血吸蟲蟲卵的孵化方法及其所用的孵化袋的製作方法
2023-08-02 07:00:11 1
專利名稱：血吸蟲蟲卵的孵化方法及其所用的孵化袋的製作方法
技術領域：
本發明涉及動物蟲卵的孵化方法，尤其涉及一種血吸蟲蟲卵的孵化方法及其所用 的孵化袋。
背景技術：
日本血吸蟲是一種嚴重的人畜共患寄生蟲病，家畜、尤其是生活在疫區的家畜是 主要的傳染源。人與家畜血吸蟲病的普查方法有多種，但最普遍、最準確的方法是採用糞便 檢查的方法。糞便檢查血吸蟲病也是當前病原檢查的主要方法之一。糞便檢查血吸蟲的 方法主要依靠糞便毛蚴孵化法，糞便毛蚴孵化法仍是當前可以作出正確診斷的檢測方法， 也是國家考核達標驗收時規定的檢測方法。該方法的操作程序分為四步驟1.銅篩過濾; 2.濾出物以尼龍篩絹淘洗；3.加入沉澱杯，沉澱換水，除去上浮物；4.倒入三角燒瓶或長頸 燒瓶中進行孵化，為便於觀察毛蚴，還要在瓶頸下1/2處加一塊2-3cm的脫脂棉，再加清水 至瓶口。這種方法通常稱為常規尼龍篩絹淘洗糞便毛蚴孵化法，由於該方法既經過銅篩網 過濾，又經過尼龍篩絹淘洗，糞渣清晰，孵出毛蚴易於觀察，但是由於要經過銅篩網過濾，尼 龍篩絹淘洗等多步驟，每一步驟均要散失一些蟲卵。根據無錫血防所以16份陽性糞便進行 試驗，共檢出毛蚴數1998隻，其中沉澱內為1171隻，僅佔58. 6 %，而倒去的殘雜卻孵出毛蚴 827隻，佔總數的38. 1%，其他換水等散失佔3. 3%。這種孵化的方法的缺點是(1)對低感 染度人群或動物的敏感性低；( 蟲卵丟失多，計數不準確；C3)步驟多，耗時長。為此，有必 要發展更靈敏、快捷的方法。直接糞便毛蚴孵化法檢測家畜血吸蟲病，其操作方法上減少銅篩過濾、尼龍篩絹 淘洗過濾這兩個過程，將糞便直接倒入三角燒瓶或長頸燒瓶中進行孵化。有實驗證實75克 血吸蟲病陽性牛糞採用直接糞便毛蚴孵化法與常規尼龍篩絹淘洗法進行對比試驗，結果常 規尼龍篩絹法孵出毛蚴22個，而直接糞便淘洗法僅孵出毛蚴2個，12小時後，前者換水重新 孵化，已沒有發現毛蚴，後者換水後分瓶孵化，卻仍然出現大量毛蚴，說明許多蟲卵尚未孵 出毛蚴。第二次同樣方法以50克糞便進行對比試驗，常規尼龍篩絹法孵出毛蚴146個，而 直接糞便毛蚴孵化法為101個，同樣12小時後換水分瓶孵化，前者仍然沒有孵出毛蚴，而後 者依然有毛蚴孵出。常規尼龍篩絹淘洗糞便毛蚴孵化法，由於該方法既經過銅篩網過濾，又 經過尼龍篩絹淘洗，糞渣清晰，所有毛蚴均能孵出，效果較直接糞便毛蚴孵化法好。
發明內容
本發明要解決現有的糞便毛蚴孵化法檢測步驟繁瑣、敏感性低、準確性差的技術 問題，提供一種血吸蟲蟲卵的孵化方法，該方法不僅操作簡便、耗時少，而且可批量操作，且 靈敏度高、準確性好。此外，還需要提供一種上述血吸蟲蟲卵的孵化方法所用的孵化袋。為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現在本發明的一個方面，提供了一種血吸蟲蟲卵的孵化方法，包括以下步驟
3
將待檢糞樣加入孵化袋後封口，該孵化袋具有100 500目孔徑的微孔；把裝有待檢糞樣的孵化袋放入清洗裝置中清洗、甩幹，以去除待檢糞樣中部分雜 質與色素，並保留血吸蟲蟲卵；將清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。優選的，所述孵化袋的孔徑為300 350目，因為300 350目的孵化袋能有效阻 擋血吸蟲蟲卵通過，而孵化出的血吸蟲毛蚴又易於鑽出孵化袋，達到很好的孵化效果。所述孵化袋的材質包括尼龍篩絹、滌綸篩絹、丙綸纖維或維綸纖維。