含有聚(adp-核糖)聚合酶抑制劑的治療組合物的製作方法

2023-08-05 07:25:56

專利名稱：：含有聚(adp-核糖)聚合酶抑制劑的治療組合物的製作方法
技術領域：
：60/612,457、60/612,459和60/679,296中所述的來製備，其公開的內容在此以全文併入作為參考。迄今為止，在PARP家族中，已經有18種酶通過DNA序列同源性得到鑑定，調查了7種酶的生物化學和酶的性質通過DNA鏈斷裂刺激PARP-1和PARP-2;PARP-3與PARP-1和中心體的相互作用;PARP-4還稱為官窿PARP(VPARP)是最大的PARP並與細胞質的官窿有關；tankyrasel和2(PARP-5a和5b)是和端粒蛋白有關的；PARP-7(TiPARP)的功能目前還不清楚但是其可能與T-細胞功能有關而且它可以多聚ADP-核糖化組蛋白(AmeJC，SplenlehauerCanddeMurciaG.ThePARPSuperfamily."/oem/s26882-893(2004))。藥理學研究表明，式1_化合物是PARP-1(Ki=1.4nM)和PARP-2(Ki=0.17nM)的抑制劑。基於PARP酶中胺基酸序列上結構的相似性，式i的化合物也可能高親和力地結合家族中的其他成員。DNA中單鏈或雙鏈斷裂的酶介導修復是潛在的抗放射治療或細胞中毒類藥的機制，該機製取決於DNA損傷。因此，抑制DNA修復酶是增強這些試劑的策略。PARP-1是PARP家族中最具有特徵的成員，是這樣的核酶，當其被DNA損傷激活時，其調節ADP-核糖碎片從NAD+轉化成大量的受體蛋白。根據遭受的DNA損傷的程度，PARP-1激活，隨後的聚(ADP-核糖)化調解損傷的DNA的修復或引起細胞死亡。當DNA損傷是適度的，PARP-1在DM的修復過程中具有重要的作用。相反地，如果發生大量的DNA損傷，PARP-1過度的激活耗盡ATP池(pools)(盡力再補充NAD+)，由於壞死其最終導致細胞死亡(TentoriL，PortarenaI，GrazianiG.Potentialapplicationsofpoly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitors.b2002，45，73-85)。PARP的激活還可以導致釋放AIF(凋亡誘導因子)觸發不依賴半胱天冬酶的細胞凋亡的途徑。(HongSJ，Da講nTMandDawsonVL.Nuclearandmitochondrialconversationsincelldeath:PARP-landAIF.7Ve油//泡濯co/og/ca7iWe膨s25259-264(2004))。作為PARP-1雙重作用的結果，這種酶的抑制劑，如式1表示的8-氟-2-{4-[(甲氨基)曱基]苯基}-1，3，4，5-四氫-6H-氮雜萆並苯基}-1，3,4，5-四氫-6H-氮雜革並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸鹽。術語"式1_化合物"涉及8-氟-2-{4-[(曱氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氫-6H-氮雜萆並[5，4，3-cd]吲咮-6-酮游離鹼。如本文所用的"異常細胞生長"，除非另外指出，涉及不依賴正常的調節機制的細胞生長(例如，喪失接觸抑制)。如本文所用的術語"治療"，除非另外指出，指的是逆轉、緩解、抑制該術語施用的障礙或病症或這樣的障礙或病症的一種或多種症候群的進展或預防該術語施用的障礙或病症或這樣的障礙或病症的一種或多種症候群。如本文所用的術語"療法"，除非另外指出，指的是用作以上直接定義的"治療"的治療的行為。如本文所用的術語"放射敏化劑"，指的是使腫瘤細胞對放射治療更敏感的藥物。如本文所用的術語"放射治療"，包括外線束放射治療(XBRT)或遠程放射治療、近程放射治療或密封源放射治療和未密封源放射治療。這三組主要放射治療之間的差異，是關於放射源的位置；外部的是在在身體外面，而密封源和未密封源的放射治療具有在體內傳遞的放射性物質。外線束放射治療是放射治療最常見的形式，其中患者躺在檢查臺上，外源的x-射線的瞄準身體的特定部位。放射線與組織相互作用，被吸收，損害細胞的DNA。近程放射治療是用放置於儘可能接近治療位點的密封源傳送放射治療。當放射源可以放置於體腔如食道或支氣管內或當腫瘤如頭和頸和皮膚進得去放置放射源的針或導管，其可適用於治療腫瘤。近程放射治療潛在地應用於大多數的腫瘤位點，其可以用作初期治療或與外線束放射治療聯合。未密封源的放射治療指的是使用注射進體內的溶解形式的放射性物質。所有這些物質具有一個最常見的特徵，即是非放射性母體物質的生物學作用。質子治療是外線束放射治療的特殊情況，其中粒子是質子。如本文所用的術語"放射免疫療法"，指的是這樣的放射治療，其中細胞毒素的放射性核素聯接抗體，以便直接傳送毒素進入腫瘤的靶點。勝於抗體靶向毒素(免疫毒素)的定向放射的治療具有的益處是，靠近腫瘤的喪失適當的抗原決定子的細胞可以是被交叉放療破壞的。放射免疫療法有時稱為靶向放射治療，但是後者的術語還可以涉及連接無免疫性分子的放射性核素(放射治療)。如本文所用的術語"藥學上可接受的鹽"，除非另外指出，包括化合物中可存在的酸性或鹼性基團的鹽。本質上是鹼性的化合物能夠與多種無機和有機酸形成廣泛的多種鹽。可用於製備這樣鹼性化合物的藥學上可接受的酸加成鹽的酸是形成無毒的酸加成鹽的那些酸，伊，含有藥理學上可接受的陰離子的鹽，如醋酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、重硫酸鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、依地酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸化物、依地酸鹽、edislyate、丙酸酯月桂硫酸鹽、乙磺酸鹽，乙基琥珀酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、穀氨酸鹽、醣酵對氨基苯胂酸鹽、hexylresorcinate、海蔥次苷、氫溴化物、鹽酸鹽、碘化物、異蘇氨酸、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、曱基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、樸酸鹽(雙羥萘酸鹽)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次醋酸鹽、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、triethiodode和戊酸鹽的鹽類。特別優選的鹽包括磷酸鹽和葡糖酸鹽的鹽。本發明還包括同位素標記的化合物，其與式JL中列舉的那些化合物相同，除一個或多個原子被原子量或質量數不同於自然界中常見的原子量或質量數的原子取代。可結合本發明的化合物的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別如211、3H、"C、13C、14C、15N、180、170、31P、32P、35S、"F和"C1。包含前述提及的同位素和/或其他原子的其他同位素的本發明的化合物及該化合物藥學上可接受的鹽是在本發明的範圍之內。本發明某些同位素標記的化合物，例如其中結合放射性同位素如311、"C、"C或"F那些，可用於藥物和/或底物組織分布測定。