來源於王棕(Roystonearegia)果實的用於治療和預防前列腺增生和前列腺炎的藥物組...的製作方法
2023-08-10 13:03:46 1
專利名稱：來源於王棕(Roystonea regia)果實的用於治療和預防前列腺增生和前列腺炎的藥物組 ...的製作方法
技術領域：
本發明涉及製藥工業，特別涉及來源於王棕(Roystonea regia)果實的用於預防和/或治療良性前列腺增生(BPH)和前列腺炎的新的藥物組合物和方法。本發明組合物包含游離脂肪酸和/或其酯的混合物。脂肪酸和/或酯在8和28個碳原子之間，特別是在8和18個碳原子之間的範圍。更具體地，混合物含有8，10，12，14，16和18個碳原子的飽和直鏈脂肪酸及16∶1和18∶1碳原子的單不飽和脂肪酸。由酯水解富集游離的脂肪酸。
從王棕(Roystonea regia)果實獲得這種組合物，首先乾燥和研磨該果實，對該植物性材料進行中度鹼性水解直至獲得皂化產物，用有機溶劑進行選擇性提取，或者對脂肪酸混合物進行選擇性提取。兩種方法都產生了具有藥理學特性的組合物，該組合物與沒有先進行皂化獲得的提取物相似。
因此，所獲得的混合物與用於治療BPH和前列腺炎及其它疾病諸如脫髮症和多毛症的藥物不同製劑中含有的活性組分相似。
本發明涉及製藥工業，因為可以使用或者在藥物製劑中使用所獲得的藥物組合物，用做治療BPH，前列腺炎，脫髮症和多毛症的藥物。
背景技術：
前列腺是位於緊鄰膀胱下面的腺體，並且BHP是在50％以上50歲以上男性中存在的一種疾病。BPH包括腺體的肌肉纖維和上皮結構的增大，這可以引起尿路梗阻，而尿路梗阻通常需要手術以改進尿滯留症狀，諸如(Madsen和Bruskewitz，CurrOpinion Nephrol Hipert 4455-459，1995)中所包括的排尿紊亂，夜尿症症狀。同時手術，特別是經尿道切除術已經成為患有這種病狀患者的普通治療手段，最近已經出現了許多其它可選擇的治療手段(Oesterling，New Engl.J.Med 33299-109，1995；Geller等，J.Clin.Endocrinol Metab.80，745-756，1995)，這些手段包括非侵入性手術方法和不同的藥物治療，象5α-還原酶抑制劑(Boyle等.Urology；48398-405，1996)，α-腎上腺素能受體拮抗劑和植物藥療法提取物。
男性性激素，主要是睪酮在這種疾病的病理病原學中起到非常重要的作用，睪酮通過5α-還原酶轉化為其更具活性的衍生物，雙氫睪酮(DHT)，其結合腎上腺素能受體，因此促進蛋白質合成和隨後的細胞生長。因此，增加活性的5α-還原酶可以產生BPH，因為患有這種病狀的患者顯示了4到6倍增加水平的DHT。
BPH的精確的病因未知，但是明顯依賴於睪丸的存在，並且隨著年齡增長其頻率增加。參與前列腺生長的雄激素是DHT，其在前列腺中形成，來源於睪酮，通過5α-還原酶催化反應。已經進行的研究證明前列腺生長直接與DHT水平增加有關。另一方面，在試驗模型中，在50歲以上的男性中，雌二醇的產生比雄激素增加了，發現雌激素與DHT協同作用以誘導前列腺增生。
BPH症狀與煩擾患者的尿道梗阻或疼痛發炎有關。在這些症狀中，包括下面的症狀夜尿症、排尿困難、減少量和濃度的尿流、不完全排盡的感覺和尿滯留。這些症狀的大多數症狀是逐漸開始的，但是當疾病發展時，症狀惡化，必需施用藥物治療。
因此，已經廣泛地使用了α-腎上腺素能受體拮抗劑，象阿夫唑嗪(alfuzosin)，多沙唑嗪，特拉唑嗪(Chapple，Eur.Urol 29，129-144，1996)和幾種植物提取物用於治療BPH。目前，植物藥療法產品通常在歐洲和美國，佔開處方用於BPH治療的所有藥物的80％。
