與洗滌劑分析有關的改進的製作方法

2023-08-10 15:17:56

專利名稱：與洗滌劑分析有關的改進的製作方法
技術領域：
本發明涉及與洗滌劑分析有關的改進，以及特別是與用於這樣分析的所謂「樣品」 的製備有關的改進。
背景技術：
在洗衣洗滌劑製劑領域中，「樣品」是一塊大致柔軟的材料，例如有對其施用的汙 跡的織物。該材料可以是例如由棉、聚酯或者天然和合成纖維的各種各樣的混合物製成的 織物。該樣品可以是非紡織的(例如濾紙或者硝化纖維素)或者甚至是一塊硬材料，例如 陶器。汙跡可以包括血、牛奶、墨水、草、茶、酒、菠菜、肉汁、巧克力、雞蛋、乳酪、粘土、顏料、 油或者這些成分的混合物。樣品通常用於對洗衣洗滌劑組合物的評估。在傳統的「模型清洗」分析裡，因為它 們是清洗負荷的小部分，負荷主體由「壓載物」(「ballast」)構成，其包括多張的布。一種 或多種樣品(也稱為「探測器」)和大量的「壓載物」在已知的條件下被清洗以便可確定汙 跡去除的程度。美國專利7122334公開了一種更先進的洗滌劑組合物分析技術。在這裡，「較小的 樣品」——塊樣品(在把汙跡固定在樣品之前或之後其已經被切割或者以其它方式從樣品 的材料中去除)被置於對、48或者96孔微量滴定板的孔中。「較小的樣品」也可以通過將 汙跡施用於小塊的材料來製成。通常這些「較小的樣品」的直徑約為5mm。在本發明的上下 文中，「樣品」包括較大和較小的樣品。在各物種型的材料上具有已知「強度」汙跡的樣品是可商業得到的(來自EMPA， St. Gallen, Switzerland ；WFK-Testgewebe GmbH, Krefeld Germany ；或 Center for Test Materials, Vlaardingen. The Netherlands)和/或可以通過本領域普通技術人員來製備 (例如描述在 Morris 禾口 Prato，Textile Research Journal 52(4) :280 286(1982)中)。在美國專利7122334中已經表明使用茶(Camellia sinensis)和菠菜(Spinacia oleracea)作為汙跡的來源，例如獲自食品和飲料溢出物的那些。機械產生的植物汙跡是洗衣汙跡的常見來源，並且一般被稱為「草」汙跡。「草」 是非常一般性的術語，並且在常見用法中，其經常用來指禾本科(Poaceae)(也稱為禾本科 (Gramineae))的單子葉綠色植物。如應是明顯的，在衣物和其他織物物品上的菠菜和茶汙 跡比「草汙跡」更不可能通過戶外活動發生，以及更可能起因於食物或飲料的溢出物，而「草 汙跡」更多地是關於運動/戶外衣物和/或兒童衣物的問題。草汙跡的實驗室用途的一個主要問題是結果顯示出較差的再現性。因此最優化洗 衣洗滌劑組合物有效和高效地去除「草」汙跡是困難的。已經進行了許多努力來如何準確 地在樣品上形成「草」汙跡，且已建議用各種複雜的設備來解決這一問題。發明簡述我們已經確定，如果存在的主要綠色植物材料是大部分或全部來自單一物種的綠 色植物，那麼可以製備改進的「草」汙跡樣品。依照本發明，提供了具有0. 25m2至4X10_6m2面積的織物樣品，所述樣品在一個
3或多個在其表面的至少0.1%上的斑點(patch)中被包含葉綠體材料的碎片汙染，其中存 在於斑點中的至少80% wt的該葉綠體材料來自單一物種的綠色植物，該綠色植物選自 下面的屬冰草屬(Agropyron)、剪股穎屬(Agrostis)、擬南芥屬(Aradopsis)、燕麥草屬 (Arrhenatherum)地種草屬(Axonopus)、維菊屬(Belliss)、孑L穎草屬(Bothriochloa)、 格蘭馬草屬(Bouteloua)、青蘚屬(Brachythecium)、果香菊屬(Chamaemelum)、龍爪茅屬 (Dactyloctenium)、卷耳屬(Cerastium)、金須茅屬(Chrysopogon)、還陽參屬(Crepis)、狗 牙根屬(Cynodon)洋狗尾草屬(Cynosurus)、鴨茅屬(Dactylis)、發草屬(Deschampsia)、 山螞蝗屬(Desmodium)、雙花草屬(Dichanthium)、馬蹄金屬(Dichondra)、馬唐屬 (Digitaria)、鹽草屬(Distichlis)、披鹼草屬(Elymus)、偃麥草屬(Elytrigia)、畫眉草屬 (Eragrostis)、蜈般草屬(Eremochloa)、美喙蘚屬(Eurhynchium)、羊茅屬(Fescue)、海氏 草屬(Hilaria)、絨毛草屬(Holcus)、天胡荽屬(Hydrocotyle)、貓兒菊屬(Hypochaeris)、 鴨嘴草屬(Ischaemum)、洽草屬(Koeleria)、L印tinella、黑麥草屬(Lolium)、地楊梅屬 (Luzula)、Microlaena、雀稗屬(Paspalum)、狼尾草屬(Pennisetum)、梯牧草屬(Phleum)、 過江藤屬(Phyla)、車前屬(Plantago)、早熟禾屬(Poa)、單序草屬(Polytrias)、銅錘玉帶 屬 Gratia)、夏枯草屬 O^runella)、鹼茅屬(Puccinellia)、毛茛屬(Ranunculus)、酸模屬 (Rumex)、千裡光屬(Senecio)、鈍葉草屬(Stenotaphrum)、蒲公英屬(Taraxacum)、三葉草 屬(Trifolium)、三毛草屬(Trisetum)尾稃草屬(Urochloa)和/或結縷草屬(Zoysia)。