氚標記即3H和碳-14標記即"C的同位素是特別優選的，由於其易於製備和測定，而"C或"F用於正電子成象術。進一步，具有更重同位素的置換如氘即2H，可以提供某些治療益處，由於更大的代謝穩定性，例如增加的體內半衰期或減少的劑量需要，因此，在某些情況下可以是優選的。本發明中同位素標記的式]_化合物通常以上述製備未標記化合物的方法製備，以易得的同位素標記試劑取代非同位素標記試劑。二磷酸腺苷不利事件丙氨酸氨基轉移酶嗜中性細胞絕對計數天門冬氨酸氨基轉移酶血漿濃度-時間曲線下面積0-24小時的血漿濃度時間曲線下面積O-最後的記錄的觀察點的血漿濃度時間曲線下面積檢測下限體表面積血液尿素氮ADPAEALTANCASTAUCAUC(0—24)AUC(0-tlast)BLDBSABUNc。開始濃度a清除率最大血漿濃度CRC結腸直腸癌CTCAEv3不利事件版本3的常規術語標準CV心血管的DLT劑量限制毒性DNA脫氧核糖核苷酸EC50產生5(^的最大效應的濃度ECG心電圖FcRFc受體5-FU5-氟尿嘧啶GI胃腸的GIST胃腸道間質瘤GLP藥品安全性試驗規範HCT血細胞比容hERG人快速延遲性整流性鉀通道基因hERG-IKr人快速延遲性整流性鉀通道基因通道阻斷HGB血紅蛋白GI5。50%細胞生長抑制濃度IC5。50%酶活性抑制濃度IGF胰島素樣生長因子IGF-1Rl型，胰島素樣生長受體IL白細胞介素IP腹膜內注射IV靜脈注射LLN正常的下限L闊定量的下限LV亞葉酸腿NGN-曱基-N'-硝基-N-亞硝基胍MTD最大耐受劑量腸煙醯胺腺嘌呤二核苷酸N0AEL未觀察到不利事件的濃度PARP聚(ADP-核糖)聚合酶PBMCs外周血單核細胞PD>藥效學PIDPARP-抑制劑量PK藥物代謝動力學P0口服RBC紅血細胞RECIST實體瘤響應評價標準QC質量控制SAE嚴重的不利事件SWFI/SWI注射用無菌水tl/2表觀的末端半衰期T1max出現C的時間ULN正常的上限Vdss穩態分布的量WFI注射用水附圖簡述圖1表示關於與用作抑制SW620異種移植的8-氟-2-{4-[(曱氨基)甲基]苯基}-1，3，4,5-四氫-6H-氮雜萆並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸鹽聯合的替莫唑胺的有效性的數據。圖2表示關於與用作抑制SW62Q異種移植的8-氟-2-M-[(甲氨基)甲基]苯基}-l，3，4，5-四氫-6H-氮雜萆並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的葡萄糖醛酸鹽聯合替莫唑胺的有效性的數據。圖3表示當30-分鐘IV輸注給予磷酸鹽和給予口服替莫唑胺100mg/m2時，第7天(單獨8-氟-2-{4-[(甲氨基)曱基]苯基}-1，3，4，5-四氫-6H-氮雜萆並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸鹽)和第1天和笫4天(8-氟-2-{4-[(甲氨基)曱基]苯基)-l，3，4，5-四氫-6H-氮雜革並[5，4，3-cd]吲咮-6-酮的磷酸鹽+替莫唑胺)平均的8-氟-2-{4-[(曱氨基)曱基]苯基}-1，3，4，5-四氫-6H-氮雜革並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮血漿濃度-時間分布。圖4表示給藥8-氟-2-{4-[(曱氨基)曱基]苯基}-1，3，4,5-四氫-6H-氮雜萆並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮之後外周血淋巴細胞中中值PARP活性。發明詳述I.8-氟-2-{4-[(甲氨基)曱基]苯基卜l，3，4，5-四氫-6H-氮雜苯並[5，4，3-cd]丐l咮-6-酮的藥物製劑式1_化合物的及其鹽，可以按照美國專利號6,495,541、PCT申請號PCT/IB2004/000915、美國臨時專利申請號60/612,457和美國臨時專利申請號60/612，459描述的製備，其在此以全文併入作為參考。某些起始原料可以根據本領域技術人員熟悉方法製備，而且根據本領域技術人員熟悉的方法可以進行某些合成修飾。式1_化合物能夠與無機和有機酸形成廣泛的多種不同的鹽類。雖然這樣的鹽必須是藥學上可接受的用於給藥哺乳動物，在實踐中，常常期望最初從反應混合物中分離出式1_化合物作為藥學上不可接受的鹽，然後通過用鹼性試劑處理使後者筒單地轉變成游離鹼化合物，隨後把後者的游離鹼轉變成藥學上可接受的酸加成鹽。本發明鹼性化合物的酸加成鹽是容易製得的，通過用含基本上等量的選擇的無機酸或有機酸在水性溶劑介質或適合的有機溶劑如曱醇或乙醇中處理鹼性化合物。謹慎地蒸發溶劑，容易獲得期望的固體鹽。通過把適合的無機酸或有機酸加入到溶液中，還可以是從游離鹼的有機溶劑中沉澱出期望的酸式鹽。製備優選的鹽，磷酸鹽的特定的實例可以在PCT申請號PCT/IB2004/000915、美國臨時專利申請號60/612,457和美國臨時專利申請號60/612，459找到，其公開的內容在此以全文併入作為參考。通過能使化合物傳送至作用位點的任何方法，可以完成式1_化合物的給藥。這些方法包括口服途徑、十二指腸內途徑、胃腸外注射(包括靜脈、皮下、肌內、血管內或輸注)、局部和直腸給藥。例如，該化合物可以是以適於口服給藥如片劑、膠嚢劑、丸劑、粉劑、持續釋放製劑、溶液、混懸液，適於胃腸外注射如無菌溶液、混懸液或乳液，適於局部給藥如軟骨劑或霜劑或適於直腸給藥如栓劑的形式提供。該化合物可以是適於精確劑量的單個給藥的單位劑型。優選地，劑型含有常規的藥用載體或賦形劑和作為活性成分的式1_化合物。此外，劑型可以包含其他的醫用或藥用的試劑、載體、佐劑等。示例性的胃腸外給藥的形式包括無菌水溶液的溶液或混懸液，例如水性的丙二醇或葡萄糖溶液。如果需要，這樣的劑型可以適當地緩衝。適合的藥用載體包括無活性的稀釋劑或填充劑，水和多種有機溶劑。如果期望，藥物組合物可以含有另外的成分如調味劑、粘合劑、輔料和類似物。因此就口服給藥而言，含有多種輔料的片劑，如檸檬酸可以和多種崩解劑如澱粉、海藻酸和某些複合的矽酸鹽以及粘合劑如蔗糖、明膠和阿拉伯膠一起使用。此外，潤滑劑如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉和滑石常常用於壓片目的。同樣類型的固體組分也可以用在軟和硬填充的明膠膠嚢中。因此，優選的物質包括乳糖或乳糖(milksugar)以及高分子量的聚乙二醇。當水性的混懸劑或酏劑期望用於口服給藥時，其中的活性成分可以配伍多種甜味劑或芳香劑、著色物質或顏料，而且如果期望，乳化劑或助懸劑連同稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油或其組合。在本發明劑型的一個優選的實施方案中，該劑型是口服劑型，更優選地是片劑或膠嚢劑。在本發明方法的一個優選的實施方案中，式jj匕合物是胃腸外給藥，例如使用凍乾粉。臨床用注射的凍乾粉的製備是在美國臨時專利申請號60/612，中描述的，其公開的內容在此以全文併入作為參考。例如，式1_化合物的磷酸鹽可以配製並提供為注射用的凍乾粉。12mg/瓶(作為游離鹼)，10mL/20mm,I型，琥珀色玻璃管形瓶。式1_化合物的磷酸鹽的組合物的藥品可以是由式U匕合物的磷酸鹽、甘露醇、注射用水和氮氣組成。所得的藥品可以是米色至黃色的餅狀物。每個藥物產品瓶可以用6mL的注射用無菌水重建獲得2.02mg/mL(四捨五入至2mg/mL)，為式jj匕合物的游離鹼。在本發明優選的實施方案中，式i化合物的血漿濃度維持在5.9ng/mL或以上。根據抑制細胞NAD+消耗和多聚-ADP-核糖聚合物形成且調節蛋白結合的靶效應(IC89)來測定該值。