肝水解肽注射液的製作方法
2023-08-07 08:15:21 1
專利名稱：肝水解肽注射液的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域。
背景技術：
目前關於肝水解肽注射液的生產工藝已是普遍應用的工藝，其缺點是1、工藝過程較為複雜，有些試藥如A-T3942黴菌蛋白酶已無廠家生產。2、另外由於工藝過程時間較長，且在高溫條件下進行，造成產品氧化，並使終產品顏色較深，為棕色。3、工藝過程中加入苯酚為抑菌劑，使產品不可靜脈注射。4、工藝中無截留1萬分子量大分子超濾過程，使產品過敏性難以保障，也使靜脈注射已乎不可能。
發明內容
為了解決上述問題，本發明提供一種可以靜脈注射的肝水解肽注射液。
本發明的工藝過程是a、勻漿取新鮮牛肝，去除脂肪、大血管及其它結締組織，切成塊，水洗二次，衝淨血水，再用純化水衝洗二次，稱重，按1∶0.5--3加水，用膠體磨勻漿，循環數分鐘，放入血漿瓶中，備用。
b、酶解用Ca(OH)2的混懸液將上述勻漿調至pH至7.0--7.5。將胰酶按組織重量的0.5--5％稱出胰酶，每500g胰酶加純化水1000ml，加入CaCl25-6g，攪勻，室溫放置1小時活化。將上述活化的胰酶加入勻漿中，攪勻，在水浴鍋中加熱至54℃--60℃，將上述混合物分至血漿瓶或不鏽鋼桶中，放入54℃--60℃的水浴鍋中，每半小時攪拌一次，54℃--60℃保溫1-5小時。可根據水解情況調整。
c、分離上清將上述水解液取出，用磷酸調pH5-8，按肝組織重量的0.5--4％(w∶w)加入活性碳或不加活性碳，根據上清晰出情況定，加熱至沸，持續數分鐘，自然放冷，吸取上清液過濾，濾液煮開後按組織重量的0.5--2‰加入亞硫酸氫鈉，如水解液顏色較淺，亦可不加。冷卻後，過濾至澄清。
d、冷凍上述濾液過5萬或10萬分子量的超濾柱，濾液立即放入-20～-30℃冷庫或冷櫃深凍過夜，24小時後取出，室溫條件下自然化凍。
e、超濾注意觀察化凍進程，待有少量冰塊時，即吸取上清過1萬分子量超濾柱二次，得超濾液即為肝水解肽原液，每1kg牛肝大約得到中間體溶液600---1200ml。
f、灌封上述原液進行檢測，合格後加水稀釋至11.5-12.0mg/m1，調節pH至5.5-7.0除菌過濾，灌封滅菌即得。
本發明優點1、本工藝省去了原工藝中的乙醇沉澱步驟及苯酚抑菌步驟，保證了製劑不含任何抑菌劑，從而使靜脈注射成為可解，同時也使工藝過程簡單。
2、由於工藝加熱時間較原工藝大大縮小，使該產品顏色變化不大，符合新的國家藥品質量標準，即微黃色至淡黃色或淡黃棕色。
3、由於採用了現化的超濾技術，保證了成品的分子量在1萬道爾頓以下，使得靜脈注射後不過敏，從而使靜脈給藥成為可能。
本發明的
具體實施例方式1、勻漿取新鮮牛肝，去除脂肪、大血管及其它結締組織，切成4-6cm小塊，水洗二次，衝淨血水，再用純化水衝洗二次，稱重，按1∶1(w∶w)加水，用膠體磨勻漿，循環數5鍾，放入1萬毫升血漿瓶或不鏽鋼桶中，備用。
2、酶解用Ca(OH)2的混懸液將上述勻漿調至pH至7.0--7.5。將胰酶按組織重量的1.25％稱出胰酶，每500g胰酶加純化水1000ml，加入CaCl25-6g，攪勻，室溫放置1小時活化。將上述活化的胰酶加入勻漿中，攪勻，在水浴鍋中加熱至54℃--60℃，將上述混合物分至血漿瓶或不鏽鋼桶中，放入54℃--60℃的水浴鍋中，每半小時攪拌一次，54℃--60℃保溫2小時。
3、分離上清將上述水解液取出，用磷酸調pH5-8，按肝組織重量的1.0％(w∶w)加入活性碳，加熱至沸，持續10分鐘，自然放冷，吸取上清液過濾，濾液煮開後按組織重量的2‰加入亞硫酸氫鈉，冷卻後，過濾至澄清。
4、冷凍上述濾液過5萬或10萬分子量的超濾柱，濾液立即放入-20～-30℃冷庫或冷櫃深凍過夜，24小時後取出，室溫條件下自然化凍。
5、超濾注意觀察化凍進程，待有少量冰塊時，即吸取上清過1萬分子量超濾柱二次，得超濾液即為肝水解肽原液，每1kg牛肝大約得到中間體溶液600---1200ml。
6、灌封上述原液進行檢測，合格後加水稀釋至11.5-12.0mg/ml，調節pH至5.5-7.0除菌過濾，灌封滅菌即得。
實驗數據1、上述的水解溶液按質量標準方法測定多肽濃度(方法見參考文獻1)，結果如下
2、鑑別實驗三批均符合國家藥品標準WS-10001(HD--0808)--2002肝水解肽注射液項下的規定。
