二氧化錳納米片修飾的上轉換發光納米材料及製備方法、過氧化氫或膽鹼的檢測方法及應用與流程

2023-08-13 02:29:01 2

本發明涉及上轉換發光納米材料，具體地，涉及二氧化錳納米片修飾的上轉換發光納米材料及製備方法、過氧化氫或膽鹼的檢測方法及應用。
背景技術：
：膽鹼在生理方面起著非常重要的作用,如促進腦發育和提高記憶能力，因此，膽鹼作為基本營養成分添加在在日常食品，如嬰兒配方奶粉。另外，膽鹼參與乙醯膽鹼的合成。在中樞神經系統中，乙醯膽鹼參與信息傳送和作為神經遞質，乙醯膽鹼對人體機能有著重要影響。乙醯膽鹼的濃度異常會引起很多疾病，如帕金森病、阿爾茨海默氏症和腦脊髓多發性硬化症等。所以，準確、快速地檢測膽鹼和乙醯膽鹼的濃度至關重要。由於膽鹼和乙醯膽鹼因缺少活性和發色基團導致很難對其進行準確檢測。至今檢測膽鹼的方法有許多種，但這些方法因潛在的毒性和化學不穩定性而使應用有一定的局限性。技術實現要素：本發明的目的是提供一種二氧化錳納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料及製備方法、過氧化氫或膽鹼的檢測方法及應用，該二氧化錳納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料能夠對於過氧化氫或膽鹼的檢測具有靈敏度高、穩定性好和選擇性好的優點，進而使得其能夠用於檢測奶粉中的膽鹼，另外，該製備方法和檢測方法均工序簡單且成本低廉。為了實現上述目的，本發明提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備方法，該製備方法包括：1)將鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源、水、濃硝酸ctab和c1-c3的醇進行接觸反應，接著進行水熱反應，然後洗滌、分離以得到nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料；2)在保護氣和有機溶劑的存在下，將聚丙烯酸(paa)、二甘醇與nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料進行配位體交換反應以得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料；3)將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料分散於乙磺酸(mes)中，接著加入高錳酸鉀進行接觸反應以製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。本發明也提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料，該mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料通過上述的製備方法製備而得。本發明還提供了一種過氧化氫或者膽鹼的檢測方法，該檢測方法包括：1)將如上述mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料加入pbs緩衝溶液中；2)將已知濃度的檢測底物加入pbs緩衝溶液進行黑暗下孵育，接著檢測螢光強度，然後以檢測底物的濃度為橫坐標，螢光強度為縱坐標繪製工作曲線或者計算出工作曲線方程；3)將未知濃度的檢測底物加入pbs緩衝溶液進行黑暗下孵育，接著檢測螢光強度，然後根據工作曲線或者工作曲線方程計算出檢測底物的濃度；其中，檢測底物為過氧化氫，或者膽鹼與過量的膽鹼氧化酶的混合物。本發明進一步提供了一種如上述的檢測方法在檢測奶粉中膽鹼上的應用。在中上述技術方案，本發明首先製備了在水相中分散性好、具有羧基功能基團、能夠用於生物修飾的稀土nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料；接著將paa修飾修飾到nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料；然後通過mes將kmno4還原成mno2同時修飾在nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的表面形成mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。上轉換納米材nayf4:yb,er/mn作為能量供體，mno2納米片作為能量受體；在此基礎上，設計一個「turn-on」夾心結構，如圖12所示，該夾心結構對於過氧化氫和膽鹼的檢測原理如下：1)在底物為過氧化氫時，過氧化氫能夠與mno2納米片快速地發生氧化還原反應將mno2還原為mn2+，使mno2脫離上轉換發光納米材料的表面從而阻止了螢光能量轉移發生，即螢光強度恢復。2)在底物為膽鹼與過量的膽鹼氧化酶的混合物時，首先膽鹼與鹼氧化酶發生反應進而生成過氧化氫和甜菜鹼，接著過氧化氫能夠與mno2納米片快速地發生氧化還原反應進而使得體系螢光強度恢復；並且螢光強度的強弱與過氧化氫的濃度呈線性的關係，因此能夠利用體系的螢光強度檢測過氧化氫以及膽鹼的濃度；進一步地，便可利用mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料檢測奶粉中的膽鹼的含量。本發明的其他特徵和優點將在隨後的具體實施方式部分予以詳細說明。附圖說明附圖是用來提供對本發明的進一步理解，並且構成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用於解釋本發明，但並不構成對本發明的限制。在附圖中：圖1是檢測例1的透射電鏡圖；圖2是檢測例2的eds檢測；圖3是檢測例3的螢光分光圖譜；圖4是檢測例4的螢光分光圖譜；圖5是檢測例5的透射電鏡圖譜；圖6是檢測例6的紫外-可見分光表徵圖；圖7是檢測例7的紫外-可見分光表徵圖；圖8是檢測例8的紫外-可見分光表徵圖；圖9a是檢測例9的螢光檢測圖；圖9b是圖9a的工作曲線方程圖；圖10a是檢測例10的螢光檢測圖；圖10b是圖10a的工作曲線方程圖；圖11應用例2中的螢光檢測結果統計圖；圖12是本發明的原理圖。