用於檢測神經損傷的組合物、試劑盒及方法

2023-08-13 08:51:16

專利名稱：用於檢測神經損傷的組合物、試劑盒及方法
技術領域：
本發明涉及一種對神經損傷的診斷有用的組合物或試劑盒。本發明還涉及一種使用該組合物或試劑盒檢測(或者判定或鑑定)神經損傷的方法。
背景技術：
由於醫療技術的進步和社會環境的變化，近年來，隨著年齡增長而發生或發展的 疾病備受關注。代表性地如生活習慣病，據說這些疾病是體內產生的微小變化隨年齡的增 長而逐漸蓄積並發生、發展的。其中，以神經損傷為主要原因的疾病已成為嚴重的社會問 題。神經損傷是由於動脈硬化等原因引起向組織供給氧和營養的的末梢血管狹窄·閉 塞，血流停滯、不能將營養成分充分地供給至末梢組織，結果導致神經功能異常的狀態。血 管障礙在血管豐富的器官·組織發生時引起神經損傷之類的嚴重問題，如果血管障礙在感 覺器官、特別是在眼組織發生時，有時導致失明。被稱為房水的液體代替血液在眼睛中流動以運輸營養等。房水在睫狀體中生成從 khlemm氏管中排出。眼睛的形狀被稱作眼壓的該房水的壓力保持。眼壓隨時間或季節略 微變化，但基本保持一定的值。青光眼是一種由某種原因引起的視神經損傷、視野變窄的疾病，眼壓上升被稱為 是其病因之一，為高齡者的失明原因之一。隨著近年的高齡者人口的急劇增加，患者數也持 續增加。由於青光眼是無症狀的所以早期發現困難。由於是能導致失明的疾病，所以早期 進行診斷是非常重要的。一直以來，在青光眼的診斷中，主要進行眼底檢查，在檢查之前對 患者滴入用於擴大瞳孔的散瞳藥，然後，醫師使用眼底鏡或眼底照相機直接觀察視網膜。但 是，現狀為當散瞳藥引起瞳孔擴大時，房水的流動變差，眼壓上升，不能說完全不存在使病 情進一步惡化的可能性。另外，不能說醫師對視網膜的直接觀察一定是客觀的檢測方法，由 於醫師必須一個人一個人地對患者進行檢查，所以難以將該檢查應用於包括大量受試者的 集團檢查。如上所述，現有的檢查方法存在較多的問題，人們期望一種用於早期診斷的、能夠 更客觀且定量地顯示患者的病態的發展程度和治療中的經時變化、使患者負擔少的高通量 的檢測方法。。使用診斷標記的檢測方法是客觀的高通量方法之一。到目前為止公開了一種特 異性識別由小梁細胞產生的作為糖皮質激素誘導蛋白質的TIGR的抗體的青光眼的診斷法 (專利文獻1)、和房水中的TGF-β的定量(非專利文獻1)。上述方法不能使用上述標記以 相對高的特異性判定青光眼，並且由於以診斷目的取出困難的眼組織為樣品，所以該方法 目前仍處於研究階段。隨著近年的基因組分析或蛋白質組分析的進步，已經報導了各種各樣的新型標記候選。青光眼中，通過使用眼組織的蛋白質組分析，已經報導了各種各樣的新型標記候選 (非專利文獻2、非專利文獻幻。但是，還沒有通過使用血液樣品的蛋白質組分析發現青光 眼的蛋白質標記的報導、並且未知使用青光眼患者的血液中的蛋白質標記診斷青光眼的方 法。人們期待如果能夠開發出可以診斷青光眼的標記及可以使用該標記進行診斷的方法， 則可以擴大應用於神經損傷自身的診斷。
專利文獻1 日本特表平10-509866非專利文獻1 :Min SH,Lee Tl，Chung YS,Kim HK. ,Korean JOphthalmol. 2006Sep ； 20(3) :162-5. Transforming growth factor-beta levelsin human aqueous humor of glaucomatous, diabetic and uveitic eyes.非專利文獻2 =Bhuattacharya SK, Crabb JS,BoniIha VL, Gu X, Takahara H, Crabb JW., Invest Ophthalmol Vis Sci. 2006Jun ；47 (6) :2508-14. . Proteomics implicates peptidyl arginine deiminase 2 andoptic nerve citrullination in glaucoma pathogenesis.非專利文獻3 =Tezel G, Tang X，Cai J.，Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005S印； 46(9) :3177-3187. Proteomic identification of oxidatively modifiedretinal proteins in a chronic pressure-induced rat model of glaucoma.

