抗pdcd4抗體在製備預測紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥敏感性的檢測試劑中的應用的製作方法
2023-08-01 22:26:36 1
抗pdcd4抗體在製備預測紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥敏感性的檢測試劑中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了抗PDCD4抗體在製備預測紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥敏感性的檢測試劑中的應用，本發明應用定量蛋白組學技術分析紫杉醇處理腫瘤細胞中全細胞蛋白質豐度的變化，發現紫杉醇下調PDCD4的表達水平，且腫瘤細胞對紫杉醇的敏感性與細胞中PDCD4的表達水平呈正相關。對腫瘤細胞中PDCD4進行基因沉默或過表達，進一步驗證了細胞對紫杉醇的敏感性與細胞中PDCD4的表達水平呈正相關。同時，本發明在臨床肺癌患者生存預後的研究中發現，同樣在紫杉醇聯合輔助化療下，PDCD4表達水平較低的患者生存預後較差，而PDCD4表達水平較高的患者生存時間較長。基於上述研究成果，本發明提出了一種指導紫杉醇或其衍生藥物(例如多西他賽)個體化用藥的參考指標及檢測和應用方法。
【專利說明】抗PDCD4抗體在製備預測紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥 敏感性的檢測試劑中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及指導紫杉醇藥物應用的參考指標，特別涉及抗腫瘤抑制因子TOCD4的 抗體在指導紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥中的應用，本發明屬於生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 紫杉醇（Paclitaxel，PTX)是一種新型抗腫瘤藥物，它促進細胞微管蛋白的聚合 而抑制其解聚，使細胞阻滯在有絲分裂期，進而抑制細胞的增殖（Jordan, Μ et al，Cancer Research，1996)。由於其作用於細胞微管系統的獨特抗癌機制，而被應用於乳腺癌、卵巢 癌、肺癌、大腸癌、膀胱癌等的臨床治療。紫杉醇還可增強放療藥物的敏感性，常與放療聯合 應用。
[0003] 肺癌是我國人群中最常見的惡性腫瘤之一，中國也是世界上肺癌最多的國家。根 據衛生部2008年公布的全國第三次人口死因調查的數據：肺癌已經成為我國惡性腫瘤死 亡的首要原因。肺癌的發病機制複雜，與基因功能改變、吸菸和環境汙染有密切關係。目前 醫學界按形態特徵將肺癌分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌，而非小細胞肺癌發病率佔肺癌 的85%以上。手術是治療肺癌的首選方法，而化療是治療肺癌的主要方法。絕大部分肺癌 需要接受治療性化療或術後輔助性化療。化療對小細胞肺癌的療效無論早期或晚期均較肯 定，而對非小細胞肺癌也能達到40%?50%腫瘤緩解率。紫杉醇聯合順鉬是目前治療非小 細胞肺癌的最有效方案之一（王麗萍等，藥學與臨床研究，2007)。
[0004] 但是紫杉醇對不同的惡性腫瘤或同種腫瘤的不同類型的個體治療效果存在差異 性。由於目前還缺乏預測和指導紫杉醇個體化用藥的有效參考指標，對病人的用藥缺乏針 對性，其療效也很難預測。此外，隨著紫杉醇臨床應用的不斷增加，其耐藥性的出現是限制 其臨床應用的重要原因。雖然已知的紫杉醇耐藥機制包括a、Ptubulin等的突變以及多 耐藥基因（MDR1)的高表達（Januchowski，R，et al Biomed Pharmacotherapy, 2013)，但這 些因素並不能解釋所有腫瘤細胞對紫杉醇的耐藥性。因此，目前對其耐藥性的機制還是缺 乏全面透徹的了解。
[0005] 本發明應用定量蛋白組學技術對紫杉醇處理後的HeLa細胞中的全蛋白組進行分 析並建立了紫杉醇應答蛋白定量資料庫。對該紫杉醇應答蛋白定量資料庫分析發現TOCD4 蛋白豐度受紫杉醇的負性調控。roOM(Programmed cell death protein4)是一種腫瘤抑 制因子（Shibahara K，et al，Gene，1995)，H)CD4的低表達常見於肺癌，乳腺癌患者，卵巢 癌，結腸癌（Lankat-Buttgereit B，et al, Biol Cell, 2009)。等位基因位於人染色 體10q24,其cDNA全長3. 5kb，編碼區約1. 4kb。H)⑶4蛋白N端含有一個結合RNA的結構 域RRM，可與靶點分子的mRNA結合，而C端含有兩個重要的α螺旋結構MA-3M和MA-3C，能 夠與真核翻譯起始因子eIF4A結合（Waters LC，et al，J Biol Chem, 2011)。
