一種樣本處理液及其配製方法和應用的製作方法

2023-08-06 02:55:31 2

專利名稱：：一種樣本處理液及其配製方法和應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及免疫檢測用的樣本處理液，尤其是用於流感病毒檢測中的樣本預處理。
背景技術：
：流行性感冒病毒簡稱流感病毒，是引起流感的病原體，流感是一種上呼吸道急性傳染病，它傳染性強、傳播快、潛伏期短、發病率高。已引起數次世界性大流行，對人類的生命健康危害極大。隨著流感實驗技術的發展，流感快速診斷技術也不斷進步，不僅實驗方法更加敏感，實驗時間也不斷縮短最傳統的病毒分離培養法數天可報告實驗結果，酶聯免疫吸附實驗(ELISA)、免疫螢光實驗當天可報告實驗結果。這些檢測需要依賴於醫院或精密的儀器，操作比較複雜。目前市面上，有一種更為簡單的檢測工具，流感病毒膠體金法快速診斷試劑盒可以在更短時間內完成整個實驗。然而由於流感病毒的樣本，通常選用鼻涕，痰液或者咽喉擦拭液，當這些樣本通過免疫的方法進行檢測時，樣本中存在的高粘性物質會堵塞多孔膜的孔。另外，這些高粘性物質還可能通過與人體脫落的上皮黏膜細胞結合在一起，進一步堵寨多孔膜，造成免疫檢測的不精確甚至無法進行。
發明內容為了克服以上現有技術存在的缺陷，進行了本發明。本發明較現有技術相比，能夠使樣本在檢測前被充分預處理，排除影響檢測反應的不利因素，降低流感檢測的假陽性，提高檢測的精確性。本薦明提供了一種樣本處理液，包括牛血清白蛋白和鹽離子物質，優選的，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質的濃度為5—200mg/ml。優選的，所述的鹽離子物質包括氯化鈉或氯化鉀。更為優選的，所述的氯化鈉的濃度為20-50mg/ml;所述的牛血清白蛋白濃度為5-20mg/ml。在另一個實施方式中，所述的樣本處理液包括表面活性劑。優選的，所述的樣本處理液包括兩性表面活性劑。同樣優選的，所述的表面活性劑選自於聚氧乙烯月桂醇醚、乙烯基二元胺共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、異丙胺烷基苯磺酸鹽中的一種或幾種。在另一個實施方式中，所述的樣本處理液還包括生物緩衝物和防腐劑。優選的，所述的生物緩衝物選自於三羥甲基氨基甲垸、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸、二(2-羥乙基)亞氣基三(羥甲基)甲烷-丙垸中的一種或幾種；所述的防腐劑選自於疊氮鈉、慶大黴素、卡那黴素、硫柳汞鈉、氨苄青黴素中的一種或述的疊氮化鈉的濃度為0.1-lmg/ml。本發明還提供一種配製樣本處理液的方法，在溶劑中加入一定量的牛血清蛋白和鹽離子物質。優選的，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質的濃度為5_200mg/ml。本發明還提供一種檢測試劑盒，包括可以快速檢測樣本中是否含有被分析物質的橫向流動檢測裝置和樣本處理液，所述的樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質。優選的，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質的濃度為5_200mg/ml。本發明取得的有益效果是能夠使樣本在檢測前被充分預處理，排除影響檢測反應的不利因素，降低流感檢測的假陽性，提高檢測的精確性。具體實施例方式下面對本發明中所使用的技術術語做進一步的說明。檢測檢測表示化驗或測試一種物質或材料是否存在，比如，，但並不限於此，化學物質、有機化合物、無機化合物、新陳代謝產物、藥物或者藥物代謝物、有機組織或有機組織的代謝物、核酸、蛋白質或聚合物。另外，檢測表示測試物質或材料的數量。進一步說，化驗還包括免疫檢測，化學檢測、酶檢測等。樣本本發明所指的樣本指那些可以用來檢測、化驗或診斷是否存在感興趣的被分析物質的物質。樣本可以是，例如，液體樣本，液體樣本可以包括血液、血漿、血清、尿液、唾液和各種分泌液，還可以包括固體樣本和半固體樣本經過預先處理後形成的液體溶液。收集來的樣本可以用於免疫檢測、化學檢測、酶檢測等方法來檢測是否存在被分析物質。樣本優選如鼻涕，痰液，咽喉擦拭液等。對於採集這些樣本沒有特別的限制，一般可以採用常規方法，比如可以用棉籤採集，也可以用專用的收集器。