一種含沙蠶的改善營養性貧血的保健品的製作方法
2023-07-10 03:41:21 1
專利名稱：一種含沙蠶的改善營養性貧血的保健品的製作方法
技術領域：
本發明涉及保健食品的研製領域，具體涉及一種含沙蠶的改善營養性貧血的保健食品的研製。
背景技術：
改善營養性貧血的功能保健食品有著很大的適應人群，但到目前為止還沒有一種以海洋生物沙蠶為原料的補血生血劑。
沙蠶在閩廣浙沿海多有之，形如蚯蚓。閩人以蒸蛋，或作膏食。得醋則白漿自出，以白米泔濾過，蒸為膏，甘美益人，得稻之精華者也，其醃為脯作醬，則貧者之食。滴鹽醋一小杯，出白漿，蒸雞鴨蛋，牛乳最鮮。補脾胃，生血利溼，行小便。瘡瘍忽食，能作膿。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是將具有豐富營養價值的海洋生物沙蠶與中藥複方配伍，提供一種療效顯著的改善營養性貧血的保健功能食品。
本發明公開的改善營養性貧血的保健品是由含沙蠶、白芍、當歸、熟地、黃芪的活性成份製成的口服製劑。
所述的活性成份重量百分比組成為沙蠶25-30％，白芍15-21％，當歸15-21％，熟地15-21％，黃芪15-21％。
所述的口服製劑為醫學上可接受的各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、口服液等。
本發明所要解決的另一技術問題是公開上述保健品的製備方法。
本發明含沙蠶保健品的製備包括下列步驟(1)沙蠶活性成份提取物按處方量將新鮮沙蠶原材料，洗乾淨後，用的食鹽溶液勻漿，在4-10℃提取，離心，得上清液，上清液加食用酒精至終濃度75％，沉澱過夜後離心，沉澱物用適量的無菌蒸餾水溶解，混勻後冷凍乾燥；(2)中藥活性成份提取按處方量挑選白芍、當歸、熟地黃、黃芪藥材，洗淨、粉碎後，用沸水提取3次，過濾得濾液，濾液濃縮後，用75％酒精沉澱過夜，離心，固體乾燥；(3)口服製劑的製備將步驟(1)製得的沙蠶提取物和步驟(2)製得的中藥活性成份提取物混合，按常規方法製成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸或口服液。
本發明所要解決的再一技術問題是公開上述製劑在製備改善營養性貧血保健品中的應用。
本發明改善營養性貧血保健品的口服劑量為0.48-0.96g(相當於沙蠶0.66-1.32g，生藥1.71-3.41g)，30天為一療程。
本發明處方中沙蠶——又名禾蟲，為環節動物門多毛綱沙蠶科海洋生物，含有大量的蛋白質、脂肪和微量元素；營養豐富，可滋補強身，延年益壽；具有補脾胃，生血利溼，利小便等功能。臨床用於生血健脾，滲溼，消腫等。採用現代生物技術提取其主要活性成分，大量動物實驗結果表明a.沙蠶有明顯的刺激造血細胞生長作用，細胞數量增加。b.抗疲勞試驗，小鼠體重增加，遊泳時間明顯延長。c.免疫試驗，有提高機體免疫功能趨勢。