具體實施方式以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用於說明和解釋本發明，並不用於限制本發明。本發明提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備方法，該製備方法包括：1)將鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源、水、濃硝酸ctab和c1-c3的醇進行接觸反應，接著進行水熱反應，然後洗滌、分離以得到nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料；2)在保護氣和有機溶劑的存在下，將聚丙烯酸(paa)、二甘醇與nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料進行配位體交換反應以得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料；3)將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料分散於乙磺酸(mes)中，接著加入高錳酸鉀進行接觸反應以製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。在本發明的步驟1)中，各物料的用量可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，在步驟1)中，相對於10μmol的鉺源，錳源的用量為148.5-181.5μmol，鐿源的用量為0.08-0.12mmol，檸檬酸三鈉的用量為0.165-0.185mmol，氟化鈉的用量為4-8mmol，釔源的用量為0.2-0.28mmol，水的用量為9-17ml，醇的用量為14-16ml，濃硝酸的用量為0.5-1.5ml，ctab的用量為0.08-0.12g在本發明的步驟1)中，接觸反應的具體條件可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，在步驟1)中，接觸反應至少滿足以下條件：反應溫度為24-26℃，反應時間為1.5-2.5h；水熱反應至少滿足以下條件：反應溫度為160-180℃，反應時間為3-5h。在本發明的步驟1)中，鉺源、鐿源、錳源、醇和釔源的具體種類可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，鉺源選自硝酸鉺、氯化鉺、醋酸鉺和氧化鉺中的至少一者，錳源選自四水合氯化錳、二水合氯化錳、六水合氯化錳和氯化錳中的至少一者，鐿源選自氯化鐿、硝酸鐿、醋酸鐿和氧化鐿中的至少一者，釔源選自硝酸釔、氯化釔、醋酸釔和氧化釔中的至少一者，醇選自甲醇、乙醇和丙醇中的至少一者。在本發明的步驟1)中，添料順序可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，在步驟1)中，添料順序為：先將釔源加入至水中，接著依次加入錳源、鐿源、鉺源、檸檬酸三鈉、ctab、醇和氟化鈉，然後加入濃硝酸。在本發明的步驟1)中，鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源可以提供純淨的化合物，也可以通過溶液的方式提供，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源均採用水溶液的形式提供，並且氟化鈉水溶液採用勻速滴加的方式加入體系中。在本發明的步驟1)中，濃硝酸的濃度可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，濃硝酸中硝酸的濃度為65-68重量％。在本發明的步驟2)中，各物料的用量可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，在步驟2)中，相對於0.026g的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料，二甘醇的用量為14-18ml，paa的用量為0.1-0.3g，有機溶劑的用量為1-3ml。在本發明的步驟2)中，paa的重均分子量可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，paa的重均分子量為1600-2000。在本發明的步驟2)中，配位體交換反應的具體條件可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，在步驟2)中，配位體交換反應至少滿足以下條件：反應溫度為140-160℃，反應時間為1-2h。在本發明的步驟2)中，物料的添料順序可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，在步驟2)中，添料順序為：先將paa與二甘醇混合併加熱至100-120℃，然後將nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料與甲醇的混合溶液添加至體系中進行配位體交換反應。在本發明的步驟2)中，保護氣的具體種類可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料產率、製備速率以及製得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能，優選地，保護氣為氮氣、氬氣和氦氣中的至少一者，有機溶劑為甲醇、甲苯和乙醇中的至少一者。