一種食藥用真菌液體種子的培養方法
2023-08-12 11:29:11 1
專利名稱：一種食藥用真菌液體種子的培養方法
技術領域：
本發明涉及發酵工程領域，具體的說是一種食藥用真菌液體種子的培養方法。
背景技術：
液體種子是藥用真菌液體發酵的基礎，是決定液體發酵成敗和效果好壞的關鍵因 素之一，優良的種子不僅能使液體發酵過程中菌絲體產量和多糖產量顯著增加，而且能夠 縮短發酵時間，提高發酵設備的利用率；液體種子也是藥用真菌固體發酵和蘑菇栽培中的 優良種子，可以顯著提高發菌速度，縮短發菌期，提早蘑菇收穫時間和提高蘑菇產量。以往液體種子生產中，多以菌絲體產量或菌絲球個數為單一考察對象，沒有同時 考察兩者的生產技術；對培養基配方的選擇也是從少數幾種配方中篩選，沒有通過數學模 型進行優化，獲得最佳培養基配方；對培養方法也缺少創新性。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術的不足，提供一種生活力強、菌 絲體產量和菌絲球個數均顯著增加的液體種子的培養方法。本發明解決上述技術問題採用的技術方案是提供一種通過均勻設計數學模型優 化出的培養基配方，結合靜止預培養方法，培養優良液體種子。其包括如下步驟(1)選用的培養基配方(克/升)為葡萄糖15-35，馬鈴薯100-200，酵母膏 15-17. 5，牛肉膏12. 5-17. 5。製作固體培養基時，在上述配方中加入20克瓊脂。(2)從保藏的食藥用真菌菌種中，無菌操作接種到平板固體培養基上，在20-30°C 下恆溫培養5-10天；(3)用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛處打孔，取菌種10 土夬， 接種於裝有IOOmL液體培養基的250mL三角瓶中；(4)在20_30°C下靜止預培養1-2天；(5)轉入搖床中，於20_30°C和120轉/分鐘恆溫搖床繼續培養至8_10天，即可獲 得優良液體種子。本發明方法所用的培養基配方與其它液體種子培養中的配方顯著不同在於第一 是同時以菌絲球個數和菌絲體產量兩個指標為優化指標獲得的，避免了單一篩選指標的缺 陷；第二是經過均勻設計數學模型優化獲得的配方，更科學合理；第三配方中的營養物質 豐富與搭配合理，不僅為種子生長提供了充足的營養，而且為其創造了適宜的生長環境。本發明方法與其它液體種子培養方法的另一個顯著不同在於靜止預培養1-2天， 可顯著促進菌絲體的萌發，增加生長點，從而獲得菌絲球個數和菌絲體產量均顯著增加、菌 種生活力強的優良液體種子。本發明生產的液體種子的菌絲球個數和菌絲體產量分別比對照培養基配方和培 養方法提高7-14倍和2-4倍，而且種子處於對數旺盛生長期，生活力強。本發明生產的液體種子不僅可用於工業化液體發酵，也可用於固體發酵，以及蘑菇栽培中。用於液體發酵生產菌絲體則可使菌絲體產量達到15. 4-19. 2克/升，比對照提 高2. 6-3. 2倍。本發明適合於生產真菌優良液體種子。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步說明。實施例1一種食藥用真菌液體種子的培養方法，其所用培養基配方(克/升)為葡萄糖15， 馬鈴薯100，酵母膏15，牛肉膏12. 5，首先從保藏的菌種中，無菌操作接種到平板固體培養 基上，在20°C下恆溫培養8天；然後用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛 處打孔，取菌種10塊，接種於裝有IOOmL液體培養基的250mL三角瓶中；在20°C下靜止預 培養1天；最後轉入搖床中，於20°C和120轉/分鐘恆溫搖床培養10天，即可獲得優良液 體種子。本發明生產的液體種子中，菌絲體產量為7. 4克/升，菌絲球個數為122. 8個/毫 升，分別比對照培養方法提高2. 8倍和7. 