3、蛋白質檢測取本品稀釋至10mg/ml，取1ml，加20％磺基水楊酸，混勻，均未發生混濁。
4、高分子物質按國家藥品標準WS-10001(HD--0808)--2002肝水解肽注射液項下進行，取本品適量加水製成每ml含1mg的溶液，作為供試品溶液，另取細胞素C適量，加水製成每ml含5mg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)測定。
採用凝膠色譜柱(如TSKgelG2000SW)，以磷酸緩衝液(取磷酸氫二鉀13.93g，磷酸二氫鉀5.32g，加異丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸調pH7.0)為流動相，檢測波長為280nm，取對照溶液與供試品各20ul，分別注入液相色譜柱，記錄色譜圖，供試品色譜圖中，各峰的保留時間均應大於對照溶液峰的保留時間。結果細胞色素C主峰保留時間為8.49min，各批樣品峰保留時間大於8.49min。
5、熱源取本品製成注射液後，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI D)，劑量按家兔每1kg注射0.5ml，結果均符合規定。
6、過敏實驗取本品，加氯化鈉注射液製成每ml含2mg的溶液作為致敏液及供試品，依法檢查，健康豚鼠，雌雄均可，體重250--350g，試驗前及試驗期內，均應按正常飼養條件飼養，取上述豚鼠6隻，隔日腹腔注射供試品0.5ml，連續3次，然後分成兩組，每組3隻，分別在第一次注射後14日及21靜脈注射供試品溶液1.0ml。靜脈注射15分鐘內均不得出現過敏反應，如有豎毛，呼吸困難，噴嚏、幹哎或咳嗽3聲等現象中的兩種以上者，或有囉音、抽搐、虛脫或死亡現象之一者應判斷為陽性。
7、降壓物質取肝水解肽注射液，加0.9％氯化鈉注射液製成1ml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版第二部附錄XG)，劑量按貓體重每1kg注射0.2ml，結果三批均符合規定。
8、其他應符合注射劑項下有關的各項規定，各批均符合，尤其澄明度很好。
權利要求
1.一種肝水解肽注射液，其特徵在於其工藝過程是a、勻漿取新鮮牛肝，去除脂肪、大血管及其它結締組織，切成塊，水洗二次，衝淨血水，再用純化水衝洗二次，稱重，按1∶0.5--3加水，用膠體磨勻漿，循環數分鐘，放入血漿瓶中，備用。b、酶解用Ca(OH)2的混懸液將上述勻漿調至pH至7.0--7.5。將胰酶按組織重量的0.5--5％稱出胰酶，每500g胰酶加純化水1000ml，加入CaCl25-6g，攪勻，室溫放置1小時活化。將上述活化的胰酶加入勻漿中，攪勻，在水浴鍋中加熱至54℃-60℃，將上述混合物分至血漿瓶或不鏽鋼桶中，放入54℃-60℃的水浴鍋中，每半小時攪拌一次，54℃-60℃保溫1-5小時。可根據水解情況調整。c、分離上清將上述水解液取出，用磷酸調pH5-8，按肝組織重量的0.5-4％(w∶w)加入活性碳或不加活性碳，根據上清晰出情況定，加熱至沸，持續數分鐘，自然放冷，吸取上清液過濾，濾液煮開後按組織重量的0.5--2‰加入亞硫酸氫鈉，如水解液顏色較淺，亦可不加。冷卻後，過濾至澄清。d、冷凍上述濾液過5萬或10萬分子量的超濾柱，濾液立即放入-20～-30℃冷庫或冷櫃深凍過夜，24小時後取出，室溫條件下自然化凍。e、超濾注意觀察化凍進程，待有少量冰塊時，即吸取上清過1萬分子量超濾柱二次，得超濾液即為肝水解肽原液，每1kg牛肝大約得到中間體溶液600---1200ml。f、灌封上述原液進行檢測，合格後加水稀釋至11.5-12.0mg/ml，調節pH至5.5-7.0除菌過濾，灌封滅菌即得。
全文摘要
一種肝水解肽注射液，屬於醫藥技術領域。本發明提供一種可以靜脈注射的肝水解肽注射液。本發明的工藝過程包括六表步驟勻漿、酶解、分離上清、冷凍、超濾、灌封。本發明省去了原工藝中的乙醇沉澱步驟及苯酚抑菌步驟，保證了製劑不含任何抑菌劑，從而使靜脈注射成為可解，同時也使工藝過程簡單。
文檔編號A61P1/00GK101091722SQ200710055818
公開日2007年12月26日 申請日期2007年6月29日 優先權日2007年6月29日
發明者石海 申請人:石海