，其中所述腎炎選自腎小球性腎炎、腎盂腎炎、間質性腎炎、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病、蛋白尿症、腎小管腔萎縮、腎小球硬化症和腎衰竭。
19.如權利要求14所述的方法，其中所述提取物的每日劑量為0.7-500mg/kg。
全文摘要
本發明涉及藥草提取物在用於預防和治療腎炎的藥物組合物中的新用途。更具體地，本發明提供包含一種或者多種選自山楂、肉桂、夏枯草和木賊的藥草提取物和保健食品，使用所述藥草提取物治療腎炎的方法，以及所述藥草提取物在製備用於預防和/或治療腎炎的組合物中的用途。所述藥草提取物可用於在慶大黴素、順鉑等藥物誘導的腎炎模型中預防和/或治療腎炎，並且具有高的對腎臟中的腎小球膜細胞生長的抑制活性。
文檔編號A61K36/73GK102497874SQ20108003444
公開日2012年6月13日 申請日期2010年6月1日 優先權日2009年6月4日
發明者延成欽, 張守任, 文曉進, 李智慧, 李焌碩, 李鍾旭, 漁津, 磪勝仁, 辛榮埈, 郭好永, 金成珉, 金昌煥, 韓東午, 韓昌均 申請人:韓國安國藥品株式會社