特別地，如實施例4中所示，式i化合物在5nM(替莫唑胺PF5。=1.3)時，大大地減少了A549細胞中MNNG-誘導的細胞NAD+消耗並抑制89y。的多聚-ADP-核糖形成。校正人蛋白結合(27.4%平均未結合的式1化合物濃度介於0.05-25nM)的5nM靶效應，獲得5.9ng/mL的血漿濃度5nMx323.375.9ng/mL0.274x1000II.本發明的藥物組合物及其應用在本發明的一個實施方案中，式i化合物是用於增強細胞中毒類藥的效力，所述細胞中毒類藥的機制依賴於DNA損傷。這些藥物包括但不限於替莫唑胺(SCHERING)、伊立替康(PFIZER)、託泊替康(GLAXOSMITHKLINE)、順柏(BRISTOLMEYERSSQUIBB;AMPHARMPARTNERS;BEDFORD;GENSIASICORPHARMS;PHARMACHEMIE),和鹽酸阿黴素(AMPHARMPARTNERS;BEDFORD;GENSIA;SICORPHARMS;PHARMACHEMIE;ADRIA;ALZA)。通常以藥物組合物的形式，給藥治療有效量的本發明的藥物來治療PARP的調變或調節介導的疾病。"有效量"意欲指的是當給藥於需要此治療的哺乳動物包括人時，足以有效地治療由一種或多種PARP酶介導的疾病的藥物的量。因此，本發明化合物的治療有效量是足以調整、調節或抑制一種或多種PARP酶的活性以便減輕或緩解由該活性介導的疾病症狀的量。給定化合物的有效量將根據以下因素變化，如疾病情況及其嚴重度、需要治療的哺乳動物的特性和條件(例如，體重)，但是儘管如此可以由本領域技術人員常規地確定。"治療"意欲指的是至少緩和哺乳動物包括人的疾病情況，所述疾病情況是至少部分上被一種或多種PARP酶的活性影響，並包括預防哺乳動物中疾病情況的發生，特別是當發現哺乳動物傾向於患有了疾病情況但是還未診斷出患有該疾病情況；調節和/或抑制病症；和/或減輕疾病情況。示例性的病症包括癌症。作為PARP活性調節劑的式l化合物的活性可以通過本領域技術人員可用的任何方法測量，包括體內和/或體外測定。測量活性的適合測定法的實例包括美國專利號6,495,541及本發明說明書中描述的那些。本發明涉及治療PARP活性介導的病症的治療方法，所述病症是例如癌症和涉及氧化的或一氧化氮引起的應激和後來的PARP活動過度的多種疾病和中毒狀態。這樣的病症包括，但不限於神經和神經變性的病症(例如，帕金森病、阿耳茨海默病)、心血管病症(例如，心肌梗死、缺血再灌注損傷)、糖尿病的血管功能障礙、順鉑引起的中毒性腎損害。本發明的治療方法包括給予有此需要的哺乳動物治療有效量藥物組合物，所述藥物組合物包括任何多晶型、或以上討論的藥物組合物。本發明還涉及治療哺乳動物包括人的異常細胞生長的方法，包括給予該哺乳動物有效治療異常細胞生長的以上定義量的式1_化合物，或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。在此方法的一個實施方案中，異常細胞生長是癌症，包括但不限於間皮瘤、hepatobiliary(肝和bi11iaryduct)、原發性或繼發性的CNS腫瘤、原發性或繼發性的腦瘤、肺癌(NSCLCandSCLC)、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼黑色素瘤、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、肛區癌、胃癌、胃腸(胃的、結腸直腸的和十二指腸的)癌、乳腺癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、睪丸癌、慢性或急性白血病、慢性髄細胞樣白血病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統的新生物(CNS)、原發性中樞神經的淋巴瘤、非霍奇金淋巴癌、脊推腫瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤、腎上腺皮質癌、膽嚢癌、多發性骨髓瘤、膽管癌、纖維肉瘤、成神經細胞瘤、視網膜母細胞瘤，或前述癌症的一種或多種的組合。在該方法的另一個實施方案中，該異常細胞生長是良性的增殖疾病，包括但不限於銀屑病、良性前列腺肥大或restinosis。本發明還涉及治療哺乳動物異常細胞生長的方法，包括給藥該哺乳動物一定量的式1_化合物，或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，其與選自有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝物、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞周期抑制劑、酶類、拓樸異構酶抑制劑、生物反應修飾劑、抗體、細胞毒素、抗激素類和抗^^激素類的抗腫瘤劑組合有效地治療異常細胞生長。本發明還涉及治療哺乳動物包括人異常細胞生長的藥物組合物，包含如上定義量的有效地治療異常細胞生長的式L化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，以及藥學上可接受的載體。在該組合物的一個實施方案中，該異常細胞生長是癌症，包括但不限於間皮瘤、hepatobilliary(肝和bi11iaryduct)、原發性或繼發性的CNS腫瘤、原發性或繼發性的腦瘤、肺癌(NSCLCandSCLC)、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼的黑色素瘤、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、肛區癌、胃癌、胃腸(胃的、結腸直腸的和十二指腸的)癌、乳腺癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、曱狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、睪丸癌、慢性或急性白血病、慢性髄細胞樣白血病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統的新生物(CNS)、原發性中樞神經的淋巴瘤、非霍奇金淋巴癌、脊推腫瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤、腎上腺皮質癌、膽嚢癌、多發性骨髄瘤、膽管癌、纖維肉瘤、成神經細胞瘤、視網膜母細胞瘤、或一種或多種前述癌症的組合。在該藥物組合物的另一個實施方案中，該異常細胞生長是良性的增殖疾病，包括但不限於銀屑病、良性前列腺肥大或restinosis。本發明還涉及治療哺乳動物包括人的異常細胞生長的藥物組合物，其包含如上定義量的式1_化合物，或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，其與藥學上可接受的栽體和選自有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝物、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞周期抑制劑、酶類、拓樸異構酶抑制劑、生物反應修飾劑、抗體、細胞毒素、抗激素類和抗雄激素類的抗腫瘤劑組合有效地治療異常細胞生長。