一種含有植物腫節風有效成分的藥物及其製備方法和應用的製作方法
2023-07-30 20:22:31 1
專利名稱：一種含有植物腫節風有效成分的藥物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及植物藥物腫節風，更具體的說是腫節風有效部位和其有效成分單體及其由兩者單獨或分別與其它植物提取物或化合物混合製成的各種製劑及其製備方法和它們在抗腫瘤、抗腫瘤的增效減毒及抗血小板減少性紫癜、抗菌抗炎方面的應用。
背景技術：
腫節風(Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai)為金粟蘭科草珊瑚屬植物乾燥全草，又名草珊瑚、九節茶、接骨木、駁骨茶、骨消風等。為多年生常綠草本，分布於江西、安徽、浙江、湖南、湖北、四川、廣東、廣西等省，江西省為主要產地。腫節風有活血祛瘀、止痛、清熱解毒等功效。用於治療常見炎症(包括咽喉炎、氣管支氣管炎、肺炎、角膜炎、蜂窩組織炎、闌尾炎)、風溼性關節炎。近代用於癌症輔助治療。對多種惡性腫瘤如胃癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、直腸癌等均有療效。現有文獻報導腫節風含黃酮類、香豆素、有機酸、揮髮油、三萜，倍半萜類、酚類等多種成分。《中國藥典》2000年版和2005年版收載了腫節風片、血康口服液、草珊瑚含片3個製劑。腫節風片(腫節風浸膏製成)用於肺炎、闌尾炎、蜂窩組織炎，並可用於癌症輔助治療。血康口服液用於血小板紫癜，可升高血小板。草珊瑚含片用於咽喉炎。《衛生部藥品標準》收載了腫節風注射液製劑。腫節風注射液同樣用於肺炎、闌尾炎、蜂窩組織炎，癌症輔助治療。這4個製劑均屬於總提取物的粗製劑，不是有效部位和單體化合物的製劑，而且有效成分不明確。
發明內容
本發明的目的在於克服已有技術的不足，提供一種腫節風有效部位和其有效成分單體及其由兩者單獨或分別與其它植物提取物或化合物混合製成的各種製劑的抗腫瘤、抗腫瘤的增效減毒及抗血小板減少性紫癜、抗菌抗炎的應用。
本發明解決上述技術問題所採用的技術方案為一種含有植物腫節風有效成分的藥物，其特徵在於所述的有效成分是腫節風有效部位總多酚；所述的有效成分是腫節風有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
製備所述的腫節風有效部位總多酚包括如下步驟腫節風總提取物的提取
乙醇回流提取取腫節風藥材粗粉，用35％～70％乙醇10～15倍量作溶劑，浸漬1小時後，加熱回流提取3～4次，每次1～2小時，合併回流液，濃縮後得腫節風總提取物；或乙醇滲漉提取取腫節風藥材粗粉，用35％～70％乙醇10～15倍量作溶劑，浸漬1小時後進行滲漉直到滲漉液無色，合併滲漉液，濃縮後得腫節風總提取物；或水煎煮提取取腫節風藥材粗粉加10～15倍量水煎煮，每次1～2小時，濾過，濾液合併，濃縮後腫節風總提取物；腫節風有效部位總多酚的製備上述方法提取的腫節風總提取物溶解於水中，用正丁醇萃取，合併萃取液，濃縮後得正丁醇萃取物，正丁醇萃取物經大孔吸附樹脂柱層析，先用水洗脫後再用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，減壓濃縮後得浸膏。將浸膏溶解於少量25％乙醇中，經反相矽膠柱層析，先用水洗脫，後用10％乙醇洗脫，再用25％乙醇洗脫，收集25％乙醇洗脫液；濃縮和乾燥腫節風總提取物和腫節風總多酚的濃縮方法可用薄膜濃縮或減壓濃縮，乾燥方法可用真空乾燥或噴霧乾燥或冷凍乾燥，濃縮並乾燥後得腫節風總多酚；製備所述的腫節風有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯包括如下步驟將腫節風總多酚溶解於少量25％乙醇中，經反相矽膠柱層析，先用水洗脫，後用25％乙醇洗脫，分段收集25％乙醇洗脫液，用高效液相色譜檢測每個組分，將含有單一成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的組分合併，濃縮並乾燥後得單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯；或試藥3，4-二羥基苯乙酸，咖啡酸，亞硫醯二氯，四氫鋁化鋰，二環己基碳二亞胺，無水甲醇，無水四氫呋喃，酒石酸，無水硫酸鈉；方法3，4-二羥基苯乙醇的合成將3，4-二羥基苯乙酸溶於無水甲醇中，在0℃條件下逐滴加入亞硫醯二氯並攪拌15分鐘後，於室溫下放置16小時並不停攪拌；反應物經減壓濃縮後，其殘留物溶於無水四氫呋喃中，分部加入四氫鋁化鋰後，於室溫下放置16小時並不停攪拌；反應物倒入5％酒石酸溶液中，用乙酸乙酯萃取。合併後的乙酸乙酯萃取液經無水硫酸鈉脫水後回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物；乙酸乙酯萃取物經矽膠柱層析，用環己烷和乙酸溶解於無水四氫呋喃中，然後加入二環己基碳二亞胺；其混合物在室溫下攪拌8小時，加乙酯的混合溶液作洗脫液，分段收集洗脫液，用薄層層析(TLC)在紫外燈下檢測每一組分，將含有3，4二羥基苯乙醇的洗脫液合併後回收有機溶劑得到3，4-二羥基苯乙醇；咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的合成將咖啡酸和3，4-二羥基苯乙醇入微量蒸餾水繼續攪拌15分鐘。濾過，濾液在60℃下減壓濃縮得棕色稠狀溶液；該棕色稠狀溶液經矽膠柱層析，用乙酸乙酯和乙醇的混合溶液作洗脫液，分段收集洗脫液，用TLC在紫外燈下檢測各組分，將含有咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的各組分合併後回收有機溶劑得單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
