一種b群鏈球菌選擇性培養基的製作方法

2023-07-17 21:18:36

一種b群鏈球菌選擇性培養基的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種B群鏈球菌選擇性培養基，該培養基組份為：牛肉浸出液1000ml，胰蛋白腖15-25g，酵母浸出粉3-5g,500g/L的右旋葡萄糖溶液25-35ml，NaCl 2-12g，Na2HPO40.5-4.5g，Na2CO31-10g，慶大黴素3-30mg，萘啶酮酸3-30mg。本發明提供的B群鏈球菌選擇性培養基能夠抑制其他細菌的生長，而B群鏈球菌是正常生長，便於後續的鑑定檢測，提高檢測的正確率和效率。本發明的選擇性培養基使用方法操作簡單。
【專利說明】一種B群鏈球菌選擇性培養基

【技術領域】
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[0001]本發明涉及一種培養基，尤其涉及一種B群鏈球菌選擇性培養基。

【背景技術】
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[0002]B群鏈球菌(group B strep tococcus, GBS)又名無乳鏈球菌，是圍生期女性泌尿生殖道感染和新生兒期重症肺炎、敗血症和腦膜炎的常見病原菌。新生兒的GBS感染臨床進展迅速，具有發病迅速、病死率高的特點，是新生兒的主要死亡原因，已引起世界範圍內廣大學者的深切關注。細菌培養是檢測GBS的標準方法，但此菌營養要求較高，培養鑑定耗時較長(至少2d)且陽性率較低。如何在感染早期快速、準確、靈敏地檢測B群鏈球菌成為研究的熱點。
[0003]目前，在對孕產婦是否攜帶GBS進行篩查的時候主要有兩種方法，第一種是使用檢測試劑盒進行快速診斷。但是通過檢測試劑盒進行快速診斷對操作的要求和成本均比較高。第二種是目前最常見的方法，是利用培養基對取得的樣品進行培養，然後通過直接觀察法、革蘭氏染色法、觸酶試驗、協同溶血(CAMP)試驗等判斷是否感染GBS。但是孕婦生殖道和直腸有多種細菌存在，而目前的培養基不能有效抑制GBS以外的其他菌的生長，這些細菌生長速度快，常使GBS菌生長受到抑制，造成GBS菌漏檢。
[0004]萘啶酮酸為抗細菌性合成化合物之一，具有寬廣的抗菌譜，特別對革蘭氏陰性菌有很強的效力，其作用機制是抑制細菌脫氧核苷酸的合成。
[0005]慶大黴素是一種氨基糖苷類抗生素，對大腸桿菌、產氣桿菌、克雷白桿菌、奇異變形桿菌、某些吲哚陽性變形桿菌、綠膿桿菌、某些奈瑟菌、某些無色素沙雷桿菌和志賀菌等革蘭陰性菌有抗菌作用，同時也對革蘭氏陽性菌中的金黃色葡萄球菌(包括產內醯胺酶株)有抗菌作用。
[0006]氟康唑能夠高度選擇抑制真菌的細胞色素Ρ-450，使菌細胞損失正常的甾醇，而14 α -甲基留醇則在菌細胞中蓄積，起抑菌作用，對新型隱球菌、白色念珠菌及其他念珠菌、黃曲菌、煙曲菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌、莢膜組織胞漿菌等有抗菌作用。


【發明內容】

[0007]本發明提供了一種能夠擴增B群鏈球菌的選擇性培養基，該培養基能夠抑制其他細菌的生長，如果樣品中存在B群鏈球菌則可正常生長為優勢菌，便於後續的鑑定檢測，提高檢測的正確率和效率。
[0008]—種B群鏈球菌選擇性培養基，該培養基組份為:牛肉浸出液100ml,胰蛋白腖15-25g，酵母浸出粉3-5g，500g/L的右旋葡萄糖溶液25_35ml，NaCl 2~12g,Na2HPO40.5-4.5g，Na2CO31-1Og,慶大黴素 3_30mg，萘啶酮酸 3_30mg。
[0009]—種B群鏈球菌選擇性培養基,該培養基組份為:牛肉浸出液1000ml,胰蛋白腖20g，酵母浸出粉4g，500g/L的右旋葡萄糖溶液30ml，NaCl 7g，Na2HP043g, Na2C035g，慶大黴素20mg，萘啶酮酸21mg。
[0010]所述B群鏈球菌選擇性培養基還包含終濃度為5_50mg/L的氟康唑。
[0011]所述B群鏈球菌選擇性培養基的氟康唑濃度為10_30mg/L。
[0012]B群鏈球菌培養基製備方法:按量稱取各組份，將胰蛋白腖、酵母浸出粉、NaCl，Na2HPO4, Na2CO3溶於牛肉浸出液中，調整pH值至7.7±0.1，滅菌後再在前述溶液中加入滅菌的右旋葡萄糖溶液。將樣品接種於B群鏈球菌選擇性培養基中，於5% -8%二氧化碳培養箱中37°C培養16-24小時。
[0013]本發明的有益效果在於:本發明提供的B群鏈球菌選擇性培養基能夠抑制其他細菌的生長，而B群鏈球菌是正常生長，便於後續的鑑定檢測，提高檢測的正確率和效率。本發明的選擇性培養基使用方法操作簡單。