在本發明的步驟3)中，各物料的用量可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能的產率、製備速率以及性能，優選地，在步驟3)中，相對於0.026g的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料，mes的用量為1.8-2.2mol，高錳酸鉀的用量為1.3-1.6mmol。在本發明的步驟3)中，接觸反應的具體條件可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能的產率、製備速率以及性能，優選地，在步驟3)中，接觸反應至少滿足以下條件：在超聲波的存在下，反應溫度為15-35℃，反應時間為20-40min。在本發明的步驟3)中，超聲波的頻率可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料性能的產率、製備速率以及性能，優選地，超聲波的頻率為39-41khz。本發明也提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料，該mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料通過上述的製備方法製備而得。本發明還提供了一種過氧化氫或者膽鹼的檢測方法，該檢測方法包括：1)將如上述mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料加入pbs緩衝溶液中；2)將已知濃度的檢測底物加入pbs緩衝溶液進行黑暗下孵育，接著檢測螢光強度，然後以檢測底物的濃度為橫坐標，螢光強度為縱坐標繪製工作曲線或者計算出工作曲線方程；3)將未知濃度的檢測底物加入pbs緩衝溶液進行黑暗下孵育，接著檢測螢光強度，然後根據工作曲線或者工作曲線方程計算出檢測底物的濃度；其中，檢測底物為過氧化氫，或者膽鹼與過量的膽鹼氧化酶的混合物。在上述檢測方法的步驟2)以及步驟3)中，mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的濃度以及單次檢測的pbs緩衝溶液的用量和ph可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高檢測的準確度，優選地，在步驟2)的pbs緩衝溶液中，mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的濃度為0.10-0.15mg/ml，pbs緩衝溶液的用量為180-220ml，pbs緩衝溶液的ph為7-7.6。在上述檢測方法中，孵育的具體條件可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高檢測的準確度，優選地，孵育滿足以下條件：孵育溫度為20-40℃，孵育時間為55-65min。在上述檢測方法中，測體系中膽鹼氧化酶的濃度可以在寬的範圍內選擇，但是為了提高檢測的準確度，優選地，在檢測底物為膽鹼與過量的膽鹼氧化酶的混合物的情況下，檢測體系中膽鹼氧化酶的濃度為0.14-0.18u/ml。在上述檢測方法中，螢光檢測波長可以在寬的範圍內選擇，在不同的波長的情形下，工作曲線以及工作曲線方程存在差異，但是為了提高檢測的準確度，優選地，螢光檢測波長為545-560nm，在檢測底物為膽鹼與過量的膽鹼氧化酶的混合物的情況下，工作曲線方程為i-i0＝163.20+2.73c；其中，i為添加檢測底物時體系的螢光強度，i0未加檢測底物時的體系的螢光強度，c為檢測底物的濃度。同理，在上述檢測方法中，螢光檢測波長可以在寬的範圍內選擇，在不同的波長的情形下，工作曲線以及工作曲線方程存在差異，但是為了提高檢測的準確度，優選地，螢光檢測波長為545-560nm，優選地，在檢測底物為膽鹼與過量的膽鹼氧化酶的混合物的情況下，工作曲線方程為i-i0＝178.55+6.51c；其中，i為添加檢測底物時體系的螢光強度，i0未加檢測底物時的體系的螢光強度，c為檢測底物的濃度。本發明進一步提供了一種如上述的檢測方法在檢測奶粉中膽鹼上的應用。以下將通過實施例對本發明進行詳細描述。二氧化錳納米片為是通過文獻(deng,r.；xie,x.；vendrell,m.；chang,y.t.；liu,x.,intracellularglutathionedetectionusingmno(2)-nanosheet-modifiedupconversionnanoparticles.journaloftheamericanchemicalsociety2011,133(50),20168-20171.)中記載的方法製備而得。實施例11)nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：將y(no3)3溶液(0.20mol/l，1.20ml)、mncl2·4h2o溶液(1.10mol/l,145.00μl)、ybcl3溶液(0.10mol/l,1.00ml)、er(no3)3溶液(0.10mol/l,100.00μl)溶液、檸檬酸三鈉溶液(0.10mol/l,1.75ml)和超純水(2.1ml)在燒杯中混合均勻，形成金屬-檸檬酸根複合物溶液。然後，向金屬-檸檬酸根複合物溶液中加入0.10g的ctab(十六烷基三甲基溴化銨)和15.00ml無水乙醇。隨後，在攪拌下逐滴加入6.00ml的naf溶液(1.00mol/l)，溫和攪拌反應2h後，加入1.00ml濃硝酸(硝酸的濃度為65重量％)，得到反應前驅體溶液，將上述溶液轉移至50ml反應釜中，並在180℃下恆溫反應4h，自然冷卻至25℃，離心(速率為10000rpm，時間為5min)、接著超純水及無水乙醇洗滌、分離得到nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。