製備的腫節風總多酚純度大於50％(50％-90％)，有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯純度大於80％(80％-100％)，從其他植物或化學合成方法得到咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯純度大於80％(80％-100％)。
製成的製劑包括片劑口服片、含片、咀嚼片，丸劑、滴丸、膠囊、軟膠囊、顆粒、泡騰劑、針劑小針劑、大針劑、粉針劑、乳劑、混懸液，口服液、糖漿、乳劑、合劑、緩釋劑、控釋劑、靶向製劑。
含有植物腫節風有效成分的藥物，應用於抗腫瘤；抗腫瘤增效；降低由放射、化學治療腫瘤所引起的毒性反應如白細胞下降及血小板減少；抗菌抗炎。
由於本發明採取了上述的技術措施，它與現有技術相比具有如下優點本發明用多種動物實驗證明腫節風抗腫瘤及增效減毒作用的有效部位為多酚類化合物，並發現其主要的有效成分為咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。腫節風有效部位總多酚的上述作用優於目前市售的腫節風注射液、腫節風片和血康口服液粗製劑。本發明用體外培養腫瘤細胞生長抑制作用實驗證明腫節風總多酚和其有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對多種腫瘤細胞生長具有明顯抑制作用，且單體成分的作用明顯優於總多酚。本發明建立的提取分離純化方法可製備其純度大於50％(50～90％)的腫節風總多酚和純度大於90％(90～98％)的單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯以及純度大於98％的對照品咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。而且純度大於90％的單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯還可通過化學合成而獲得。本發明為將腫節風開發成有效成分明確、純度更高、療效更好、毒副作用更少、質量可控的各種製劑提供了科學依據。
圖1是腫節風有效部位總多酚的高效液相色譜圖；圖2是咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的結構示意圖；圖3是咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的H-C遠程偶合關係示意圖；圖4是咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的高效液相色譜圖；圖5是咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的化學合成流程圖；圖6是腫節風總多酚和咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的製備工藝流程圖。
具體實施例方式
以下結合附圖對本發明作進一步詳細描述。
一、腫節風有效部位總多酚的製備及含量測定(一)腫節風總提取物的提取1、乙醇回流提取取腫節風藥材粗粉，用35％～70％乙醇10～15倍量作溶劑，浸漬1小時後，加熱回流提取3～4次，每次1～2小時，合併回流液，濃縮後得腫節風總提取物。
2、乙醇滲漉提取取腫節風藥材粗粉，用35％～70％乙醇10～15倍量作溶劑，浸漬1小時後進行滲漉直到滲漉液無色，合併滲漉液，濃縮後得腫節風總提取物。
3、水煎煮提取取腫節風藥材粗粉加10～15倍量水煎煮，每次1～2小時，濾過，濾液合併，濃縮後腫節風總提取物。
(二)腫節風有效部位總多酚的製備上述三種方法提取的腫節風總提取物溶解於水中，用正丁醇萃取，合併萃取液，濃縮後得正丁醇萃取物，正丁醇萃取物經大孔吸附樹脂柱層析，先用水洗脫後再用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，減壓濃縮後得浸膏。將浸膏溶解於少量25％乙醇中，經反相矽膠柱層析，先用水洗脫，後用10％乙醇洗脫，再用25％乙醇洗脫，收集25％乙醇洗脫液，濃縮並乾燥後得腫節風總多酚。
濃縮和乾燥方法本發明腫節風總提取物和腫節風總多酚的濃縮和乾燥方法可用薄膜濃縮，減壓濃縮和真空乾燥，噴霧乾燥，冷凍乾燥等各種方法。選擇何種方法，可視實際條件。
(三)腫節風有效部位總多酚的含量測定1、儀器高效液相色譜儀。
2、試藥咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對照品，從腫節風中提取分離純化，純度大於98％。甲醇(色譜純)，乙酸(分析純)。
3、色譜條件色譜柱Hypersil C18高效液相色譜柱(250×4.6mm，5μm)；柱溫25C；檢測波長326nm；流速1.5mL/min；流動相見表1。
表1咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯RP-HPLC分析的梯度條件
4、對照品溶液的製備精密稱取在60℃真空乾燥後的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對照品25.0mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇20ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加70％乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