織物優選為纖維質的、聚酯或其混合物。優選的，剩餘20% Wt的碎片為來自不超過五種，優選三種，優選一種其它的物種。 在優選的實施方案中，汙跡來自單一物種。通過保證使用小的和已知數量物種的綠色植物，可獲得可再現的「草汙跡」，對於 它們的去除，其具有一致水平的困難。優選地，碎片為來自以下物種中的一種或多種普通剪股穎(Agrostis canina), 細弱剪股 M (Agrostis capillaris)、華；I匕剪股穎(Agrostis clavata)、Agrostis curtisii、巨序剪股穎(Agrostis gigantea)、旱地曹股穎(Agrostis castellana)、 Agrostis mertensii、Agrostis scabra、匍匍剪月受穎(Agrostis stolonifera) > Agrostis tenuis、Agrostis palustris、Agrostis vineale、紫羊茅(Festuca rubra)、多年生黑 麥草(LoIium perenne)、白三葉草(Trifolium repens)、雛菊(Bellis perennis)、西洋 蒲公英(Taraxacum officinale) > Eurhynchium praelongum、卵葉青蘇(Brachythecium rutabulum)、匍枝毛茛(Ranunculus repens)、絨毛草(Ho Icus lanatus)、如臭狗舌草 (Senecio jacobaea)禾口大車前(Plantago major)、普通早熟禾(Poa trivialis)、草地早熟 禾(Poa. pratensis)禾口一年生早熟禾(Poa. Annua)。優選的，碎片來自一種或多種的毛茛目(Ranunculales)和菊科(Asteraceae)。許多這些植物為更常見的下面的通用名剪股穎屬為彎草(bentgrass)(匍匐剪 股穎——「爬行彎曲」(「craping bent」)通常用於高爾夫球場綠色植被)，並且廣泛地用 於草坪。羊茅屬包括簇絨草(用於滾球場草地上和用於飼料)，黑麥草屬(Lolium)為黑麥 草(ryegrass)，早熟禾屬包括歐洲牧場草、藍草(bluegrass)和草叢，而絨毛草屬也是草。 然而，許多優選植物在非科學通用術語用法中並不是「草」。例如，三葉草屬(Trifolium)包 括苜蓿(clover)、雛菊屬包括雛菊、蒲公英屬包括西洋蒲公英、毛茛屬植物包括金風花。美喙蘚屬(Eurhynchium)是一種苔蘚屬，如青蘚屬(Brachytheciaceae)0特別優選的汙跡包含一種或多種選自下列的植物黑麥草屬，優選多年生黑麥草 (a perennial ryegrass)；羊茅屬，優選Festuca pratensis (—禾中牧場羊茅草)。三葉草 屬，優選紅三葉草(一種紅苜蓿)。其它適合的汙跡可以包含剪股穎屬(彎草)、白三葉草 (白苜蓿)和/或西洋蒲公英(蒲公英)。樣品可以包含兩種或更多種汙跡，其是相同物種的不同品種或變種。因此，在樣品 包括衍生自白三葉草(白苜蓿)的汙跡的情況下，可存在各自衍生自Aber Dai品種和Aber Ace品種的汙跡。優選存在至少一種非草物種，特別優選的是其選自非脈管植物(苔蘚類植物)，非 被子植物的脈管植物或者選自被子植物科菊科(Asteraceae)、茜草科(Rubiaceae)或者 豆科(Fabaceae)。可以製備這樣的樣品，其中來源於真實的草(禾本科(Poaceae))的碎片 為少於存在的材料的50% wt，優選少於25% wt。可以製備這樣的樣品，其中存在的材料都 不來源於草。超過一種物種特定的汙跡可存在於每一個樣品上。優選在較大的樣品上有1-30 個汙染的斑點，每一個覆蓋至少0. 的樣品面積。特別優選4-10個斑點。更小的樣品可以被均勻汙跡或者從較大的樣品來切割。本發明的第二方面涉及製備樣品的方法，其包括用含葉綠體的綠色植物材料接觸 片狀形式的具有大於4X 10_6m2的面積(大於4mm2)的織物基底的步驟，其中至少80%的碎 片來自單一物種的不是茶或者菠菜的綠色植物。在本發明的該第二方面，優選的屬和種是上面所提及的以及該過程可以被重複以 提供具有多種汙跡的樣品。本發明的第三方面提供用於測定洗衣組合物效力的方法，其包括用洗衣組合物處 理依據本發明的樣品的步驟。在本發明的一個特別優選實施方案中，洗衣組合物包括至少
