一種用以促進神經細胞生長的化合物的製作方法
2023-07-12 18:00:16 1
專利名稱:一種用以促進神經細胞生長的化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種通過促進神經幹細胞的再生與分化，以抑制神經退化的化合物。
背景技術：
已知的神經幹細胞(neural stem cell，NSCs)是指能夠進行自我更新修復，並能在體外培養條件下，通過一些刺激因子的刺激而分化為多種不同型態的細胞，例如神經元細胞(Neurons)、星形膠質細胞(Astrocytes)和少突膠質細胞(Oligodendrocyte)。這些分化後的細胞對於哺乳動物中樞神經的發育，以及在成年動物神經系統的功能表現中都扮演著重要的角色。已知神經幹細胞已可從多種哺乳動物(例如小鼠、大鼠、豬和人類)的中樞神經系統，在其發育至成熟的過程中被分離出來。其中，人類中樞神經系統中的神經幹細胞，與其同源的嚙齒類動物類似。
哺乳類動物的神經幹細胞(neural stem cell)除存在於發育中的神經系統中外，同時也存在於成熟的器官中。雖然根據先前的研究報告指出，目前已可從胚胎幹細胞衍生出神經幹細胞，但是內生性神經幹細胞的調控機制，卻仍然了解有限。
對於神經退化性疾病的治療來說，設法挽救已受損的神經細胞，並同時刺激該神經細胞的再生，是較為理想的治療策略。目前已有人通過使用神經幹細胞移植來嘗試修補受損的細胞，並且通過活化內生性神經幹細胞以提供神經細胞進行「自我更新」的可能。
雖然目前科學家對於神經幹細胞已有了一些初步的了解，但是若要將神經幹細胞應用於神經細胞的修復上，則還需要一種可有效地控制其增生或分化成具有特定功能細胞的方法。根據以前多份研究報告顯示，神經幹細胞已經可以在有生長因子的培養條件下進行增殖。這些生長因子目前已知包括鹼性成纖維生長因子(Basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)及表皮生長因子(Epithelial Growth Factor，EGF)等。已知在無血清但含有前述生長因子的培養基中，在懸浮培養的狀態下，神經幹細胞會聚集形成所謂的「神經球」(neurospheres)。另一方面，假若將這些生長因子去除，改為適量補充一些小分子的活性化合物、其它除鹼性成纖維生長因子或表皮生長因子外的其它生長因子、或神經營養因子(neurotrophic factors)，神經幹細胞則可能會受刺激而分化，經分化的細胞主要以星形膠質細胞為主(90％以上)，僅有少部分會分化成為神經元細胞(10％以下)。
另外，以前的研究結果表明，目前科學家已經發現許多神經營養因子，其包括有膠質細胞源性神經營養因子(Glial-derived NeurotrophicFactor，GDNF)、腦源性神經營養因子(Brain-derived Neurotrophic Factor，BDNF)、神經生長因子(nerve growth factor，NGF)、神經營養因子3(neurotrophin-3，NT3)、神經營養因子4(NT4)，及血小板源性生長因子(Platelet-derived growth factor，PDGF)等。這些神經營養因子雖已被證實具有促進神經細胞存活的活性，但是其在臨床上卻有許多使用上的限制。這是由於將這些神經營養因子使用到活體中時，這些神經營養因子因為具有較大的分子量，因此並不易穿過血腦屏障(Blood BrainBarrier，BBB)而到達腦部。
因此，若能找出一些具有較小分子量且能活化內生性神經幹細胞的化合物，用以促進神經幹細胞的增生並維持其特性，甚至是促進其分化成具有功能的神經元細胞，這將有助於將神經幹細胞移植至宿主體內，以提供做為退化性神經疾病的有效預防或治療策略，並對一些具有神經退化因子的個體提供預防的效果。
發明內容為克服已知技術之缺點，本發明的目的是提供一種用以促進神經細胞增生的化合物，其具有較小的分子量，因此易於穿過血腦屏障而到達腦部，進而得以抑制神經細胞的死亡，並增加其存活率。
本發明的另一目的是提供一種用以促進神經幹細胞分化的化合物，以促使神經幹細胞分化為具有特定功能的神經元細胞。
為達到本發明的目的，根據本發明所指出的一種用以促進神經細胞增生的化合物，其為具有如下式一所示化學結構式的異戊二烯類黃酮(prenylflavanones)化合物 其中，R1為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基(isoprene)；R2、R3、R4、R5、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、異戊二烯基(isoprene)、或如式二或式三所示香葉基(geranyl)。
