鹿布氏桿菌病抗體檢測卡的製作方法

2023-08-03 13:46:51 3

本實用新型涉及檢測卡領域，尤其涉及一種快速檢測鹿布氏桿菌病毒抗體的檢測卡，用於對鹿血樣品中布氏桿菌病毒抗體的檢測。

背景技術：

近年來我國鹿養殖業得到了迅速的發展，給我國帶來了巨大的經濟收入。但目前我國梅花鹿嚴重的疫病流行影響著鹿養殖業的發展。布氏桿菌（Brucellosis)就是其中重要的傳染疫病之一，作為常見的人畜共患病，該病廣泛流行於我國畜間，不僅帶來了極大的經濟損失，還不斷威脅著人類和社會的安全。

監測抗體是有效淘汰感染鹿的重要手段。採集鹿血清，並檢測血清中鹿布氏桿菌抗體的效價是監控此病的主要方法。

目前，血清學檢測方法是鹿布氏桿菌病常用的診斷方法之一。血清學檢測常用的方法有試管凝集試驗和虎紅平板試驗。試管凝集試驗和虎紅平板試驗的結果判定主觀性較強、不易量化。 膠體金檢測試紙條具有方便快捷、特異敏感、穩定性強、不需要特殊設備和儀器，結果判定直觀等優點，廣泛應用於多種疾病的快速診斷。

本發明應用膠體金免疫層析製備鹿布氏桿菌抗體檢測卡，用於鹿布氏桿菌病抗體的檢測，其靈敏度高，且在短時間內能夠判斷結果，操作簡便，不需要特殊的實驗儀器，不需要專業的操作人員，可以用於鹿布氏桿菌病抗體的快速檢測，尤其適用於基層畜牧獸醫站對本病的初篩。

技術實現要素：

本實用新型的目的是提供一種操作簡單，靈敏度高的鹿布氏桿菌病抗體檢測卡。

為實現上述目的，本實用新型提供一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，包括卡殼和卡殼內的試紙條，卡殼上設有加樣孔和視窗孔，所述試紙條包括底板，所述底板上依次銜接有樣品墊、兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；所述硝酸纖維素膜上設有包被有鹿布氏桿菌脂多糖LPS抗原的檢測線和包被有羊抗兔IgG的質控線，所述的檢測線和質控線平行排列。

進一步的，上述的一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，所述硝酸纖維素膜兩端分別與兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊和吸水紙相互交疊連接，所述樣品墊壓貼在兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊上。

進一步的，上述的一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，所述樣品墊為用於檢測血清、血漿及全血的樣品墊。

進一步的，上述的一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，所述底板為PVC板。

進一步的，上述的一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，所述的樣品墊與卡殼上的加樣孔相對應，所述的硝酸纖維素膜上的檢測線與視窗孔相對應。

進一步的，上述的一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，所述的樣品墊為濾血膜。

進一步的，上述的一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，所述的樣品墊為加入有抗鹿紅細胞表面蛋白抗體的樣品墊。

進一步的，上述的一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，所述兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊是在玻璃纖維上噴塗兔抗鹿IgG膠體金標記物。

有益效果

與現有技術相比，本實用新型提供的鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，結構簡單，易於操作，用於鹿布氏桿菌病抗體的檢測時，其靈敏度高，且在短時間內能夠判斷結果，不需要特殊的實驗儀器，不需要專業的操作人員，可以用於鹿布氏桿菌病抗體的快速檢測，尤其適用於基層畜牧獸醫站對本病的初篩。

通過以下的描述並結合附圖，本實用新型將變得更加清晰，這些附圖用於解釋本實用新型的實施例。

附圖說明

為了更清楚地說明本實用新型實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本實用新型的一些實施例，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為鹿布氏桿菌病抗體檢測卡的結構布置圖；

圖中，樣品墊1；硝酸纖維素膜2；底板3；兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4；檢測線5；質控線6；吸水紙7；卡殼8；加樣孔81；視窗孔82。