一種酶。因為葉綠體包含DNA，確定在具體樣品上表現的屬和種的數目和類型是相對容易 的。發明詳述樣品的製備方法很明顯地由下面的實例給出。通常，樣品可用於設計為區分洗衣 洗滌劑組合物的實驗，所述洗衣洗滌劑組合物含有不同濃度和類型的酶，從而可優化草汙 跡的移除。表面活性劑、聚合物、金屬螯合劑以及漂白劑也可有助於草-汙跡去除或脫色以 及也發現本發明的樣品在檢測這些成分的活性上的用途。酶如上所述，在本發明特別優選的實施方案中，測試的洗衣組合物包含至少一種酶。 特別預期的酶包括蛋白酶、α -澱粉酶、纖維素酶、脂肪酶、過氧化物酶/氧化酶、果膠酸裂 合酶和甘露聚糖酶或者其混合物。適合的蛋白酶包括動物、植物或微生物來源的那些。優選微生物來源的。包括化 學修飾的或蛋白質工程化的突變體。蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶或者金屬蛋白酶，優選鹼 性微生物蛋白酶或者胰島素樣蛋白酶。鹼性蛋白酶的例子是枯草桿菌蛋白酶，特別是那些 來源於芽孢桿菌屬(Bacillus)的，例如枯草桿菌蛋白酶Novo、枯草桿菌蛋白酶Carlsberg、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168 (描述在WO 89/06279 中)。胰島素樣蛋白酶的實例是胰島素(例如豬或者牛來源的)和在WO 89/06270和WO 94/25583中描述的鐮刀菌屬(Fusarium)的蛋白酶。有用的蛋白酶的實例是描述在WO 92/19729、WO 98/20115、WO 98/20116以 及TO 98/34946中的變體，尤其是具有一個或多個下列位置置換的變體27、36、57、76、 87、97、101、104、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235 和 274。優選的商業上可 得的蛋白酶包括 Alcalase 、Savinase , Primase 、Duralase 、Dyrazym , Esperase 、 Everlase >Polarzyme 以及 Kannase (Novozymes A/S)、Maxatase 、MaxacalTM、Maxapem 、 Properase , Purafect , Purafect OxP 、FN2 以及 FN3 (Genencor International Inc.) 0合適的脂肪酶包括細菌或者真菌來源的那些。包括化學修飾的或蛋白質工程化的 突變體。有用的脂肪酶的實例包括來自腐質黴屬(Humicola)(同義詞Thermomyces)的脂肪 酶，例如來自描述在 EP 258 068 和 EP 305 216 中的 H. lanuginosa(T. Ianuginosus)或來 自描述在WO 96/13580中的特異腐質黴(H. insolens)，假單胞菌屬(I^seudomas)的脂肪酶， 例如來自產鹼假單胞菌(P. alcaligenes)或者類產鹼假單胞菌(P. pseudoalcaligenes) (EP 218 272)、洋蔥假單胞菌(P. c印acia) (EP 331 376)、施氏假單胞菌(P. stutzeri) (GB 1，372，034)、螢光假單胞菌(P. fluorescens)、假單胞菌屬的種的SD 705株(TO 95/06720 和 WO 96/27002)、威斯康星假單胞菌(P. wisconsinensis) (W0 96/12012)，芽孢 桿菌屬的脂肪酶，例如來自枯草芽孢桿菌(B. subtilis) (Dartois等(1993)，Biochemica et Biophysica Acta，1131，253-360)，嗜熱脂肪芽孢桿菌(B. stearothermophilus) (JP 64/744992)或者短小芽孢桿菌(B. pumilus) (W091/16422)。其他的實例是脂肪酶變體，例如描述在WO 92/05249, WO 94/01541, EP 407225、 EP 260 105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615, WO 97/04079 和 WO 97/07202 中的那些。優選的商業上可得的脂肪酶包括Lipolase 和Lipolase Ultra 、 Lipex (Novozymes A/S)。本發明的方法可在角質酶(cutinase)，分類為EC 3. 1. 1. 74，存在的情況下進行。 根據本發明使用的角質酶可以是任何來源的。優選微生物來源的角質酶，特別是細菌、真菌 或者酵母來源的。角質酶是能降解角質的酶。在一個優選實施方案中，角質酶衍生自麴黴屬 (Aspergillus)的株，特別是米麴黴(Aspergillus oryzae)、鏈格孢屬(Alternaria)的 株，特別是甘藍鏈格孢(Alternaria brassiciola)、鐮孢菌屬(Fusarium)的株，特別是