白芍——為毛莨科植物芍藥的根。氣味苦、平、無毒。歸肝、脾經。功能補血、斂陰柔肝、緩急止痛。主治腹中虛痛，骨痛，腳氣腫痛，消渴，鼻血不止，鼻血，咯血，崩中下血(小腹痛)，月經不停，赤白帶長期不愈，刀傷，木舌腫滿，魚骨鯁喉。臨床應用-補血①血虛經行不調，痛經，崩漏，伴頭昏乏力，心悸失眠者與當歸、熟地、川芎同用。②血虛肝脈失養，肢體拘攣，關節僵硬，屈伸不利，可於木瓜、伸筋草、雞血藤、苡仁等養血舒筋和絡。白芍對體液免疫有雙向調節作用，誘生白細胞介素-2亦呈雙向調節作用，並有促進脊髓造血功能。白芍、當歸、熟地是四物湯(來源於仙授理傷續斷秘方841-846年)中的主要成分。自公元841年流傳至今，對其改善營養不良性貧血功能十分肯定。加減後增強生血利溼，補氣補虛作用，達到補血養血，補氣補虛之功效。
當歸——釋名亦名幹歸、山蘄、白蘄、文無。氣味(根)苦、溫、無毒。歸心、肝、脾經。功能養血，活血，調經，止痛，潤腸道通便。主治血虛發熱(困渴大飲，目赤面紅，脈洪大而虛，重按無力)，失血過多(傷胎、產後、崩中、金瘡、拔牙等出血過多，心煩眩暈，不省人事)，鼻血不止，小便出血，頭痛欲裂，手臂疼痛，久痢不止，大便不通，婦女百病，月經逆行(從口鼻出)，少女閉經，婦女臍下氣脹、月經不調、常作嘔、睡不好，小產後流血不止，妊娠胎動(腹痛，下血，口噤欲死)，產後血脹(腹痛牽引到脅痛)，產後腹痛如絞，產後自汗、大熱、氣短、腰腳劇痛，產後中風(口吐涎沫，手腳抽筋，不省人事)，小兒胎寒，好哭成，小兒臍溼(或紅腫，或出水，不早治，成臍風)，小兒臍溼(或紅腫，或出水，不早治，成臍風)，湯火傷潰爛成瘡。臨床應用養血、活血調經、潤腸通便。當歸多糖對Co-r射線輻射所致骨髓抑制貧血小鼠的紅細胞、血紅蛋白、白細胞和股骨有核細胞數恢復有顯著的促進作用，能明顯促進各造血祖細胞的增殖。
熟地黃——氣味甘、微苦、微溫、無毒。歸肝、腎經。功能養血、滋陰。主治吐血唾血，補虛、除熱，去癰癤，利血生精，明目補腎，虛損(或大病後，或積勞後，四休沉滯，骨肉酸痛，呼吸力少，或小腹拘急，咽幹唇燥，飲食無味，多臥少起)，病後虛汗(口乾心躁)，咳嗽唾血，吐血便血，小便帶血、吐血、耳鼻出血，月經不止，月經不調，妊娠胎動，產生血痛(腹中有硬塊作痛)，產後中風，胞衣不出，熱悶昏迷，疔腫乳癰，跌打損傷，瘀血在腹，眼睛紅痛，牙疳膿血，牙齒動搖，耳中常鳴，犬咬傷。臨床應用補血、滋陰。熟地水提物明顯促進小鼠骨髓造血幹細胞，祖細胞的增殖分化，對細胞和體液及非特異性免疫有一定的調節作用。
黃芪——釋名亦名戴糝、戴椹、草、百本、王孫。(「芪」原作為「耆」)。氣味 (根)甘、微溫、無毒。歸肺、脾經。功能補中益氣，益味固表，利水消腫，託毒生肌。主治小便不通，酒疸黃疾(醉後感寒，身上發赤、黑、黃斑)，白濁，血，血淋少淋，吐血，咳膿咳血，咽幹(這是虛熱，不可吃涼藥)，肺癰，甲疽(趾甲邊紅肉突出成疽)，胎動不安(腹痛，下黃汁)，陰汗溼癢。臨床應用補中益氣、固表止汗、利水消腫、託毒生肌。黃芪顯著促進骨髓細胞DNA的合成，加快有核細胞分裂過程，提高機體免疫能力，有抗疲勞，抗缺氧，抗衰老，耐低溫等作用。
本方中沙蠶生血利溼，為君藥。熟地滋陰補血，當歸補血和血，為臣藥。白芍養陰和血，黃芪活血行氣，同為佐使藥。五藥配合，既能補血養陰，又能行氣和血，可使滋而不膩，營血調和，故而能補血調經。
本發明保健品是目前國內外唯一以海洋生物沙蠶為原料的改善營養性貧血的功能性保健食品，對人體不產生任何急性，亞急性或慢性毒副作用。本發明製劑中含有機鐵，與採用無機鐵的補血生血劑相比更容易被人體吸收，更為有效。製劑中含有的多糖，在改善營養性貧血的同時可調節機體免疫力。本發明製劑配方的合理配伍發揮了複方的綜合效能，多靶點作用於機體從而達到改善機體營養性貧血的目的。