2)paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：向潔淨四頸燒瓶中加入0.20g的paa(聚丙烯酸，重均分子量為1600-2000)和16.00ml二甘醇，在氮氣保護下加熱至110℃，然後向其中加入nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的甲苯溶液(2.00ml，nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料0.026g)，繼續加熱，待溫度升高到150℃，恆溫回流1.5h後，蒸發20min。自然冷卻至25℃後加入稀鹽酸(0.10m，2.00ml)，離心(速率為10000rpm，時間為10min)、超純水洗滌兩次，得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。3)mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料溶液(100.00μl，paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的含量為步驟2)製得的的全部paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料，溶劑為水)加入到裝有mse緩衝溶液(200ml，10.00mmol/l，ph為6.00)的2ml離心管中後，向混合溶液中加入kmno4溶液(含1.1mmolkmno4，10.00mmol/l)，混合溶液超聲30min直到形成棕色的膠體。隨後，離心分離收集，超純水洗滌幾次除去多餘的kmno4得到mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a1。實施例21)nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：將y(no3)3溶液(0.20mol/l，1.00ml)、mncl2·4h2o溶液(1.10mol/l,135.00μl)、ybcl3溶液(0.10mol/l,0.8ml)、er(no3)3溶液(0.10mol/l,100.00μl)溶液、檸檬酸三鈉溶液(0.10mol/l,1.65ml)和超純水(2.10ml)在燒杯中混合均勻，形成金屬-檸檬酸根複合物溶液。然後，向金屬-檸檬酸根複合物溶液中加入0.11g的ctab(十六烷基三甲基溴化銨)和14.00ml無水乙醇。隨後，在攪拌下逐滴加入4.00ml的naf溶液(1.00mol/l)，溫和攪拌反應2h後，加入0.50ml濃硝酸(硝酸的濃度為66重量％)，得到反應前驅體溶液，將上述溶液轉移至50ml反應釜中，並在160℃下恆溫反應3h，自然冷卻至25℃，離心(速率為10000rpm，時間為5min)、接著超純水及無水乙醇洗滌、分離得到nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。2)paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：向潔淨四頸燒瓶中加入0.10g的paa(聚丙烯酸，重均分子量為1600-2000)和14.00ml二甘醇，在氮氣保護下加熱至100℃，然後向其中加入nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的甲苯溶液(2.00ml，nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料0.026g)，繼續加熱，待溫度升高到140℃，恆溫回流1h後，蒸發20min。自然冷卻至25℃後加入稀鹽酸(0.10m，2.00ml)，離心(速率為10000rpm，時間為10min)、超純水洗滌兩次，得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。3)mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料溶液(100.00μl，paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的含量為步驟2)製得的的全部paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料，溶劑為水)加入到裝有mse緩衝溶液(180ml，10.00mmol/l，ph為6.00)的2ml離心管中後，向混合溶液中加入kmno4溶液(含1.2mmolkmno4，10.00mmol/l)，混合溶液超聲20min直到形成棕色的膠體。隨後，離心分離收集，超純水洗滌幾次除去多餘的kmno4得到mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a2。實施例31)nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：將y(no3)3溶液(0.20mol/l，1.40ml)、mncl2·4h2o溶液(1.10mol/l,165.00μl)、ybcl3溶液(0.10mol/l,1.20ml)、er(no3)3溶液(0.10mol/l,100.00μl)溶液、檸檬酸三鈉溶液(0.10mol/l,1.85ml)和超純水(2.10ml)在燒杯中混合均勻，形成金屬-檸檬酸根複合物溶液。然後，向金屬-檸檬酸根複合物溶液中加入0.12g的ctab(十六烷基三甲基溴化銨)和16.00ml無水乙醇。隨後，在攪拌下逐滴加入8.00ml的naf溶液(1.00mol/l)，溫和攪拌反應2.5h後，加入1.50ml濃硝酸(硝酸的濃度為68重量％)，得到反應前驅體溶液，將上述溶液轉移至50ml反應釜中，並在170℃下恆溫反應5h，自然冷卻至25℃，離心(速率為10000rpm，時間為5min)、接著超純水及無水乙醇洗滌、分離得到nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。