病鍵抱菌(Fusarium solani)、Fusarium solani pisi、攻瑰色大刀鍵刀菌(Fusarium roseum culmorum)或者攻瑰色接骨木鍵抱菌(Fusarium roseum sambucium)、長孺抱 屬(Helminthosporum)的株，特別是蒜頭長孺孢(Helminthosporum sativum)、腐質黴屬 (Humicola)的株，特別是特異腐質黴(Humicola insolens)、假單胞菌屬(Pseudomonas) 的株，特別是門多薩假單胞菌O^seudomonas mendocina)或者惡臭假單胞菌(I^seudomonas putida)、絲核菌屬(Rhizoctonia)的株，特別是茄屬絲核菌(Rhizoctonia solani)、鏈黴 菌屬(Sti^ptomyces)的株，特別是瘡痂鏈黴菌(Sti^ptomyces scabies)或者細基格孢屬(Ulocladium)的株，特別是群生細基格孢(Ulocladium consortiale)。在一個最優選 的實施方案中，角質酶來源於特異腐質黴的株，尤其是特異腐質黴DSM 1800株。特異腐質 黴的角質酶描述在WO 96/13580中，其在此引入作為參考。角質酶可以是變體，例如在WO 00/34450和WO 01/92502中公開的變體中的一種，其在此引入作為參考。優選的角質酶變 體包括列在WO 01/92502的實施例2中的變體，其特別地在此引入作為參考。優選的商業可用的角質酶包括N0V0ZYM 51032 (可獲自Novozymes A/S， Denmark)。本發明的方法可在磷脂酶(分類為EC 3. 1. 1.4和/或EC 3. 1. 1.32)存在的情況 下進行。如本文所用的，術語磷脂酶為對磷脂具有活性的酶。磷脂，例如卵磷脂或者磷脂醯 膽鹼，由在外部(sn-Ι)和中間(sn-幻位置用兩個脂肪酸酯化以及在第三位置用磷酸酯化 的甘油組成；進而，磷酸可以被酯化成氨基醇。磷脂酶是參與磷脂水解作用的酶。幾類的磷 脂酶活性可以被區分，包括磷脂酶A1和A2,其水解一個脂肪醯基(分別在sn-Ι和sn-2位 置)，形成溶血磷脂；以及溶血磷脂酶(或者磷脂酶B)，其能夠水解溶血磷脂中其餘的脂肪 醯基。磷脂酶C和磷脂酶D (磷酸二酯酶)分別釋放二醯基甘油或者磷脂酸。術語磷脂酶包括具有磷脂酶活性的酶，例如磷脂酶或A2)、磷脂酶B活性、磷 脂酶C活性或磷脂酶D活性。在這裡使用的與本發明的酶有關的術語「磷脂酶A」包含具有 磷脂酶A1和/或磷脂酶A2活性的酶。磷脂酶活性可以通過還具有其他活性的酶來提供，例 如舉例來說具有磷脂酶活性的脂肪酶。磷脂酶活性可以例如來自具有磷脂酶副活性的脂肪 酶。在本發明的另一個實施方案中，磷脂酶活性通過基本上僅具有磷脂酶活性的酶提供，以 及其中磷脂酶酶活性不是副活性。磷脂酶可以是任何來源的，例如，動物來源的(例如，舉例來說，哺乳動物)， 例如來自胰臟(例如，牛或者豬的胰臟)，或者蛇毒或者蜜蜂毒。磷脂酶可以優選微 生物來源的，例如絲狀真菌、酵母或者細菌，例如以下的屬或者種麴黴屬，例如黑麴黴 (A. niger)；盤基網柄菌屬(Dictyostelium)，例如 D. discoideum ；毛黴屬(Mucor)，例如 爪哇毛黴(M. javanicus)、大毛黴(M. mucedo)、細胞毛黴(M. subtilissimus)；脈胞菌屬 (Neurospora)，例如粗糙脈胞菌(N. crassa)；根毛黴屬(Rhizomucor)，例如 R. pusillus ； 根黴菌屬(Miizopus)，例如無根根黴(R. arrhizus)、日本根黴(R. japonicus)、葡枝根 黴(R. stolonifer)；核盤菌屬(Sclerotinia)，例如大豆核盤菌(S. Iibertiana)；髮癬 菌屬trichophyton)，例如深紅色髮癬菌(T. rubrum)；維氏核盤菌屬(Whetzelinia)， 例如W. sclerotiorum ；芽抱桿菌屬，例如巨大芽抱桿菌(B. megaterium)、枯草芽抱 桿菌；檸檬桿菌屬(CitrcAacter)，例如弗勞地氏檸檬桿菌(C. freimdii)；腸桿菌屬 (Enterobacter)，例如產氣腸桿菌(E. aerogenes)、陰溝腸桿菌(E. cloacae)，愛德華氏菌 屬(Edwardsiella)，遲鈍愛德華氏菌(E. tarda)；歐文氏桿菌屬(Erwinia)，例如草生歐文 氏桿菌(E. herbicola)；埃希氏菌屬(Escherichia)，例如大腸埃希氏菌(E. coli)；克雷伯 氏菌屬(Klebsiella)，例如肺炎克雷伯氏菌(K. pneumoniae)；變形桿菌屬(Proteus)，例 如，普通變形桿菌(P. vulgaris)；普羅威登斯菌屬(Providencia)，例如斯氏普羅威登斯菌 (P. stuartii)；沙門氏菌屬(Salmonella)，例如鼠傷寒沙門氏菌(S. typhimurium)；沙雷氏 菌屬(Serratia)，例如解凝沙雷氏菌(S. Iiquefasciens)、粘質沙雷氏菌(S. marcescens)； 志賀氏菌屬(Shigella)，例如弗氏志賀氏菌(S. flexneri)；鏈黴菌屬，例如，紫紅鏈