優選的，本發 明的孵化袋選用尼龍篩絹袋。優選的，清洗所用水的溫度不超過16°C，因為降低水體溫度至16°C及以下後清洗 孵化袋內蟲卵時可抑制蟲卵孵化，防止在清洗過程中因蟲卵孵化成毛蚴而流失，提高檢測 的準確率。優選的，清洗所用水的鹽濃度大於等於0. 5%，因為增加水體中鹽的含量可增加孵 化所需時間，0.5%及以上鹽濃度水清洗孵化袋內蟲卵時可抑制蟲卵孵化，從而防止在清洗 過程中因蟲卵孵化成毛蚴而流失，提高檢測的準確率。優選的，所述清洗、甩幹的次數為四次以上，可以將待檢糞樣清洗乾淨，提高毛蚴
孵化率。優選的，所述孵化的溫度為，是最適孵化溫度。在本發明的另一方面，提供了一種用於血吸蟲蟲卵孵化的孵化袋，該孵化袋具有 100 500目孔徑的微孔。優選的，所述孵化袋設有自封條，便於封口。本發明血吸蟲蟲卵的孵化方法，每一個樣品在一個尼龍篩絹袋中完成待檢物的過 濾和孵化，減少了操作步驟和蟲卵損失，提高了檢測敏感性，同時由於可以進行自動化操 作，本發明方法檢測速度明顯提高，適於血吸蟲病疫區家畜的大規模檢測。
下面結合附圖和具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。圖1是本發明尼龍篩絹袋的示意圖。
具體實施例方式本發明提供了一種血吸蟲蟲卵的孵化方法，包括以下步驟將待檢糞樣加入孵化 袋後封口，該孵化袋具有100 500目孔徑的微孔；把裝有待檢糞樣的孵化袋放入清洗裝置 中清洗、甩幹，以去除待檢糞樣中小於孵化袋孔徑的雜質與色素，並保留大於孵化袋孔徑的 血吸蟲蟲卵；將清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。在僅有上部開口的孵化杯 中，蟲卵得到孵化，由於孵化毛蚴具有向光性和向上性，匯聚到孵化杯上部的觀察窗。當僅 需要做定性檢測時，可通過觀察窗觀察水體中是否有毛蚴出現；當需要做定量檢測時，可通 過過濾杯體中的水分收集全部毛蚴，達到定量效果。本發明的孵化方法減少了經銅篩網過濾的步驟，直接將糞樣放入特製的可封口的 孵化袋內，用加水清洗甩幹的方法淘洗糞樣，減少了糞樣的轉移過程，使糞渣中的蟲卵得以 保存，能獲得更多的毛蚴，同時，本發明方法又不同於直接糞便毛蚴孵化法。直接糞便毛蚴
4孵化法由於糞便未經銅篩網過濾，又沒有經過尼龍篩絹袋淘洗，糞渣多，色素濃，影響其毛 蚴孵出。有實驗表明自然光線下孵出毛蚴數比黑暗情況下孵出毛蚴數高出3倍之多，直接 糞便毛蚴孵化法，有多種原因造成蟲卵孵出率較低，其中大量糞渣和糞渣中抑制蟲卵孵化 的物質以及水體透光率低可能是主要因素。本發明方法通過加水清洗甩幹的方式淘洗孵化 袋中的糞樣，減少了糞渣中抑制蟲卵孵化的物質，增加了透光率，既促進孵化，又便於毛蚴 觀測。本發明用於血吸蟲蟲卵孵化的孵化袋的材質包括尼龍篩絹、滌綸篩絹、丙綸纖維 或維綸纖維。在本發明的實施例中，孵化袋優選帶有自封條的尼龍篩絹袋(如圖1所示)。下面通過實施例作進一步詳細說明。實施例1不同孔徑尼龍篩絹袋對血吸蟲蟲卵的通透及孵化100-500目/時的尼龍篩絹袋可阻擋血吸蟲蟲卵通過，而血吸蟲毛蚴可方便通過。製作不同孔徑的尼龍篩絹袋，將吸取定量的血吸蟲蟲卵(1000個/ml)置於其中， 加水過濾一次後計數過濾出的蟲卵，袋內剩餘蟲卵孵化，觀察不同孔徑尼龍篩絹袋對蟲卵 和毛蚴的阻隔作用。表1不同孔徑尼龍篩絹袋對血吸蟲蟲卵的通透及孵化