已知，神經細胞在低密度(160cells/mm2以下)的狀況下進行培養時，神經細胞易於死亡，不易進行培養。而根據本發明所指出的化合物除可用以增進神經細胞的存活率外，即使於低密度的培養狀況下，也可以顯著地減少神經細胞的死亡。另外，本發明化合物也能用以促進神經細胞的生長，例如可使得神經突變粗及變長。此外，本發明化合物能用以促進神經幹細胞的形成，並能誘導其分化為神經元細胞。
圖1為神經幹細胞添加含有本發明化合物與已知生長因子的培養基培養後的外觀形態照相圖(A)化合物A；(B)化合物B；(C)化合物C；(D)化合物D；(E)化合物E；(F)化合物F；(G)化合物G；(H)化合物H；(I)空白空白對照組；(J)表皮生長因子；(K)神經生長因子。
圖2為在培養基中添加本發明化合物對大腦皮質神經元細胞生長的影響的結果分析圖(*表示p＜0.0005)。
圖3為本發明化合物對大腦皮質神經元細胞以不同細胞密度進行培養時之影響的結果分析圖(*表示p＜0.005；**表示p＜0.05)(A)細胞密度300cells/mm2；(B)細胞密度150cells/mm2。
圖4為本發明化合物對神經細胞的神經突長度影響所得的照相圖(A)空白對照組；(B)化合物A；(C)化合物B；(D)化合物D；(E)化合物G。
圖5為用顯微鏡觀察神經幹細胞受誘導分化後的情形所得的照相圖，其中左排為螢光激發下的相片圖，右排是可見光下的細胞型態(A)先用化合物A培養，接著再用化合物A培養；(B)先用化合物A培養，之後用不添加任何生長因子的培養基培養；(C)先用表皮生長因子培養，之後再用表皮生長因子培養；(D)先用表皮生長因子培養，之後用不添加任何生長因子的培養基培養。
圖6為用顯微鏡觀察神經幹細胞受誘導分化後的情形所得的照相圖，其中左排為螢光激發下的相片圖，右排是可見光下的細胞型態(A)化合物D+表皮生長因子；(B)化合物D；(C)表皮生長因子；(D)不添加任何生長因子。
圖7為神經幹細胞經培養30天後的外觀形態的照相圖(A)空白對照組；(B)加入化合物A；(C)加入化合物A，在螢光激發下的相片圖。
本發明將通過參考下列實施方式做進一步的說明，這裡所述的實施方式並不限制本發明前面所公開的內容。本領域的技術人員，可做些一些改良與修飾，但其仍不脫離本發明的範圍。
實施方式根據本發明所指出的一種用以促進神經細胞增生的化合物，其是具有如下式一所示化學結構式的異戊二烯類黃酮化合物 其中，R1為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基(isoprene)；R2，R3，R4，R5，R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、異戊二烯基(isoprene)、或如式二或式三所示之香葉基(geranyl)。
本發明前述的異戊二烯類黃酮化合物，可通過已知有機化學合成技術合成，亦可通過自天然物中分離出具有近似化學結構的化合物，再經用已知的化學修飾技術修飾部分官能團後獲得。
作為本發明前述異戊二烯類黃酮化合物具體的實施例，其具有如下的化學結構式 其中，R1、R2、R3、R5、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1~3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
或 其中，R1、R2、R3、R5、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
或 其中，R1、R2、R3、R4、R5與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1~3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
或 其中，R1、R2、R3、R4、R5與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1~3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
或
其中，R1、R2、R3、R4、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基，或異戊二烯基。