特別地，來源於鋸櫚(Sabal serrulata，syn.Serenoa repens)果實和來源於蕁麻屬(Urtica dioica)根的提取物是普遍的。進行了雙盲對照臨床試驗以比較鋸櫚提取物和5α-還原酶潛在抑制劑的非那甾胺(finasteride)的作用，表明治療6個月後兩種治療方法之間相似的效力(Carraro等，Prostate 29，231-240，1996；Marks等Journal ofUrology 1631451-1456，2000)。另一方面，來源於蕁麻屬(Urtica dioica)根的提取物臨床上已經用於治療BPH。一些組織學和生物學數據證明根提取物對依賴於雄激素的前列腺細胞生長的作用。
沒有完全闡明鋸櫚的作用機理，並且看起來包括一個以上的機理。因此，研究證明它可以對α-腎上腺素能受體施加非競爭性抑制作用，表明與坦索羅辛(tamsulosin)相似的機理。其它的作者認為鋸櫚允許上皮收縮，可能是由於腺體破裂，表明與非那甾胺(finasteride)相似的機理，包括5α-還原酶的抑制，這看似是基本的機理(Niederprum等1，Annals N.Y.Acad Sci，768，227-30，1995)。
雄激素脫髮症在男性和女性中是常見的，是雄激素依賴型的，因為無發直接與5α-還原酶的水平有關，無發相關的雄激素是DHT，通過該酶作用從睪酮產生該DHT。因此，在無發男性的前部檢測到了增加水平的5α-還原酶(Bingham KD等，J.Endocrinology 57，111，1973)，而具有5α-還原酶缺陷綜合症的男性沒有患頭髮損失疾病(Ebling FJ，Clin Endocrinol Metab 319，1986)。
證明了頭髮損失是青春期後可以很快開始的廣泛分布的特徵，這是為什麼必須開發用於預防男性和女性中無發的產品。
如所知道的，來源於鋸櫚的脂質提取物抑制DHT激素產生，阻斷50％DHT與受體的結合位點和其進入前列腺細胞的核，強烈地抑制5α-還原酶活性。因此，在脫髮症的治療中使用了這種物種的果實提取物(WO9702041，USA 6,019,976和WO9833472)。
根據不同報導的方法(EPO541853，EPO492305，EPO250953，USA專利6,039,950，Cristoni，Fitoterapia 68，355，1997；DeSwaef Nat Prod Letters 7，223，1996)，商業上用於治療BPH的來源於鋸櫚的提取物是脂肪酸混合物，含有從植物果實獲得的固醇和高分子量醇類。幾乎沒有作者報導過如本發明權利要求書中獲得棕櫚科(Acecacee)果實，在本發明中是王棕(Roystonea regia)果實的這樣簡單和經濟的方法。
發明內容
用於製備本發明目的組合物的方法是基於乾燥王棕(Roystonea regia)成熟果實。研磨幹的果實直至獲得細粉，顆粒大小＜5000μm。隨後用鹼，鹼土和有機氫氧化物，特別是用低分子量氫氧化物，更特別是用氫氧化鈉、鉀、鈣或銨對該粉末進行鹼性水解，或者不對該粉末進行鹼性水解；接著在有機溶劑或具有CO2的超臨界下進行選擇性提取。
在常規固液抽提器中提取水解或沒有水解的植物性材料，其中通過在適當的溶劑，象1到3個碳原子的醇類和5到8個碳原子的碳氫化合物中進行選擇性提取，分離脂肪酸和/或酯與果實中存在的其它成分。在這些溶劑中，包括甲醇、乙醇、2-丙醇、己烷、戊烷、異戊烷、庚烷和辛烷。
獲得的產量在5和20％之間。獲得的酸混合物的組分包含12，14，16和18個碳原子的飽和酸及具有16∶1和18∶1碳原子的不飽和酸，在表1中報導了它們的定性和定量組分。
表1王棕(Roystonea regia)脂質提取物中存在的脂肪酸組分