用本發明含沙蠶的改善營養性貧血的保健品進行有關毒理和藥效試驗一、急性毒性(經口LD50)試驗取沙蠶膠囊內容物20g，加蒸餾水至40ml，充分混勻後作為受試樣品。清潔昆明種小鼠20隻，雌雄各半，體重18-22g，禁食(不禁水)16小時後，按體重要求選雌、雄小鼠各10隻，同性別小鼠之間體重之差不超過3g。將受試樣品採用一次經口灌胃給樣，灌胃容量按0.4ml/20g體重計(24小時內共進行二次灌胃)。給樣後，觀察小鼠的一般狀態、體重變化、中毒症狀和死亡情況等，觀察期為一周。實驗末再次對小鼠稱重。對死亡小鼠及到期處死小鼠進行屍體解剖，肉眼觀察大體病理改變情況。
結果顯示雌性小鼠的LD50＞20g/kg，雄性小鼠的LD50＞20g/kg，試驗期間各組動物活動正常，毛色光澤度好，未見任何症狀和死亡，根據急性毒性半致死劑量分級，沙蠶膠囊屬無毒級物質。
二、微核試驗取沙蠶膠囊內容物10、5、2.5g，分別加蒸餾水至20ml，作為樣品供試。將昆明種小鼠隨機分為5組，每組10隻，雌雄各半，體重25-30克，分別作為樣品三個劑量組及蒸餾水陰性對照組和環磷醯胺陽性對照組。採用30小時兩次灌胃法，將的不同濃度樣品按0.4ml/20g體重，分別對各組小鼠灌胃。於第二次灌胃後6小時，勁椎脫臼處死小鼠，取股骨骨髓加小牛血清混勻，常規塗片、固定、Giemsa染色製片。鏡檢觀察，每鼠計數1000個嗜多染紅細胞微核數，計算微核放生率，並進行統計分析。
結果見表1，沙蠶膠囊各劑量組的微核細胞數和微核率與陰性對照組無顯著性差異(P＞0.05)，說明沙蠶膠囊不會誘發小鼠骨髓染色體畸變。
表1動物骨髓嗜多染紅細胞微核發生率
*與陰性對照組比較(經卡方檢驗)三、精子畸形試驗取沙蠶膠囊內容物10、5、2.5g，分別加蒸餾水至20ml，作為樣品供試。將昆明種小鼠，雄性，體重25-30克，隨機分為5組，每組5隻，分別作為樣品三個劑量組及蒸餾水陰性對照組和環磷醯胺陽性對照組。小鼠稱體重後，將的不同濃度樣品按0.4ml/20g體重，分別對各組小鼠灌胃。每日一次，連續5天。於首次給樣後第35天，勁椎脫臼處死小鼠，取二側副睪放入生理鹽水中，剪碎，過濾，取濾液塗片，固定，2％伊紅染色製片。鏡檢觀察，每鼠計數1000個精子畸形數，計算精子畸形發生率，並進行統計分析。
結果見表2，沙蠶膠囊各劑量組的精子畸變數與畸形發生率與陰性對照組無顯著性差異(P＞0.05)，說明沙蠶膠囊對精子生成發育無影響，及在體內對生殖細胞無遺傳毒性。
表2動物精子畸形發生率
*與陰性對照組比較(經卡方檢驗)四、Ames試驗大鼠肝S9的誘導和製備選健康成年SD大鼠150g左右，將多氯聯苯溶於玉米油中，濃度為200mg/ml，按500mg/kg(體重)無菌操作一次腹腔注射，5d後斷頭處死動物，取出肝臟稱重後，用新鮮冰冷的0.15mol/L氯化鉀溶液連續衝洗肝臟數次，每克肝(溼重)加0.15mol/L氯化鉀溶液3ml，冰浴，用消毒剪刀剪碎肝臟，用組織勻漿機(20000r/min，1min)製成肝勻漿，隨後將製成的肝勻漿在低溫(0-4℃)高速離心機以9000g離心10min，吸取上清液即為S9組分。將S9組分分裝於無菌凍存管，液氮保存。