本發明還涉及治療哺乳動物中過度增生疾病的方法，包括給予該哺乳動物治療有效量的式1_化合物或其藥學上可接受的鹽或水合物，與選自抗增殖劑、激酶抑制劑、血管生成抑制劑、生長因子抑制劑、cox-I抑制劑、cox-II抑制劑、有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝物、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、放射、細胞周期抑制劑、酶類、拓樸異構酶抑制劑、生物反應修飾劑、抗體類、細胞毒素類、抗激素類、他汀類和抗雄激素類的抗肺瘤劑的聯合。本發明還涉及治療PARP活性介導的病症的組合治療方法，包括向有此需要的哺乳動物給予治療有效量的藥物組合物，其含有以上討論的任何多晶型或藥物組合物和治療有效量一種或多種選自抗腫瘤劑、血管生成抑制、信號傳導抑制劑和抗增殖劑的物質。這樣的物質包括PCT公布號W000/38715、W000/38716、W000/38717、WO00/38718、WO00/38719、WO00/38730、WO00/38665，WO00/37107和WO00/38786中公開的那些，其公開的內容在此以全文併入作為參考。抗腫瘤劑的實例包括替莫唑胺(SCHERING)、伊立替康(PFIZER)、託泊替康(GLAXOSMITHKLINE)、順柏(BRISTOLMEYERSSQUIBB;AMPHARMPARTNERS;BEDFORD;GENSIASICORPHARMS;PHARMACHEMIE)和鹽酸阿黴素(AMPHARMPARTNERS;BEDFORD;GENSIA;SICORPHARMS;PHARMACHEMIE;ADRIA;ALZA)。聯合治療方法包括使用任何希望的劑量用法給藥式i化合物和抗腫瘤劑。例如，用藥法可以取決於以下的聯合藥劑(a)給藥25-200mg/m2替莫唑胺之前，優選是100-200mg/m2替莫唑胺之前l小時，式i化合物、藥學上可接受的鹽或溶劑合物、或其混合物可以表示為式i化合物的等量的游離鹼的l-48mg/m2的量給藥，每28天，每日給藥連續5天；(b)式i化合物、藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其混合物，可以是以1-48mg/i^的量給藥，表示為式i化合物的等量的游離鹼，伊立替康給藥前1小時和24小時後。伊立替康的劑量範圍每6周，每周62-125mg/m2連續4周每3周175-350mg/m2每2周90-180mg/m2(c)託泊替康給藥前l小時，式i化合物，藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其混合物可以表示為式i化合物的等量的游離鹼的l-48mg/m'的量給藥，每21天，每日給藥連續5天。託泊替康的劑量範圍每21天，每日0.75-1.5mg/m2連續5天(d)順柏給藥前1小時，式i化合物，藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其混合物，可以表示為式i化合物的等量的游離鹼的1-48mg/m卩的量給藥，每3-4周一次或者每3-4周，每日給藥連續3-5天。順鉑的劑量範圍每3-4周，10-100mg/m2每3-4周，每日10-40mg/m2連續3-5天(e)式i化合物，藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其混合物，可以表示為式丄化合物的等量的游離鹼的l-48mg/n^的量給藥，在多柔比星給藥前1小時和24小時後。多柔比星的劑量範圍每21-28天的20-75mg/m2本發明的聯合治療方法可包括以表示為式i化合物的等量的游離鹼的1-48mg/m2的量給藥式i化合物、藥學上可接受的鹽或溶劑合物、或其混合物，以及抗腫瘤劑，例如給藥法如表l所示表ltableseeoriginaldocumentpage26tableseeoriginaldocumentpage27例如在治療未能用如表2給出的治療法治療的患者中，可以使用本發明的聯合治療方法，其包括以表示為式i化合物的等量的游離鹼的l-48mg/i^的量給藥式i化合物、藥學上可接受的鹽或溶劑合物、或其混合物，以及一種抗腫瘤劑。表2tableseeoriginaldocumentpage28tableseeoriginaldocumentpage29劑量單位是以每1112的BSA的mg表示。例如，Mosteller公式、DuBois和DuBois公式、Haycock公式、Gehan和George公式、Boyd公式是用於測量BSA(MostellerRD:SimplifiedCalculationofBodySurfaceArea./廳1987Oct22;317(17):1098;DuBoisD;DuBoisEF:Aformulatoestimatetheapproximatesurfaceareaifheightandweightbeknown,^rc//"f#ed191617:863-71;HaycockG.B.，SchwartzG.J.，WisotskyD.H.Geometricmethodformeasuringbodysurfacearea:Aheightweightformulavalidatedininfants,childrenandadults.r力e/oi/i7a/戶ed/"r/cs197893:1:62-66;GehanEA，GeorgeSL，Estimationofhumanbodysurfaceareafromheightandweight.Ca/cerC力ejiz7of力erAe/197054:225—35;BoydE，Thegrowthofthesurfaceareaofthehumanbody.Minneapolis:universityofMinnesotaPress,1935;LamTK，LeungDT:Moreonsimplifiedcalculationofbody-surfacearea.^~//層1988Apr28;318(17):1130)。抗腫瘤劑另外的實例包括抗增殖劑、激酶抑制劑、血管生成抑制劑、生長因子抑制劑、cox-I抑制劑、cox-II抑制劑、有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝物、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、放射、細胞周期抑制劑、酶類、拓樸異構酶抑制劑、生物反應修飾劑、抗體類、細胞毒素類、抗激素類、他汀類和抗雄激素類。在本發明的一個實施方案中，與本文所述的式jjt合物和藥物組合物一起使用的抗腫瘤劑是血管生成抑制、激酶抑制劑、全激酶抑制劑或生長因子抑制劑。優選的全激酶抑制劑包括SU-11248,描述於美國專利號6,573,293(Pfizer，Inc，NY，USA)中。血管生成抑制，包括但不限於以下的藥物，如EGF抑制劑、EGFR抑制劑、VEGF抑制劑、VEGFR抑制劑、TIE2抑制劑、IGF1R抑制劑、C0X-II(環氧合酶II)抑制劑、MMP-2(基質金屬蛋白酶2)抑制劑和MMP-9(基質金屬蛋白酶9)抑制劑。例如，優選的VEGF抑制劑包括Avastin(貝伐單抗)，Genentech，Inc.ofSouthSanFrancisco,California的抗-VEGF單克隆抗體。另外的VEGF抑制劑包括CP-547，632(PfizerInc.,NY，USA)、AG13736(PfizerInc.)