8倍，而且，菌種處於對數旺盛生長期，非常適合於 作為液體種子用於大規模液體發酵或固體發酵。實施例2一種食藥用真菌液體種子的培養方法，其所用培養基配方(克/升)為葡萄糖25， 馬鈴薯150，酵母膏15，牛肉膏15，首先從保藏的菌種中，無菌操作接種到平板固體培養基 上，在30°C下恆溫培養5天；然後用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛處 打孔，取菌種10塊，接種於裝有IOOmL液體培養基的250mL三角瓶中；在30°C下靜止預培 養1天；最後轉入搖床中，於30°C和120轉/分鐘恆溫搖床培養8天，即可獲得優良液體種 子。本發明生產的液體種子中，菌絲體產量為8. 3克/升，菌絲球個數為192. 5個/毫升， 分別比對照培養方法提高3. 2倍和12. 2倍，而且，菌種處於對數旺盛生長期，非常適合於作 為液體種子用於大規模液體發酵或固體發酵。實施例3一種食藥用真菌液體種子的培養方法，其所用培養基配方(克/升)為葡萄糖35， 馬鈴薯200，酵母膏17. 5，牛肉膏17. 5，首先從保藏的菌種中，無菌操作接種到平板固體培 養基上，在25°C下恆溫培養8天；然後用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺 盛處打孔，取菌種10塊，接種於裝有IOOmL液體培養基的250mL三角瓶中；在25°C下靜止 預培養2天；最後轉入搖床中，於25°C和120轉/分鐘恆溫搖床培養9天，即可獲得優良液 體種子。本發明生產的液體種子中，菌絲體產量為8. 8克/升，菌絲球個數為206. 3個/毫 升，分別比對照培養方法提高3. 4倍和13. 1倍，而且，菌種處於對數旺盛生長期，非常適合 於作為液體種子用於大規模液體發酵或固體發酵。
權利要求
一種食藥用真菌液體種子的培養方法，其特徵在於包括如下步驟(1)選用的培養基配方(克/升)為葡萄糖15 35，馬鈴薯100 200，酵母膏15 17.5，牛肉膏12.5 17.5；(2)從保藏的食藥用真菌菌種中，無菌操作接種到平板固體培養基上，在20 30℃下恆溫培養5 10天；(3)用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛處打孔，取菌種10塊，接種於裝有100mL液體培養基的250mL三角瓶中；(4)在20 30℃下靜止預培養1 2天；(5)轉入搖床中，於20 30℃和120轉/分鐘恆溫搖床繼續培養至8 10天，即可獲得優良液體種子。
2.根據權利要求1所述的食藥用真菌液體種子培養方法，其特徵在於所用的培養基 為固體，其組成配方(克/升)為葡萄糖15-35，馬鈴薯100-200，酵母膏15-17. 5，牛肉膏 12. 5-17. 5，瓊脂 20 克。
3.根據權利要求1所述的液體種子培養方法，其特徵在於所述的方法也適用於自動發 酵罐發酵生產液體種子。
全文摘要
本發明涉及一種食藥用真菌液體種子的培養方法，首先，向裝有100mL特定配方的液體培養基的250mL三角瓶中，接入10塊直徑為10毫米的平板菌種，在20-30℃下靜止預培養1-2天後，再於20-30℃和120轉/分鐘下恆溫搖床繼續培養至8-10天，即可培養獲得優良液體種子。本發明培養的液體種子的菌絲球個數和菌絲體生物量均顯著增加，分別比在對照配方和培養方法下提高7-14倍和2-4倍，而且種子處於對數生長期，生活力強，是優良的液體種子。本發明可用於各種食藥用真菌三角瓶液體種子的培養，以及自動發酵罐生產液體種子。培養的液體種子不僅可用於液體發酵，也可用於固體發酵，以及蘑菇栽培中。
文檔編號C05G1/00GK101940128SQ20101025776
公開日2011年1月12日 申請日期2010年8月17日 優先權日2010年8月17日
發明者朱國振, 董靜, 閆培生, 高秀君 申請人:哈爾濱工業大學(威海)