流感病毒本發明的檢測對象是樣本中的物質，特別是流感病毒。流感病毒可以使通常定義下的，沒有特別的限制。流感病毒屬於正粘病毒科。流感病毒顆粒呈球形，由外膜和包圍於其中的核衣殼組成。外膜的主要成份是脂質，其內表面為一層作為基質的蛋白質，外表面有血凝素和神經氨酸酶兩種糖蛋白突起，這些糖蛋白突起是流感病毒抗原結構的主要成分，同時也是流感疫苗的重要組成部分。核衣殼由RNA(f亥糖核酸)、核蛋白以及多聚酶組成，依據核蛋白的抗原性，流感病毒分為甲、乙、丙三型。以甲型的流行規模最大，乙型次之，丙型極少引起流行，因而檢測甲型和乙型流感顯得尤為重要。樣本處理液樣本可以在檢測前被預處理。預處理的溶液，可以包括牛血清白蛋白(BSA)和鹽離子物質。牛血清白蛋白(簡稱BSA)，是血液的主要成分(38g/100ml)，分子量68kD。等電點4.8。含氮量16%，含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。牛血清白蛋白由581個胺基酸殘基組成，其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。在樣本處理液中加入BSA，BSA的濃度可以是1-50mg/ml之間，優選的，BSA的濃度在5-20mg/ml之間。更為優選的，BSA的^j^度為5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml或20mg/ml。BSA上有多個結合位點，可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質結合。尤其可以和樣本中的非特異性物質結合在一起，即封閉非特異性位點，可以避免樣本和非特異性物質的結合，起到生理和機械保護作用,抵消由非特異性物質引起的假陽性現象。鹽離子物質，可以是還有無機鹽離子的物質，比如氯化鈉、氯化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、EDTA鈉鹽、疊氮化鈉中一種或者幾種物質的組合。鹽離子物質的濃度可以是5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml。優選的，鹽離子的濃度為20-50mg/ml，如20mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40.mg/ml、45mg/ml或50mg/ml。更為優選的，鹽離子物質為氯化鈉，濃度為20-50mg/ml。鹽離子可以除去樣本中，尤其是鼻涕，唾液或者咽喉擦拭液中的粘性物質，使粘性物質沉降，不影響樣本在試劑條上的流動和滲透。樣本處理液還可以包括各類表面活性劑。表面活性劑能顯著改變液體表面張力或兩相之間的界面張力。本發明中的表面活性劑，可以採用非離子型的表面活性劑，如聚氧乙烯月桂醇醚(商品名ChemalLA-9)、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物(Pluronic)、異丙胺垸基苯磺酸鹽(Ninate)、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)月旨肪醇聚氧乙烯醚、$基酚聚氧乙烯醚和聚乙二醇等，也可以採用離子型的表面活性劑，如十烷基三甲基氯化銨(DTMAC)、十二烷基三甲基氯化銨(DTAC)、十四烷基三甲基氯化銨(TTAC)、十六烷基三甲基氯化銨(CTAC)、十八烷基三甲基氯化銨(OTAC)及十二烷基硫酸鈉(SDS)等。優選的，樣本處理液中還可以加入兩性表面活性劑，比如乙烯基二元胺共聚物(商品名Tetronic)。以上表面活性劑均可使樣本與預處理液混合均勻的作用。以上表面活性劑的濃度可以在0.1-15mg/ml之間。本發明的樣本處理液還可以包括生物緩衝物品，濃度在3-30mg/ml之間，如三羥甲基氨基甲垸(TrizmaBase)、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris鹽酸)、3-(N-嗎啉基)_2-羥基丙磺酸(MOPSO)、二(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷-丙垸(BPT)等。本發明的樣本處理液還可以包括防腐劑，有效延長樣本處理液的保質時間。