、ZD-6474(AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、AZD-2171)、VEGFTrap(Regeneron，/Aventis)、Vatalanib(也稱為PTK-787、ZK-222584:Novartis&ScheringAG)、Macugen(pegaptaniboctasodium、NX-1838、EYE-OOl、PfizerInc./Gilead/Eyetech)、IM862(CytranInc.ofKirkland，Washington,USA);以及angiozyme，一種來自Ribozyme(Boulder,Colorado)和Chiron(Emeryville,California)及其組合的合成的核酶。用於本發明實際的VEGF抑制劑在美國專利號6，534,524和6，235，764中公開了，兩者以所有目的的全文併入。特別優選的VEGF抑制劑包括CP-547,632、AG13736、Vatalanib、Macugen及其組合。另外的VEGF抑制劑記載於，例如WO99/24440(1999年5月20日公布)、PCT國際申請PCT/IB99/00797(1999年5月3日提交)、WO95/21613(1995年8月7日公布)、WO99/61422(1999年12月2日公布)、美國專利6，534,524(公開了AG13736)、美國專利5,834,504(1998年11月10日出版)、WO98/50356(1998年11月12日公布)、美國專利5,883,113(1999年3月16日出版)、美國專利5，886，020(1999年3月23日出版)、美國專利5,792，783(1998年8月11日出版)、美國專利號US6，653，308(2003年11月25日出版)、W099/10349(1999年3月4日公布)、WO97/32856(1997年9月12日公布)、WO97/22596(1997年6月26日公布)、WO98/54093(1998年12月3日公布)、WO98/02438(1998年1月22日公布)、WO99/16755(1999年4月8日公布)和WO98/02437(1998年1月22日公布)，所有這些在此以全文併入作為參考。可與本發明的化合物一起使用其他的抗增殖劑包括酶法呢基蛋白質轉移酶的抑制劑和受體酪氨酸激酶PDGFr的抑制劑，包括在以下美國專利申請中公開和要求的化合物09/221946(1998年12月28日提交)、09/454058(1999年12月2日提交)、09/501163(2000年2月9日提交)、09/539930(2000年3月31日提交)、09/202796(1997年5月22日提交)、09/384339(1999年8月26日提交)和09/383755(1999年8月26日提交)，以及在以下美國臨時專利申請中公開和要求的化合物60/168207(1999年11月30日提交)、60/170119(1999年12月10日提交)、60/177718(2000年1月21日提交)、60/168217(1999年11月30日提交)和60/200834(2000年5月1日提交)。每個上述的專利申請和臨時專利申請是以全文併入作為參考。PDGRr抑制劑包括但不限於2001年7月7日公布的國際專利申請號WO01/40217和2004年3月11日公布的國際專利申請號WO2004/020431中公開的那些，其內容根據所有目的以全文併入。優選的PDGFr抑制劑包括輝瑞的CP-673,451和CP-868，596及其藥學上可接受的鹽。優選的GARF抑制劑包括輝瑞的AG-2037(pelitrexol)及其藥學上可接受的鹽。本發明實踐中所用的GARF抑制劑是公開在美國專利號5，608，082中，其根據所有目的以全文併入。可以與本文描述的式L化合物和藥物組合物一起使用的有用的COX-II抑制劑的實例包括CELEBREX(塞來考昔)、帕瑞考昔、地拉考昔、ABT-963、MK-663(艾託考昔)、C0X-189(羅非昔布)、BMS347070、RS57067、NS-398、Bextra(伐地考昔)、paracoxib、Vioxx(羅非考昔)、SD-8381、4-曱基-2-(3，4-二甲苯基)-l-(4-氨磺醯基-苯基)-lH-吡咯、2-(4-乙氧基苯基)-4-甲基-l-(4-氨磺醯基苯基)-IH-耽咯、T-614、JTE-522、S-2474、SVT-2016、CT-3、SC-58125和Arcoxia(艾託考昔)。另外地，COX-II抑制劑公開在美國專利申請號10/801,446和10/801,429,其內容根據所有目的以全文併入。在一個優選的實施方案中，抗腫癍劑是如美國專利號5,466,823中公開的塞來考昔，其內容根據所有目的以全文併入作為參考。塞來考昔的結構是如T所示在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是如美國專利號5,633,272中公開的伐地考昔，其內容根據所有目的以全文併入作為參考。伐地考昔的結構是如下所示formulaseeoriginaldocumentpage32在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是如美國專利號5,932,598中公開的帕瑞考昔，其內容根據所有目的以全文併入作為參考。帕瑞考昔的結構是如下所示C-2931.在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是如美國專利號5,521,207中公開的地拉考昔，其內容根據所有目的以全文併入作為參考。地拉考昔的結構是如下所示在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是如美國專利號6,034,256中公開的SD-8381，其內容根據所有目的以全文併入作為參考。SD-8381的結構是如下所示o在一個優選的實施方案中，抗胂瘤劑是如國際公布號WO2002/24719中公開的ABT-963,其內容根據所有目的以全文併入作為參考。ABT-963的結構是如下所示formulaseeoriginaldocumentpage34在一個優選的實施方案中H3C、抗肺瘤劑是如下所示的羅非考昔:formulaseeoriginaldocumentpage34在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是如國際公布號wo1998/03484中公開的MK-663(艾託考昔)，其內容根據所有目的以全文併入作為參考。艾託考昔的結構是如下所示MK-663etoricoxibCASNO.202409-33-4WO98/03484SC-86218在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是如國際公布號wo1999/11605中公開的COX-189(Lumiracoxib),其內容根據所有目的以全文併入作為參考。Lumiracoxib的結構是々口下所示formulaseeoriginaldocumentpage34在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是如美國專利號6，180，651中公開的BMS-347070,其內容根據所有目的以全文併入作為參考。BMS-347070的結構是如下所示S02CH:BMS347070CASNo.197438-48-56,180,651在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是NS-398(CAS123653-11-2)。NS-398(CAS123653-11-2)的結構是如下所示:O，NNS-398CASNo.123653—11-2在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是RS57067(CAS17932-91-3)。