*定量為層析峰總量，其中油酸洗脫物(60-70％的峰)，亞麻酸(25-40％的峰)和亞麻酸(＜10％的層析峰)。
按照本發明，從王棕(Roystonea regia)果實獲得的物質的全面估測表明這種組合物是非常安全的，並且具有良好的耐受性，通過在齧齒動物中進行的毒性實驗結果支持了有關的優點，該實驗表明沒有物質相關的毒性。
參考但不限於下面的實施例，將詳細地描述本發明的目的。
具體實施例方式
實施例1摘取5kg王棕(Roystonea regia)的新鮮果實，並且放置在可控溫度45℃下的烤箱中7天。在研磨機中，將乾燥的果實研磨成1500和2000μm之間的顆粒大小，並且從這種粉末中取樣1000g，放在攪拌反應器中，進行鹼水解。後來，用10L己烷提取產物，加熱到55℃，並且連續攪拌36小時。然後，利用真空，在50℃過濾產物，並且蒸發到乾燥。獲得的提取物重量是98.5g，表2表示通過氣相層析測定的它的組分。
表2王棕(Roystonea regia)脂質提取物中存在的脂肪酸組分
實施例210kg王棕(Roystonea regia)的新鮮果實放置在可控溫度45℃下的烤箱中7天。在研磨機中，將乾燥的果實研磨成＜1500μm顆粒大小，並且從這種粉末中取樣1500g，進行鹼水解。後來，在60℃，在含有10L乙醇的Sxhlet抽提器中提取產物48小時。然後，利用真空，在50℃移除有機溶液，過濾並且蒸發到乾燥。稱重所獲得的提取物，並且通過氣相層析分析該提取物，表3中列出了它的組分。
表3王棕(Roystonea regia)脂質提取物中存在的脂肪酸組分
實施例3摘取5kg王棕(Roystonea regia)的新鮮果實，並且放置在可控溫度45℃下的烤箱中7天。在研磨機中，將乾燥的果實研磨成1500和2000μm之間的顆粒大小，並且從這種粉末中取樣100kg，進行鹼水解。後來，在60℃，在含有10L己烷的攪拌反應器中提取產物，同時連續攪拌50小時。然後，利用真空，在65℃移除溶劑，並且蒸發到乾燥。稱重所獲得的提取物，並且通過氣相層析分析該提取物，表4中表示所概述的組分。
表4王棕(Roystonea regia)脂質提取物中存在的脂肪酸組分
實施例4摘取5kg王棕(Roystonea regia)的新鮮果實，並且放置在可控溫度45℃下的烤箱中7天。在研磨機中，將乾燥的果實研磨成1000和1800μm之間的顆粒大小，並且從這種粉末中取樣1000g，用氫氧化銨處理直到弄溼所有的粉末。後來，在55℃，在含有10L己烷的攪拌反應器中提取產物，同時連續攪拌36小時。然後，利用真空，在50℃移除溶劑，並且蒸發到乾燥。稱重所獲得的提取物，並且通過氣相層析分析該提取物，表5中表示所概述的組分。
表5王棕(Roystonea regia)脂質提取物中存在的脂肪酸組分
實施例5為了評估來源於王棕(Roystonea regia)果實的脂質提取物的作用，使重量在30和40g之間的OF1雄性魚眼石(albine)小鼠適應具有可控溫度(25±2℃)和溼度的實驗室條件7天。在適應期間後，隨機將動物分配在不同試驗組中。在Tween-20/H2O載體中懸浮來源於王棕(Roystonea regia)的提取物，並且口服施用治療(5mL/kg)，用載體處理對照動物。在植物油中溶解貯藏的睪酮，並且以100mg/kg，單次給藥通過肌內(i.m)途徑注射它。動物被隨機分配在下面的組中1)陰性對照組；2)陽性對照組(用睪酮注射和用載體口服施用的動物)；3，4和5)通過肌內(i.m)途徑用睪酮注射和分別以200，400和800mg/kg王棕(Roystonea regia)果實提取物口服治療的動物和6)用睪酮注射和以400mg/kg的鋸櫚果實提取物口服給藥的動物。