防腐劑可是選自於山梨酸、山梨酸鉀、苯甲酸、二氧化碳、硝酸鹽、亞硝酸鹽、亞硫酸等。優選的，防腐劑選自於疊氮鈉，慶太黴素，卡那黴素，硫柳汞，氨苄青黴素等之一或其組合。優選的，疊氮鈉濃度可以是O.1-lmg/ml,慶大黴素濃度可以是0.01-0.lmg/ml，卡那黴素濃度可以是0.01-0.lmg/ml，硫柳汞鈉濃度可以是0.1-lmg/ml，氨苄青黴素濃度可以是O.Ol-O.lmg/ml。更優選的，疊氮鈉濃度可以是0.2mg/ml，慶大黴素濃度可以是0.02mg/ml，卡那黴素濃度可以是0.05mg/ml，硫柳汞鈉濃度可以是0.2mg/ml，氨苄青黴素濃度可以是0.05mg/ml。樣本處理液中可以含有以上濃度的其中之一種防腐劑，也可以兩兩組合或者兩種以上組合作為防腐劑存在。本發明還提供一種配製以上所述樣本處理液的方法，在水中加入一定量的牛血清蛋白和鹽離子物質。優選的，牛血清白蛋白的濃度為.l-50mg/ml，鹽離子物質的濃度為5—200mg/ml。本潭明還提供一種檢測試劑盒，包括可以快速檢測樣本中是否含有被分析物質的橫向流動檢測裝置和如上所述的樣本處理液，樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質。優選的，牛血清白蛋白的濃度為1-50mg/ml，鹽離子物質的濃度為5—200mg/ml。優選的，這種檢測試劑盒可以用於流感A型或者B型的檢測。更為優選的；這種檢測試劑盒可以同時用於檢測感A型和流感B型。更為優選的，橫向流動.檢測裝置為流感病毒膠體金法快速診斷試劑裝置。下面結合具體實施例對本發明來進行詳細的說明。這些具體的實施例子僅僅是在不違背本發明精神下的有限列舉，並不排除本領域的一般技術人員把現有技術和本發明結合而產生的其他具體的實施方案。實施例一本實施例以檢測流感病毒為對象，樣本處理液的配方為不'同濃度的BSA和NaCl，濃度單位為mg/ml。1.樣本處理液的配比。其中，BSA的濃度分別為5mg/ml、15mg/ml、25mg/ml、35mg/ml;NaCl的濃度分別為10mg/ml、25mg/ml、35mg/mi、45mg/ml和50mg/ml。根據不同濃度配比成不同的樣本處理液。2.選用流感檢測中兩種不同類型的流感的標準品溶液，如FluA弱陽性標準品、FluB弱陽性標準品、FluA強'陽性標準品、FluB彈陽性標準品和Flu陰性標準品。3.快速診斷檢測。使用流感病毒膠體金法快速診斷試劑盒，包括流感病毒膠體金法快速診斷試劑條(FluA+B)(IMI公司生產)。將各種樣本使用不同的樣本處理液進行預處理後，取一定量滴於快速診斷試劑條上，進行15分鐘的免疫反應。結果如表一所示，+-表示疑似，+表示陽性，-表示陰性，++表示強陽性。在完全不含有BSA和NaCl的情況下，反應結果比較模糊，處於陽性和陰性交界，很容易給檢測者或者醫生造成誤讀。採用不同濃度的BSA和NaCl，都可以讀得準確良好的結果，很容易對流感A和流感B進行鑑定。表一BSA+NaClFluA弱陽性標準品FluB弱陽性標準品FluA強陽性標準品FluB強陽性標準品陰性標準口叩0+Q+-+-+++-5+10++++++—15+25++++++-15+35++++++—25+25++++++-25+45++++++-11tableseeoriginaldocumentpage12實施例二與實施例一不同的是，本實施例中採用三種物質配比得到樣本處理液，分別是BSA，NaCl和聚氧乙烯月桂醇醚(ChemalLA-9)，，三者配比濃度如表二，濃度為mg/ml。在含有BSA，NaCl和ChemalLA-9的情況下，均可以讀得準確良好的結果，很容易對流感A和流感B進行鑑定。tableseeoriginaldocumentpage12實施例三與實施例一不同的是，本實施例中採用三種物質配比得到樣本處理液，分別是BSA，NaCl和乙烯基二元胺共聚物(Tetronic),三者配比濃度如表二，濃度為mg/ml。在含有BSA，NaCl和Tetronic的情況下，均可以讀得準確良好的結果，很容易對流感A和流感B進行鑑定。tableseeoriginaldocumentpage12tableseeoriginaldocumentpage13實施例四與實施例一不同的是，本實施例中採用五種物質配比得到樣本處理液，分別是BSA，NaCl、ChemalLA-9、三羥甲基氨基甲烷(TrizmaBase)和疊氮鈉(SodiumAzide)，三者配比濃度如表二，濃度為mg/ml。