Lc-ms/ms檢測飲用水和飲料食品中雙酚a的方法

2023-07-10 05:25:16 1

專利名稱：Lc-ms/ms檢測飲用水和飲料食品中雙酚a的方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測飲用水及飲料類食品中雙酚A的方法，具體涉及一種以 LC-MS/MS定量檢測飲用水和飲料類食品中雙酚A的方法。
背景技術：
雙酚A是近幾年從食品包裝材料中新發現的一種「內分泌幹擾物」(Endocrine Disrupting Chemicals，E⑶)，具有某些雌激素特性。會影響兒童的發育進程，特別是發育 中的胎兒、嬰兒和兒童。數以百計的研究證明了與BPA相關的疾病越來越多，如心血管疾 病、腸道疾病、免疫系統等，也證明了雙酚A對幹擾人體內分泌系統造成的重大危害。2008 年10月，加拿大聯邦政府正式宣布將雙酚A(BispherK)I Α,ΒΡΑ)列入有毒物質列表中。加 拿大也成為第一個將雙酚A視為有毒物質的國家。加拿大衛生部近日對全國範圍內公眾 BPA暴露情況進行了調查，根據2010/8/17發布的一份關於加拿大人的尿液研究報告稱，平 均每10人中有9個以上的人體內含有BPA (雙酚Α)。其中年齡為6歲的加拿大兒童，尿液 中含有BPA佔79%到91%。這些數據表明，加拿大兒童和青少年體內含有的BPA含量比以 往任何時候都要高。調查還發現，幾乎每一位加拿大民眾體內都含有一定數量的ΒΡΑ。美國 紐約州最近通過《禁止兒童和嬰幼兒產品使用雙酚A法令》，禁止生產、分銷和銷售含有雙 酚A的某些兒童護理產品。《華盛頓郵報》報導說，93%的6歲以上美國人的尿液中，可以檢 測到雙酚A成分目前，檢測雙酚A的方法主要有液相/質譜聯用(HPLC/MS)、氣相/質譜聯用(GC/ MS)、酶聯免疫法等，這些方法主要應用於對雙酚A含量高的樣品進行檢測，而對於一些雙 酚A含量較低的食品類則無能為力。

發明內容
本發明的目的在於提供一種LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其 靈敏度高，檢測限低，分析速度快，從而克服了現有技術中的不足。為實現上述發明目的，本發明採用了如下技術方案一種LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在於，該方法包括 如下步驟(1) LC-MS/MS 條件的確定I、LC-MS色譜條件根據雙酚A在色譜柱中保留特性，選取色譜柱，並制定色譜分 析條件；II、MS條件採用常規雙酚A質譜分析條件；(2)標準曲線繪製取雙酚A標準品溶於甲醇或甲醇與水的混合物，製成一系列濃度的雙酚A標準液， 以上述LC-MS/MS條件檢測該一系列濃度的雙酚A標準液，並根據檢測結果繪製標準曲線；(3)樣品檢測
a、以固相萃取小柱萃取飲用水中的雙酚A，再以甲醇將雙酚A從固相萃取小柱 中洗脫，除去洗脫液中的甲醇，殘渣以甲醇或甲醇與水的混合物溶解，再經過濾後，以上述 LC-MS/MS條件進行檢測，將檢測結果與標準曲線對照，計算出樣品中雙酚A的含量；b、將飲料食品與有機溶劑充分混合萃取，經離心或靜置處理後，取上層有機相以 無水硫酸鈉脫水後，除去有機溶劑，，殘渣以甲醇或甲醇與水的混合物溶解，再經過濾後，以 上述LC-MS/MS條件進行檢測，將檢測結果與標準曲線對照，計算出樣品中雙酚A的含量。進一步地講所述LC-MS色譜條件具體為液相色譜柱VarianPolaris C18-A 100X2. 1mm, 5 μ m ；柱溫室溫；流動相A甲醇，B水；梯度條件0 3min 50% A 90% A，3 6min 90% A，6 12min 50% A ；流速0. 2 0. 5mL/min。
所述MS色譜條件具體為噴霧電壓3500V，鞘氣40arb，輔助氣7arb，毛細管溫度330°C，掃描窗口寬度 Q10. 7、Q30. 7，雙酚 A 定量離子 212 (18eV)；所述甲醇與水的混合物採用體積比為1 1的甲醇與水形成的混合物。步驟(3)中，所述過濾是採用孔徑0.45 μ m的濾膜進行過濾。步驟(3)a中，除去洗脫液中甲醇的操作具體為在40°C下，在氮吹儀上吹乾洗脫液。步驟(3) b具體為將飲料食品與過量乙腈均勻混合，經超聲、過濾處理後，在濾液中加入異丙醇均勻 混合，再在加熱條件下蒸發除去有機溶劑，而後將殘留溶液與過量乙酸乙酯均勻混合、靜 置，分離出上層乙酸乙酯溶液；重複上述操作一次以上，合併各次所得乙酸乙酯溶液，經無水硫酸鈉脫水後蒸乾，殘 渣用體積比為1 1的甲醇與水的混合物溶解後，以0.45μπι濾膜過濾後，進行LC-MS/MS檢測。步驟(3) b具體為將飲料食品與過量乙酸乙酯充分混勻後，進行離心處理，分離出上層乙酸乙酯溶 液；重複上述操作一次以上，合併各次所得乙酸乙酯溶液，經無水硫酸鈉脫水後再在 加熱條件下蒸發除去有機溶劑，，殘渣用體積比為1 1的甲醇與水的混合物溶解後，以 0. 45 μ m濾膜過濾後，進行LC-MS/MS檢測。所述加熱條件是溫度為40°C的條件。步驟(3) a中，所述固相萃取小柱採用C18柱。與現有技術相比，本發明的有益效果是該LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙 酚A的方法檢測限低，靈敏度高，檢測速度快，能夠準確地對樣品中雙酚A進行定性、定量檢 測，適於標準化。


圖1為雙酚A標準曲線圖。
具體實施例方式下面結合若干較佳實施例對本發明的技術方案做進一步詳細說明，但本發明並不 僅僅局限於下述實施例。如下實施例中，採用如下LC-MS/MS條件I、LC-MS 色譜條件液相色譜柱:Varian Polaris C18-A 100X 2. 1mm，5 μ m ；柱 溫室溫；流動相A 甲醇，B 水；梯度條件=Omin 50% A,3min 90% A,3-6min 90% A, 6-8min 50% A ；流速0. 2 0. 5mL/min ；進樣量:25 μ L ；當然，本領域技術人員也可根據習知材料，按照雙酚A在各種色譜柱中的保留特 性，選取其它合適色譜柱，並制定相應的色譜分析條件；II,MS條件噴霧電壓3500V ；鞘氣40arb ；輔助氣7arb ；毛細管溫度330°C ；掃 描窗 口寬度:Q1 0. 7，Q3 :0. 7 ；母離子227，子離子(碰撞能量)133 (25eV), 212 (18eV)。在確定LC-MS/MS條件後，可參照如下方法繪製標準曲線準確稱取雙酚A 10mg，用甲醇溶解並定容至IOOmL,此時溶液的質量濃度為 0. lmg/mL (於冰箱4°C冷凍保存)，此為雙酚A標準貯備液。將標準貯備液用甲醇+水(體 積比 1 1)依次稀釋到 5. Ong/mLUO. 0ng/mL、20. 0ng/mL、50. 0ng/mLU00. 0ng/mL，按上述 LC-MS/MS條件進行檢測，以雙酚A濃度為橫坐標，定量離子質譜峰面積為縱坐標繪製標準 曲線，用於分析樣品中雙酚A的含量。試驗結果顯示，雙酚A的保留時間為4. 90min，定量離 子對為m/z 227/212。以雙酚A濃度為橫坐標，定量離子峰面積為縱坐標繪製標準曲線(如 圖1所示)，得標準曲線函數關係為:y = -185. 14+1212. 7x，相關係數為R2 = 0. 9991，該標 準曲線線性良好，可用於測定樣品中分析物的量。實施例1取SEP-PAR C18小柱先用5mL甲醇和5mL水依次淋洗，淋洗流速控制在4mL/min， 在洗淨烘乾的燒杯中倒入200mL桶裝水樣，經大體積採樣器與該C18小柱相連，上樣結束， 用2X4mL的甲醇洗脫，洗脫液在氮吹儀上(40°C )小心吹乾，ImL甲醇水溶液(1+1)溶解殘 渣，過0. 45 μ m濾膜後供LC/MS/MS檢測。取飲用一水樣做三個平行，分別為平行樣1、平行 樣2、平行樣3，分析結果見表1。對平行樣1重複測定6次，分析結果見表2。通過分析知， 平行樣品的相當標準偏差(RSD)為1.52%，重複測定實驗的相當標準偏差為2. 91%，重複 性較好。在200mL水樣品(確定無BPA)中加入不等量的雙酚A，用玻璃棒攪拌均勻，按上述 水的處理方法進行處理，LC/MS/MS方法檢測，測其方法加標回收率，結果如表3所示。表1桶裝水中雙酚A的含量
權利要求
一種LC MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在於，該方法包括如下步驟(1)LC MS/MS條件的確定I、LC MS色譜條件根據雙酚A在色譜柱中保留特性，選取色譜柱，並制定色譜分析條件；II、MS條件採用常規雙酚A質譜分析條件；(2)標準曲線繪製取雙酚A標準品溶於甲醇或甲醇與水的混合物，製成一系列濃度的雙酚A標準液，以上述LC MS/MS條件檢測該一系列濃度的雙酚A標準液，並根據檢測結果繪製標準曲線；(3)樣品檢測a、以固相萃取小柱萃取飲用水中的雙酚A，再以甲醇將雙酚A從固相萃取小柱中洗脫，除去洗脫液中的甲醇，殘渣以甲醇或甲醇與水的混合物溶解，再經過濾後，以上述LC MS/MS條件進行檢測，將檢測結果與標準曲線對照，計算出樣品中雙酚A的含量；b、將飲料食品與有機溶劑充分混合萃取，經離心或靜置處理後，取上層有機相以無水硫酸鈉脫水後，除去有機溶劑，，殘渣以甲醇或甲醇與水的混合物溶解，再經過濾後，以上述LC MS/MS條件進行檢測，將檢測結果與標準曲線對照，計算出樣品中雙酚A的含量。
2.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在 於，所述LC-MS色譜條件具體為液相色譜柱Varian Polaris C18-A 100X2. 1mm, 5 μ m ；柱溫室溫；流動相A甲醇，B水；梯度條件0 3min 50% A 90% A，3 6min 90% A，6 12min 50% A ；流速0. 2 0. 5mL/min。
3.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在 於，所述MS色譜條件具體為噴霧電壓3500V，鞘氣40arb，輔助氣7arb，毛細管溫度330°C，掃描窗口寬度Q1 0. 7、 Q3 0. 7，雙酚A定量離子212(18eV)；
4.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在 於，所述甲醇與水的混合物採用體積比為1 1的甲醇與水形成的混合物。
5.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在 於，步驟(3)中，所述過濾是採用孔徑0.45 μ m的濾膜進行過濾。
6.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在 於，步驟(3)a中，除去洗脫液中甲醇的操作具體為在40°C下，在氮吹儀上吹乾洗脫液。
7.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在 於，步驟(3)b具體為將飲料食品與過量乙腈均勻混合，經超聲、過濾處理後，在濾液中加入異丙醇均勻混 合，再在加熱條件下蒸發除去有機溶劑，而後將殘留溶液與過量乙酸乙酯均勻混合、靜置， 分離出上層乙酸乙酯溶液；重複上述操作一次以上，合併各次所得乙酸乙酯溶液，經無水硫酸鈉脫水後蒸乾，殘渣 用體積比為1 1的甲醇與水的混合物溶解後，以0.45 μ m濾膜過濾後，進行LC-MS/MS檢2測。
8.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵在 於，步驟(3)b具體為將飲料食品與過量乙酸乙酯充分混勻後，進行離心處理，分離出上層乙酸乙酯溶液；重複上述操作一次以上，合併各次所得乙酸乙酯溶液，經無水硫酸鈉脫水後再在加熱 條件下蒸發除去有機溶劑，，殘渣用體積比為1 1的甲醇與水的混合物溶解後，以0.45 μ m 濾膜過濾後，進行LC-MS/MS檢測。
9.根據權利要求7或8所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特 徵在於，所述加熱條件是溫度為40°C的條件。
10.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，其特徵 在於，步驟(3)a中，所述固相萃取小柱採用C18柱。
全文摘要
本發明涉及一種LC-MS/MS檢測飲用水和飲料食品中雙酚A的方法，包括如下步驟首先根據雙酚A在色譜柱和質譜中的特性，制定合適LC-MS/MS條件；其後，藉上述LC-MS/MS條件，取雙酚A標樣進行測試，並根據檢測結果繪製標準曲線；而後，針對不同樣品，分別採用固相萃取、萃取、濃縮、過濾等操作對樣品進行前處理後，再進行LC-MS/MS檢測，將檢測結果與標準曲線對照，計算出樣品中雙酚A的含量。本發明方法檢測限低，靈敏度高，檢測速度快，能夠準確地對樣品中雙酚A進行定性、定量檢測，適於標準化。
文檔編號G01N30/06GK101968474SQ20101050474
公開日2011年2月9日 申請日期2010年10月13日 優先權日2010年10月13日
發明者俞曄, 姚衛蓉, 汪仕韜, 汪何雅 申請人:江南大學