一旦試驗結束，就處死給藥期間(14天)的小鼠，通過在腹部中線開口剖開它們的腹部，分離前列腺並且稱重。通過Mann Whitney U檢驗完成處理和對照組之間的比較。表6表示該結果。
如所觀察到的，與陰性對照組比較，肌內注射的貯藏睪酮(100mg/kg)產生了顯著增加的前列腺重量及前列腺重量與體重的比率。
表6來源於王棕(Roystonea regia)果實的脂質提取物對患有誘導型前列腺增生(PH)小鼠的作用
BW體重(g)，PW前列腺重量(mg)，％I抑制百分比，+++p＜0.001 Sham vs對照，Mann Whitney U檢驗，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001比較vs對照。
用本發明組合物口服治療2周(200-800mg/kg)顯著地和依賴於劑量地抑制了睪酮誘導的前列腺大小的增加，最高劑量(800mg/kg)獲得了92.7％的抑制，也顯著地和依賴於劑量地抑制了前列腺重量/體重比率的增加，用800mg/kg達到了96.6％的抑制。另一方面，重複劑量的鋸櫚(400mg/kg)治療抑制了前列腺增大62％，並且減少了PW/BW比率59％，沒有王棕(Roystonea regia)果實提取物有效，王棕(Roystonea regia)果實提取物在相似的劑量分別產生了77和72％的抑制。
該試驗中獲得的結果證明了在小鼠BPH中王棕(Roystonea regia)果實脂質提取物的效力，表明依賴於劑量的前列腺大小的減小，在400mg/kg達到了96.6％的抑制百分比，獲得了比用相似劑量鋸櫚誘導的抑制百分比更高的抑制百分比。
實施例6為了評估來源於王棕(Roystonea regia)果實的脂質提取物的作用，使重量在250和270g之間的Sprague Dawley雄性大鼠適應具有可控溫度(25±2℃)和溼度的實驗室條件7天。適應期間後，隨機將動物分配在不同試驗組中。
在Tween-20/H2O載體中懸浮來源於王棕(Roystonea regia)果實的提取物，並且口服施用治療(5mL/kg)，給對照動物施用載體。在植物油中溶解貯藏的睪酮丙酸酯，並且以4mg/kg，通過皮下(sc)途徑注射它14天。
動物被隨機分配在6個試驗組中1)陰性對照組+(植物油)；2)對照組(載體)+睪酮；3，4和5)以50，200和400mg/kg的王棕(Roystonea regia)果實提取物+睪酮。一旦試驗結束，就處死給藥期間(2周)的大鼠，並且使其流更多的血，通過在腹部中線開口剖開它們的腹部，分離前列腺並且稱重。通過Mann Whitney U檢驗完成處理和對照組之間的比較。表7表示該結果。
表7來源於王棕(Roystonea regia)果實的脂質提取物對患有誘導型前列腺增生(PH)大鼠的作用
BW體重(g)，PW前列腺重量(mg)，％I抑制百分比，++++p＜0.0001 Sham vs對照，*p＜0.05，**p＜0.01，***比較vs對照，Mann Whitney U檢驗。
如所觀察到的，與陰性對照比較，用睪酮4mg/kg皮下注射14天顯著增加了前列腺重量和前列腺量/體重的比率。用王棕(Roystonea regia)和鋸櫚(400mg/kg)果實提取物口服給藥2周顯著地抑制了睪酮注射誘導的前列腺大小的增加，分別獲得了41和58％的抑制百分比。在400mg/kg，王棕(Roystonea regia)提取物也顯著地降低了前列腺重量/體重的比率，獲得了45％的抑制。
在該研究中所獲得的結果表明用王棕(Roystonea regia)果實提取物以400mg/kg治療睪酮處理的大鼠14天引起了兩個處理組相似的相對於體重的前列腺大小增加的抑制(45％)，有利於王棕果實提取物的潛在的治療用途。