在含有BSA，NaCl、ChemalLA國9、TrizmaBase禾BSodiumAzide的情況下，均可以讀得準確良好的結果，很容易對流感A和流感B法行鑑定。表四tableseeoriginaldocumentpage13權利要求1.一種樣本處理液，其特徵在於，該樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質。2.如權利要求i所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質的濃度為5，200mg/ml。3.如權利要求1所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的鹽，離子物質包括氯化鈉或氯化鉀。4..如權利要求3所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的氯化鈉的濃度為20-50mg/ml。5.如權利要求1或2所述的樣本處理液，其特徵在於.，所述的牛血清白蛋白濃度為5-20mg/ml。6.如權利要求1所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的樣本處理液包括表面活性劑。7.如權利要求6所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的樣本處理液包括兩性表面活性劑。8.如權利要求6所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的表面活性劑選自於聚氧乙烯月桂醇醚、乙烯基二元胺共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、異丙胺烷基苯磺酸鹽中的一種或幾種。9.如權利要求1所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的樣本處理液還包括生物緩衝物和防腐劑。10.如權利要求9所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的生物緩衝物選自於三羥甲基氨基甲烷、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸、二(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲'基)甲烷-丙烷中的一種或幾種；所述的防腐劑選自於疊氮鈉、慶大黴素、卡那黴素、硫柳汞鈉、氨苄青黴素的一種或幾種。11.如權利要求10所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的三羥甲基氨基甲烷的濃度為3-30mg/ml;所述的疊氮化鈉的濃度為0.l-lmg/ml。12.—種配製如權利要求1所述的樣本處理液的方法，其特徵在於，在溶劑中加入一定量的牛血清蛋白和鹽離子物質。13.如權利要求12所述的配製樣本處理液的方法，其特徵在於，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質的濃度為5—200mg/ml。14.一種檢測試劑盒，包括可以快速檢測樣本中是否含有被分析物質的橫向流動檢測裝置和樣本處理液，其特徵在於，所迷的樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質。15.如權利要求14所述的樣本處理液，其特徵在於，所述的牛血清白蛋白.的濃度為1-50mg/ml，所述的鹽離子物質的濃度為5—200mg/ml。全文摘要本發明提供了一種樣本處理液，包括牛血清白蛋白和鹽離子物質，牛血清白蛋白的濃度為1-50mg/ml，鹽離子物質的濃度為5-200mg/ml。本發明的樣本處理液中還可以包括表面活性劑。本發明能夠使樣本在檢測前被充分預處理，排除影響檢測反應的不利因素，降低流感檢測的假陽性，提高檢測的精確性。文檔編號G01N33/48GK101556222SQ20081006169公開日2009年10月14日申請日期2008年5月29日優先權日2008年5月29日發明者紅於,吳淑江,吳銀飛,陸維克,陳金樹,飛高申請人:艾博生物醫藥(杭州)有限公司