一種雞γ幹擾素蛋白的生產方法

2023-07-10 10:02:21

一種雞γ幹擾素蛋白的生產方法
【專利摘要】本發明首先提供一種雞γ幹擾素蛋白的基因，該基因經過核苷酸突變後，能在大腸桿菌中高效的表達可溶性雞γ幹擾素蛋白，該基因的序列為SEQ ID NO:1。本發明通過對雞γ幹擾素基因序列的改變，實現了雞γ幹擾素蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達。該表達產物為胞液中可溶性蛋白，具有天然雞γ幹擾素蛋白的生物活性，同時本發明也提供了一種工程菌誘導表達工藝。通過細胞病變抑制試驗、雞胚病毒抑制試驗、免疫增強試驗、動物攻毒保護試驗，證明表達的雞γ幹擾素蛋白具有良好的抗病毒和免疫增強活性。
【專利說明】一種雞Y幹擾素蛋白的生產方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於重組蛋白表達【技術領域】，具體涉及一種可溶性雞y幹擾素蛋白的生 產方法。

【背景技術】
[0002] 幹擾素是一類由T淋巴細胞和NK細胞產生的低分子可溶性多功能糖蛋白，能增強 細胞毒性T細胞功能，促進B細胞分化和活化，誘導動物細胞產生多種抗病毒、抗腫瘤活性 的細胞因子，具有良好的免疫調節作用（HOU Y_D. Molecular virology. Beijing:Xueyuan Press, 1990.) 〇
[0003] 雞y幹擾素最早由Issaacs等於1957年利用雞胚絨毛尿囊膜研宄流感病毒幹 擾現象時發現的，之後得益於生物技術的飛速發展，雞Y幹擾素的生物學研宄進入到一個 更為深入廣泛的研宄階段。近幾年，Digby等國內外學者相繼報導了雞Y幹擾素基因序 列，在基因克隆、序列分析等方面進行了大量的研宄。已有的研宄表明，雞y幹擾素開放 性閱讀框有495個鹼基，編碼19個胺基酸的信號肽和145個胺基酸的成熟蛋白。雞Y幹 擾素對某些病毒（腺病毒，流感病毒，水皰性口炎病毒等）的生長及繁殖有較強的抑制作 用，可作為一種活化機體細胞的抗病毒生物製劑，同時也可作為免疫佐劑提高疫苗的保護 效力（Kaiser P, Wain H M, Rothwell L. Structure of the chicken interferon- y gene and comparison to mammalian homologues.Gene, 1998, 207 (1):25-32 ；Digby M R, Lowenthal J ff. Cloning and expression of the chicken interferon-gamma gene. J IFN Cyto Res, 1995, 15:939-945 ；ffeining K C,Schultz U,Munster U, et al. Biological properties of recombinant chicken interferon-gamma.Eur J Immunol. 1996, 26:2440-2447 ；Michalski ff P,Shiell B J, ONeil TE, et al. Recombinant chicken IFN-gamma expressed in E. coli:analysis of C-terminal truncation and effect on biologic activity. J IFN Cyto Res, 1999, 19:383-392 ；Yeh H Y, Winslow B J, Junker D E, et al. In vitro effects of recombinant chicken interferon-gamma on immune cells. J IFN Cyto Res, 1999, 19:687-691)〇
[0004] 為了更廣泛的利用雞y-幹擾素蛋白，研宄者將雞y-幹擾素基因克隆到大 腸桿菌中進行表達。但雞Y-幹擾素在原核細胞中表達主要是以不可溶的包涵體形 式存在，這就需要經過複雜的變性、復性過程才能使用。（戴建華，秦愛建，許金俊 等.雞y-幹擾素基因的克隆及其在原核和真核系統中的表達[J].中國預防獸醫學 報，2003, 25(4) :249-253;鮑鳴，仲大蓮等.雞y-幹擾素基因的克隆及原核表達[J]. 安徽農業大學學報，2004, 31(1): 92-95;蔡梅紅，曹瑞兵，周斌等.雞y-幹擾素成熟 蛋白基因的表達及其產物抗病毒活性測定，中國病毒學[J]，2004, 19(1) :32-35 ;史耀 旭，關貴全，高金亮黨志勝等.雞Y-幹擾素基因的克隆及原核表達[J].中國獸藥雜 志，2006, 40 (7): 12-16 ;吳樹華宮鵬濤等.雞Y-幹擾素基因在大腸桿菌中的表達[J].青 島農業大學學報，2009, 26(1) : 8-11.)。而包涵體蛋白沒有生物活性，後續純化非常複雜，而 且在復性過程中很難做到完全復性，很難達到50%的復性。因此，為了滿足對雞Y幹擾素 的需有，有必要提供一種雞y幹擾素的可溶性表達方法。


【發明內容】

[0005] 本發明的目的是提供一種可溶性雞y幹擾素蛋白的生產方法，從而可以高效的 表達可溶性雞y幹擾素蛋白。
[0006] 本發明首先提供一種雞Y幹擾素蛋白的基因，該基因經過核苷酸突變後，能在大 腸桿菌中高效的表達可溶性雞Y幹擾素蛋白，該基因的序列為SEQ ID NO: 1。

【權利要求】
1. 一種雞Y幹擾素蛋白的基因，其特徵在於，所述的基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:1〇
2. 用於擴增權利要求1所述的基因的引物對，其特徵在於，所述的引物對的核苷酸序 列為 SEQ ID N0:2 和 SEQ ID N0:3。
3. -種重組表達載體，其特徵在於，所述的重組表達載體為攜帶有權利要求1所述的 基因的原核表達載體。
4. 如權利要求3所述的重組表達載體，其特徵在於，所述的原核表達載體為28a-CHIF。
5. -種重組大腸桿菌，其特徵在於，所述的重組大腸桿菌攜帶有權利要求3所述的重 組表達載體。
6. -種可溶性雞Y幹擾素蛋白的生產方法，其特徵在於，所述的方法是用權利要求5 所述的重組大腸桿菌來表達雞Y幹擾素蛋白。
【文檔編號】C12N15/11GK104450731SQ201410771866
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月11日 優先權日:2014年12月11日
【發明者】劉新文, 胡瀟, 鄒敏, 郭偉偉, 宮曉 申請人:青島易邦生物工程有限公司