RS-57067(CAS17932-91-3)的結構是如下所示:RS57067CASNo.17932-91-:在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是4-曱基-2-(3，4-基)-1-(4-氨磺醯基-苯基)-lH-吡咯。4-甲基-2-(3，4-基)-l-(4-氨磺醯基-苯基)-lH-吡咯的結構是如下所示二甲苯二曱苯formulaseeoriginaldocumentpage35在一個優選的實施方案中，抗腫瘤劑是2-(4-乙氧基苯基)-4-甲基-1-(4-氨磺醯基苯基)-lH-吡咯。2-(4-乙氧基苯基)-4-曱基-1-(4-氨磺醯基苯基)-lH-吡咯的結構是如下所示C2H50SO,NH，在一個優選的實施方案中，抗肺瘤劑是美洛昔康。美洛昔康的結構是如下所示formulaseeoriginaldocumentpage36作為抗肺瘤劑與本文描述的式1化合物和藥物組合物一起使用的I和II)致使前列腺素水平更低的非甾體類抗炎藥(NSAIDs)，包括但不限於以下雙水楊酯(Amigesic)、二氟尼柳(Dolobid)、布洛芬(Motrin)、酮洛芬(Orudis)、萘丁美酮(Relafen)、吡羅昔康(Feldene)、萘普生(Aleve、Naprosyn),雙氯芬酸(Voltaren)、丐l咮美辛(Indocin)、舒林酸(CIinori1)、託美丁(Tolectin)、依託度酸(Lodine)、酮咯酸(Toradol)、奧沙普秦(Daypro)及其組合。優選的COX-I抑制劑包括布洛芬(Motrin)、磺胺二甲噁唑、萘普生(Aleve)、p引哚美辛(Indocin)、萘丁美酮(Relafen)及其組合。與本文記載的式1化合物和藥物組合物一起使用的靶向劑包括EGFr抑制劑如Iressa(gefitinib，AstraZeneca)、Tarceva(erlotinib或OSI-774、OSIPharmaceuticalsInc.)、Erbitux(cetuximab，ImclonePharmaceuticals,Inc.)、EMD-7200(MerckAG)、ABX-EGF(AmgenInc.和AbgenixInc.)、HR3(CubanGovernment)、IgA抗體類(UniversityofErlangen-Nuremberg)、TP-38(IVAX)、EGFR融合蛋白、EGF-疫苗、抗-EGFr免疫脂質體(HermesBiosciencesInc.)及其組合。優選的EGFr抑制劑包括Iressa、Erbitux、Tarceva及其組合。本發明還涉及選自panerb受體抑制劑或ErbB2受體抑制劑的抗腫瘤劑，如CP-724,714(Pfizer，Inc.)、CI-1033(canertinib，Pfizer、Inc.)、赫賽汀(trastuzumab，GenentechInc.)、Omitarg(2C4pertuz畫b,Ge歸techInc.)、TAK-165(Takeda)、GW-572016(lonafarnib，GlaxoSmithKline)、GW-282974(GlaxoSmithKline)、EKB-569(Wyeth)、PKI-166(Novartis)、dHER2(HER2Vaccine,Corixa和GlaxoSmithKline)、APC8024(HER2Vaccine,Dendreon)、抗-HER2/neu雙特異性抗體(DecofCancerCenter)、B7.her2.IgG3(Agensys)、ASHER2(ResearchInstituteforRadBiology&Medicine)、三功能性的雙特異性抗體(UniversityofMunich)和mABAR-209(AronexPharmaceuticalsInc)和mAB2B-1(Chiron)及其組合。優選的erb選擇性抗腫瘤刑包括赫賽汀、TAK-165、CP-724,714、ABX-EGF、HER3及其組合。優選的panerbb受體抑制劑包括GW572016、CI-1033、EKB-569和Omitarg及其組合。另外的erbB2抑制劑包括W098/02434(1998年1月22日公布)、WO99/35146(1999年7月15日公布)、W099/35132(1999年7月15日公布)、W098/02437(1998年1月22日公布)、W097/13760(1997年4月17日公布)、W095/19970(1995年7月27日公布)、美國專利5，587，458(1996年12月24日出版)和美國專利5，877，305(1999年3月2日出版)中描述的那些，其各自在此以全文併入作為參考。本發明中有用的ErbB2受體抑制劑還描述在美國專利號6，465，449和6,284,764，及國際申請號W02001/98277中，其各自在此以全文併入作為參考。此外，其他的抗腫瘤劑可以是選自以下的藥物，BAY-43-9006(OnyxPharmaceuticalsInc.)、Genasense(augmerosen，Genta)、Panitumumab(Abgenix/Amgen)、Zevalin(Schering)、Bexxar(Corixa/GlaxoSmithKline)、阿巴瑞克、Alimta、EP0906(Novartis)、discodermolide(XAA-296)、ABT-510(Abbott)、新伐司他(Aeterna)、enzastaurin(EliLilly)、CombrestatinA4P(0xigene)、ZD-6126(AstraZeneca)、flavopiridol(Aventis)、CYC-202(Cyclacel)、AVE-8062(Aventis)、DMXAA(Roche/Antisoma)、Thymitaq(Eximias)、Temodar(替莫哇胺、ScheringPlough)和Revilimd(Celegene)及其組合。其他的抗腫瘤劑可以選自以下的藥物，CyPat(醋酸環丙氯地孕酮)、Histerelin(醋酸組氨瑞林)、Plenaixis(阿巴瑞克己酸羥孕酮)、阿曲生坦(ABT-627)、沙鉑(JM-216)、thalomid(沙利度胺)、癌疫苗、Temilifene(DPPE)、ABI-007(紫杉醇)、Evista(雷洛昔芬)、阿他美坦(Biomed-777)、Xyotax(polyglutamate紫杉醇)、Targetin(bexarotine)及其組合。此外，其他的抗肺瘤劑可以選自以下的藥物，Trizaone(替拉扎明)、Aposyn(依昔舒林)、Nevastat(AE-941)、Ceplene(二鹽酸組胺)、0rathecin(盧比替康)、維魯利秦、Gastri咖une(G17DT)、DX-8951f(甲磺酸依沙替康)、0nconase(豹蛙酶)、BEC2(米妥莫單抗)、Xcytrin(莫特沙芬釓)及其組合。進一步的抗腫瘤劑可以選自以下的藥物，CeaVac(CEA)、三甲曲沙(葡萄糖醛酸三甲曲)及其組合。另外的抗腫瘤劑可以選自以下的藥物，0vaRex(oregovomab)、0sidem(IDM-l)及其組合。另外的抗肺瘤劑可以選自以下的藥物，Advexin(ING201)、Tirazone(替拉扎明)及其組合。另外的抗肺瘤劑可以選自以下的藥物，RSR13(efaproxiral)、Cotara(1311chTNT1/b)、NBI-3001(IL-4)及其組合。