實施例7為了評估來源於王棕(Roystonea regia)果實的提取物的作用，使重量在250和270g之間的Sprague Dawley雄性大鼠適應具有可控溫度(25±2℃)和溼度的實驗室條件7天。適應期間後，隨機將動物分配在不同試驗組中。在植物油中溶解睪酮丙酸酯，並且通過皮下途徑，每日3和4mg/kg給藥14天。
在Tween-20/H2O載體中懸浮來源於王棕(Roystonea regia)果實的提取物，並且口服施用治療(5mL/kg)，給對照動物施用載體。
用3mh/kg睪酮處理的大鼠被分配在5個試驗組中1)陰性對照組+(植物油)；2)陽性對照組(載體)+睪酮；3，4)D-004 50和200mg/kg+睪酮；5)鋸櫚200mg/kg+睪酮。接著，用4mg/kg睪酮處理的動物被分配在6個試驗組中1)陰性對照組+(植物油)；2)對照組(載體)+睪酮；3，4，5)以50，200和400mg/kg的王棕(Roystonea regia)果實提取物+睪酮；5)鋸櫚400mg/kg+睪酮。給藥所有的口服治療14天。表8和表9表示結果。
表8來源於王棕(Roystonea regia)果實的脂質提取物對患有誘導型前列腺增生(PH)大鼠的作用劑量處理
BW體重(g)，PW前列腺重量(mg)，++p＜0.01；+++p＜0.001比較vs Sham，*p＜0.05，ap＝0.05比較vs對照(Mann Whitney U檢驗)。
表9來源於王棕(Roystonea regia)果實的脂質提取物對患有誘導型前列腺增生(PH)大鼠的作用
BW體重(g)，PW前列腺重量(mg)，％I抑制百分比，++p＜0.01；+++p＜0.001比較vs Sham；*p＜0.05；tp＝0.06比較vs對照(Mann Whitney U檢驗)。
實施例8在研究中使用4和5kg之間體重的兔子。在用王棕(Roystonea regia)果實提取物治療的基線和治療後測定每隻兔子的毛髮生長。在用王棕(Roystonea regia)果實提取物口服治療前，期間和後進行毛髮測定，每次測量之間有4周間隔。每隻動物鎮靜後，剪切背部大約1平方英寸的面積，稱重該面積的毛髮。
剪毛的兔子被分配在5隻兔子一組的4個小組中，第1組的兔子接受每天一次400mg的王棕(Roystonea regia)提取物日常給藥，而第2組的兔子接受每天一次載體的日常給藥。接著，第3組的兔子接受分兩次200mg劑量，每天400mg的王棕(Roystonea regia)提取物日常給藥，第4組的兔子接受分2次給藥的載體，如第3組一樣。
利用方差分析比較比較組之間在所標記的區域出現的毛髮生長重量的變化，和利用Wilcoxon檢驗比較組內成對樣品的變化。
p＜0.05，認為該變化是顯著性差異。
該研究的結果證明第1組和3組兔子的毛髮生長顯著優於第2和4組兔子的毛髮生長，也優於最初的毛髮生長，證明王棕(Roystonea regia)提取物可以用於治療脫髮症。
權利要求
1.從綠色或成熟王棕(Roystonea regia)果實獲得的藥物組合物，其包含具有8到28個碳原子的初級脂肪酸混合物，包含下面的脂肪酸辛酸(C8:0)，癸酸(C10:0)，月桂酸(C12:0)，肉豆蔻酸(C14:0)，棕櫚酸(C16:0)，棕櫚油酸(C16:1)，硬脂酸(C18:0)和油酸(C18:1)(其包含油酸本身，亞油酸和亞麻酸)，及這些脂肪酸酯的混合物，從酯水解富集游離的脂肪酸。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其包含一級脂肪酸和其酯的混合物，其特徵在於脂肪酸中下面的組分王棕(Roystonea regia)果實的脂質提取物中存在的脂肪酸混合物辛酸(C8:0)＜3.0癸酸(C10:0) ＜3.0月桂酸(C12:0) 3.0-40.0％肉豆蔻酸(C14:0) 4.0-15.0％棕櫚酸(C16:0) 10.0-80.0％棕櫚油酸(C16:1) 1.5-20.0％硬脂酸(C18:0) 0.1-5.0％油酸(C18:1) 3.0-50.0％