或 其中，R1、R2、R3、R4、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基，或異戊二烯基。
或
其中，R1、R3、R4、R5、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1~3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
或 其中，R1、R3、R4、R5、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1~3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
作為本發明前述用以促進神經細胞增生的化合物更進一步的實施例，其具有如下化學結構式化合物A(Propolin A)
化合物B(Propolin B) 化合物C(Propolin C) 化合物D(Propolin D)
化合物E(Propolin E) 化合物F(Propolin F) 化合物G(Propolin G) 化合物H(Propolin H)
根據本發明所指出的化合物具有如下的特點(1)本發明化合物能在低密度(160cells/mm2以下)神經細胞的培養條件下，顯著地促進神經細胞(例如腦皮質神經細胞)的生長，以提高神經細胞的存活率。
(2)在對神經細胞生長與發育的影響上，本發明化合物可顯著地比用鹼性成纖維生長因子或表皮生長因子處理獲得更粗、更長及更多分支的神經突。
(3)在促進神經幹細胞的生成方面，用本發明化合物進行處理，顯著比用鹼性成纖維生長因子或表皮生長因子處理，更能促進神經幹細胞的生成，並且能維持這種球狀特性在體外培養的情況下存活至少30天，而這些神經幹細胞可以被誘導分化為神經元細胞、星形膠質細胞及少突神經膠質細胞。
(4)本發明化合物可用以誘導生成以神經元幹細胞(neuronal stemcells)為主的神經幹細胞(neural stem cells)，並促使這些幹細胞進一步分化為神經元細胞(neurons)。另外，本發明化合物與已知的生長因子(growth factors)不同，因此在應用上可通過共同使用鹼性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor)，以進行神經幹細胞的增生以有效地將神經幹細胞量化，以此即可以大量地獲得神經元幹細胞，以未來可應用於治療退化性神經疾病的細胞療法。
由於本發明化合物具有前述的功能及特點，因此本發明化合物可作為於體外培養神經幹細胞的添加劑，與前述已知技術所使用的大分子蛋白質(例如，表皮生長因子、鹼性纖維母細胞生長、膠質細胞源性神經營養因子、腦源性神經營養因子、神經生長因子、神經營養因子3、神經營養因子4，及血小板源性生長因子等)不同，本發明化合物中的異戊二烯類黃酮化合物為分子量較小的小分子物質，其可以在培養液內較久地維持其特性(大約7～9天換一次培養基即可)。此外，本發明化合物可誘導神經幹細胞顯著地分化為神經元細胞。另外，本領域的技術人員，通過閱讀本發明說明書後也可得知，本發明化合物中也可進一步包含一生長因子，用於培養神經幹細胞，以促使其增生。前述的生長因子在本發明中可舉出的例子包含表皮生長因子、鹼性成纖維生長因子和神經生長因子，但並不僅限於此。這對於一些神經學方面的研究是一個更好的且新興的實驗用無血清的細胞培養添加劑。
另外，已知小分子物質較易通過血腦屏障(Blood Brain Barrier，BBB)而到達腦細胞，而目前美國食品及藥物管理局(Food and DrugAdministration，FDA)正積極進行關於人體幹細胞移植治療方式的認可，尤其是關於神經退化性疾病方面的治療，而本發明化合物中所包含的異戊二烯類黃酮為小分子的物質，且其可在無血清的培養基中促進具有功能性的神經元細胞的形成，並可以在低細胞密度的情況下促進神經細胞的生存，因此本發明化合物所具有的這些特性，對於輔助前述人體幹細胞移植的治療來說，將可提供很大的幫助。
此外，本發明的技術人員，也可通過閱讀前述的說明而了解到，本發明化合物可進一步通過已知的技術開發成為一醫藥化合物。
實施例1配製培養神經幹細胞的生長培養基，其為在B-27無血清神經細胞培養基(B-27 supplemented neurobasal medium，Gibco)中添加青黴素G(penicillin G)、硫酸鏈黴素(streptomycin sulphate)及0.5mM的穀氨酸(L-glutamine，Gibco)。