另外的抗腫瘤劑可以選自以下的藥物，Canvaxin、GMK疫苗、PEGInteronA、Taxoprexin(DHA/paci1taxel)及其組合。其他優選的抗腫瘤劑包括Pfizer，sMEK1/2抑制劑PD325901、ArrayBiopharm，sMEK抑制劑ARRY-142886、BristolMyers，CDK2抑制劑BMS-387,032、Pfizer，sCDK抑制劑PD0332991和AstraZeneca，sAXD-5438及其組合。另外地，還可以利用mTOR抑制劑如CCI-779(Wyeth)和雷怕黴素矛汙生物RAD001(Novartis)和AP-23573(Ariad)、HDAC抑制劑SAHA(MerckInc./AtonPharmaceuticals)及其組合。另外的抗腫瘤劑包括aurora2抑制劑VX-680(Vertex)、Chkl/2抑制劑XL844(Exilixis)。以下細胞毒素劑，例如一個或多個選自表柔比星(Ellence)、多西紫杉醇(Taxotere)、紫杉醇、右雷佐生(右丙亞胺)、利妥昔單抗(Rituxan)、甲磺酸伊馬替尼(Gleevec)及其組合，可以與本文描述的式1化合物和藥物組合物一起使用。本發明還關注本發明的化合物和激素治療的一起使用，包括但不限於，依西美坦(Aromasin,PfizerInc.)、亮丙瑞林(Lupron或Leuplin，TAP/Abbott/Takeda)、阿那曲峻(Arimidex，Astrazeneca)、gosrelin(Zoladex，AstraZeneca)、度骨化醇、法倔唑、福美坦、檸檬酸他莫昔芬(tamoxifen、Nolvadex、AstraZeneca)、康士得(AstraZeneca)、阿巴瑞克(Praecis)、Trelstar及其組合。本發明還涉及激素治療劑如抗雌激素類，包括但不限於氟維司群、託瑞米芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、來曲唑(Femara、Novartis),抗雄激素類如比卡魯胺、氟他胺、米非司酮、尼魯米特、康士得⑧(4'-氰基-3-(4-氟苯基磺醯)-2-羥基-2-甲基-3'-(三氟甲基)propio磁ilide、比卡魯胺)及其組合。進一步，本發明提供本發明的化合物單獨或連同一種或多種支持性醫護品，例如選自非格司亭(Neupogen)、昂丹司瓊(Zofran)、法安明、重組人類紅細胞生成素ot(Procrit)、Aloxi、Emend或其組合的產品。特別優選的細胞毒素劑包括鹽酸伊立替康的山梨醇注射劑(Camptosar)、Erbitux、Iressa、Gleevec、泰索帝及其組合。以下的拓樸異構酶I抑制劑可用作抗腫瘤劑，喜樹鹼、伊立替康HC1(Camptosar)、edotecarin、orathecin(Supergen)、依沙替康(Daiichi)、BN-80915(Roche)及其組合。優選的拓樸異構酶II抑制劑包括表柔比星(Ellence)。本發明的化合物可以和抗腫瘤劑、烷化劑、抗代謝物、抗生素、植物衍生的抗肺瘤劑、喜樹鹼衍生物、酪氨酸激酶抑制劑、抗體類、幹擾素類和/或生物反應修飾劑一起使用。烷化劑，包括但不限於氮芥N-氧化物、環磷醯胺、異環磷醯胺、美法侖、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫峻胺、AMD-473、六甲蜜胺、AP-5280、apaziquone、brostallicin、苯達莫司汀、卡莫司汀、雌莫司汀、福莫司汀、葡磷醯胺、異環磷醯胺、KW-2170、馬磷醯胺和二溴衛矛醇；鉑協調的烷化化合物，包括但不限於順鉑、伯爾定(carboplatin)、依他鉑、洛鉑、奈達鉑、樂沙定(奧沙利鉑、Sanofi)或satrplatin及其組合。特別優選的烷化劑包括樂沙定(奧沙利鉑)。抗代謝物，包括但不限於甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤肌苷、巰嘌呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)單獨或聯合亞葉酸、替加氟、UFT、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷ocfosfate、依諾他濱、S-l、Alimta(培美曲塞二鈉、LY231514、MTA)、健擇(吉西他濱、EliLilly)、氟達拉濱、5-氮雜胞苷、卡培他濱、克拉屈濱、氯苯吩噪、地西他濱、依洛尼塞、ethynylcytidine、阿糖胞苷、羥基脲、TS-1、美法侖、奈拉濱、諾拉曲塞、ocfosfate、培美曲塞二鈉、噴司他丁、pelitrexol、雷替曲塞、triapine、三甲曲沙、阿糖腺苷、長春新鹼、長春瑞濱；或者例如，歐洲專利申請號239362中公開優選的抗代謝物之一，如N-(5-[N-(3，4-二氫-2-曱基-4-氧喹唑啉-6-基曱基)-N-曱氨基]-2-噻吩甲醯)-L-穀氨酸及其組合。抗體包括嵌入抗生素，但不限於阿柔比星、放線菌素D、氨柔比星、阿米替林、阿黴素、博來黴素、柔紅黴素、多柔比星、依沙蘆星、表柔比星、加柔比星、伊達比星、絲裂黴素c、奈莫柔比星、新制癌菌素、培洛黴素、p比柔比星、rebeccamycin、stimalamer、鏈佐星、戊柔比星、淨司他丁及其組合。植物衍生的抗腫瘤物質包括，例如，選自有絲分裂抑制劑例如長春鹼、多西紫杉醇(泰索帝)、紫杉醇及其組合的那些。細胞毒素的拓樸異構酶抑制劑包括選自的aclarubicn、氨萘非特、belotecan、喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、9-氨基喜樹鹼、diflomotecan、伊立替康HC1(Camptosar)、edotecarin、表柔比星(Ellence)、依託泊苷、依沙替康、gimatecan、勒託替康、米託蒽醌、吡柔比星、pixantrone、盧比替康、索布佐生、SN-38、tafluposide、託泊替康及其組合一種或多種藥物。優選的細胞毒素的拓樸異構酶抑制劑包括選自的喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、9-氨基喜樹鹼、伊立替康HC1(Camptosar)、edotecarin、表柔比星(Ellence)、依託泊苷、SN-38、託泊替康及其組合的一種或多種藥物。免疫劑類幹擾素類和多種其他的免疫增強劑。幹擾素類包括幹擾素ot、幹擾素ct-2a、幹擾素ot-2b、幹擾素P、幹擾素y-la、幹擾素Y-lb(AcU咖une)或幹擾素Y-nl及其組合.其他的藥包括非格司亭、蘑菇多糖、裂襉多糖、TheraCys、烏苯美司、WF-IO、阿地白介素、阿侖單抗、BAM-002、達卡巴漆、達珠單抗、地尼白介素、吉姆單抗奧佐米星、ibritumomab、咪壹莫特、來格司亭、香菇多糖、黑色素瘤疫苗(Corixa)、莫拉司亭、0ncoVAX-CL、沙格司亭、他索納明、替克洛佔、胸腺法新、託西莫單抗、維魯利秦、Z-IOO、依帕珠單抗、米妥莫單抗、oregovomab、pemtumomab(Y-mu,Gl)、Provenge(Dendreon)及其組合。生物反應修飾劑是修飾活的有機體防禦機制或生物應答如存活、生長，或者分化組織細胞使其具有抗腫瘤活性的藥物。這樣的藥物包括雲芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、溶鏈菌、烏苯美司及其組合。