取沙蠶膠囊內容物用無菌蒸餾水配製成0.1mg/皿、0.5mg/皿、2.5mg/皿、5.0mg/皿供試。將測試菌株TA97、TA98、TA100、TA102稀釋到1-2×109/ml。溶劑對照無菌蒸餾水。陽性對照-S9TA97阿的平(500μl/皿)、TA98對硝基喹啉(200μg/皿)，TA100、TA102 MMS(1μl/皿)。+S9TA97、TA98、TA100 2-氨基芴(10μg/皿)，TA102 1.8-二羥基蒽醌(50μg/皿)。
陽性對照組除阿的平用無菌蒸餾水作溶劑外，其餘均用二甲基亞碸(DMSO)作溶劑。按GB15193-94標準平板摻入法45℃頂層瓊脂2ml，依次加入菌液0.1ml、受試物0.1ml、活化需加S9混合液0.5ml，充分混勻後迅速傾入底層培養基上，37℃培養48小時，觀察結果。每次試驗重複一次。
結果見表3、表4，兩次試驗結果均表明，在本實驗條件下，沙蠶膠囊各劑量組Ames試驗結果為陰性，說明沙蠶膠囊不具有遺傳危害和潛在致癌作用。
表3 第一次試驗測試結果
表4 第二次試驗測試結果
五、沙蠶膠囊改善營養性貧血(大鼠)取沙蠶膠囊內容物用去離子水配製8、16、48mg/ml三個濃度，既為低、中、高三劑量組，供試。健康雄性斷乳SD大鼠，體重50-60克，以基礎飼料，在實驗環境下適應3天後，三個劑量組及低鐵對照組給予低鐵飼料及去離子水，正常對照組給予正常飼料及飲水。採用灌胃方式給樣，灌胃容量1ml/100g.體重。自第三周開始每周選取部分大鼠採尾血測定血紅蛋白，直至80％動物血紅蛋白低於100g/L(正常對照組除外)，即模型成立。全部大鼠稱重及測定血紅蛋白。根據貧血大鼠Hb水平和體重將其隨機分為低鐵對照組和三個劑量組，每組10隻。受試物用去離子水調配成不同濃度，各劑量組灌胃給樣，低鐵對照組以非強化鐵奶飲料灌胃，連續四周，三個劑量組及低鐵對照組繼續給予低鐵飼料及去離子水，正常對照組給予正常飼料及飲水。四周後，測定動物體重及各項血液學指標。
從表5-8可以看出，餵飼樣品後不同劑量組沙蠶膠囊與低鐵對照組與正常對照組相比，均有所下降，而各劑量組與低鐵對照組比較均無顯著差異(P＞0.05)。實驗末，高劑量組大鼠的血紅蛋白明顯上升(與餵前Hb值相比，上升值＞15g/L)，紅細胞內原卟啉水平顯著下降，血清鐵水平顯著上升，紅細胞壓積水平顯著上升，與低鐵對照組相比，均有顯著性差異(P＜0.05)。
表5沙蠶膠囊對大鼠血紅蛋白水平的影響(X±SD)
aP＜0.05與低鐵對照組相比(經方差分析)。
表6 沙蠶膠囊對紅細胞內原卟啉水平的影響(X±SD)
aP＜0.05與低鐵對照組相比(經方差分析)。
表7 沙蠶膠囊對血清鐵水平的影響(X±SD)
aP＜0.05與低鐵對照組相比(經方差分析)。
表8 沙蠶膠囊對大鼠紅細胞數、紅細胞壓積和平均紅細胞體積的影響(X±SD)
aP＜0.05與低鐵對照組相比(經方差分析)。
上述結果提示，沙蠶膠囊能顯著提高營養性貧血模型大鼠的血紅蛋白、血清鐵含量及紅細胞壓積水平，降低紅細胞游離原卟啉含量，對大鼠體重無明顯影響，說明沙蠶膠囊對大鼠具有改善營養性貧血作用。
六、沙蠶膠囊改善營養性貧血(人體)選擇血紅蛋白水平＜110g/L的女性60人，平均年齡為19歲。按年齡和血紅蛋白水平隨機分為兩組，每組30人。參加者血常規，肝功能檢查無異常，X線與心電圖檢查無異常。試驗組人群每日食用沙蠶膠囊4粒(240mg/粒)，對照組人群食用相同劑型的安慰劑，共30天。在試驗前後各抽取靜脈血4ml，進行指標分析。
試驗組(食用沙蠶膠囊)和對照組(食用安慰劑膠囊)人群試驗30天後，從表9可見，試驗前兩組人群的血紅蛋白含量無顯著性差別，試驗後兩組間血紅蛋白含量差別經統計學檢驗有顯著性，試驗組人群試驗末血紅蛋白量較試驗前平均上升27g/L；由表10可見，試驗前兩組人群紅細胞內游離原卟啉濃度和紅細胞壓積無顯著性差異(P＞0.05)，試驗末，試驗組人群紅細胞內游離原卟啉濃度下降，紅細胞壓積升高，自身前後比較及與對照組相比有統計學差異；由表11可見，試驗前兩組人群血清鐵蛋白含量和紅細胞體積無顯著性差異(P＞0.05)，試驗末，試驗組人群血清鐵蛋白含量和平均紅細胞體積與試驗前相比差異有統計學意義；由表12可見，沙蠶膠囊對實驗人群試驗前後血紅細胞數有影響，但與對照組比較無差異。
表9 試驗前後血紅蛋白水平(Mean±SD)
a與對照組相比差別有顯著性，P＜0.01。
b自身前後相比差別經統計學檢驗有顯著性，P＜0.01。
表10 試驗前後紅細胞內游離原卟啉濃度和紅細胞壓積(Mean±SD)
a與對照組相比差別有顯著性，P＜0.01。
b自身前後相比差別經統計學檢驗有顯著性，P＜0.01。
表11試驗前後血清鐵蛋白和平均紅細胞體積(Mean±SD)
a自身前後相比差別經統計學檢驗有顯著性，P＜0.05。
b自身前後相比差別經統計學檢驗有顯著性，P＜0.01。
c與對照組相比差別有顯著性，P＜0.01。
表12 試驗前後紅細胞計數(Mean±SD)
a自身前後相比差別經統計學檢驗有顯著性，P＜0.05。
結果與判斷上述人體試服實驗結果提示，在兩組人群膳食營養素攝入量無顯著性差異，各生化指標在正常範圍內，試驗人群食用沙蠶膠囊後，血紅蛋白有所上升，與對照組相比，差別有顯著性，且與試驗前血紅蛋白比較，上升值＞15g/L；試驗組人群血清鐵蛋白含量和紅細胞數上升，自身前後比較差異有顯著性；試驗組人群紅細胞內游離原卟啉濃度下降，紅細胞壓積升高，平均紅細胞體積上升，自身比較及與對照組相比有統計學差異；沙蠶膠囊對試驗組人群平均紅細胞血紅蛋白含量有顯著性影響。根據「保健食品功能學評價程序和檢驗方法」中規定的評價標準，可以認為沙蠶膠囊具有改善人體營養性貧血的作用。
上述試驗結果證明，本發明含沙蠶的保健品是一種安全、有效的改善人體營養性貧血的功能性保健品。
具體實施例方式實施例1配方沙蠶28g，白芍18g，當歸18g，熟地18g，黃芪18g。
新鮮沙蠶原材料，洗乾淨後，用0.1mol/L的食鹽溶液勻漿，在4-10℃提取24h，7000rpm離心30min，得上清液。上清液加食用酒精至終濃度75％，沉澱過夜後(75％酒精同時起到殺菌作用)，7000rpm離心30min得沉澱(一)。用適量的無菌蒸餾水溶解沉澱物(一)，混勻後冷凍乾燥。
白芍、當歸、熟地黃、黃芪藥材挑選。洗淨，粉碎後，按比例混合。用沸水提取3次，過濾得濾液，濾液濃縮後，用75％酒精沉澱過夜(75％酒精同時起到殺菌作用)，7000rpm離心30min得沉澱(二)。將沉澱(二)在70℃烘箱內烤乾。
將沉澱(一)冷凍乾燥品和沉澱(二)烘乾品混合，研碎成細粉過50目篩，裝入2號膠囊，即得。
實施例2配方沙蠶26.4g，白芍17.8g，當歸17.8g，熟地17.8g，黃芪17.8g，澱粉2.4g。
沙蠶提取物及中藥提取物製備同實施例1，將兩種提取物混合，加入澱粉，壓片，製得片劑。
實施例3配方沙蠶27g，白芍17g，當歸17g，熟地17g，黃芪17g，澱粉2g。
沙蠶提取物及中藥提取物製備同實施例1，將兩種提取物混合，加入澱粉，製得衝劑。
實施例4配方沙蠶25g，白芍19g，當歸19g，熟地19g，黃芪19g。
沙蠶提取物及中藥提取物製備同實施例1，將兩種提取物混合，研磨，加適量水，製得口服液。
權利要求
1.一種含沙蠶的改善營養性貧血的保健品，其特徵在於該保健品為由含沙蠶、白芍、當歸、熟地、黃芪的活性成份製成的口服製劑。
2.一種如權利要求1所述的含沙蠶的改善營養性貧血的保健品，其特徵在於其中所述的活性成份重量百分比組成為沙蠶25-30％，白芍15-21％，當歸15-21％，熟地15-21％，黃芪15-21％。
3.一種如權利要求1所述的含沙蠶的改善營養性貧血的保健品，其特徵在於其中所述的口服製劑為醫學上可接受片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸或口服液。
4.一種如權利要求1所述的含沙蠶的改善營養性貧血的保健品的製備方法，其特徵在於該保健品的製備包括下列步驟(1)沙蠶活性成份提取物按處方量將新鮮沙蠶原材料，洗乾淨後，用的食鹽溶液勻漿，在4-10℃提取，離心，得上清液，上清液加食用酒精至終濃度75％，沉澱過夜後離心，沉澱物用適量的無菌蒸餾水溶解，混勻後冷凍乾燥；(2)中藥活性成份提取按處方量挑選白芍、當歸、熟地黃、黃芪藥材，洗淨、粉碎後，用沸水提取3次，過濾得濾液，濾液濃縮後，用75％酒精沉澱過夜，離心，固體乾燥；(3)口服製劑的製備將步驟(1)製得的沙蠶提取物和步驟(2)製得的中藥活性成份提取物混合，按常規方法製成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸或口服液。
5.一種如權利要求1所述的保健品在製備改善營養性貧血保健品中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種含沙蠶的改善營養性貧血的保健品。該保健品是由含沙蠶、白芍、當歸、熟地、黃芪的活性成分製成的口服製劑。其中活性成分重量百分比組成為沙蠶25－30％，白芍15－21％，當歸15－21％，熟地15－21％，黃芪15－21％。本發明保健品是一種安全、效果顯著的改善人體營養性貧血的功能性保健品。
文檔編號A61P7/06GK1507898SQ0215519
公開日2004年6月30日 申請日期2002年12月17日 優先權日2002年12月17日
發明者周菊珍, 沈先榮, 賈福星, 蔣定文, 陳美華, 李樹林, 祝曉輝 申請人:上海澳博海洋生物技術開發有限公司