一種免疫層析試劑盒及其檢測方法
2023-07-22 23:36:46 1
專利名稱：一種免疫層析試劑盒及其檢測方法
技術領域：
本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及到一種用於疾病診斷定量檢測的試劑盒及其檢測方法。
背景技術：
目前，免疫層析技術已被廣泛的應用於疾病的診斷中，但由於技術本身的局限性，已有的免疫層析技術絕大部分應用於定性的診斷試劑中，而很難運用於定量的診斷試劑中，其原因在於試劑盒中的檢測靈敏度低，無法達到幾十pg/ml的檢測水平，特別是偶合物和待檢測蛋白的聚合體顆粒的大小很難控制，其偶合顆粒還存在有不均勻的現象發生，造成精確度和準確度低，變動係數大，其變動係數在低端臨近最低檢測水平時，檢測膜的檢測方法往往大於15%，制約了免疫層析技術精密定量的發展，從而達不到定量診斷的行業標準。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種靈敏度、精確度高的免疫層析試劑盒及其該試劑盒的檢測方法。為了解決上述技術問題，本發明提供了一種免疫層析試劑盒，它包括至少一個試劑條，所述試劑條包括樣品墊片、檢測膜、吸水墊片和支撐片，所述檢測膜上設有測試帶和質控帶，所述測試帶或質控帶由蛋白或核糖核酸製成，所述樣品墊片和檢測膜之間設有偶合物墊片，所述樣品墊片與偶合物墊片之間設有第一層玻璃纖維墊片，所述偶合物墊片與檢測膜之間設有第二層玻璃纖維墊片，所述第一層玻璃纖維墊片或樣品墊片上包被有阻斷試劑，所述樣品墊片、偶合物墊片、第二層玻璃纖維墊片和檢測膜依次呈搭接的狀態，所述吸水墊片設置於檢測膜上，並與檢測膜保持水平狀態。作為本發明的進一步改進，所述樣品墊片、偶合物墊片、第一層玻璃纖維墊片或第二層玻璃纖維墊片由玻璃纖維或棉纖維製成。本發明還提供了一種試劑盒的檢測方法，包括下列步驟:
步驟一，採集樣品；
步驟二，過濾處理:取待測樣品滴入樣品墊片上，樣品墊片過濾樣品中顆粒雜質或細胞，過濾後樣品通過第一層玻璃纖維墊片，第一層玻璃纖維墊片上包被有阻斷試劑，樣品與阻斷試劑反應，將樣品中非特異性結合蛋白中和，降低假陽性，樣品中的待測蛋白再與偶合物墊片中的偶合物結合反應形成免疫聚合體，所述免疫聚合體與未結合的偶合物通過第二層玻璃纖維墊片進一步過濾，所述未結合的偶合物為內控偶合物，使得聚合體大小均勻，減少試劑盒整體變動係數，延長反應時間；
步驟三，反應處理:免疫聚合體和內控偶合物流入檢測膜，同時與測試帶上的物質免疫反應並結合，待檢測蛋白聚合體固定於測試帶位置，內控偶合物繼續流入質控帶，同時與質控帶上的物質反應並結合，內控偶合物停留於質控帶內，多餘液體流入吸水墊片內； 步驟四，捕獲信息:測試帶和質控帶上的偶合物帶有光學信號，所述信號通過檢測儀器捕獲並按設定反應曲線進行定量計算；
步驟五，分析判斷:得出檢測蛋白的濃度。與現有技術相比，本發明具有以下優點。(I)樣品墊過濾了樣品中的大顆粒雜質和細胞，第一層玻璃纖維墊片或樣品墊片上包被有阻斷試劑，樣品與第一層玻璃纖維墊片上的阻斷試劑反應，在第一層玻璃纖維墊片中先中和並過濾非特異性結合蛋白，再與偶合物結合反應，從而有效的降低了假陽性，便於提供更精確的檢測結果。(2)所述樣本、免疫聚合體、內控偶合物通過第二層玻璃纖維墊片進一步過濾，使聚合體顆粒更加的均勻，減少了測試盒的整體變異係數，使偶合物與待檢測蛋白在檢測膜前的反應充分，從而提高檢測的靈敏度和精確度，適用於定量診斷的質量標準。(3)樣品墊片和檢測膜之間增加二層玻璃纖維墊片過濾點，通過上述結構改進，達到pg/ml級的檢測水平，在混和檢測膜的情況下，變動係數在接近低端檢測數值時，變動係數(CV)小於15%。