具體實施方式

現在參考附圖描述本實用新型的實施例。

實施例

本實用新型是一種鹿布氏桿菌病抗體檢測卡，如圖1所示，包括卡殼8和卡殼8內的試紙條，卡殼8上設有加樣孔81和視窗孔82，所述試紙條包括底板3，所述底板3為PVC板，所述底板3上依次銜接有用於檢測血清、血漿及全血的樣品墊1，為檢測結果更為精確，在檢測全血時，其樣品墊1優先選用濾血膜，或者加入有抗鹿紅細胞表面蛋白抗體的樣品墊。兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4、硝酸纖維素膜2和吸水紙7，具體的說，所述硝酸纖維素膜2兩端分別與兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4和吸水紙7相互交疊連接，所述樣品墊1壓貼在兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4上，所述兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4上設有膠體金標記的兔抗鹿IgG抗體。所述硝酸纖維素膜2上設有包被有鹿布氏桿菌脂多糖LPS抗原的檢測線5和包被有羊抗兔IgG的質控線6，所述的檢測線5和質控線6平行排列。

為了方便加樣和觀察檢測結果，所述的樣品墊1與卡殼8上的加樣孔81相對應，所述的硝酸纖維素膜上的檢測線5與視窗孔82相對應。

為了更清楚的說明本實用新型提供的技術方案，所述的鹿布氏桿菌脂多糖LPS抗原購自杭州億米偌生物技術有限公司，所述的兔抗鹿IgG和羊抗兔IgG購自洛陽佰奧通實驗材料中心。

所述的兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4通過下述步驟依次製得：

所述的兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4是將兔抗鹿IgG膠體金標記物噴塗在玻璃纖維材質，所述的兔抗鹿IgG膠體金標記物是膠體金顆粒溶液和兔抗鹿IgG通過物理吸附連接而成，其具體步驟如下：

（1）用0.2mol/L的碳酸鉀溶液將膠體金顆粒溶液的PH調至9.0；

（2）按照10µg/ml濃度計算所需的兔抗鹿IgG，將兔抗鹿IgG用去離子水稀釋至1mg/ml，攪拌下緩慢滴入上述膠體金顆粒溶液；

（3）攪拌下同樣將10%的牛血清白蛋白（BSA）加入上述混合溶液中；

（4）在離心速度10000rpm，時長30min後，將上述混合液中的上清除去，剩餘的沉澱物用0.01mol/ml的PH7.0磷酸鹽緩衝液復溶至原體積的1/10，得兔抗鹿IgG膠體金標記物。

（5）將上述兔抗鹿IgG膠體金標記物噴塗在玻璃纖維上，待乾燥後製備成兔抗鹿IgG膠體金複合物金墊。

為了精確檢測結果，所述膠體金顆粒溶液中含有的膠體金顆粒大小為25nm，所述膠體金顆粒溶液中所含有的膠體金顆粒大小的變異度小於2%，其採用下述步驟依次製得：

（1）將0.01%氯金酸水溶液100ml加熱至沸騰，同時勻速攪拌；

（2）攪動下準確加入1%檸檬酸三鈉水溶液0.7ml，金黃色的氯金酸水溶液在2分鐘內變為紫紅色，繼續煮沸15分鐘，冷卻後以蒸餾水恢復到原體積。

具體使用時，上述鹿布氏桿菌病抗體檢測卡是利用鹿血液樣品中鹿布氏桿菌抗體、兔抗鹿IgG膠體金標記物和硝酸纖維素膜上的鹿布氏桿菌脂多糖LPS抗原通過間接法來檢測鹿血液樣本中的鹿布氏桿菌抗體。

為快速層析檢測卡，在添加鹿血液樣本後，樣本中的鹿布氏桿菌抗體沿層析膜移動，與檢測線5上的布氏桿菌脂多糖LPS抗原結合顯色，通過檢測線5的顯色深淺來判定鹿血液中布氏桿菌抗體含量的高低。

具體使用時，將待檢鹿血液樣本70µl加入到加樣孔81後，與兔抗鹿IgG膠體金複合物金標墊4上的兔抗鹿IgG結合沿層析膜移動。若待檢樣本中含有鹿布氏桿菌抗體，將與檢測線5處的布氏桿菌脂多糖LPS抗原結合，形成抗原抗體複合物，在檢測線5處出現紅色的條帶，結合物越多，條帶的紅色就越深。

以上所述僅為說明本實用新型，並不用於限制本實用新型，凡在本實用新型的的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本實用新型的保護範圍之內。