治療血小板減少症的藥物及其在治療輻射病中的應用的製作方法

2023-08-07 04:27:41 2

專利名稱：治療血小板減少症的藥物及其在治療輻射病中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及治療血小板減少症的藥物，以及治療輻射病的藥物。
血小板減少是血液病臨床中常見的症狀。現有的治療血小板減少症的藥物主要是糖皮質激素，如強的松，效果較好。口服大劑量此類藥物可使血小板增多，並提高纖維蛋白原濃度，縮短凝血時間。但是，大劑量或長期應用本類藥物，可引起肥胖、多毛、痤瘡、血糖升高、高血壓等副作用，並且由於本類藥物對病原微生物並無抑制作用，且由於其能抑制炎症反應和免疫反應，降低機體防禦功能，反而有可能使潛在的感染病灶活動和擴散。在妊娠期間特別是妊娠早期使用可能影響胎兒發育，有的可導致多發性畸形。次為長春新鹼等免疫抑制劑，但療效低，且毒副反應很大。
為克服上述藥物的缺陷，本申請人曾提出用從巴西引進的藥用白甘薯(Ipomoea batatas(Linn.)Lam.，又名西蒙)葉製備治療血小板減少症的藥物。詳細見《臨床血液學雜誌》1992年第5卷第1期第8--10頁。其製備方法是將白甘薯葉乾燥，粉碎成粉狀後，壓片即得。用該白甘薯葉片劑治療血小板減少症，取得了較好的療效。但是，該藥物卻存在如下缺點1、由於不知道其中的有效部位，未進行提取，因而藥物中的有效成分含量低，病人服藥量大；2、由於服藥量大，而且藥物中纖維含量高，往往造成病人腸胃不適。
除上述現有技術外，中國專利ZL92103783.X公開了一種從甘薯葉提取有效成分的方法。其具體做法是以京薯2號的幹葉或鮮塊為原料，以水為提取劑，在75--85下煎煮，真空濃縮，高壓滅菌製成營養液。在該文獻中還指出對京薯2號的幹薯葉分析發現硒含量為0.163ppm，高於西蒙1號的甘薯幹葉(0.102ppm)，已知硒有抑制腫瘤和抗衰老作用。因此該現有技術是以硒為有效成分進行提取。
另一方面，目前臨床上治療輻射病的藥物主要為氨磷汀，可選擇的藥物很少。輻射病的臨床症狀不僅表現在血小板的減少，而且可能造成全血細胞減少，如白細胞的減少。
本發明的目的是在現有技術的基礎上，提取原藥中的有效部位，製備治療血小板減少症的藥物，在不降低療效的前提下，減少病人的服藥量。
本發明的另一目的是提出上述發明目的中所述的藥物的第二藥物用途。
本發明提供的藥物是由西蒙，經乙醇提取，並濃縮、乾燥後得到的。
進一步的優化是所使用的乙醇濃度為50--95％，用量為原料藥的5--15倍，回流提取時間為1--4小時，提取溫度為25--75℃。
最優條件是乙醇濃度為70％，用量為原料藥的8倍，回流提取時間為2小時。
濃縮過程可在減壓、溫度為50--80℃條件下進行。
乾燥過程採用噴霧乾燥方法，其中進口溫度200-260℃，出口溫度100--160℃。
本申請人經研究表明上述藥物還可以作為治療輻射病的藥物。
本發明中所用的西蒙味甘，性寒(涼)。味甘屬陽，性寒涼屬陰，既有補益髒俯氣血之功，又有清熱涼血止血之效。故該藥在性能上陰陽並存，治療上標本兼顧。西蒙甘寒，力專清熱瀉火、涼血消瘀，故凡吐血、咯血、衄血、畜血、溺血、崩中帶下，審其證因於熱成者無不宜此調治。西蒙滋肝腎，補脾氣，又內專涼血滋陰，病人虛而有熱者，或肝、腎陰虛，或脾失統血，宜加用之。
本申請人將西蒙提取物按極性大小分成不同的部位，並用生物導向實驗研究表明經醇提制的部位主含咖啡酸類及黃酮類。
本申請人經主藥效學試驗證明西蒙中的有效成份為咖啡酸類和黃酮類物質，它們為醇溶性物質。其中咖啡酸可以咖啡酸醯化物的形式存在，在水中即水解為咖啡酸。咖啡酸具有抗菌抗病毒、升高白細胞、止血、抑制鼠腦組織勻漿脂質過氧化物的生成，有縮短血凝及出血時間的作用，易溶於乙醇。