發明內容
上述已知的標記、及標記候選物缺乏特異性及/或靈敏性，並且還沒有確立從生 物樣品檢測上述標記的有效方法，所以通常情況下不進行臨床上的使用，因此強烈需要一 種特異性及靈敏性更高的神經損傷的標記。另外，人們期望一種能夠更客觀及定量地顯示 出患者的病態的發展程度及術後的經時變化、使患者負擔小的高通量檢測方法。本發明的目的在於提供一種對伴隨有神經損傷的疾病、特別是青光眼的診斷有用 的組合物、試劑盒、及使用該組合物或試劑盒的檢測伴隨有神經損傷的疾病的方法。本發明人等通過對青光眼患者和其他眼部疾病患者的血液樣品進行蛋白質組分 析，發現了在青光眼患者中被特異性檢測的血中蛋白質標記，並由此完成了使用該蛋白質 標記的青光眼的檢測方法的發明。本發明具有以下特徵。(1) 一種神經損傷的檢測方法，包括定量或定性地測定及/或檢測包含在來自受 試者的生物體樣品中的多肽、其突變體或其片段中的任意1種或多種，所述多肽含有序列 號1 15所示的胺基酸序列。(2)如(1)所述的方法，其中，神經損傷為眼組織的神經損傷。(3)如⑵所述的方法，其中，眼組織的神經損傷為青光眼。(4)如⑴ (3)中任一項所述的方法，其中，上述多肽、其突變體或其片段的測定 及/或檢測是使用質譜法進行的。(5)如(4)所述的方法，其中，上述測定及/或檢測是使用能與上述多肽、其突變體 或其片段結合的物質進行的。(6)如(5)所述的方法，其中，上述可結合的物質為抗體或其抗原結合片段。(7)如(6)所述的方法，其中，使用的上述抗體為被酶、螢光物質、色素、放射性同位素或生物素中的任一種標記過的抗體。(8)如(6)或(7)所述的方法，其中，所述抗體或其抗原結合片段是單克隆抗體或 多克隆抗體或者其抗原結合片段。(9)如(1) (8)中任一項所述的方法，其中，所述生物體樣品為血液、血漿或血清。(10) 一種用於診斷及/或檢測神經損傷的組合物，含有選自抗體或其抗原結合片 段或它們的化學修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結合片 段或它們的化學修飾衍生物能與含有序列號1 15所示的胺基酸序列的多肽、其突變體或 其片段的至少1種特異性結合。(11) 一種用於診斷及/或檢測神經損傷的試劑盒，含有選自抗體或其抗原結合片 段或它們的化學修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結合片 段或它們的化學修飾衍生物能與含有序列號1 15所示的胺基酸序列的多肽、其突變體或 其片段的至少1種特異性結合。(12)如(10)或(11)所述的用於診斷及/或檢測的組合物或試劑盒，其中，神經損 傷為眼組織的神經損傷。(13)如(12)所述的用於診斷及/或檢測的組合物或試劑盒，其中，眼組織的神經 損傷為青光眼。(14)抗體探針在(11) (13)中任一項所述的試劑盒的製造中的應用，其中，所述 抗體探針選自抗體或其抗原結合片段或它們的化學修飾衍生物中的1種或多種，所述抗體 或其抗原結合片段或它們的化學修飾衍生物能與含有序列號1 15所示的胺基酸序列的 多肽、其突變體或其片段的至少1種特異性結合。本說明書中使用的用語具有以下定義。本說明書中所謂的含有序列號1 15所示的胺基酸序列的多肽的突變體，是指在 序列號1 15所示的胺基酸序列或其部分序列中含有1或多個、優選為1或幾個的胺基酸 的缺失、取代、添加或插入的突變體，或者是含有與該胺基酸序列或其部分序列具有約80% 以上、約85%以上、優選為約90%以上、較優選為約95%以上、約97%以上、約98%以上、約 99%以上同一性的胺基酸序列的突變體。本說明書中使用的「 ％同一性」的用語通常是指通過在2個胺基酸序列中引入空 隙、或不引入空隙進行編組(比對)時，兩個序列共有的同一胺基酸殘基或位置的數相對於 胺基酸殘基或位置的總數的比例(％)。2個胺基酸序列的同一性可以使用數學算法確定， 所述算法的例子為 Karlin and Altshul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990,87 :2264 及作為 其改良版的 Karlin and Altshul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA1993,90 5873-58770 這種算 法被引入 BLASTN、BLASTX 等(Altshulet al.，J. Mol. Biol. 1990，215 :403)。為了得到與本 發明的序列號1 15所示的多肽的各胺基酸序列相同的胺基酸序列，使用例如分數=50、 字長=3的BLAST程序進行BLAST的蛋白質檢索。另外，為了得到引入空隙的比對，可以使 用空隙引入 BLAST (gapped BLAST) (Altshul et al.，Nucleic Acid Res. 1997,25 :3389)。本說明書中使用的「幾個」的用語是指約10、9、8、7、6、5、4、3或2的整數。