2)paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：向潔淨四頸燒瓶中加入0.30g的paa(聚丙烯酸，重均分子量為1600-2000)和18.00ml二甘醇，在氮氣保護下加熱至120℃，然後向其中加入nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的甲苯溶液(2.00ml，nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料0.026g)，繼續加熱，待溫度升高到160℃，恆溫回流2h後，蒸發20min。自然冷卻至25℃後加入稀鹽酸(0.10m，2.00ml)，離心(速率為10000rpm，時間為10min)、超純水洗滌兩次，得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料。3)mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的製備：將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料溶液(100.00μl，paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的含量為步驟2)製得的的全部paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料，溶劑為水)加入到裝有mse緩衝溶液(220ml，10.00mmol/l，ph為6.00)的2ml離心管中後，向混合溶液中加入kmno4溶液(含1.3mmolkmno4，10.00mmol/l)，混合溶液超聲40min直到形成棕色的膠體。隨後，離心分離收集，超純水洗滌幾次除去多餘的kmno4得到mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a3。實施例4按照實施例1的方法進行製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a4，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為0.9mol/l。實施例5按照實施例1的方法進行製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a4，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.0mol/l。實施例6按照實施例1的方法進行製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a6，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.2mol/l。實施例7按照實施例1的方法進行製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a7，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.3mol/l。實施例8按照實施例1的方法進行製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a8，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.5mol/l。實施例9按照實施例1的方法進行製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a9，所不同的是，將鉺源換為氯化鉺，錳源換為二水合氯化錳，鐿源換為硝酸鐿，釔源換為硝酸釔，醇換為乙醇。實施例10按照實施例1的方法進行製得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a10，所不同的是，將鉺源換為氧化鉺，錳源換為六水合氯化錳，鐿源換為醋酸鐿，釔源換為醋酸釔，醇換為丙醇。檢測例1通過牌號為jeol2010的透射電子顯微鏡對上轉換發光納米材料a1進行透射電鏡檢測，檢測結果見圖1，由圖可知，上轉換發光納米材料a1的尺寸約為200nm，大小均勻。檢測例2利用牌號為hitachis-4800的掃描電子顯微對上轉換發光納米材料a1進行元素分析檢測，檢測結果見圖2，由圖可知，上轉換發光納米材料a1的其元素成分為c、na、f、y、yb、er和mn。檢測例3通過牌號為hitachif-4600螢光分光光度計對上轉換發光納米材料a1以及修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料進行螢光檢測，具體結果見圖3，由圖可知，摻雜後比未摻雜螢光強度增強約一倍，其中a曲線為上轉換發光納米材料a1的螢光曲線圖，b曲線為未摻雜二氧化錳納米片的上轉換發光納米材料(實施例1步驟1)製得的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料)的螢光曲線圖。檢測例4通過牌號為hitachif-4600螢光分光光度計對上轉換發光納米材料a1、a4-a8進行螢光檢測，具體結果見圖4，由圖可知，隨著mn2+濃度的增加，其螢光強度先逐漸增加，隨後減弱。檢測例5通過牌號為jeol2010的透射電子顯微鏡對mno2納米片修飾的上轉換發光納米材料a1進行透射電鏡檢測，檢測結果見圖5，由圖可知，上轉換發光納米材料a1的尺寸約為200nm，大小均勻，mno2納米片修飾在nayf4:yb,er/mn表面。檢測例6通過牌號為uv-4100的紫外-可見分光光度計對上轉換發光納米材料a1進行紫外吸收峰的檢測，檢測結果見圖6，圖中顯示nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的發射峰與mno2納米片在300-600nm處吸收峰圖有重疊，其中a曲線為nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的紫外-可見分光表徵圖，b曲線為二氧化錳納米片的紫外-可見分光表徵圖。