一種寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型h1n1流感病毒藥物中的應用的製作方法

2023-08-07 09:47:01 2

專利名稱：一種寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型h1n1流感病毒藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於海洋藥物領域，涉及到寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用。
背景技術：
甲型、流感病毒(Influenza A Virus, IAV)屬於正粘病毒科(Orthomyxoviridae) 且有包膜的負鏈RNA病毒，根據其表面的血凝素蛋白(HA)和神經氨酸酶蛋白(NA)的結構及基因特性的不同可分為若干亞型，如Hmi、H5m及H3N2等。IAV在上個世紀至少引起三次大規模的流感爆發，其中最嚴重的是1918-1919年間爆發的西班牙流感，造成了超過4000 萬人死亡。自2009年4月以來，發源於墨西哥的Hmi亞型的甲型流感病毒造成了世界範圍的流感爆發，給人類的健康帶來了巨大威脅。據世界衛生組織統計，全球每年約有6億人感染流感，約30萬人死於流感，直接經濟損失超過100億美元。目前，治療甲型流感病毒的藥物主要有兩大類，分別是以離子通道蛋白(IC)為靶點的金剛烷胺和金剛乙胺以及以神經氨酸酶(NA)為靶點的扎那米韋(zanamivir)和奧司他韋(oseltamivir)。由於流感病毒是分節段的RNA病毒，容易發生變異並容易對現有藥物產生耐藥性，如歐洲已經出現了對金剛烷胺及奧司他韋產生耐藥性的IAV毒株。此外，現有的抗流感病毒藥物大多具有不同程度的毒副作用，尤其是離子通道阻斷劑具有神經毒性等副作用。因此，研發低毒有效的抗IAV藥物十分迫切。以糖為基礎的藥物研發是本世紀生化藥物研究領域的熱點之一。海洋多糖特別是來源於褐藻的酸性多糖具有良好的抗病毒作用。國內外大量研究表明，褐藻多糖及其衍生物具有抗人類免疫缺陷病毒HIV及甲型流感病毒IAV的顯著活性(Miao et al. ,Biochem. Pharmacol.，2004，68 :641-649 ；Lee et al.,Chem. Pharm. Bull.，2004，52(9) :1091-1094)。 但是多糖藥物的分子量大，溶解性和吸收性較差，導致其生物利用度很低從而限制了其在臨床上的應用。國內外學者已經報導了一些關於褐藻寡糖的製備和應用方面的專利 (ZL01107952. 5，CN1414002A, CN1562050A, Cm01037456A)，但是還沒有關於寡聚甘露糖酸酸在抗甲型Hmi流感病毒方面的研究和應用報導。

發明內容
針對現有技術中治療甲型流感病毒的藥物容易產生耐藥性且具有毒副作用的缺點，本發明提供了寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用。本發明提供的寡聚甘露糖醛酸(OM)具有其分子量小、溶解性和穩定性好的特點，並且此寡聚甘露糖醛酸在體內外實驗中都呈現出很好的抗甲型Hmi流感病毒的活性。為實現上述發明目的，本發明採用下述技術方案予以實現本發明提供了寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用。所述寡聚甘露糖醛酸的糖殘基是由D-甘露糖醛酸組成，並以β-1，4-糖苷鍵連接，重均分子量為< 6KD，其分子式可表述為[C6H8OJn，其中η = 2_34。對技術方案的進一步改進所述寡聚甘露糖醛酸在濃度為40 μ mol/L以上可顯著抑制甲型Hmi流感病毒在狗腎上皮細胞(MDCK)中的感染和增殖。對技術方案的進一步改進所述寡聚甘露糖醛酸在40mg/kg/day的劑量下可顯著減輕甲型Hmi流感病毒IAV感染引起的小鼠肺部炎症。對技術方案的進一步改進對IAV病毒感染小鼠的肺指數抑制率達到34. 9%，對於IAV感染小鼠的死亡保護率達到50%。與現有技術相比，本發明的優點和積極效果是本發明選取來源於海洋褐藻的低分子量的新型寡聚甘露糖醛酸OM為研究對象，在體內外水平上揭示其抗甲型Hmi流感病毒感染和增殖的作用。本發明經實驗證實寡聚甘露糖醛酸OM可以很好地抑制甲型Hmi流感病毒對於狗腎上皮細胞的感染和增殖過程，其作用效果與陽性對照藥利巴韋林相近。寡聚甘露糖醛酸 OM可以顯著減輕甲型Hmi流感病毒感染引起的小鼠肺部炎症，減輕流感引起的小鼠體重下降症狀，從而對小鼠起到治療和保護作用。此外，寡聚甘露糖醛酸OM還可以顯著減少IAV 感染引起的小鼠死亡，延長生存時間。本發明證實寡聚甘露糖醛酸OM無論在細胞水平還是動物水平上都可以很好地抑制甲型Hmi流感病毒的感染和增殖過程，揭示該化合物具有開發成抗甲型流感病毒藥物的廣闊前景。結合附圖閱讀本發明的具體實施方式
後，本發明的其他特點和優點將變得更加清林疋。