在麻醉狀態下從懷孕16天的母鼠(Wistar)腹腔中取出在胎囊中的未出生的胎鼠。取出胎鼠的大腦組織，用0.1％胰蛋白酶溶液(trypsinsolution)在25℃下作用1分鐘。用磷酸鹽緩衝溶液(PBS solution)洗滌3次後，用已知的機械方式上下混合使其細胞打散。之後，將前述含有胎鼠大腦組織細胞的溶液通過70μm尼龍細胞濾網(nylon cell strainer，Falcon)，以將神經幹細胞釋放到溶液中。之後將此溶液以1000rpm的轉速離心10分鐘，再用前述培養神經幹細胞的生長培養基置換，這樣即可獲得包含神經幹細胞細胞群的懸浮液。
將前述神經幹細胞的懸浮液以150,000cells的細胞量放置於培養皿(Petri dish)上，並將其在37℃、5％CO2，以及相對溼度95％的環境下進行培養，以培養神經幹細胞。培養細胞的生長培養基每三天更換1次，每次更換一半的培養液。
進行實驗時，將前述神經幹細胞以300cells/mm2的細胞量放置於裝載有神經幹細胞的生長培養基的培養皿中。其中，在空白對照組的生長培養基中進一步添加表皮生長因子(5ng/mL)、鹼性成纖維生長因子(5ng/mL)或神經生長因子(5ng/mL)。而實驗組的生長培養基中則分別加入本發明化合物A～H。空白對照組的生長培養基中則加入5μL的二甲基亞碸(Dimethyl Sulfoxide，DMSO)。之後，在上述培養條件進行培養，並在培養七天後用顯微鏡觀察懸浮神經幹細胞的大小、外型態和存活率。所得結果示於圖1。
結果顯示，本發明化合物A～H、表皮生長因子、神經生長因子都可以使得神經幹細胞聚集成球狀(神經球)，且比空白對照組所形成的神經球要大。由此可明顯地看出本發明化合物可與已知生長因子達到相同促進神經幹細胞生長的目的。也就是，本發明化合物對於神經幹細胞球狀物的增生有促進的效果。
實施例2將實施例1中所得的神經幹細胞以300cells/mm2的細胞量培養在已吸附30μg/mL多聚賴氨酸(poly-D-lysine，Sigma)的6孔培養盤中，在37℃、5％CO2，以及相對溼度95％的環境下進行培養。經培養分化而成的細胞統稱為大腦皮質神經元細胞(cortical neurons)。
將前述的大腦皮質神經元細胞分別培養於含有10μM化合物A、化合物B、化合物D、化合物E、化合物F、化合物G和化合物H的生長培養基中，重複進行三次試驗。另外，對照組的生長培養基中加入5μL的二甲基亞碸。經培養五天後，用已知計數活細胞數目的方法進行細胞計數(MTT assay)，並在540nm吸光值進行結果的分析，結果示於圖2。
通過圖2所得的結果顯示，實驗組的吸光值顯著地比空白對照組的高，其中又以化合物A、D與G的效果最好。此結果顯示本發明化合物確實能顯著地增加大腦皮質神經元細胞的存活率。
實施例3將實施例1中所得的神經幹細胞分別以不同的細胞密度(150,300cells/mm2)的細胞量培養在已吸附30μg/mL多聚賴氨酸(poly-D-lysine，Sigma)的6孔培養盤中，在37℃、5％CO2，以及相對溼度95％的環境下進行培養。經培養分化而成的細胞統稱為大腦皮質神經元細胞(cortical neurons)。
將前述大腦皮質神經元細胞分別培養於含有化合物A、D與G的生長培養基中，重複進行三次試驗。另外，取5μL的二甲基亞碸加入生長培養基中，作為對照組。培養五天後，以已知計數活細胞數目的方法進行細胞計數(MTT assay)，並於540nm吸光值進行結果的分析，結果示於圖3。已知大腦皮質神經元細胞以640cells/mm2的細胞密度培養於生長培養基中時，細胞的存活率可高於90％，而以160cells/mm2的細胞密度培養時，細胞的存活率會降至約50％。因此當培養時細胞密度低於160cells/mm2時，若沒有適時添加任何生長因子，則細胞的死亡率將會大幅地增加。這是由於在這種情況下，會由於細胞數太少使得細胞和細胞間的距離相隔太遠，而致使細胞和細胞間不易進行生長因子的傳遞。
由圖3所得的結果顯示，添加有本發明化合物的實驗組中，不論起始培養的細胞密度如何，其所得的吸光值均顯著地比對照組的高，此結果顯示本發明化合物的添加，可顯著地改善在低細胞密度下進行培養之神經細胞的存活率。
實施例4
將實施例1中所得的神經幹細胞以38cells/mm2的細胞量培養於已吸附30μg/mL多聚賴氨酸(poly-D-lysine，Sigma)的6孔培養盤中，在37℃、5％CO2，以及相對溼度95％的環境下進行培養。經培養分化而成的細胞統稱為大腦皮質神經元細胞(cortical neurons)。