7黴菌(S. violeceoruber)；耶爾森氏菌屬(Yersinia)，例如小腸結腸炎耶爾森氏菌 (Y. enterocolitica)。因此，磷脂酶可以是真菌的，例如，來自核菌綱(Pyrenomycetes)， 例如鐮孢菌屬，例如大刀鐮孢菌(F. culmorum)、異孢鐮孢菌(F. heterosporum)、茄病鐮孢 菌的株或者尖孢鐮孢菌(F. oxysporum)株。磷脂酶也可以是來自麴黴屬內的絲狀真菌 株，例如泡盛曲霄(Aspergillus awamori)、臭曲霄(Aspergillus foetidus)、曰本曲霄 (Aspergillus japonicus)、黑麴黴(Aspergillus niger)或米麴黴(Aspergillus oryzae) 的株。優選的磷脂酶衍生自腐質黴屬(Humicola)的變體，尤其是綿毛狀腐質黴 (Humicola lanuginosa)。磷脂酶可以是變體，例如公開在WO 00/32758中的變體中的一種， 其在此引入作為參考。優選的磷脂酶變體包括列在WO 00/32758的實施例5中的變體，其 特別地在此引入作為參考。在另一個優選的實施方案中，磷脂酶為描述在WO 04/111216中 的一種，尤其是列在實施例1表中的變體。在另一個優選的實施方案中，磷脂酶衍生自鐮孢菌株，尤其是尖孢鐮孢菌。磷脂酶 可以是與W098/(^6057中提及的衍生自尖孢鐮孢菌DSM 2672或其變體中的一種。在本發明的一個優選的實施方案中，磷脂酶為磷脂酶A1 (EC. 3. 1. 1. 32)。在另一個 優選的實施方案中，磷脂酶為磷脂酶A2 (EC. 3. 1. 1. 4)。商業上的磷脂酶的實例包括LECITASE 和LECITASE ULTRA、YIELSMAX或 LIP0PANF (可得自 Novozymes A/S, Denmark)。合適的澱粉酶(α和/或β)包括細菌或者真菌來源的那些。包括化學修飾的 或蛋白質工程化的突變體。澱粉酶包括例如獲自芽孢桿菌屬的α-澱粉酶，例如地衣形芽 孢桿菌(B. Iicheniformis)的特殊株，更詳細地描述在GB 1，296，839中，或者公開在WO 95/026397或者WO 00/060060中的芽孢桿菌屬的株。有用的澱粉酶的實例為描述在WO 94/02597、WO 94/18314、WO 96/23873、WO 97/43424、WO 01/066712、WO 02/010355、WO 02/031124 和 PCT/DK2005/000469 中的變體 (所有參考引入作為參考)。商業上可得的澱粉酶為Duramyl 、Termamyl 、Termamyl Ultra 、Natalase 、 StainzymeTM、Fungamyl 和 BAN (Novozymes A/S)、Rapidase 和 Purastar (來自 Genencor International Inc.)。適合的纖維素酶包括細菌或真菌來源的。包括化學修飾的或蛋白質工程化的突 變體。適合的纖維素酶包括來自以下的纖維素酶杆狀菌屬、假單胞菌屬、腐質黴屬、鐮孢 菌屬、草根黴屬(Thielavia)、支頂孢屬(Acremonium)，例如產生自Humicola insolens、 Thielavia terrestris、嗜熱毀絲黴(Myceliophthora thermophila)和尖孢鐮孢菌的 真菌纖維素酶，公開在 US4, 435，307、US 5，648，263、US 5，691，178、US 5，776，757、WO 89/09259、WO 96/(^9397 和 WO 98/012307 中。特別合適的纖維素酶是鹼性或者中性的具有顏色護理益處的纖維素酶。這樣的 纖維素酶的實例為描述在 EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、W096/29397、WO 98/08940中的纖維素酶。其他的實例為纖維素酶的變體，例如描述在WO 94/07998、EP 0 531 315,US 5, 457, 046,US 5, 686, 593,US 5, 763, 254,WO 95/2447UW0 98/12307 和 PCT/ DK98/00299中的那些。