圖1表明本發明中寡聚甘露糖醛酸OM對於感染甲型Hmi流感病毒小鼠的死亡保護作用。圖1中，病毒對照組為只感染病毒而不加藥的模型對照組；利巴韋林組為陽性藥處理組；寡糖OM組為寡聚甘露糖醛酸處理組；給藥劑量為40mg/kg/day ；病毒對照組給予同樣體積的生理鹽水。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施方式
對本發明的技術方案作進一步詳細的說明。本發明採用酸降解法從海藻多糖褐藻膠中製備並分離獲得低分子量的寡聚甘露糖醛酸OM(在專利ZLOl 107952. 5和ZLOl 127533. 2中記載有寡聚甘露糖醛酸OM的製備方法)，並試驗其在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用。本發明製得的所述寡聚甘露糖醛酸OM的糖殘基是D-甘露糖醛酸，並以β-1， 4-糖苷鍵連接，重均分子量為< 6KD，其分子式可表述為[C6H8OJn，其中η = 2_34。按照國際公認的方法，評價了它對甲型Hmi流感病毒的體內外感染和增殖的影響。實施例1、寡聚甘露糖醛酸OM體外抗甲型Hmi流感病毒增殖作用利用甲型流感病毒小鼠適應株Hmi (A/PR/8/34，中科院武漢病毒所提供)感染狗腎上皮細胞(MDCK)建立細胞模型，並利用此細胞模型結合細胞病變(CPE)抑制試驗和噻唑籃(MTT)比色法分別檢測寡聚甘露糖醛酸OM對於IAV的抑制活性以及細胞毒性的大小，並且計算半數抑制濃度IC50和半數細胞毒性濃度CC50。陽性對照藥物選擇利巴韋林。實驗結果如表1所示，寡聚甘露糖醛酸OM對於IAV的抑制活性非常顯著(IC5tl = 38. 3 μ M)，且細胞毒性較小(CC5tl = 420 μ Μ)，治療指數SI (CC50/IC50)達到11.0。與廣譜的抗病毒藥物利巴韋林相比，寡聚甘露糖醛酸OM起效的藥物濃度更低，IC5tl值遠小於利巴韋林(IC5tl = 91.3 μ M)，且兩者的治療指數(Si)都大於10.0。說明寡聚甘露糖醛酸OM具有較好的體外抑制甲型流感病毒增殖的作用。表1 寡聚甘露糖醛酸OM體外抗甲型Hmi流感病毒活性
權利要求
1. 一種寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用， 其特徵在於所述寡聚甘露糖醛酸的糖殘基是由D-甘露糖醛酸組成，並以β -1，4-糖苷鍵連接，重均分子量為<6 kDa，其分子式可表述為[C6H8OJn，其中n=2-34。
3.根據權利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用， 其特徵在於所述寡聚甘露糖醛酸在濃度為40 Mfflol/L以上可顯著抑制甲型Hmi流感病毒在狗腎上皮細胞中的感染和增殖，半數抑制濃度(IC5tl)為38. 3 μ M0
4.根據權利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應用， 其特徵在於所述寡聚甘露糖醛酸在40 mg/kg/day的劑量下可顯著減輕甲型HlNI流感病毒感染引起的小鼠肺部炎症，降低死亡率。
5.根據權利要求4所述的寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型Hmi亞型的流感病毒藥物中的應用，其特徵在於對甲型Hmi流感病毒感染小鼠的肺指數抑制率達到34. 9%,對於甲型 HlNl流感感染小鼠的死亡保護率達到50%。
全文摘要
本發明提供了一種寡聚甘露糖醛酸在製備抗甲型H1N1流感病毒的藥物中的應用。本發明通過實驗不僅證明了寡聚甘露糖醛酸OM在體外對H1N1亞型的甲型流感病毒感染的狗腎上皮細胞具有較好的保護作用，可以有效地降低病毒的複製,其作用效果與陽性對照藥利巴韋林相當。而且，OM還可以顯著減少甲型H1N1流感病毒感染引起的小鼠死亡，延長生存時間。本發明提供的寡聚甘露糖醛酸OM具有水溶性好、穩定性高和安全低毒等優點，在體內外實驗中都證明OM具有良好的抗甲型H1N1流感病毒活性，預示該寡聚甘露糖醛酸有開發成抗甲型流感病毒藥物的前景。
文檔編號A61K31/7016GK102488697SQ20111040896
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月9日 優先權日2011年12月9日
發明者於廣利, 王偉, 管華詩, 郝翠 申請人:中國海洋大學