另一方面，輻射病主要是由於射線的高能量光子直接或間接作用於患者的組織器官，將機體局部組織中的水分電離分解後產生非常活潑O2·、OH·及H2O2·、HO2·、H·等自由基，繼而破壞機體的生物大分子、造血系統、酶及核酸等生命物質。而西蒙中含有的黃酮類、咖啡酸類物質均有易於還原的有機基團，在極短時間內可致自由基失活。
在該藥的研究過程中，發現由於葉中含有較多的樹膠類物質，經煎煮後，難於過濾，且水煎液的臨床效果不理想。其原因在於，水提取液要濃縮時需將溫度控制在50--80℃，在工業生產中很難達到。它要求設備密封性能相當好，從而達到減壓濃縮的真空度。另一方面，咖啡酸在水中的溶解度隨溫度變化，在冷水中溶解度很小。本申請人提出用醇回流提取，則易於過濾，便於製劑。回收醇時，即達到濃縮的目的。由於西蒙幹葉中所含成分較多，常法難於乾燥，故採用噴霧乾燥，在瞬間達到蒸發、乾燥的效果，將有效成份的損失降低到最低限度。原藥經提取濃縮、乾燥後，可製成膠囊，有利於避免藥物吸潮。
I期臨床試驗結果表明從1999年4月至2000年2月，在臨床資料完整的23例ITP、STP病人中，有9例(39.1％)是經強的松、氨肽素、肌苷、利血生、血康等治療無效的情況下該用本發明藥物，其結果有效率為100％，其中治癒7例(77.8％)，顯效1例(11.1％)，進步1例(11.1％)。治療期間無任何毒副反應，使用安全，療效確切。臨床給藥量為1--2粒/次，每天3--4次，每粒藥中含提取藥粉0.35g。
本發明提供的治療血小板減少症的藥物，不但能治療血小板減少，而且對輻射病也有顯著的療效。臨床給藥量為2--3粒/次，每天4次，每粒藥中含提取藥粉0.35g。
表1、提取工藝因素水平表因素 ABC水平 溶媒量乙醇濃度(％) 回流時間1 4 8542 6 7023 8 501實驗方法與結果稱取50g西蒙葉片，該西蒙葉為湖南省農科院作物研究所提供(下同)。按正交表加入乙醇，回流，測定幹浸膏量和咖啡酸含量。
幹浸膏量測定方法精密吸取回流後濾液20ml，按藥典方法測定，並計算出幹浸膏提取量。
咖啡酸含量採用標準曲線法，按分光光度法(中國藥典1990版一部附錄51頁)於325nm處測定。
供試品溶液的製備取本品，研成細粉，取約1g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加70％乙醇50ml，稱定重量，水浴加熱回流1小時，放冷，稱定重量，加70％乙醇補足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液10ml，蒸至近幹，殘渣加蒸餾水適量，使之溶解，放冷，小心轉移至製備好的聚胺柱(Φ1.5×30cm，聚醯胺柱約10cm高)，蒸餾水洗滌蒸發皿三次，洗液併入柱上。冷蒸餾水反覆衝洗柱子(約100ml)，棄去洗液。95％乙醇150ml衝洗至流出醇液近無色，減壓回收乙醇至幹，甲醇定量轉移至50ml容量瓶中，搖勻即得供試品溶液。
測定法按分光光度法(中國藥典1990版一部附錄51頁)在325nm波長處測定吸收度。計算供試品溶液中咖啡酸的重量(ug)，即得本品中含咖啡酸(C9H8O4)的百分含量。
表2、醇提工藝方差分析表結 果ABCD浸膏得率(％) 咖啡酸類含量(mg/g藥材)1111111.7 8.342122212.1 8.823133311.8 8.134212313.2 8.645223114.1 9.276231215.2 9.457313212.2 8.708321316.2 10.539332114.8 9.12注D為空白值。