[0006] 儘管以前的研究發現ro⑶4與eIF4A相結合抑制了蛋白的翻譯，然而近些年 的研究表明，TOCD4可能不是一個廣譜的翻譯抑制因子，已有研究顯示TOCD4可特異性 結合 p53、c-myb、Bcl_xL 和 XIAP 等的 mRNA(Liwak U，et al, Molecular and cellular biology, 2012)，並抑制這些基因的翻譯過程。由於其N端存在能夠特異性結合mRNA的RRM 功能域也支持了上述觀點。因此，PDCD4很可能是一個具特異性靶點的翻譯抑制因子，但它 的全部特異性抑制靶點尚不清楚。我們應用定量蛋白組學篩選的結果表明，一些調控有絲 分裂的蛋白如UBE2S、KIFCI、TPX2等可能是H)CD4的潛在靶點，H)CD4通過抑制這些蛋白的 翻譯來影響細胞對紫杉醇的敏感性（結果尚未發表）。
[0007] 大量新近研究表明H)CD4不僅調控細胞的增殖生長，而且對基因的轉錄、細胞周 期控制、DNA損傷應答、氧化應激及腫瘤細胞的藥物敏感性均有重要影響，TOCD4參與的信 號通路詳見表1。
[0008] 表1 ro⑶4參與的信號轉導通路 [0009]
【權利要求】
1. 抗腫瘤抑制因子rocD4的抗體在製備預測紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥敏感性 的檢測試劑中的應用，優選的，所述的衍生藥物為多西他賽。
2. 如權利要求1所述的應用，其特徵在於所述抗體用於檢測腫瘤抑制因子TOCD4在癌 組織中的蛋白表達水平，以腫瘤抑制因子TOCD4在癌組織中的蛋白表達水平作為參考指標 指導紫杉醇或其衍生藥物的個體化用藥。
3. 如權利要求2所述的應用，其特徵在於所述的癌組織包括肺癌組織、卵巢癌組織、乳 腺癌組織以及結直腸癌組織。
4. 如權利要求2所述的應用，其特徵在於所述抗體用於檢測腫瘤抑制因子TOCD4在癌 組織中的蛋白表達水平，在內參GAPDH表達水平一致的前提下，將癌旁組織中⑶4的蛋 白表達水平定義為正常組，癌組織中H)CD4的蛋白表達水平為正常組的80%以上定義為高 表達組，小於40%的定義為低表達組，位於二者之間的定義為中表達組，根據檢測結果對於 測定癌組織中ro⑶4蛋白表達水平大於癌旁組織80%以上的患者，推薦採用紫杉醇或其衍 生藥物聯合輔助化療或者治療性化療，而對於測定癌組織中ro⑶4蛋白中低表達水平的患 者，應避免使用紫杉醇或其衍生藥物聯合輔助化療，建議採用其他藥物替代化療方案，如基 於順鉬或阿黴素的化療方案。
5. 權利要求2或4所述的應用，其特徵在於所述抗體通過免疫印跡技術（Western Blotting)檢測腫瘤抑制因子Η)⑶4在癌組織中的蛋白表達水平。
6. -種用於預測紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥敏感性的檢測試劑盒，其特徵在於包 括抗腫瘤抑制因子TOCD4的抗體，所述抗體用於檢測腫瘤抑制因子TOCD4在癌組織中的蛋 白表達水平，以腫瘤抑制因子TOCD4在癌組織中的蛋白表達水平作為參考指標指導紫杉醇 或其衍生藥物的個體化用藥，優選的，所述的衍生藥物為多西他賽。
7. 如權利要求6所述的檢測試劑盒，其特徵在於所述的癌組織包括肺癌組織、卵巢癌 組織、乳腺癌組織以及結直腸癌組織。
8. 如權利要求6所述的檢測試劑盒，其特徵在於所述試劑盒用於檢測腫瘤抑制因子 ro⑶4在癌組織中的蛋白表達水平，在內參GAPDH表達水平一致的前提下，將癌旁組織中 ro⑶4的蛋白表達水平定義為正常組，癌組織中ro⑶4的蛋白表達水平為正常組的80%以 上定義為高表達組，小於40%的定義為低表達組，位於二者之間的定義為中表達組，根據檢 測結果對於測定癌組織中ro⑶4蛋白水平大於癌旁組織80%以上的患者，推薦採用紫杉醇 或其衍生藥物聯合輔助化療或者治療性化療，而對於測定癌組織中TOCD4蛋白中低表達水 平的患者，應避免使用紫杉醇或其衍生藥物聯合輔助化療，建議採用其他藥物替代化療方 案，如基於順鉬或阿黴素的化療方案。
9. 權利要求6或8所述的檢測試劑盒，其特徵在於所述試劑盒通過免疫印跡技術 (Western Blotting)檢測腫瘤抑制因子⑶4在癌組織中的蛋白表達水平。
【文檔編號】G01N33/574GK104155446SQ201410338836
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月16日 優先權日:2014年7月16日
【發明者】周春水, 張海員, 劉佳瑋, 傅松濱, 白靜, 徐暉, 孫慧瑩, 範芳芳, 李亦蘭, 劉寶剛, 劉通, 高民, 戴紹春, 寧雪蓮, 孫悅 申請人:哈爾濱醫科大學