檢測例7通過牌號為uv-4100的紫外-可見分光光度計對製備的mno2納米片和kmno4溶液進行紫外吸收峰的檢測，檢測結果見圖7，其中，曲線a為kmno4溶液紫外吸收圖譜，b曲線為mno2納米片紫外吸收圖譜，由於在350nm處出現mno2納米片特徵峰，進而顯示成功製備了mno2納米片。檢測例8通過牌號為uv-4100的紫外-可見分光光度計nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料和mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a1紫外吸收峰的檢測，檢測結果見圖8。其中，曲線a為nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料的紫外吸收圖譜，b曲線為mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a1紫外吸收圖譜，從圖8可以看未進行mno2修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料沒有紫外吸收峰，而修飾後在350nm出現了mno2的特徵峰，進而顯示mno2納米片修飾到nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料表面。檢測例9h2o2的檢測：在測定h2o2的過程中，mno2納米片修飾nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a1(100.00μl，0.13mg/ml)和不同濃度的h2o2加入到pbs緩衝溶液(10.00ml，ph為7.4)，在30℃、黑暗下孵育60min，用日立f-4600螢光儀進行螢光測定。並繪製工作曲線，結果見圖9a，其中，檢測濃度範圍的工作曲線方程為i-i0＝163.20+2.73ch2o2，具體見圖9b。由9a可知，隨著h2o2濃度的增加，其螢光強度逐漸增加。由9b可知，工作曲線方程具有良好的線性。檢測例10膽鹼的檢測：在測定膽鹼的過程中，mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料a1(100.00μl，0.13mg/ml)，膽鹼氧化酶(260.00μl，5u/ml)和不同濃度的膽鹼到pbs緩衝溶(10.00ml，ph7.4)，在30℃、黑暗下孵育60min，用日立f-4600螢光儀進行螢光測定。並繪製工作曲線，結果見圖10a，其中，小你濃度範圍的工作曲線方程為i-i0＝178.55+6.51ccholine，具體見圖10b。由10a可知，隨著膽鹼濃度的增加，其螢光強度逐漸增加。由10b可知，工作曲線方程具有良好的線性。應用例1採用與做標準曲線相同的方法對處理過的嬰兒配方奶粉進行檢測：本應用例中的奶粉奶粉採用君樂寶嬰兒配方奶粉，該配方奶粉每100g中含有144mol/lg的膽鹼，加入標準濃度的膽鹼和膽鹼氧化酶後。並於30℃下反應60min後，進行螢光檢測。根據檢測例9中的工作曲線，計算樣品濃度。然後進行回收率的檢測。具體結果見表1，其中rsd為相對標準偏差。表1標準濃度(μmol/l)發現(μmol/l)回收率(％)rsd(％)(n＝3)1.491.51101.342.022.983.12104.701.365.215.0095.971.11通過本應用例可知，該檢測方法的回收率在95-105％之間，進而說明了本檢測方法具有優異的回收率。應用例2幹擾檢測：將mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉換發光納米材料(100.00μl，0.13mg/ml)和膽鹼氧化酶(260.00μl，5u/ml)加入到pbs緩衝溶液後，分別向次此體系中加入幹擾物(丙氨酸：1.25×10-3mol/l，穀氨酸：1.25×10-3mol/l，甘氨酸：1.25×10-1mol/l，半乳糖：1.25×10-3mol/l，甲胎蛋白：1.25×10-2mol/l，牛血清蛋白：1.25×10-2mol/l，人血清蛋白：1.25×10-2mol/l，ca2+：1.25×10-1mol/l，hg+：1.25×10-3mol/l，cu2+：1.25×10-2mol/l，na+：6.25×10-2mol/l，k+：1.25×10-1mol/l，hco3-：1.25×10-2mol/l，so42-：1.25×10-1mol/l，膽鹼：1.25×10-3mol/l，膽鹼+膽鹼氧化酶：1.55×10-5mol/l和h2o2：1.00×10-5mol/l。並於30℃下反應60min後，進行螢光檢測。結果見圖。可以看出，各種幹擾物對體系均無明顯影響。最後兩個柱狀物圖依次代表膽鹼與膽鹼氧化酶樣品、h2o2。可以看出螢光恢復效果良好。其中，ala表示丙氨酸，glu表示穀氨酸，glycine表示甘氨酸，galactose表示半乳糖，afp表示甲胎蛋白，bsa表示牛血清蛋白，hsa表示人血清蛋白，choline表示膽鹼，chox表示膽鹼氧化酶。按照上述檢測例和應用例對a2-a3以及a9-a10進行檢測，檢測的結果與a1的檢測結果基本保持一致。以上詳細描述了本發明的優選實施方式，但是，本發明並不限於上述實施方式中的具體細節，在本發明的技術構思範圍內，可以對本發明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬於本發明的保護範圍。另外需要說明的是，在上述具體實施方式中所描述的各個具體技術特徵，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重複，本發明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發明的思想，其同樣應當視為本發明所公開的內容。當前第1頁12