將前述將大腦皮質神經元細胞培養在含有本發明化合物A、B、D與G的培養基中。另外，取5μL的二甲基亞碸加入生長培養基中，以作對照組。經培養五天後，用顯微鏡進行細胞觀察並計算神經突(neurite)的長度，所得結果示於圖4。
參考圖4，完全不加入任何生長因子的空白對照組，在顯微鏡下可觀察到其神經元本體(soma)的萎縮，神經細胞完全死亡的情況(圖4A)，所以其所測得的神經突的長度為零。然而，實驗組經分別加入化合物A2.5μM、化合物B 5μM、化合物D 5μM和化合物G 5μM後，在顯微鏡下可觀察到實驗組中的神經元細胞持續生長，且神經突向外伸長，並可觀察到一個神經元本體至少有三條以上的神經突伸出，而且其中一條會變長且尾端分岔為多個神經突觸。對神經突長度進行分析，加入化合物A後，神經突L1長度為236μm、神經突L2長度為161μm(圖4B)；加入化合物B後，神經突L1長度為235μm(圖4C)；圖片D中加入化合物B後，神經突L1長度為211μm(圖4D)；圖片E中加入化合物B後，神經突L1長度為316μm、神經突L2長度為216μm(圖4E)。
由此結果可以得知本發明化合物能在低細胞濃度(38cells/mm2)下，促進神經細胞的存活，並促使其神經突伸長，且發育為成熟的神經元細胞。實施例5從實施例1所得的細胞懸浮液中取出100μL，將其稀釋成1mL。接著，吸取250μL的上清液培養在已吸附30μg/mL多聚賴氨酸(poly-D-lysine，Sigma)的載玻片上，依前述的培養條件培養3天後，以使其分化成大腦皮質神經元細胞(cortical neurons)。最後通過已知的免疫螢光染色法進行染色。進行免疫螢光染色時，使用可與神經元細胞專一性結合的抗MAP2做為一抗，以及使用可識別一抗的含螢光基質的老鼠免疫球蛋白抗體做為二抗。當神經元細胞被一抗識別後會使得神經元細胞在螢光的激發下產生螢光。
在開始培養神經幹細胞時即加入化合物A或是表皮生長因子，而後取出神經幹細胞貼在載玻片上，然後在細胞都貼附在玻片上後，移除細胞液重新加入含有化合物A或表皮生長因子的培養液中，或不添加任何生長因子的培養液中，培養三天後使用免疫螢光染色觀察細胞型態。
參考圖5，左排為螢光激發下的相片圖(白光的為神經元細胞，圖中陰影的部份為死亡的細胞或是為非神經元細胞，右排是可見光下的細胞型態，其可顯現此視野下的所有細胞。因此從第五圖的結果中可實際觀察看到，當一開始培養神經幹細胞時即加入化合物A，無論以後細胞分化成大腦皮質神經元細胞時有沒有加入化合物A，都會使得神經幹細胞分化成神經元細胞(圖5A、B)，而當細胞加入表皮生長因子時，會使得神經細胞增生(圖5C)，但是其長出來的大多是非神經元細胞，而即便之後不再提供表皮生長因子，細胞長出來的大多也是非神經元細胞只是比繼續加入的少(圖5D)。由此可得知表皮生長因子雖可用以促進神經細胞的增生，使其存活率增加，但其所增生的細胞大多為非神經元細胞的前體細胞，但本發明化合物除可增加神經幹細胞的存活外，還可進一步影響其分化，使其向神經元細胞發育。
實施例6實驗操作同實施例6，但在開始培養神經幹細胞時，改為添加化合物D並同時使用表皮生長因子，而後取出幹細胞貼在載玻片上，然後待細胞都貼附在玻片上後，移除細胞液重新加入含有化合物D，或表皮生長因子，或加入不含任何生長因子的培養液，或加入化合物D並同時使用表皮生長因子，培養三天後使用免疫螢光染色觀察細胞型態。
參考圖6，左排為螢光激發下的相片圖(白光的為神經元細胞，圖中陰影的部份為死亡的細胞或是為非神經元細胞，右排是可見光下的細胞型態，其可顯現此視野下的所有細胞。因此從圖6的結果中可實際觀察到，如果一開始培養神經幹細胞時即加入化合物D以及表皮生長因子，可觀察到神經幹細胞顯著增生的狀況，並且在分化後向神經元細胞發育(圖6A)。而當細胞分化成大腦皮質神經元細胞後，僅加入表皮生長因子的，其細胞會分化成非神經元細胞(圖6C)，而含有化合物D的，則會促使其神經幹細胞分化成為神經元細胞(圖6B)。另外，當細胞分化成大腦皮質神經元細胞後，不再加入任何生長因子的，也可使神經幹細胞分化成神經元細胞，但其神經元細胞的數量會比再加入化合物D的少(圖6D)。由此可知表皮生長因子可以促進神經細胞的增生，如果同時使用本發明化合物則會使得較多的細胞向神經元細胞發育。由此實驗結果可進一步得知，當神經幹細胞在發育時加入了本發明化合物，將可使得神經幹細胞向神經元幹細胞(neuronal stem cells)方向發育。