商業上可得的纖維素酶包括Celluzyme 、Carezyme 、Endolase 、 Renozyme (Novozymes A/S)、Clazinase 禾口 Puradax HA (Genencor International Inc.) 和 KAC-500(B) (Kao Corporation)。適合的過氧化物酶/氧化酶包括植物、細菌或真菌來源的那些。包括化學修 飾的或蛋白質工程化的突變體。有用的過氧化物酶的實例包括來自鬼傘屬(Coprinus) 例如灰蓋鬼傘(C. cinereus)的過氧化物酶及其變體，如描述在WO 93/24618, WO 95/10602和WO 98/15257中的那些。商業上可得的過氧化物酶包括Guardzyme 和 Novozym 51004(Novozymes A/S)。果膠酸裂合酶的實例包括已從不同細菌屬克隆的果膠酸裂合酶，例如歐文氏 桿菌屬、假單胞菌屬、克雷伯氏菌屬和黃單胞桿菌屬(Xanthomonas)，也來自枯草芽孢 桿菌(Nasser 等人(1993)FEBS Letts. 335 :319-326)和芽孢桿菌屬的種 YA-14(Kim 等 人(1994)Biosci. Biotech. Biochem. 58 :947-949)。也已經描述了 短小芽孢桿菌(Dave 和 Vaughn(1971)J. Bacterid. 108 :166-174)、多粘芽孢桿菌(B. polymyxa)(Nage1 和 Vaughn (1961) Arch. Biochem. Biophys. 93 :344-352)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Karbassi 和 Vaughn (1980) Can. J. Microbiol. 26 :377-384)、芽孢桿菌屬的種(Hasegawa 和 Nagel (1966) J. Food Sci. 31 :838-845)以及芽孢桿菌屬的種 RK9 (Kelly 和 Fogarty (1978) Can. J. Microbiol. 24 :1164-1172)產生的在pH8_10範圍具有最大活性的果膠酸裂合酶的純 化。任何上述的，以及二價陽離子-獨立的和/或熱穩定的果膠酸裂合酶也可在本發明 的實踐中使用。在優選的實施方案中，果膠酸裂合酶包含在Heffron等人，(19%)MoI. Plant-Microbe Interact. 8 :331-334 和 Henrissat 等人，(1995)Plant Physiol. 107 963-976中公開的果膠酸裂合酶的胺基酸序列。特別預期的果膠酸裂合酶公開在WO 99Λ7083和WO 99Λ7084中。其他特別預期的果膠酸裂合酶來源於公開在美國專利號 6，284, 524(其文獻在此引入作為參考)中的地衣形芽孢桿菌。特別預期的果膠酸裂合酶變 體公開在W002/006442中，尤其是公開在WO 02/006442實施例中的變體(其文獻在此引入 作為參考)。商業上可得的鹼性果膠酸裂合酶的實例包括來自Novozymes A/S, Denmark的 BI0PREP 禾口 SC0URZYME L。甘露聚糖酶(EC 3. 2. 1. 78)的實例包括細菌和真菌來源的甘露聚糖酶。在一個 具體的實施方案中，甘露聚糖酶衍生自絲狀真菌麴黴菌屬的株，優選黑麴黴或棘孢麴黴 (Aspergillus aculeatus) (W0 94/25576)。W093/24622 公開了從裡氏木黴(Trichoderma reesei)分離的甘露聚糖酶。甘露聚糖酶也已經從幾種細菌中分離，包括芽孢桿菌生物 體。例如，Talbot 等人，Appl. Environ. Microbiol.，Vol. 56，No. 11，pp. 3505-3510(1990) 描述了衍生自嗜熱脂肪芽孢桿菌的β-甘露聚糖酶。Mendoza等人，World J. Microbiol. Biotech.，Vol. 10，No. 5, pp. 551-555 (1994)描述了衍生自枯草芽孢桿菌的β _甘露聚糖 酶。JP-A-03047076公開了衍生自芽孢桿菌屬的種的β-甘露聚糖酶。JP-A-63056289描述 了鹼性熱穩定β-甘露聚糖酶的產生。JP-A-63036775涉及芽孢桿菌微生物FERM Ρ-8856， 其產生β-甘露聚糖酶和β-甘露糖苷酶。JP-A-08051975公開了來自鹼性芽孢桿菌屬的 種AM-OOl的鹼性β-甘露聚糖酶。來自解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) 的純化的甘露聚糖酶公開在WO 97/11164中。W091/18974描述了半纖維素酶，例如葡聚