【具體實施方式】
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[0014]為了加深對本發明的理解，下面結合實施例對本發明作進一步詳述，該實施例僅用於解釋本發明，並不構成對本發明保護範圍的限定。
[0015]一、B群鏈球菌選擇性培養基的製備。
[0016]實施例一:
[0017]—種B群鏈球菌選擇性培養基,該培養基組份為:牛肉浸出液1000ml,胰蛋白腖15g，酵母浸出粉 3g，500g/L 的右旋葡萄糖溶液 25ml，NaCl 2g，Na2HPO40.5g，Na2CO3Ig,慶大黴素3mg，萘啶酮酸3mg。
[0018]所述B群鏈球菌選擇性培養基還包含終濃度為5mg/L的氟康唑。
[0019]一種B群鏈球菌培養基製備方法:按量稱取各組份，將胰蛋白腖、酵母浸出粉、NaCl, Na2HPO4, Na2CO3溶於牛肉浸出液中，調整pH值至7.7，滅菌後再在前述溶液中加入滅菌的右旋葡萄糖溶液。將樣品接種於B群鏈球菌選擇性培養基中，於5%二氧化碳培養箱中37°C培養24小時。
[0020]實施例二:
[0021]—種B群鏈球菌選擇性培養基,該培養基組份為:牛肉浸出液1000ml,胰蛋白腖20g，酵母浸出粉4g，500g/L的右旋葡萄糖溶液30ml，NaCl lg, Na2HP043g, Na2C035g，慶大黴素20mg，萘啶酮酸21mg。
[0022]所述B群鏈球菌選擇性培養基的氟康唑濃度為20mg/L。
[0023]一種B群鏈球菌培養基製備方法:按量稱取各組份，將胰蛋白腖、酵母浸出粉、NaCl, Na2HPO4, Na2CO3溶於牛肉浸出液中，調整pH值至7.7，滅菌後再在前述溶液中加入滅菌的右旋葡萄糖溶液。將樣品接種於B群鏈球菌選擇性培養基中，於5%二氧化碳培養箱中37°C培養24小時。
[0024]實施例三:
[0025]—種B群鏈球菌選擇性培養基,該培養基組份為:牛肉浸出液1000ml,胰蛋白腖25g，酵母浸出粉 5g，500g/L 的右旋葡萄糖溶液 35ml，NaCl 12g，Na2HP044.5g，Na2CO31g,慶大黴素30mg，萘唳酮酸30mg。
[0026]所述B群鏈球菌選擇性培養基的氟康唑濃度為30mg/L。
[0027]B群鏈球菌培養基製備方法:按量稱取各組份，將胰蛋白腖、酵母浸出粉、NaCl,Na2HPO4, Na2CO3溶於牛肉浸出液中，調整pH值至7.7，滅菌後再在前述溶液中加入滅菌的右旋葡萄糖溶液。將樣品接種於B群鏈球菌選擇性培養基中，於5%二氧化碳培養箱中37°C培養24小時。
[0028]二、B群鏈球菌選擇性培養基與普通培養基的比較試驗。
[0029]本實驗中所使用的B群鏈球菌選擇性培養基與實施例2中所配製的培養基相同，所用普通培養基為營養肉湯培養基(購於蘇州朗易生物醫藥有限公司)。
[0030]B群鏈球菌選擇性培養基與營養肉湯培養基效果比較試驗。
[0031]取B群鏈球菌懸液、金黃色葡萄球菌懸液、大腸桿菌懸液(三種菌懸液的濃度均在104-105cfu/ml)各Iml混勻，吸取該菌懸液100 μ L接種到B群鏈球菌選擇性培養基中，於5%二氧化碳培養箱中37°C培養24小時。鑑定試驗結果表明存活的細菌均為B群鏈球菌。
[0032]取B群鏈球菌懸液、金黃色葡萄球菌懸液、大腸桿菌懸液(三種菌懸液的濃度均在104-105cfu/ml)各Iml混勻，吸取該菌懸液100 μ L接種到營養肉湯培養基中，於5%二氧化碳培養箱中37°C培養24小時。鑑定試驗結果表明存活的細菌大部分為金黃色葡萄球菌與大腸桿菌、少部分為B群鏈球菌。
[0033]結果表明本發明的B群鏈球菌選擇性培養基能選擇性殺滅或抑制雜菌生長，而不影響B群鏈球菌的生長。
【權利要求】
1.一種B群鏈球菌選擇性培養基,其特徵在於,該培養基組份為:牛肉浸出液100ml,胰蛋白腖15_25g，酵母浸出粉3-5g，500g/L的右旋葡萄糖溶液25_35ml，NaCl 2~12g,Na2HPO4 0.5-4.5g，Na2CO31-1Og,慶大黴素 3_30mg，萘啶酮酸 3_30mg。
2.根據權利要求1所述的B群鏈球菌性培養基，其特徵在於，該培養基組份為:牛肉浸出液1000ml，胰蛋白腖20g，酵母浸出粉4g，500g/L的右旋葡萄糖溶液30ml，NaCl 7g，Na2HPO4 3g, Na2CO3 5g，慶大黴素 20mg，萘啶酮酸 21mg。
3.根據權利要求1所述的B群鏈球菌選擇性培養基，其特徵在於:所述B群鏈球菌選擇性培養基還包含終濃度為5-50mg/L的氟康唑。
4.根據權利要求3所述的B群鏈球菌選擇性培養基，其特徵在於:所述B群鏈球菌選擇性培養基的氟康唑濃度為10-30mg/L。
5.根據權利要求1至4所述的任一B群鏈球菌培養基的製備方法，其特徵在於，按量稱取各組份，將胰蛋白腖、酵母浸出粉、NaCl，Na2HPO4, Na2CO3溶於牛肉浸出液中，調整pH值至7.7±0.1，滅菌後再在前述溶液中加入滅菌的右旋葡萄糖溶液。將樣品接種於B群鏈球菌選擇性培養基中，於5% -8%二氧化碳培養箱中37°C培養16-25小時。
【文檔編號】C12R1/46GK104450861SQ201410707063
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月27日 優先權日:2014年11月27日
【發明者】金京勳 申請人:蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司