以咖啡酸類含量和浸膏得率為指標考察正交試驗的直觀分析及統計學方差分析結果(見表2)表明。對咖啡酸類含量的影響A、B兩個因素均有顯著性意義；對浸膏得率A因素具有顯著性意義。程度依次為A＞B＞C。綜合分析，各因素的最佳水平為A3B2C1。由於提取時間因素影響小，從節約的角度出發先C2較好，即A3B2C2。結論西蒙膠囊藥粉原料製備工藝最佳條件是藥材加8倍量70％乙醇，回流2小時。無論是對咖啡酸還是浸膏的提取，均為最佳工藝條件。
所得藥粉中，經測定每1克藥粉中含咖啡酸75mg，總黃酮25mg。咖啡酸的測定方法同實施例1--9中。總黃酮的含量以槲皮素計，用標準曲線法測定。樣品製備如下精密稱取上述本發明提供的藥粉約1克，置於200ml圓底燒瓶中，精密加入50％甲醇溶液100ml，稱重，回流1小時，冷卻，稱重，補足減失重量。精密吸取樣品溶液100μl，加水約3ml，加醋酸-醋酸鈉緩衝溶液1ml，加0.1M三氯化鋁溶液1ml，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，於420nm處測定，通過標準曲線計算得總黃酮的含量。
毒理學研究本研究急性毒性試驗、亞急性毒性試驗、長期毒性試驗，實驗結果如下。
4.1急性毒性試驗昆明種小白鼠32隻，每隻動物在24小時內灌胃本發明提供的西蒙膠囊顆粒劑0.6ml/20g體重(用量相當於生藥43.5g/kg體重)，藥物濃度已達最大限度，且7天之內無一死亡。動物活動性、毛色及重要內臟器官均正常，求不出灌胃的LD50，劑量已達到臨床應用藥量的218倍。
4.2亞急性毒性試驗小白鼠24隻，隨機分成3組，連續灌胃給藥30天，每天按0.25ml/10g體重劑量給藥一次。在第31天稱體重。斷頭處死小死，並進行肝功能、血常規等檢查，結果表明給藥組與對照組小鼠的紅細胞、血紅蛋白、血小板、白細胞及肝功能，組間無顯著性差異。
4.3長期毒性試驗大白鼠60隻，連續灌服西蒙膠囊135天。高、低兩個劑量組(相當於成人日用量的8倍和3倍)，各組血常規、肝、腎、腦功能檢測，腦、心、肺、脾、腎、睪丸等病理組織學切片結果，與對照組比較無明顯差異。
以上試驗研究表明本發明提供的西蒙膠囊劑安全，毒副作用較小。
本發明藥物主要藥效學研究一、試驗材料(一)、受試動物小白鼠Balb/c種，體重18-22g，雌雄各半。由中國科學院上海實驗動物中心提供，為清潔實驗動物，隨機分為五組，每組24隻。(二)、受試藥物(含劑量與給藥途徑)本發明提供的西蒙膠囊每粒含提取藥粉0.35g，相當於西蒙原藥2.5g。將藥粉加適量蒸餾水呈混懸液對動物灌胃給藥，每日二次，分高低兩個劑量組。
陽性對照藥物強的松片，為目前治療血小板減少性紫癜療效確切的藥物。試驗時將藥片粉碎成細末，加適量蒸餾水製成一定濃度的混懸液對動物灌胃給藥，每日兩次。
空白對照用同等容量蒸餾水灌胃，每日兩次。
藥物劑量西蒙低劑量組2.5g/kg(人0.035g提取藥粉/kg體重)高劑量組7.5g/kg強的松對照組0.01g/kg(人1mg/kg)二、試驗方法與結果(一)、試驗方法1.動物分組將Balb/c鼠隨機分成五組，每組24隻，雌雄各半。
一組西蒙低劑量組；二組西蒙高劑量組；三組陽性藥物強的松對照組；四組空白對照模型動物組；五組空白對照正常動物組。
2.複製血小板減少症動物模型將前四組動物，用Co60一次性照射，劑量650rad，產生繼發性血小板減少症模型。因為特發性血小板減少性紫癜(ITP)目前尚無製造方法。
3.觀察指標Hb、WBC、Pt計數及動物活動狀況。試驗前觀察2次(取平均值)，開始試驗後，每周觀察血象1次，至實驗組血象恢復正常為止。(二)、實驗結果見表3。三、討論與小結(一)、討論西蒙膠囊治療前模型各組(一至四組)血紅蛋白值與正常組無差異(P＞0.05)。