9糖酶、木聚糖酶或甘露聚糖酶活性的。預期的是在WO 99/6461 9中公開的衍生自解瓊 脂芽孢桿菌(Bacillus agaradhaerens)、地衣形芽孢桿菌、耐鹽嗜鹼芽孢桿菌(Bacillus halodurans)、克勞氏芽孢桿菌(Bacillus clausii)、芽孢桿菌屬的種和特異腐質黴的甘露 聚糖酶鹼性家族5和26。尤其預期的是WO 99/64619中實施例中提及的芽孢桿菌屬的種的 甘露聚糖酶，此文獻在此引入作為參考。商業上可得的甘露聚糖酶的實例包括得自Novozymes A/S，Denmark的 Mannaway 0任何存在於組合物中的酶可以使用傳統的穩定劑來穩定，例如多元醇，如丙二醇 或甘油，糖或者糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如，芳香族硼酸酯或者苯基硼酸衍生物， 例如4-甲醯基苯基硼酸，並且組合物可如在例如WO 92/19709和WO 92/19708中描述的配 制。為了進一步理解和實踐本發明，參考如下非限制實施例來進一步描述。 實施例實施例1 樣品的製備下列物種用於形成「單一物種」的樣品多年生黑麥草(Lolium perenne)-多年生黑麥草(低石碳酸草)Festuca pratensis-牧場羊茅草(高石碳酸草)紅三葉草(紅苜蓿)下列物種被用於形成六個物種的「複合物種樣品」，其在同一衣物上包含六種不同 的汙跡。多年生黑麥草(Lolium perenne)(黑麥草)Aberglyn品種Festuca rubra (紫羊茅)Cezanne 品種Agrostis (彎草)白三葉草(白苜蓿)Aber Dai品種白三葉草(白苜蓿)Aber Ace品種西洋蒲公英(Taraxacumofficinale)(蒲公英)全部植物在標準溫室狀況下生長。由於植物生命周期的植物發展，細胞壁/原生 質體/等的生理學和生物化學組成不同。為了一致的目的，要求在控制條件下生長。對於 汙跡產生來說，白色棉和聚酯織物被密封在2-4cm直徑的汙跡模具的板之間。一小串植物 葉子材料被成形為2釐米的球形並且以圓周運動在織物上磨擦15秒，直到獲得均勻的汙 跡。在複合物種樣品的情況下，用獲自大量不同植物的材料重複這一過程，以獲得帶有多種 不同植物汙跡的單一樣品。在清洗之前，將汙跡在黑暗和室溫下老化三天。實施例2 樣品的使用在如下所述的條件下，在Tergotometer 中清洗汙跡溫度=37 0C時間=30分鐘攪拌=IOOrpm
清洗液=11水硬度=6° FH產品劑量(PersilBio/Non-)= 6. 6g/l液體衣物=40 1漂洗=在21軟化水(FH6)中2X2分鐘乾燥=ο/η和在室溫/在黑暗中光譜測量=HunterLab ( Δ Ε)使用的洗滌劑為PerSilTMBio和非Bio粉末。在清洗前和後，使用相對於清潔的棉 和聚酯織物校準的HimterLab ，獲得草汙跡的I^Vb和ΔΕ的值。獲得的結果列在下面的表中表 權利要求
1.具有0.25m2至4X 10_6m2面積的織物樣品，所述樣品在一個或多個在其表面的至 少0. 上的斑點中被包含葉綠體材料的碎片汙染，其中存在於斑點中的至少80% wt的 該葉綠體材料來自單一物種的綠色植物，該綠色植物選自下面的屬冰草屬(Agropyron)、 剪股穎屬(Agrostis)、擬南芥屬(Aradopsis)、燕麥草屬(Arrhenatherum)地毯草屬 (Axonopus)、雛菊屬(Belliss)、孔穎草屬(Bothriochloa)、格蘭馬草屬(Bouteloua)、青 蘚屬(Brachythecium)、果香菊屬(Chamaemelum)、龍爪茅屬(Dactyloctenium)、卷耳屬 (Cerastium)、金須茅屬(Chrysopogon)、還陽參屬(Cr印is)、狗牙根屬(Cynodon)洋狗尾草 屬(Cynosurus) >i-I^M (Dactylis) ,M^-M (Deschampsia) > Lij^ilM (Desmodium)、雙# 草屬(Dichanthium)、馬蹄金屬(Dichondra)、馬唐屬(Digitaria)、鹽草屬(Distichlis)、 披鹼草屬(Elymus)、偃麥草屬(Elytrigia)、畫眉草屬(Eragrostis)、蜈蚣草屬 (Eremochloa)、美喙蘚屬(Eurhynchium)、羊茅屬 Rescue)、海氏草屬(Hilaria)、絨毛草 屬(Holcus)、天胡荽屬(Hydrocotyle)、貓兒菊屬(Hypochaeris)、鴨嘴草屬(Ischaemum)、 AIM (Koeleria) > Leptinella> H^^M (Lolium)、: M (Luzula) > Microlaena> 雀稗屬(I^aspalum)、狼尾草屬(Pennisetum)、梯牧草屬(Phleum)、過江藤屬(Phyla)、車 前屬(Plantago)、早熟禾屬(Poa)、單序草屬(Polytrias)、銅錘玉帶屬Gratia)、夏枯草 屬 O^runella)、鹼茅屬(Puccinellia)、毛茛屬(Ranunculus)、酸模屬(Rumex)、千裡光屬 (Senecio)、鈍葉草屬(Stenotaphrum)、蒲公英屬(Taraxacum)、三葉草屬(Trifolium)、三 毛草屬(Trisetum)、尾稃草屬⑴rochloa)和/或結縷草屬(Zoysia)。