孔徑透過蟲卵透過率孵化數相對孵化率(目)(個)(%)(個)(%)100446±3987.864±2.78.5200422±3483.075±510.6260197±4438.7127±10.356.73002.3±2.50.4643±5.691.53500-34±12.671.64000-27±13.157.55000-6±4.213.5對照508±2847±5.6結果300目的尼龍篩絹袋能很好的防止蟲卵流失並達到較好的孵化效果。超過 500目阻礙蟲卵流失好但孵化效果較差。因此，用300-350目的尼龍篩絹袋做血吸蟲蟲卵孵 化，效果較佳。實施例2清洗、甩幹次數與孵化的關係將待檢牛糞50克置於300目的尼龍篩絹袋，用IOOOml水清洗並甩幹，重複上述步 驟，檢測檢每次洗滌後的水樣渾濁度(0D600值)以及對應的水的孵化毛蚴數。表2清洗、甩幹次數與孵化的關係
清洗並甩幹次■I 12345678 空白對照渾濁度OD值2. 010. 420. 40. 370. 340. 230. 170. 13 0. 0平均毛蚴數3. 716. 722. 025. 329. 731. 333. 330. 3 31. 7相對孵化率11. 652. 669. 580. 093. 798. 9105. 295. 8 --結果甩幹次數4-5次後蟲卵的孵化基本不受影響。實施例3不同水溫對毛蚴孵化的影響
5
檢測不同水溫對毛蚴孵化的影響。表3不同水溫對毛蚴孵化的影響
權利要求
1.一種血吸蟲蟲卵的孵化方法，其特徵在於，包括以下步驟將待檢糞樣加入孵化袋後封口，該孵化袋具有100 500目孔徑的微孔； 把裝有待檢糞樣的孵化袋放入清洗裝置中清洗、甩幹，以去除待檢糞樣中部分雜質與 色素，並保留血吸蟲蟲卵；將清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。
2.根據權利要求1所述的孵化方法，其特徵在於，所述孵化袋的孔徑為300 350目。
3.根據權利要求1所述的孵化方法，其特徵在於，所述孵化袋的材質包括尼龍篩絹、滌 綸篩絹、丙綸纖維或維綸纖維。
4.根據權利要求1所述的孵化方法，其特徵在於，清洗所用水的溫度不超過16°C。
5.根據權利要求1所述的孵化方法，其特徵在於，清洗所用水的鹽濃度大於等於 0. 5%。
6.根據權利要求1所述的孵化方法，其特徵在於，所述清洗、甩幹的次數為四次以上。
7.根據權利要求ι所述的孵化方法，其特徵在於，所述孵化的溫度為^rc。
8.一種用於血吸蟲蟲卵孵化的孵化袋，其特徵在於，該孵化袋具有100 500目孔徑的 微孔。
9.根據權利要求8所述的孵化袋，其特徵在於，所述孵化袋的材質包括尼龍篩絹、滌綸 篩絹、丙綸纖維或維綸纖維。
10.根據權利要求8所述的孵化袋，其特徵在於，所述孵化袋設有自封條。
全文摘要
本發明公開了一種血吸蟲蟲卵的孵化方法，包括以下步驟將待檢糞樣加入孵化袋後封口，該孵化袋具有100～500目孔徑的微孔；把裝有待檢糞樣的孵化袋放入清洗裝置中清洗、甩幹，以去除待檢糞樣中部分雜質與色素，並保留血吸蟲蟲卵；將清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。本發明還公開了一種用於血吸蟲蟲卵孵化的孵化袋。本發明血吸蟲蟲卵的孵化方法，不僅操作簡便、耗時少，而且靈敏度高、準確性好，適用於大規模批量檢測。
文檔編號A01K67/033GK102125000SQ201110071380
公開日2011年7月20日 申請日期2011年3月23日 優先權日2011年3月23日
發明者劉毅, 朱傳剛, 李小紅, 楊藝, 林矯矯, 江豔, 陸珂 申請人:中國農業科學院上海獸醫研究所