本說明書中使用的「化學修飾衍生物」的用語，是指例如通過酶、螢光物質、色素、放射性同位素等標記的標記化衍生物；或者含有生物素化、乙醯化、糖基化、磷酸化、泛素 化、硫酸化等化學修飾的衍生物，但不限定於上述物質。本說明書中使用的「用於診斷及/或檢測的組合物或試劑盒」的用語，是指可以直 接或間接地用於下述用途的組合物或試劑盒診斷及/或檢測青光眼等伴隨有神經損傷的 疾病的罹患的有無、罹患的程度或改善的有無或改善的程度，或者篩選對青光眼等伴隨有 神經損傷的疾病的預防、改善或治療有用的候選物質。本說明書中作為檢測或診斷對象的所謂的「生物樣品」，是指取自生物體的、含有 或者可能含有隨青光眼等伴隨有神經損傷的疾病的發生而出現的靶多肽的樣品，例如細 胞、組織、體液(例如血液、淋巴液、尿等)等樣品。本說明書中所謂「特異性結合」是指抗體或其抗原結合片段只與本發明中作為青 光眼標記的靶多肽、其突變體或其片段形成抗原-抗體複合體，與其他的肽性或多肽性物 質實質上不形成該複合體。此處所謂的「實質上」，是指可能發生非特異性的複合體形成但 程度小。本發明中的青光眼等伴隨有神經損傷的疾病的標記，由於在青光眼患者的血液等 生物體樣品中被發現，但在白內障或老年黃斑變性等其他眼部疾病中基本上、或完全未被 發現，因此僅以該標記的存在或量為指標可以得到如下的顯著的作用效果例如使用血液 可以容易地檢測青光眼及伴隨有神經損傷的疾病。本說明書包含作為本申請優先權基礎的日本國專利申請2008-091522號的說明 書及/或附圖
中記載的內容。
具體實施例方式以下更具體地說明本發明。本發明的使用檢測組合物或試劑盒用於診斷及/或檢測伴隨有神經損傷的疾病 的標記，是含有序列號1 15所示的胺基酸序列的多肽、其突變體或其片段。所述組合物 或試劑盒用於診斷或檢測青光眼等伴隨有神經損傷的疾病。本發明的含有序列號1 15的胺基酸序列的多肽、其蛋白質號(Swiss-Prot注 冊名及註冊號)、及它們的特性均示於下述表1。所述多肽在青光眼患者血漿中被特異性 檢測，在白內障及老年黃斑變性的患者的血漿中未被檢測或者與青光眼患者血漿中相比 檢測顯著地減少。需要說明的是，序列表所示的上述多肽的胺基酸序列可以通過存取在 Swiss-Prot等資料庫中而獲得。[表 1]權利要求
1.一種神經損傷的檢測方法，包括定量或定性地測定及/或檢測包含在來自受試者的 生物體樣品中的多肽、其突變體或其片段中的任意ι種或多種，所述多肽含有序列號ι 15 所示的胺基酸序列。
2.如權利要求1所述的方法，其中，神經損傷為眼組織的神經損傷。
3.如權利要求2所述的方法，其中，眼組織的神經損傷為青光眼。
4.如權利要求1 3中任一項所述的方法，其中，所述多肽、其突變體或其片段的測定 及/或檢測是使用質譜法進行的。
5.如權利要求4所述的方法，其中，所述測定及/或檢測是使用能與所述多肽、其突變 體或其片段結合的物質進行的。
6.如權利要求5所述的方法，其中，所述可結合的物質為抗體或其抗原結合片段。
7.如權利要求6所述的方法，其中，使用的所述抗體為被酶、螢光物質、色素、放射性同 位素或生物素中的任一種標記過的抗體。
8.如權利要求6或7所述的方法，其中，所述抗體或其抗原結合片段是單克隆抗體或多 克隆抗體或者其抗原結合片段。
9.如權利要求1 8中任一項所述的方法，其中，所述生物體樣品為血液、血漿或血清。
10.一種用於診斷及/或檢測神經損傷的組合物，含有選自抗體或其抗原結合片段或 它們的化學修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結合片段或 它們的化學修飾衍生物能與含有序列號1 15所示的胺基酸序列的多肽、其突變體或其片 段的至少1種特異性結合。
11.一種用於診斷及/或檢測神經損傷的試劑盒，含有選自抗體或其抗原結合片段或 它們的化學修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結合片段或 它們的化學修飾衍生物能與含有序列號1 15所示的胺基酸序列的多肽、其突變體或其片 段的至少1種特異性結合。
12.如權利要求10或11所述的組合物或試劑盒，其中，神經損傷為眼組織的神經損傷。
13.如權利要求12所述的組合物或試劑盒，其中，眼組織的神經損傷為青光眼。
14.抗體探針在權利要求11 13中任一項所述的試劑盒的製造中的應用，其中，所述 抗體探針選自抗體或其抗原結合片段或它們的化學修飾衍生物中的1種或多種，所述抗體 或其抗原結合片段或它們的化學修飾衍生物能與含有序列號1 15所示的胺基酸序列的 多肽、其突變體或其片段的至少1種特異性結合。
全文摘要
本發明涉及一種檢測青光眼等伴隨有神經損傷的疾病的方法以及用於診斷青光眼等伴隨有神經損傷的疾病的組合物或試劑盒，其中，所述方法包括測定來自受試者的生物體樣品中的序列號1～15所示的多肽、其突變體或其片段中的任意一種或多種。
文檔編號G01N33/68GK102047113SQ200980119619
公開日2011年5月4日 申請日期2009年3月31日 優先權日2008年3月31日
發明者巖田嶽, 松野聖, 棚橋一裕 申請人:參天製藥株式會社, 獨立行政法人國立病院機構