實施例7取由實施例1中用化合物A所培養出的神經幹細胞進行連續培養，每七天更換一次培養基。另外，以二甲基亞碸做為空白對照組。在培養至第三十天時，吸出100μL神經幹細胞的細胞液，將其稀釋至1mL。之後，吸取250μL上清液，將其培養於已吸附30μg/mL多聚賴氨酸(poly-D-lysine，Sigma)的載玻片上，用顯微鏡觀察神經幹細胞的外觀型態，所得結果示於圖7。
參考圖7，由圖7可以看到完全不加入任何生長因子的對照組(圖7A)中幾乎沒有存活的細胞，且無法呈現正常神經幹細胞會聚集成球狀的特性，細胞懸浮培養時已呈現萎縮的狀態。而加入化合物A培養的神經幹細胞則仍可維持其聚集成球狀的特性(圖7B)，並將此細胞持續培養三天後用如同實施例5的免疫螢光染色法進行染色，在顯微鏡下仍可看到神經幹細胞可正常地分化為神經元細胞，並持續進行神經突的生長(圖7C)。
綜合上述實施例可知，本發明化合物可用於長時間培養神經幹細胞並能維持其聚集成球狀的特性，並仍能使神經幹細胞向神經元細胞分化。另一方面，本發明化合物可在連續培養時，可以每七天更換一次培養基的狀況下進行長時間的培養，且可以培養神經幹細胞使其存活超過三十天以上。然而，已知的生長因子，一般約3～4天即需更換一次培養基，這是由於已知生長因子皆為大分子蛋白質，因此易於在常溫下失去活性，而本發明小分子化合物的特性則不受此因素的影響。
權利要求
1.一種用以促進神經細胞生長的化合物，其中該化合物具有如下式一所示的化學結構式 其中，R1是氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基(isoprene)；而R2、R3、R4、R5、R6與R7分別為氫、羥基、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、異戊二烯基(isoprene)、或具有如式二或式三所示的香葉基(geranyl) (式二) (式三)。
2.權利要求
1所述的化合物，其中該化合物中的R2為如式二或式三所示的香葉基(geranyl)，而R1、R3、R4、R5、R6與R7分別為氫(-H)、羥(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
3.權利要求
1所述的化合物，其中該化合物中的R4為如式二或式三所示的香葉基(geranyl)，而R1、R2、R3、R5、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
4.權利要求
1所述的化合物，其中該化合物中的R5為如式二或式三所示的香葉基(geranyl)，而R1、R2、R3、R4、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
5.權利要求
1所述的化合物，其中該化合物中的R6為如式二或式三所示的香葉基(geranyl)，而R1、R2、R3、R4、R6與R7分別為氫(-H)、羥基(-OH)、1～3個碳的直鏈或支鏈烷基、或異戊二烯基。
6.權利要求
1所述的化合物，其中該化合物能刺激神經幹細胞分化成為神經元細胞。
7.一種培養基的添加物，其包含權利要求
1所述的化合物。
8.如權利要求
7所述的添加物，其中該培養基為培養細胞的培養基。
9.權利要求
8所述的添加物，其中該細胞為神經幹細胞。
10.權利要求
7所述的添加物，其中該培養基進一步包含一生長因子。
11.權利要求
10所述的添加物，其中該生長因子選自表皮生長因子、鹼性纖維母細胞生長，及神經生長因子所組成的組。
12.一種用以刺激神經幹細胞分化的醫藥組合物，其包含權利要求
1所述的化合物。
專利摘要
一種用以促進神經細胞生長發育及神經幹細胞生成的化合物，其是具有如右式一所示化學結構式的異戊二烯類黃酮(prenylflavanones)化合物。本發明化合物可用以增加神經細胞的存活率，並能在低密度神經細胞的培養條件下，顯著地增加神經細胞的存活率。另外，在神經細胞生長發育方面，本發明化合物能促進神經細胞的生長，使得神經纖維變粗及變長，並增加其分支。此外，本發明化合物能促進神經幹細胞(neural stemcells)的形成並且進一步研究發現所生成的幹細胞為神經元幹細胞(neuronal stem cells)，並能誘使其分化為神經元細胞(neurons)。
文檔編號C12N5/0797GK1990480SQ200510097522
公開日2007年7月4日 申請日期2005年12月28日
發明者黃中洋, 陳嘉南, 賀婉如 申請人:彥臣生技藥品股份有限公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan