補骨脂滴鼻液及其生產方法
2023-08-01 01:27:56
專利名稱：補骨脂滴鼻液及其生產方法
技術領域：
本發明涉及中藥補骨脂有效成分的提取方法，補骨脂滴鼻液及其生產方法。
補骨脂系豆科植物補骨脂Psoralea corylifolia L.的乾燥成熟果實。性溫、味辛，具有溫暖水土、補腎壯陽、升達脾胃之功效。臨床上用於白癜風、腫瘤、哮喘等多種疾病的治療。補骨脂中含有呋喃香豆精化合物、黃酮類化合物及揮髮油等多種化學成分，其中呋喃香豆精化合物補骨脂素和異補骨脂素具有抗腫瘤、止血、光敏等多種作用，中國藥典將此兩種成分作為補骨脂的鑑別特徵。從其提取方法來看，內服和注射劑一般採取水提或醇提的辦法，兩種工藝都取水溶性部位，外用製劑如酊劑直接用醇提液，軟膏劑則將補骨脂打粉加入基質中，未見有對補骨脂醇提、除酒後黑色粘稠層的提取部位的報導，導致補骨脂素、異補骨脂素的提取率較低。單味補骨脂開發的劑型有注射劑、酊劑，含補骨脂的複方製劑有衝劑、口服液、軟膏劑、丸劑、片劑，無論單味或複方均未見有補骨脂滴鼻劑的研究報導。這些劑型，如為口服劑型，則吸收率較低，且存在肝臟首過效應；如為注射劑型，則對提取要求極高、成本高，且患者使用不便；如採用外用方法，則黏膜透皮吸收效率低，且不衛生。
本發明的目的就是為了克服目前補骨脂的有效成分提取率低、製劑存在使用效果差的缺點，提供補骨脂有效成分的提取率高的提取方法及使用效果好的製劑及其生產方法。
本發明是這樣實現的。
將補骨脂粉碎，經30～90％酒精水溶液浸泡一至三次，過濾，合併濾液，除酒，靜置，棄去水層，取黑色粘稠層，加入增溶劑和水，調pH值為5～8，過濾，濾液配製成補骨脂滴鼻液。
本發明中的靜置可以採用在常溫或4℃條件下靜置。
酒精浸泡的用量為酒精至少能沒過補骨脂藥材，酒精用量過多不限。
本發明的增溶劑可以採用甘油三乙酸酯和/或吐溫，吐溫可以採用吐溫-40，吐溫-60，吐溫-80，可以採用兩者之間任何比例的混合物，也可以採用甘油，甘油一乙酸酯、甘油二乙酸酯等。
取上述提取方法的經醇提後，除酒的水層與黑色粘稠層，水層用高效液相色譜流動相甲醇1％冰醋酸(45∶55)稀釋，黑色粘稠層先用甲醇溶解，再用流動相稀釋，採用外標法定量，得不同部位補骨脂素與異補骨脂素的含量，發現水層中補骨脂素和異補骨脂素的含量均為黑色粘稠層的1/100。因而提取黑色粘稠層，大大提高了補骨脂素和異補骨脂素的提取率。
色譜條件色譜柱Waters Nova-Pak C18柱，3.9mm×150mm，柱溫35℃；996二級管陣列檢測器，波長245nm；流動相甲醇∶1％冰醋酸(45∶55)，流速1mL/min。用以上條件各峰得到滿意分離，補骨脂素和異補骨脂素的保留時間分別為5.103min和5.938min，理論塔板數分別為5440和5508，用2010軟體分別對樣品中補骨脂素和異補骨脂素的峰進行純度分析，其中補骨脂素峰的純度角為0.97，閾值為1.27；異補骨脂素的純度角為0.962，閾值為1.103，兩者均為純峰。
線性關係精密稱取105℃乾燥至恆重的補骨脂素和異補骨脂素適量，用甲醇配成濃度為200mg/L的溶液。用流動相分別稀釋成1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L的溶液，進樣20μL，每一濃度進樣2次，2010色譜工作站處理數據，外標法定量，以峰面積為縱坐標，標準品濃度為橫坐標，進行線性回歸，得補骨脂素回歸方程為y=-91230.6+242781.9x，線性範圍為1～100mg/L，r=0.9999；異補骨脂素回歸方程為y=44347.2+170920.2x，線性範圍為1～100mg/L，r=0.9991。
補骨脂是一傳統的中藥，其藥理作用和臨床應用廣泛。我們通過實驗對本發明的補骨脂滴鼻液抗組胺所致哮喘試驗表明，本發明的補骨脂滴鼻液低、高劑量鼻腔給藥對組胺引喘豚鼠的潛伏時間與空白溶劑組比較，均有顯著延長，統計學上有顯著差異。本發明的補骨脂滴鼻液抗卵蛋白所致過敏性哮喘試驗表明，低、高劑量組鼻腔給藥對卵蛋白所致過敏性豚鼠的潛伏時間與模型空白組比較，均有顯著延長，統計學上有顯著差異。提示本發明的補骨脂滴鼻液具有與其它補骨脂製劑相同的藥理作用。
同時，本發明的滴鼻液的鼻黏膜給藥，有以下幾個特點(1)給藥簡便，患者可自行完成。(2)鼻腔黏膜上有眾多細微絨毛，可大大增加藥物吸收的有效表面積，黏膜下有豐富的毛細血管，故藥物吸收迅速。(3)藥物吸收後直接進入體循環，避免了首過效應，特別是對在胃腸液與胃腸壁中易代謝的或首過作用很大的肽類與蛋白類藥物確是有效的給藥途徑。(4)胃腸道難以吸收的水溶性大的極性藥物，通過鼻黏膜會有很好的吸收。
總之，本發明的補骨脂滴鼻液使用效果好。
本發明的補骨脂滴鼻液，採用白化豚鼠動物模型(200～250克)，給予0.2ml/只×0.6mg/ml(mg補骨脂黑色粘稠物/ml水溶液)補骨脂滴鼻液(相當於臨床用藥的67倍)，使之接觸4小時，觀察動物的即時反應及連續觀察7天，所有動物活動、飲食正常，說明無毒性。刺激性試驗同樣採用上述動物模型和劑量，使之接觸4小時，24小時後處死動物，取出鼻黏膜組織，無明顯充血、紅腫等現象，說明無刺激性。
本發明的補骨滴鼻液的鼻黏膜吸收研究如下1．實驗動物模型及實驗裝置選擇體重(300±60)g的SD大鼠，戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉，然後放在平板上手術在頸部作一切口，氣管內插入聚乙烯套管；另一根管通過食道插至鼻腔後部，用一根聚乙烯套管同插入大鼠鼻腔後部的管子相連接，管子的另一端與藥液接觸以使藥液循環。用電子蠕動泵使藥液通過鼻腔循環，定時取樣用高效液相色譜法測定循環液中藥物濃度，以確定藥物吸收量。
2．藥液的配製將補骨脂滴鼻液配製成1∶100、1∶60、1∶50、1∶40(克補骨脂黑色粘稠物/毫升水溶液重量比)的水溶液，其對應樣本的補骨脂素的濃度分別為0.3275mg/ml、0.5330mg/ml、0.6470mg/ml、0.7265mg/ml；異補骨脂素的濃度分別為0.3801mg/ml、0.5720mg/ml、0.7727mg/ml，0.8767mg/ml，調pH6至6.5，過濾，備用。
3．補骨脂素、異補骨素的鼻黏膜吸收取不同濃度的藥液5ml，以1.0ml/min流速在大鼠鼻腔循環，於0，5，10，20，25，30，40，50，60min各取樣20μl，用流動相稀釋至1ml，用前述高效液相色譜法測定，結果顯示經時累積吸收量與時間呈直線關係，結果見下表，表1、2表1、不同濃度補骨脂中補骨脂素鼻黏膜吸收量與時間關係式
表2、不同濃度補骨脂中異補骨脂素鼻黏膜吸收量與時間關係式
說明通過鼻黏膜能很好地吸收補骨脂素和異補骨脂素，補骨脂滴鼻液吸收效果好。
下面結合實施例對本發明作進一步說明。
實施例1補骨脂的提取方法與補骨脂滴鼻液的生產方法為補骨脂粉碎，過20目篩，經75％酒精浸泡兩次，每次三天，過濾，合併濾液，回收乙醇，靜置，濾液分為兩層，水層和黑色粘稠層，棄去水層，得黑色粘稠層。
取黑色粘稠層，按1克粘稠層加入2毫升甘油三乙酸酯和4毫升吐溫-80的比例加入增溶劑，再加蒸餾水配製成1∶40黑色粘稠層∶水重量比，約相當於1∶12補骨脂藥材∶水，加NaOH溶液調pH至6.5，過濾，分裝，即得。
使用劑量為每次兩側鼻各滴0.1ml，每天三次。
實施例2補骨脂粉碎，過40目篩，經30％酒精浸泡三次，每次三天，過濾，合併濾液，揮幹乙醇，靜置，棄去水層，得黑色粘稠層。
取黑色粘稠層，按1克粘稠層加4毫升甘油三乙酸酯的比例加入增溶劑，加蒸餾水配製成1∶100黑色粘稠層∶水，約相當於1∶33補骨脂藥材∶水(重量比)，加NaOH調pH至8.0，過濾，分裝，即得。
實施例3補骨脂粉碎，不經過篩，經90％酒精浸泡二次，每次三天，過濾，合併濾液，回收乙醇，靜置，棄去水層，得黑色粘稠層。
取黑色粘稠層，按1克粘稠層加入6毫升吐溫-80的比例加入增溶劑，加蒸餾水配製成1∶60黑色粘稠層∶水(重量比)，約相當於1∶20補骨脂藥材∶水，加HCl調pH至5.0，過濾，分裝，即得。
實施例4將吐溫-80改為吐溫-20，其餘同實施例3。
實施例5將吐溫-80改為吐溫-40，其餘同實施例3。
實施例6將甘油三乙酸酯改為甘油一乙酸酯，其餘同實施例2。
實施例7將甘油三乙酸酯改為甘油二乙酸酯，其餘同實施例2。
實施例8將2毫升甘油三乙酸酯和4毫升吐溫-80改為4毫升甘油三乙酸酯和2毫升吐溫-80，其餘同實施例1。
實施例9將pH用HCl調至pH5.5，其餘同實施例1。
實施例10用NaOH將pH調節至pH8.0，其餘同實施例1。
實施例11將pH用HCl調至5.0，其餘同實施例1。
實施例1，實施例9、實施例10製取的滴鼻液，採用上述的鼻黏膜吸收研究的方法，取上述藥液5ml，以1.0ml/min流速在大鼠鼻腔循環，於0、5、10、15、20、25、30、40、50、60min各取樣20μl，用流動相稀釋至1ml，以初始濃度分別減去不同時間點的濃度，再乘以循環液的體積5ml，(此處循環液體積的改變忽略不計)得出不同時間的累積吸收量。
結果得出隨著循環時間的延長，補骨脂素和異補骨脂素的吸收都逐漸增加，並且藥液的pH值不同，對其吸收有顯著影響，在pH為近中性條件下吸收最好。結果見下表(表3、表4)表3 不同pH條件下補骨脂素鼻黏膜吸收量與時間關係式
表4 不同pH條件下異補骨脂素鼻黏膜吸收量與時間關係式
結果表明其吸收符合一級動力學，可以認為補骨脂素和異補骨脂素的吸收機制為被動擴散，在近中性條件下吸收為佳。
本發明的其它實施例與上述實施例有相類似的效果，本發明不限於上述實施例。
權利要求
1．一種補骨脂有效成分的提取方法，依次包括以下步驟將補骨脂粉碎，經30～90％酒精水溶液浸泡一至三次，過濾，合併濾液，除酒，靜置，棄去水層，取黑色粘稠層。
2．一種補骨脂滴鼻液，為將從補骨脂中提取的黑色粘稠層溶於水製得。
3．一種如權利要求2所述的補骨脂滴鼻液的生產方法，依次包括以下步驟，取黑色粘稠層，加入增溶劑和水，調pH值為5～8，過濾，濾液配製成補骨脂滴鼻液。
4．根據權利要求3所述的補骨脂滴鼻液的生產方法，其特徵在於調pH為6.5。
5．根據權利要求3所述的補骨脂滴鼻液的生產方法，其特徵在於增溶劑為甘油三乙酸酯和/或吐溫，兩者之間任意比例的混合物。
6．根據權利要求3或5所述的補骨脂滴鼻液的生產方法，其特徵在於增溶劑為1克的黑色粘稠層添加2毫升甘油三乙酸酯和4毫升吐溫-80。
7．根據權利要求3所述的補骨脂滴鼻液的生產方法，其特徵在於滴鼻液的濃度為1∶40黑色粘稠層水重量比。
全文摘要
一種補骨脂的有效成分的提取方法、補骨脂滴鼻液及其生產方法,將補骨脂粉碎,經30～90%酒精水溶液浸泡一至三次,過濾,合併濾液,除酒,靜置,棄去水層,取黑色粘稠層,加入增溶劑和水,調pH值為5～8,過濾,濾液配製成補骨脂滴鼻液。本發明的提取方法,大大提高了補骨脂素和異補骨素的提取率,本發明的補骨脂滴鼻液使用效果好,鼻黏膜吸收效果好。
文檔編號A61P11/02GK1294923SQ9911718
公開日2001年5月16日 申請日期1999年11月3日 優先權日1999年11月3日
發明者李愛群 申請人:廣東省中醫院