白細胞與血小板計數經Co60照射後，明顯下降，僅為正常組值的四分之一，前4組與第五組(正常組)統計學處理差異顯著(p＜0.001)。
西蒙膠囊藥效學總結表3單位x109/L
經用西蒙膠囊與強的松分別治療後，第一周、第二周複查兩次，西蒙高、低劑量兩組、強的松對照組，白細胞數與血小板數明顯上升，與空白模型對照組(第四組)相比，血小板上升值有顯著差異(P＜0.001)。西蒙膠囊組與正常組血小板值無明顯差異(P＞0.05)，說明西蒙膠囊組通過西蒙膠囊治療血小板計數近於恢復正常。第三周後複查，血小板計數治療組完全恢復正常，但空白模型對照組(第四組)仍比治療組(一、二、三組即西蒙高、低劑量組與強的松對照組)和正常組(第五組)的血小板計數低很多，統計學處理，第一、二、三組的血小板數與第四組差異顯著(P＜0.01)，而一、二、三組血小板數比正常組還略高，但與正常組無統計學差異(P＞0.05)，而第四組與第五組血小板數差異顯著(P＜0.01)，說明未經治療的模型組恢復緩慢。(二)、小結從上看出，西蒙膠囊治療血小板減少性紫癜療效顯著，結果與陽性藥強的松相當，說明其對血小板減少性紫癜有確實的提升血小板的作用。
同時，由於血小板減少症動物模型是將動物用Co60一次性照射，劑量650rad，產生的繼發性血小板減少症模型。因此，該模型同樣構成輻射病的模型。從表3中的數據可以看出，動物的白細胞減少，經給藥後，白細胞恢復正常。說明本發明提供的藥物不但能升血小板，對輻射病亦具有顯著的療效。
典型病例1、劉某某女28歲，臨床症狀皮膚紫癜，月經量多，診斷為原發性血小板減少性紫癜(ITP)，曾用強的松、氨肽素等治療無效。服用本發明提供的藥物三個月後，血小板從25*109/L，升至58*109/L，皮膚紫癜消失，月經量正常。
2、楊某某女60歲，臨床症狀皮膚紫癜瘀斑17年，診斷為ITP，經強的松多次治療，效果不滿意。服用本發明提供的藥物兩個月餘，皮膚紫癜瘀斑消失，血小板從54*109/L上升至112*109/L，血小板正常。
3、朱某某，男71歲，反覆皮膚紫癜瘀斑，結膜出血，診斷為繼發性血小板減少性紫癜(STP)，經氨肽素，肌苷、血康及中藥治療無效。服用本發明提供的藥物兩個月餘，血小板從59*109/L上升至136*109/L。
權利要求
1.治療血小板減少症的藥物，它是由西蒙，經乙醇提取，並濃縮、乾燥後得到的。
2.根據權利要求1所述的治療血小板減少症的藥物，其特徵在於所使用乙醇濃度為50--95％，用量為原料藥的5--15倍，回流提取時間為1--4小時，提取溫度為25--75℃。
3.根據權利要求2所述的治療血小板減少症的藥物，其特徵在於所使用乙醇濃度為70％，用量為原料藥的8倍，回流提取時間為2小時。
4.根據權利要求2所述的治療血小板減少症的藥物，其特徵在於濃縮過程在減壓、溫度為50--80℃條件下進行。
5.根據權利要求4所述的治療血小板減少症的藥物，其特徵在於乾燥過程採用噴霧乾燥方法，其中進口溫度200-260℃，出口溫度100--160℃。
6.權利要求1、2、3、4或5所述治療血小板減少症的藥物在治療輻射病中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種治療血小板減少症的藥物及其第二藥物用途。它是以由西蒙葉為原料藥,經乙醇提取,並濃縮、乾燥後得到的。本發明提供的藥物不但能升血小板,而且對輻射病具有顯著的療效,克服了現有藥物的毒副作用。
文檔編號A61P43/00GK1330938SQ0011352
公開日2002年1月16日 申請日期2000年7月3日 優先權日2000年7月3日
發明者徐平聲, 譚桂山, 唐果成, 李新中 申請人:湖南醫科大學附屬湘雅醫院