2.根據權利要求1的樣品，其中所述織物為纖維質的、聚酯或其混合物。
3.根據前述權利要求任一項的樣品，其中剩餘20%wt的碎片來自不超過五種，優選三 種，優選一種其它的物種。
4.根據前述權利要求任一項的樣品，其中至少一個斑點衍生自單一物種。
5.根據前述權利要求任一項的樣品，其中所述碎片來自以下物種中的一種或多 種普通剪股穎(Agrostis canina)、細弱剪股穎(Agrostis capillaris)、華北剪股穎 (Agrostis clavata)>Agrostis curtisii、 巨序剪股穎(Agrostis gigmtea)、旱地翦股穎 (Agrostis castellana)、Agrostis mertensii、Agrostis scabra、匍匍剪月受穎(Agrostis stolonifera)、Agrostis tenuis、Agrostis palustris、Agrostis vineale、紫羊茅 (Festuca rubra)、多年生漂麥草(LoIium perenne)、白三葉草(Trifolium repens)、雛 菊(Bellis perennis)、西洋蒲公英(Taraxacum officinale) Λ Eurhynchium praelongum、 卵葉青薛(Brachythecium rutabulum)、甸枝毛莫(Ranunculus repens)、線毛草(Ho Icus lanatus)、普通早熟禾(Poa trivialis)、草地早熟禾(Poa. pratensis)和一年生早熟禾 (Poa. Annua)。
6.製備根據權利要求1-5中任一項的樣品的方法，其包括用含葉綠體的綠色植物碎片 接觸片狀形式的具有大於4X10_6m2的面積的織物基底的步驟，其中至少80%的碎片來自 單一物種的不是茶或者菠菜的綠色植物。
7.測定洗衣組合物效力的方法，其包括用該洗衣組合物處理根據權利要求1-5中任一 項的樣品的步驟。
8.根據權利要求7的方法，其中所述洗衣組合物包含至少一種酶。
9.根據權利要求7的方法，其中所述洗衣組合物包含多種酶。
全文摘要
具有0.25m2至4×10-6m2面積的織物樣品，所述樣品在一個或多個在其表面的至少0.1％上的斑點(patch)中被包含葉綠體材料的碎片汙染，其中存在於斑點中的至少80％wt的葉綠體材料來自單一物種的綠色植物，其選自下面的屬冰草屬(Agropyron)、剪股穎屬(Agrostis)、擬南芥屬(Aradopsis)、燕麥草屬(Arrhenatherum)、地毯草屬(Axonopus)、雛菊屬(Belliss)、孔穎草屬(Bothriochloa)、格蘭馬草屬(Bouteloua)、青蘚屬(Brachythecium)、果香菊屬(Chamaemelum)、龍爪茅屬(Dactyloctenium)、卷耳屬(Cerastium)、金須茅屬(Chrysopogon)、還陽參屬(Crepis)、狗牙根屬(Cynodon)、洋狗尾草屬(Cynosurus)、鴨茅屬(Dactylis)、發草屬(Deschampsia)、山螞蝗屬(Desmodium)、雙花草屬(Dichanthium)、馬蹄金屬(Dichondra)、馬唐屬(Digitaria)、鹽草屬(Distichlis)、披鹼草屬(Elymus)、偃麥草屬(Elytrigia)、畫眉草屬(Eragrostis)、蜈蚣草屬(Eremochloa)、美喙蘚屬(Eurhynchium)、羊茅屬(Fescue)、海氏草屬(Hilaria)、絨毛草屬(Holcus)、天胡荽屬(Hydrocotyle)、貓兒菊屬(Hypochaeris)、鴨嘴草屬(Ischaemum)、洽草屬(Koeleria)、Leptinella、黑麥草屬(Lolium)、地楊梅屬(Luzula)、Microlaena、雀稗屬(Paspalum)、狼尾草屬(Pennisetum)、梯牧草屬(Phleum)、過江藤屬(Phyla)、車前屬(Plantago)、早熟禾屬(Poa)、單序草屬(Polytrias)、銅錘玉帶屬(Pratia)、夏枯草屬(Prunella)、鹼茅屬(Puccinellia)、毛茛屬(Ranunculus)、酸模屬(Rumex)、千裡光屬(Senecio)、鈍葉草屬(Stenotaphrum)、蒲公英屬(Taraxacum)、三葉草屬(Trifolium)、三毛草屬(Trisetum)、尾稃草屬(Urochloa)和/或結縷草屬(Zoysia)。這些樣品具有研究用於洗衣過程的洗滌劑組合物(特別是包含酶的組合物)的用途。
文檔編號C11D3/386GK102112863SQ200980130613
公開日2011年6月29日 申請日期2009年7月20日 優先權日2008年8月1日
發明者I·豪厄爾, P·科特薩基斯 申請人:荷蘭聯合利華有限公司