3.如權利要求1或2所述的含有脂肪酸混合物的藥物組合物用於BPH，前列腺炎，脫髮症和多毛症的治療。
4.一種製備權利要求1，2或3所述獲自王棕(Roystonea regia)的藥物組合物的方法，該方法包括乾燥、研磨和過篩王棕(Roystonea regia)果實，通過在有機溶劑，象5到8個碳原子的碳氫化合物，1到3個碳原子的醇類及它們的混合物中的固/液提取，進一步分離提取物與其它成分，可以有或沒有利用氫氧化合物或鹼進行的先行鹼性水解。
5.如權利要求4所述的製備方法，包括在10和100C之間的溫度乾燥王棕(Roystonea regia)果實1和1000個小時之間的時間範圍，在適合的研磨機中進一步研磨，以獲得＜6000μm的顆粒大小，活性提取物成分的提取時間範圍是1和50h之間，溫度是0和70℃之間。
6.如權利要求4或5所述的製備方法，其特徵在於使用鹼性氫氧化物或鹼土氫氧化物和有機氫氧化物進行鹼性水解，特別是低分子量的鹼性氫氧化物或鹼土氫氧化物和有機氫氧化物，更具體地是氫氧化鈉、鉀、鈣或銨進行鹼性水解。
7.如權利要求4或5所述的製備方法，其特徵在於使用碳氫化合物象戊烷、己烷或辛烷製備含有脂肪酸混合物的提取物。
8.如權利要求4或5所述的方法，其特徵在於使用醇類象甲醇、乙醇、正丙醇和2-丙醇製備含有脂肪酸混合物的提取物。
9.如權利要求1，2和3中任一權利要求所述的藥物組合物用做BPH，前列腺炎，脫髮症和多毛症治療中的藥物。
10.如權利要求1或2所述的有或無皂化的藥物組合物，其特徵在於在治療和/或預防BPH，前列腺炎，脫髮症和多毛症中它的用途。
11.如權利要求1，2或3中任一權利要求所述的藥物組合物用做BPH，前列腺炎，脫髮症和多毛症治療中的藥物。
12.如權利要求1，2或3中任一權利要求所述的有或無皂化的藥物組合物，其特徵在於在治療和/或預防BPH，前列腺炎，脫髮症和多毛症中它的用途。
13.如權利要求1，2，3，10，11或12中任一權利要求所述的有或無皂化的藥物組合物，其特徵在於在治療和/或預防BPH，前列腺炎，脫髮症和多毛症中它的用途，其日常劑量是50到1000mg，具體地製成150和1000mg之間的劑量，做為固體口服形式(膠囊、軟膠囊、片劑)或液體(乳液)，栓劑或酊劑，局部作用的洗液或洗髮劑施用。
全文摘要
本發明涉及來源於王棕(Roystonea regia)果實的用於預防和/或治療良性前列腺增生(BPH)和前列腺炎及脫髮症和多毛症的新的藥物組合物和方法。本發明組合物包含游離脂肪酸和/或其酯的混合物，脂肪酸和/或酯在8和28個碳原子之間，特別是在8和18個碳原子之間的範圍。更具體地，混合物含有8，10，12，14，16和18個碳原子的飽和直鏈游離脂肪酸及16∶1和18∶1碳原子的單不飽和游離脂肪酸。本發明製備前述組合物的方法包括乾燥和碾碎果實，可選的進行鹼性水解，隨後在有機溶劑中進行選擇性提取。
文檔編號A61K131/00GK1761476SQ200480007188
公開日2006年4月19日 申請日期2004年3月15日 優先權日2003年3月20日
發明者阿比利奧·梅爾基亞德斯·拉古那·格蘭雅, 愛德華多·安東尼奧·羅德裡基茲, 羅薩·瑪莉亞·馬斯·費雷羅, 戴西·卡巴亞爾·魁恩塔那, 瑪莉亞·德勞德斯·阿魯薩薩巴拉·沃爾瑪那, 維維安·莫利那·庫維斯, 維克多·魯斯·岡薩雷斯·凱那維西奧羅 申請人:戴爾莫實驗室股份有限公司