圖1為本發明試劑盒中單個試紙條的剖面圖。1-樣品墊片，2-檢測膜，3-吸水墊片，4-支撐片，5-偶合物墊片，6_1第一層玻璃纖維墊片，6-2第二層玻璃纖維墊片，7-測試帶，8-質控帶。
具體實施例方式下面結合附圖和實施例對本發明進一步說明。實施例一。一種免疫層析試劑盒，它包括至少一個試劑條，所述試劑條包括樣品墊片1、檢測膜2、吸水墊片3和支撐片4，所述檢測膜2上設有測試帶7和質控帶8，所述測試帶7或質控帶8由蛋白或核糖核酸製成，所述樣品墊片I和檢測膜2之間設有偶合物墊片5，所述偶合物墊片5與檢測膜2之間設有第二層玻璃纖維墊片6-2，所述樣品墊片1、偶合物墊片5、第二層玻璃纖維墊片6-2和檢測膜2依次呈搭接的狀態，樣品墊片I上包被有阻斷試劑，所述吸水墊片3設置於檢測膜2上，並與檢測膜2保持水平狀態。所述樣品墊片1、偶合物墊片5和第二層玻璃纖維墊片6-2由玻璃纖維或棉纖維製成。本發明試劑盒的檢測方法為:
1、米集樣品；
2、過濾處理:取待測樣品60_100μ1滴入樣品墊片I上，樣品墊片I上包被有阻斷試劑，樣品墊片I過濾樣品中顆粒雜質和細胞並阻斷樣品中的非特異性結合蛋白，過濾後，樣品中的待測蛋白再與偶合物墊片5中的偶合物結合反應形成免疫聚合體，所述免疫聚合體與未結合的偶合物通過第二層玻璃纖維墊片6-2進一步過濾，所述未結合的偶合物為內控偶合物，使得聚合體顆粒均勻，減少試劑盒整體變異係數，免疫反應充分；
3、反應處理:免疫聚合體和內控偶合物流入檢測膜2，同時與測試帶7上的物質免疫反應並結合，待檢測蛋白聚合體固定於測試帶7位置，內控偶合物繼續流入質控帶8，同時與質控帶8上的物質反應並結合，內控偶合物停留於質控帶8內，多餘液體流入吸水墊片3內；4、捕獲信息:測試帶7和質控帶8上的偶合物帶有光學信號，所述信號通過檢測儀器捕獲並按設定反應曲線進行定量計算；
5、分析判斷:計算檢測蛋白的濃度。實施例二。如圖1所示,一種免疫層析試劑盒,它包括至少一個試劑條,所述試劑條包括樣品墊片1、檢測膜2、吸水墊片3和支撐片4，所述檢測膜2上設有測試帶7和質控帶8，所述測試帶7或質控帶8由蛋白或核糖核酸製成，所述樣品墊片I和檢測膜2之間設有偶合物墊片5，所述樣品墊片I與偶合物墊片5之間設有第一層玻璃纖維墊片6-1，所述偶合物墊片5與檢測膜2之間設有第二層玻璃纖維墊片6-2，所述第一層玻璃纖維墊片6-1上包被有阻斷試劑，所述樣品墊片1、偶合物墊片5、第二層玻璃纖維墊片6-2和檢測膜2依次呈搭接的狀態，所述吸水墊片3設置於檢測膜2上，並與檢測膜2保持水平狀態。所述樣品墊片1、偶合物墊片5、第一層玻璃纖維墊片6-1和第二層玻璃纖維墊片6-2由玻璃纖維或棉纖維製成。本發明試劑盒的檢測方法為:
1、米集樣品；
2、過濾處理:取待測樣品60-1001滴入樣品墊片I上，樣品墊片I過濾樣品中顆粒雜質和細胞，過濾後樣品通過第一層玻璃纖維墊片6-1，第一層玻璃纖維墊片6-1上包被有免疫阻斷試劑，樣品與阻斷試劑反應，將樣品中非特異性結合蛋白中和，降低假陽性，樣品中的待測蛋白再與偶合物墊片5中的偶合物結合反應形成免疫聚合體，所述免疫聚合體與未結合的偶合物通過第二層玻璃纖維墊片6-2進一步過濾，所述未結合的偶合物為內控偶合物，使得免疫聚合體顆粒均勻，減少試劑盒整體變異係數，免疫反應；
3、反應處理:免疫聚合體和內控偶合物流入檢測膜2，同時與測試帶7上的物質反應並結合，待檢測蛋白免疫聚合體固定於測試帶7位置，內控偶合物繼續流入質控帶8，同時與質控帶8上的物質反應並結合，內控偶合物停留於質控帶8內，多餘液體流入吸水墊片3內；
4、捕獲信息:測試帶7和質控帶8上的偶合物帶有光學信號，所述信號通過檢測儀器捕獲並按設定反應曲線進行定量計算；
5、分析判斷:計算檢測蛋白的濃度；
6、結果評價:使用此試紙條檢測，通過實驗觀察，與現有技術相比數據，檢測的靈敏度提聞，檢測結果見表1:
表I:
權利要求
1.一種免疫層析試劑盒，它包括至少一個試劑條，所述試劑條主要包括樣品墊片(I)、檢測膜(2 )、吸水墊片(3 )和支撐片(4 )，所述檢測膜(2 )上設有測試帶(7 )和質控帶(8 )，其特徵在於:所述樣品墊片(I)和檢測膜(2)之間設有偶合物墊片(5)，所述偶合物墊片(5)與檢測膜(2)之間設有第二層玻璃纖維墊片(6-2)，所述樣品墊片(I)、偶合物墊片(5)、第二層玻璃纖維墊片(6-2)和檢測膜(2)依次呈搭接的狀態。
2.根據權利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特徵在於:所述樣品墊片(I)與偶合物墊片(5)之間設有第一層玻璃纖維墊片(6-1)，所述第一層玻璃纖維墊片(6-1)或樣品墊片(I)上包被有阻斷試劑。
3.根據權利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特徵在於:所述吸水墊片(3)設置於檢測膜(2 )上，並與檢測膜(2 )保持水平狀態。
4.根據權利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特徵在於:所述樣品墊片(I)、偶合物墊片(5)、第一層玻璃纖維墊片(6-1)或第二層玻璃纖維墊片(6-2)由玻璃纖維或棉纖維製成。
5.根據權利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特徵在於:所述測試帶(7)或質控帶(8)由蛋白或核糖核酸製成。
6.一種根據權利要求1所述試劑盒的檢測方法，其特徵在於:包括下列步驟: 步驟一，採集樣品； 步驟二，過濾處理:取待測樣品滴入樣品墊片(I)上，樣品墊片(I)過濾樣品中顆粒雜質或細胞，過濾後樣品通過第一層玻璃纖維墊片(6-1)，第一層玻璃纖維墊片(6-1)上包被有阻斷試劑，樣品與阻斷試劑反應，將樣品中非特異性結合蛋白中和，降低假陽性，樣品中的待測蛋白再與偶合物墊片(5)中的偶合物結合反應形成免疫聚合體，所述免疫聚合體與未結合的偶合物通過第二層玻璃纖維墊片(6-2)進一步過濾，所述未結合的偶合物為內控偶合物，使得聚合體大小均勻，減少試劑盒整體變動係數，延長反應時間； 步驟三，反應處理:免疫聚合體和內控偶合物流入檢測膜(2)，同時與預先包被在檢測膜測試帶(7)上的物質特異性免疫結合，由此待檢測蛋白免疫聚合體被固定於測試帶(7)位置，內控偶合物繼續流入質控帶(8)，同時與質控帶(8)上的物質反應並結合，內控偶合物停留於質控帶(8)內，多餘液體流入吸水墊片(3)內； 步驟四，捕獲信息:測試帶(7)和質控帶(8)上的偶合物帶有光學信號，所述信號通過檢測儀器捕獲並按設定反應曲線進行定量計算； 步驟五，分析判斷:得出檢測蛋白的濃度。
全文摘要
本發明公開了一種免疫層析試劑盒及其檢測方法，它包括至少一個試劑條，所述試劑條包括樣品墊片(1)、檢測膜(2)、吸水墊片(3)和支撐片(4)，所述檢測膜(2)上設有測試帶(7)和質控帶(8)，所述樣品墊片(1)和檢測膜(2)之間設有偶合物墊片(5)所述偶合物墊片(5)與檢測膜(2)之間設有第二層玻璃纖維墊片(6-2)；採用上述結構，減少了測試盒的整體變異係數，使偶合物與待檢測蛋白在檢測膜前的反應充分，從而提高檢測的靈敏度和精確度，適用於定量診斷的質量標準。
文檔編號G01N33/566GK103197063SQ201310117538
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月3日 優先權日2013年4月3日
發明者威廉姆·努特, 劉紅劍, 何小紅, 劉麗萍, 張丹 申請人:瑞萊生物科技(江蘇)有限公司