5、供試品溶液的製備精密稱取在60℃真空乾燥後的腫節風總多酚樣品50.0mg，置50ml容量瓶中，加70％乙醇35ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加70％乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
6、線性關係考察取濃度為1.0mg/mL的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對照品溶液2，4，8，10，20μL依次進樣，在前述色譜條件下測定咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的峰面積，以對照品進樣量(X，μg)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標，回歸得直線方程Y＝1511.380204X-444.46234，r＝0.99967。結果表明咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯進樣量在2.5～25μg範圍內峰面積積分值與濃度呈良好的線性關係。
7、精密度試驗取濃度為1.0mg/mL的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對照品溶液連續進樣6次，每次10μL，在前述色譜條件下測定咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的峰面積，其峰面積的RSD＝0.97％(n＝6)。
8、穩定性試驗取濃度為1.0mg/mL的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對照品溶液分別0，1，38，40，45時內進樣，每次10μL，在前述色譜條件下測定咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的峰面積，其峰面積的RSD＝0.64％(n＝5)。
9、樣品測定取濃度為1.0mg/mL的供試品溶液20μL進樣，在前述色譜條件下測定各單一化合物的峰面積，各單一化合物的含量均以咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯計算。各單一化合物含量的總和即為腫節風總多酚的含量。本發明製備的腫節風總多酚的含量為52.6％(n＝3，SD＝0.53)。參照圖1，腫節風有效部位總多酚的高效液相色譜圖中，6號峰為咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
二、單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的分離，結構鑑定和含量測定(一)咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的分離將腫節風總多酚溶解於少量25％乙醇中，經反相矽膠柱層析，先用水洗脫，後用25％乙醇洗脫，分段收集25％乙醇洗脫液，用高效液相色譜檢測每個組分，將含有單一成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的組分合併，濃縮並乾燥後得單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
(二)單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的結構鑑定咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的結構(圖2)是根據1維1H、13C譜，2維1H-1H COSY、HMQC、HMBC(圖3)的核磁共振譜和高分辨的質譜分析並與文獻[Amani MD et al.Phytochemistry，2000；55927-931]的光譜數據比較而鑑定。該化合物為無定形粉末，溶於甲醇和乙醇中，在甲醇或乙醇與水的混合溶劑中溶解度更大，三氯化鐵反應陽性；UV(MeOH)λfmax(nm)212，251(肩峰)，293，326；IR(KBr，cm-1)3429，1693，1606，1524，1448，1384，1263，1162，1116，1056；其1H和13C-NMR數據見表2。
表2、咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的氫和碳譜數據
參照圖2，咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的結構和圖3咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的H-C遠程偶合關係。
