新科羅索酸衍生物、其製備方法及其在製備糖尿病藥物中的應用的製作方法

2023-07-31 01:16:26 1

專利名稱：新科羅索酸衍生物、其製備方法及其在製備糖尿病藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及天然藥物化學及醫藥技術領域，包括從新月旋孢腔菌轉化科羅索酸後得到的新科羅索酸衍生物的提取分離方法，結構鑑定及其對α -葡萄糖苷酶活性抑制作用。
背景技術：
科羅索酸是一種烏蘇烷型五環三萜類化合物，存在於大葉紫薇、枇杷和山楂等植物中。近年來研究發現，科羅索酸具有降血糖、減肥、抗腫瘤、抗炎、抗病毒和抗心血管疾病等作用，尤其是有較好的降血糖活性，具有類似胰島素的生理作用，被稱為「植物胰島素」，受到人們廣泛關注。α-葡萄糖苷酶抑制劑可抑制小腸內α-葡萄糖苷酶的活性，延緩或抑制葡萄糖在腸道的吸收，從而有效防治餐後高血糖症和緩解高胰島素血症，同時可以提高糖耐量，從而可達到防治糖尿病及其併發症發生的目的。

發明內容
本發明的目的在於通過新月旋孢腔菌對科羅索酸進行結構修飾得到新化合物，並研究新化合物對α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。本發明是通過以下技術方案完成的，具體內容包括:微生物轉化科羅索酸，2種轉化產物的提取分離，結構鑑定和α -葡萄糖苷酶活性的測定。(I)微生物轉化科羅索酸本發明米用微 生物新月旋抱腔菌Cochliobolus lunatus R.R.Nelson&HaasisCGMCC3.4381對底物科羅索酸在適宜條件下進行轉化。本發明所述的新月旋孢腔菌Cochlioboluslunatus R.R.Nelson&Haasis CGMCC 3.4381 可以從中國普通微生物菌種保藏管理中心獲得。(2)轉化產物提取分離本發明採用乙酸乙酯對微生物發酵液進行萃取得到菌液提取物，採用乙酸乙酯提取菌絲中的產物，二者合併後進行矽膠柱分離，採用不同比例的石油醚-四氫呋喃進行梯度洗脫，將洗脫液分別減壓濃縮、乾燥，分別得到2種新化合物的提取物。將2種提取物進行反覆矽膠柱層析，並用S印hadex LH-20或者HPLC製備純化，最終得到2個新化合物。
具體實施例方式現結合實施例對本發明做進一步說明，但本發明的內容並不局限於例舉的實施例。實施例1.
新化合物I和2的提取與分離本發明採用乙酸乙酯對微生物發酵液進行萃取得到菌液粗提物，採用乙酸乙酯超聲提取菌絲中的產物，二者合併後進行矽膠柱分離，採用不同比例的石油醚-四氫呋喃進行洗脫，將洗脫液分別減壓濃縮、乾燥，得到新化合物I和2的提取物。提取物經過SephadexLH-20凝膠柱無水乙醇洗脫和高效液相色譜製備(甲醇:水=65: 35等度洗脫)分離得到新化合物I和2。實施例2新化合物I結構鑑定新化合物I為白色粉末，由HR-ES1-MS ([M-H]_:487.3451)可知，化學式為C3tlH48O51H-NMR(Pyridine-d5, 500MHz)譜中，顯示該化合物有7個甲基氫信號，為三萜化合物角甲基特徵信號分別為:δ 0.99 (3Η, s，25-CH3)、δ 1.06 (3Η, s，26_CH3)、δ 1.09 (6H, ο,24-CH3)、δ 1.09 (3Η, ο, 29_CH3)、δ 1.23 (3Η, s』 27_CH3)、δ 1.29 (3Η, s』 23_CH3)、δ 1.41 (3H,d, 30-CHs);低場處有一氫信號δ 5.51 (brs)，推測為雙鍵上的氫。從13C-NMR(Pyridine-d5，500MHz)譜中可知該化合物有30個碳原子信號，其中3個碳原子為連氧碳原子信號，對比科羅索酸的譜圖特徵，推斷為羥基碳信號。化合物含有一組雙鍵碳信號S 126.6和δ 139.7 ；有一個羧基碳原子信號δ 179.7，綜上信息可以判斷該化合物為烏蘇烷型五環三萜類化合物。結合HSQC譜和HMBC譜對化合物I中碳、氫原子的化學位移進行了歸屬(表I)。HMBC 譜圖顯示 Η-29 ( δ 1.09)與 C-18 ( δ 53.9)，C-19 ( δ 39.3)遠程相關，Η-30 ( δ 1.41)與 C-20 ( δ 47.4)，C-21 ( δ 71.1)有遠程相關；Η~22 ( δ 1.77)，Η-19 ( δ 1.70)與C-21(S71.1)相關。在HMBC中，1.29和1.09兩個-CH3氫都和40.4的季碳相關，表明兩個-CH3分別為4位季碳上的23,24位-CH30羧基碳δ 179.68和δ 2.20、δ 2.77兩個氫相關，推斷為碳16、18位的氫。季碳峰3 139.7是烯鍵季碳特徵信號，為(:-13;3 126.6是烯鍵叔碳特徵信號，為C-12。次 甲基峰δ 84.4是3位叔碳信號。13C-NMR譜中C-21 ( δ 71.1)，為連氧碳原子信號；HSQC譜中可知Η-21(δ3.86)推斷為羥基氫信號，在HMBC譜中，δ 71.1與Η-22(δ 1.77)，Η-19(δ 1.70)遠程相關，說明C-21連有羥基，Η-21和Η-22的耦合常數為11.0Hz，確定該羥基為β構型。綜合以上信息確定化合物I在科羅索酸的結構上發生了 21位羥基化。該化合物未見文獻報導，為新化合物，命名為2 α，3 β，21 β -三羥基-12-烯-28-烏蘇酸。表I 化合物 I 的 1H-NMRj3C-NMR 及 HMBC 數據(Pyridine_d5，500ΜΗζ, δ，ppm)
權利要求
1.一種五環三萜類化合物，其特徵在於該化合物具有化學結構通式所示的化學結構:
2.根據權利要求1所述的科羅索酸衍生物的製備方法是微生物轉化法。
3.根據權利要求2所述的新的科羅索酸衍生物的製備方法為:以科羅索酸為底物，利用微生物酶對底物進行生物轉化，用乙酸乙酯對微生物發酵液進行萃取得到菌液提取物，採用不同比例的石油醚-四氫呋喃進行梯度洗脫，將洗脫液分別減壓濃縮、乾燥，分別得到2種新化合物的提取物。將2種提取物進行反覆矽膠柱層析，並用Sephadex LH-20或者HPLC製備純化，最終得到2個新化合物。
4.根據權利要求2所述的科羅索酸衍生物的製備所使用的微生物是新月旋孢腔菌或可以在科羅索酸相應位置上進行結構修飾的微生物。
5.根據權利要求1所述 的科羅索酸衍生物在治療糖尿病藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及天然藥物化學及醫藥技術領域，公開了通過新月旋孢腔菌Cochliobolus lunatus轉化科羅索酸分離得到的化學結構通式為式(1)所示的兩種新化合物1和2的結構及其提取分離方法和對α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。
文檔編號C07J63/00GK103204894SQ20121057002
公開日2013年7月17日 申請日期2012年12月25日 優先權日2012年12月25日
發明者馮旭, 儲智勇, 汪家春, 李代萍, 鄒贏鋅, 欒潔, 張術, 陳雅琳, 陳松, 郭飛飛 申請人:中國人民解放軍海軍醫學研究所