(三)化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的含量測定精密稱取在60℃真空乾燥後的單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯25.0mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇20ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加70％乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取濃度為1.0mg/mL的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯供試品溶液10μL進樣，在前述色譜條件下測定咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的峰面積，並計算咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的含量。本發明從腫節風中提取分離的單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的含量為91.0％(n＝3，SD＝0.5)。參照圖4，單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的高效液相色譜圖。
三、咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對照品的製備及純度測定1、儀器製備型的高效液相色譜儀。
2、試藥甲醇(色譜純)。
3、色譜條件色譜柱Econosil C18高效液相色譜柱(250×20mm，5μm)；檢測波長326nm；流速3mL/min；流動相甲醇/水(45∶55)。
4、方法上述分離得到的單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯配成5mg/mL的70％甲醇溶液，用前述製備型的高效液相色譜條件進行純化，每次進樣500～800μL，收集其保留時間為56分鐘的組分，合併後的收集液先在60～70℃減壓條件下回收甲醇，其殘留液置冰箱冷凍後再用冷凍乾燥法乾燥得到對照品咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
5、對照品的純度測定對照品咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯配成1.0mg/mL的70％甲醇溶液，每次進樣10μL，在前述高效液相色譜條件下由歸一化法測定其含量。並由核磁共振譜確證。本發明分離純化的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的含量大於98％，可作為定量分析的對照品。
四、咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的化學合成本發明以3，4-二羥基苯乙酸和咖啡酸兩種商品化學品為原料，經三步化學反應得到咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。其方法簡單，經濟。
1、試藥3，4-二羥基苯乙酸(3，4-didroxyphenylacetic acid)，咖啡酸(caffeic acid)，亞硫醯二氯(thionyl chloride)，四氫鋁化鋰(LiAlH4)，二環己基碳二亞胺(DCC)，無水甲醇，無水四氫呋喃(TFA)，酒石酸(tartaricaid)，無水硫酸鈉。
2、咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的化學合成流程參照圖5，咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的化學合成流程。
3、方法(1)3，4-二羥基苯乙醇的合成將3，4-二羥基苯乙酸溶於無水甲醇中，在0℃條件下逐滴加入亞硫醯二氯並攪拌15分鐘後，於室溫下放置16小時並不停攪拌。反應物經減壓濃縮後，其殘留物溶於無水四氫呋喃中，分部加入四氫鋁化鋰後，於室溫下放置16小時並不停攪拌。反應物倒入5％酒石酸溶液中，用乙酸乙酯萃取。合併後的乙酸乙酯萃取液經無水硫酸鈉脫水後回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物。乙酸乙酯萃取物經矽膠柱層析，用環己烷和乙酸溶解於無水四氫呋喃中，然後加入二環己基碳二亞胺。其混合物在室溫下攪拌8小時，加乙酯的混合溶液作洗脫液，分段收集洗脫液，用薄層層析(TLC)在紫外燈下檢測每一組分，將含有3，4-二羥基苯乙醇的洗脫液合併後回收有機溶劑得到3，4-二羥基苯乙醇。(2)咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的合成將咖啡酸和3，4-二羥基苯乙醇入微量蒸餾水繼續攪拌15分鐘。濾過，濾液在60℃下減壓濃縮得棕色稠狀溶液。該棕色稠狀溶液經矽膠柱層析，用乙酸乙酯和乙醇的混合溶液作洗脫液，分段收集洗脫液，用TLC在紫外燈下檢測各組分，將含有咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的各組分合併後回收有機溶劑得單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
4、合成品咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的含量測定將上述合成的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯照前述方法配成1.0mg/mL的供試品溶液，以10μL進樣，在前述色譜條件下測定咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的峰面積，並計算咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的含量。本發明用化學方法合成的咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的含量為93.2％(n＝3，SD＝0.22)。
五、腫節風有效部位總多酚和咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的製備工藝參照圖6，腫節風總多酚和咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的製備工藝流程。
六、腫節風有效部位總多酚和其有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的抗腫瘤、抗腫瘤的增效減毒及抗血小板減少紫癜等應用(一)整體實驗通過對多種腫瘤試驗證明，腫節風有效部位總多酚、有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯及其配製成的製劑有明顯的直接抗腫瘤的作用。且優於目前市售的粗提物製劑腫節風注射液、腫節風片。
1、直接抗腫瘤實驗在直接抗小鼠S180試驗中，通過口服、腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射這四種方式給藥，腫節風有效部位總多酚、有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯均有明顯的抗腫瘤作用，抑瘤率在30％和85％之間。S180腹水型腫瘤小鼠的生命延長率100～200％。
2、增效實驗在環磷醯胺治療小鼠S180實體瘤增效試驗中，通過口服、腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射這四種方式分別給以環磷醯胺及環磷醯胺加腫節風總多酚或單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯及其由兩者配製成的製劑，實驗結果表明單用環磷醯胺小劑量的抑瘤率在5％和20％之間，而與腫節風總多酚和單體成分合用後其抑瘤率在35％和80％以上，說明腫節風總多酚、單體成分與環磷醯胺合用時可明顯增強化療藥環磷醯胺的抗腫瘤作用。在氟尿嘧啶治療小鼠S180腹水型腫瘤增效試驗中，通過口服、肌肉注射、尾靜脈注射這三種方式分別給以氟尿嘧啶小劑量、氟尿嘧啶小劑量分別加腫節風總多酚或加單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯及其由兩者配製成的製劑，實驗結果表明單用小劑量氟尿嘧啶S180腹水型腫瘤小鼠的生命延長率在5％和15％之間，小劑量氟尿嘧啶加腫節風總多酚或加單體成分合用後其S180腹水型腫瘤小鼠的生命延長率在20％和80％之間。說明氟尿嘧啶分別與腫節風總多酚和單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯合用時可明顯增強其抗腫瘤作用。
3、減毒實驗在對環磷醯胺、阿糖胞苷治療小鼠S180實體瘤減毒試驗中，通過口服、腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射這四種方式分別給以環磷醯胺、阿糖胞苷和兩者加腫節風總多酚或單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯及其由兩者配製成的製劑，實驗結果表明小鼠在給藥環磷醯胺、阿糖胞苷後都出現血小板和白細胞顯著下降，分別加腫節風總多酚及其單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯及其由兩者配製成的製劑後，白細胞和血小板明顯的上升，說明腫節風總多酚和單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯和化療藥合用時有明顯的減毒作用。
(二)體外實驗1、對體外培養腫瘤細胞生長抑制作用實驗在對MTT法體外培養的人結腸癌細胞(HCT-8)、人胃癌細胞(BGC-823)、人卵巢癌細胞(A-2780)的生長抑制作用的實驗，腫節風總多酚、單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯對上述三種腫瘤細胞生長的抑制濃度分別為0.5μg/ml，5.0μg/ml，50.0μg/ml，IC50在50μg/ml以下，說明腫節風總多酚、單體成分具有明顯抗腫瘤作用，而且單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的作用明顯優於總多酚。
腫節風總多酚及腫節風總提取物注射液(表3)。
表3腫節風總多酚及咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的直接抗腫瘤的作用(MTT法)
2、體外抑菌實驗在體外抑菌試驗中，採用綠膿桿菌、肺炎桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、白色念球菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、甲鏈球菌、卡他球菌、流感桿菌、肺炎雙球菌、鏈球菌及脆弱類桿菌等15種117株菌，經MIC和MSC試驗表明腫節風有效部位總多酚、單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯均有不同程度的抗菌作用。
權利要求
1.一種含有植物腫節風有效成分的藥物，其特徵在於所述的有效成分是腫節風有效部位總多酚。
2.根據權利要求1所述的含有植物腫節風有效成分的藥物，其特徵在於所述的有效成分是腫節風有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
3.根據權利要求1所述的含有植物腫節風有效成分的藥物的製備方法，其特徵在於製備所述的腫節風有效部位總多酚包括如下步驟腫節風總提取物的提取乙醇回流提取取腫節風藥材粗粉，用35％～70％乙醇10～15倍量作溶劑，浸漬1小時後，加熱回流提取3～4次，每次1～2小時，合併回流液，濃縮後得腫節風總提取物；或乙醇滲漉提取取腫節風藥材粗粉，用35％～70％乙醇10～15倍量作溶劑，浸漬1小時後進行滲漉直到滲漉液無色，合併滲漉液，濃縮後得腫節風總提取物；或水煎煮提取取腫節風藥材粗粉加10～15倍量水煎煮，每次1～2小時，濾過，濾液合併，濃縮後腫節風總提取物；腫節風有效部位總多酚的製備上述方法提取的腫節風總提取物溶解於水中，用正丁醇萃取，合併萃取液，濃縮後得正丁醇萃取物，正丁醇萃取物經大孔吸附樹脂柱層析，先用水洗脫後再用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，減壓濃縮後得浸膏。將浸膏溶解於少量25％乙醇中，經反相矽膠柱層析，先用水洗脫，後用10％乙醇洗脫，再用25％乙醇洗脫，收集25％乙醇洗脫液；濃縮和乾燥腫節風總提取物和腫節風總多酚的濃縮方法可用薄膜濃縮或減壓濃縮，乾燥方法可用真空乾燥或噴霧乾燥或冷凍乾燥，濃縮並乾燥後得腫節風總多酚；製備所述的腫節風有效單體成分咖啡酸3，4～二羥基苯乙酯包括如下步驟將腫節風總多酚溶解於少量25％乙醇中，經反相矽膠柱層析，先用水洗脫，後用25％乙醇洗脫，分段收集25％乙醇洗脫液，用高效液相色譜檢測每個組分，將含有單一成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的組分合併，濃縮並乾燥後得單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯；或試藥3，4-二羥基苯乙酸，咖啡酸，亞硫醯二氯，四氫鋁化鋰，二環己基碳二亞胺，無水甲醇，無水四氫呋喃，酒石酸，無水硫酸鈉；方法3，4-二羥基苯乙醇的合成將3，4-二羥基苯乙酸溶於無水甲醇中，在0℃條件下逐滴加入亞硫醯二氯並攪拌15分鐘後，於室溫下放置16小時並不停攪拌；反應物經減壓濃縮後，其殘留物溶於無水四氫呋喃中，分部加入四氫鋁化鋰後，於室溫下放置16小時並不停攪拌；反應物倒入5％酒石酸溶液中，用乙酸乙酯萃取。合併後的乙酸乙酯萃取液經無水硫酸鈉脫水後回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物；乙酸乙酯萃取物經矽膠柱層析，用環己烷和乙酸溶解於無水四氫呋喃中，然後加入二環己基碳二亞胺；其混合物在室溫下攪拌8小時，加乙酯的混合溶液作洗脫液，分段收集洗脫液，用薄層層析(TLC)在紫外燈下檢測每一組分，將含有3，4-二羥基苯乙醇的洗脫液合併後回收有機溶劑得到3，4-二羥基苯乙醇；咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的合成將咖啡酸和3，4-二羥基苯乙醇入微量蒸餾水繼續攪拌15分鐘，濾過，濾液在60℃下減壓濃縮得棕色稠狀溶液；該棕色稠狀溶液經矽膠柱層析，用乙酸乙酯和乙醇的混合溶液作洗脫液，分段收集洗脫液，用TLC在紫外燈下檢測各組分，將含有咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯的各組分合併後回收有機溶劑得單體化合物咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯。
4.根據權利要求3所述的含有植物腫節風有效成分的藥物的製備方法，其特徵在於製備的腫節風總多酚純度大於50％，有效單體成分咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯純度大於80％，從其他植物或化學合成方法得到咖啡酸3，4-二羥基苯乙酯純度大於80％。
5.根據權利要求1或2所述的含有植物腫節風有效成分的藥物，其特徵在於製成的製劑包括片劑口服片、含片、咀嚼片，丸劑、滴丸、膠囊、軟膠囊、顆粒、泡騰劑、針劑小針劑、大針劑、粉針劑、乳劑、混懸液，口服液、糖漿、乳劑、合劑、緩釋劑、控釋劑、靶向製劑。
6.根據權利要求1或2所述的含有植物腫節風有效成分的藥物，其特徵在於應用於抗腫瘤；抗腫瘤增效；降低由放射、化學治療腫瘤所引起的毒性反應如白細胞下降及血小板減少；抗菌抗炎。
7.根據權利要求4所述的含有植物腫節風有效成分的藥物，其特徵在於應用於抗腫瘤；抗腫瘤增效；降低由放射、化學治療腫瘤所引起的毒性反應如白細胞下降及血小板減少；抗菌抗炎。
全文摘要
本發明公開了一種含有植物腫節風有效成分的藥物，其特徵在於所述的有效成分是腫節風有效部位總多酚以及有效單體成分咖啡酸3，4－二羥基苯乙酯。有效單體成分咖啡酸3，4－二羥基苯乙酯包括從腫節風和其它植物中提取分離純化和通過化學合成而得。腫節風有效部位總多酚的製備和其有效單體成分咖啡酸3，4－二羥基苯乙酯的提取分離純化方法包括不同濃度乙醇回流提取、不同濃度乙醇滲漉提取、水煎煮提取、正丁醇萃取、大孔吸附樹脂柱層析、正相和反相矽膠柱層析。本發明可用於抗腫瘤、增效減毒、抗腫瘤放化療的毒性反應及腫瘤輔助治療，亦用於原發性血小板減少性紫癜及繼發性血小板減少性紫癜，並可用於治療常見細菌性感染。
文檔編號A61P31/04GK1879672SQ20061005082
公開日2006年12月20日 申請日期2006年5月17日 優先權日2006年5月17日
發明者連曉媛 申請人:連曉媛