其他的抗腫瘤劑包括阿利維A酸、聚肌胞、阿曲生坦、貝沙羅汀、bortezomib、波生坦、骨化三醇、依昔舒林、非那雄胺、福莫司汀、伊班膦酸、米替福新、米託蒽醌、I-門冬醯胺酶、丙卡巴肼、達卡巴漆、羥基脲、培門冬酶、噴司他丁、tazarotne、Telcyta(TLK-286，Teliklnc.)、Velcade(bortemazib、Millenium)、維A酸及其組合。其他的抗生血管的化合物包括阿昔曲丁、芬維A胺、沙利度胺、唑來膦酸、血管他丁、aplidine、cilengtide、考布他汀A-4、內皮他丁、卣夫酮、rebimastat、removab、Revlimid、角簠胺、ukrain、Vitaxin及其組合。鉑協調的化合物，包括但不限於順鉑、卡鉑、奈達鉑、奧沙利鉑及其組合。喜樹鹼衍生物包括但不限於喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、9-氨基喜樹鹼、伊立替康、SN-38、edotecarin、託泊替康及其糹且合。其他抗腫瘤劑包括米託蒽醌、I-門冬醯胺酶、丙卡巴肼、達卡巴*、羥基脲、噴司他丁、維A酸及其組合。還可以利用能夠增強抗胂癍免疫應答的抗腫瘤劑如CTLA4(細胞毒素淋巴細胞抗原4)抗體類，和能夠阻止CTLA4其他的藥物如MDX-010(Medarex)和CTLA4化合物，公開於美國專利號6，682，736;還有抗增值劑如其他法呢基蛋白轉移酶抑制劑，例如法呢基蛋白轉移酶抑制劑。此外，可以用於本發明的特別的CTLA4抗體包括美國臨時申請60/113,647(1998年12月23日提交)、美國專利號6、682,736中描述的那些，兩者在此以全文併入作為參考。可用於本發明的特別的IGF1R抗體包括國際專利申請號W02002/053596中描述的那些，其在此以全文併入作為參考。可用於本發明的特別的CD40抗體類包括國際專利申請號W02003/040170中描述的那些，其在此以全文併入作為參考。基因治療劑也可以用作抗腫瘤劑，如TNFerade(GeneVec)，其在對放射治療的應答中表達TNFa。本發明的一個實施方案中，他汀類藥物可以與式1化合物和藥物組合物一起使用。他汀類(HMG-CoA還原酶抑制劑)可選自阿託伐他汀(Lipitor，PfizerInc.)、普伐他汀(Pravachol，Bristo卜MyersSquibb)、洛伐他汀(Mevacor，MerckInc.)、辛伐他汀(Zocor，MerckInc.)、氟伐他汀(Lescol，Novartis)、西立伐他汀(Baycol，Bayer)、羅蘇伐他汀(Crestor，AstraZeneca)、洛伐他汀和煙酸(Advicor，KosPharmaceutica1s)及其衍生物和組合。在一個優選的實施方案中，他汀藥物選自Atovorstatin和洛伐他汀，及其衍生物和組合。其他用作抗腫瘤劑的藥包括Caduet。所述方法包括使用任何期望的劑量用法給藥式i化合物。在一個特定的實施方案中，儘管或多或少次數的給藥是在本發明的保護範圍內，該化合物是每日給藥一次。式i化合物可以按照與其聯合給藥的細胞毒素相同的時間表給藥。在細胞毒素劑的半衰期長(即，>10小時)的情況下，考慮在細胞毒素劑給藥後的當天也單獨給藥式i化合物。式丄化合物可以給予哺乳動物包括人，優選通過30分鐘內的靜脈注射。在本發明的另一個實施方案中，式i化合物是用作增強放射治療的效力的輻射敏化劑。根據本發明，式i化合物可以與任何種類的放射治療聯合使用，所述放射治療包括外線束放射治療(XBRT)或遠程放射治療、近程放射治療或密封源的放射治療、未密封源的放射治療和放射免疫療法。根據本發明，為了使臨床上的腫瘤應答到最大值，通常每日給予2-4Gy的部分至50-60Gy的總劑量的放射。本領域的普通技術人員應當理解，根據疾病位點以及給予放射是否是用於治癒的目的或作為姑息治療，精確的實驗設計將是不同的。例如，關於不同種類的放射治療的進一步的信息可以在"AbsorbedDoseDeterminationinExternalBeamRadiotherapy"InternationalAtomicEnergyAgency,Vienna,2000，TechnicalReportsSeriesNo.398j"PrinciplesandPracticeofBrachytherapy:UsingAfterloadingSystems,"Joslin等人.(Eds.)，ArnoldPublishers,第l版，2001;"ProtonTherapyandRadiosurgery,，，Smit等人.(Eds.)，Springer-VerlagTelos，第l版，2000;Greig等人."Treatmentwithunsealedradioisotopes,"化艦""""1973，29(1):63-68;"RadioimmunotherapyofCancer,"Abrams等人.(Eds.)，MarcelDekker，第1版，2000中找到。美國專利號6，649，645教導了放射和環氧合酶-2抑制劑用於治療瘤形成病症的聯合療法。在本發明的另一個實施方案中，式丄化合物用在與放射治療和至少一種抗腫瘤劑的組合中。在本發明的另一個實施方案中，式i化合物用在與放射治療和至少一種輻射增強劑如生長因子受體拮抗劑的組合中。本發明的方法和組合物提供了一種或多種益處。本發明的式i化合物與化療或放療的聯合可以低劑量給藥，即是，以低於臨床情況下常規使用的各個組分單獨給藥的劑量。降低給予哺乳動物的本發明的化療或放療的劑量的益處包括降低同較高給藥量有關的不良作用的發生率。通過降低不良作用的發生率，預計改善經歷癌症治療的患者的生活質量，降低不良作用發生率的進一步的益處包括患者順應性的改進，治療不良作用所需的住院數的減少。選擇性地，本發明的方法和組合物還可以使較高劑量時的療效達到最大。實施例以下提供的實施例和製劑進一步說明和例證了本發明的組合、劑型和方法。應當理解的是本發明的保護範圍在任何情況下不限於以下實施例的範圍。材料除非另外指出，所有化學試劑是從Sigma(Poole,Dorset,UK)購得。Dulbecco，s磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)是從Gibco(Paisley,UK)獲得，蔗糖、氫氧化鈉和氯化鉀是由BDH(Lutterworth,UK)提供，而毛地黃鬼苦是由BoehringerMannheim(RocheDiagnostics，Lewes，UK)提供。BCA蛋白含量測定試齊寸盒(Pierce,PerbioScience,Rockford，IL，USA)是用於蛋白質濃度測定。奶粉是從MarvelPremierBrandsUKLtd(Spalding,UK)購得，而ECL蛋白質印跡檢測試劑盒是從Amersham(LittleChalfont，UK)購得。Nycomed淋巴細胞分離劑是從Axis-Shield(Oslo,Norway)購得，而EDTA血採集導管是從BDVacutainer(Plymouth,UK)購得。10H小鼠單克隆原發抗體是由教授AlexanderBtirkle充足供應，而山羊抗小鼠二級抗體(HRP-結合的)是從DAKO(Ely,UK)購得。用於刺激PARP活性的寡核苷酸最初是由DrJUmec(NorthernInstituteforCancerResearch,Newcastle)合成，以後的供應是從Invitrogen(Glasgow,UK)獲得。純化的聚(ADP核糖)(PAR)聚合物是從BIOMOLResearchLab(Plymouth,PA，USA)購得。SW620和L1210(質量控制)細胞的組織培養細胞維持在添加10%(v/v)的胎牛血清(Invitrogen)和1U/ml的青黴素-鏈黴素溶液(Sigma)的RPMI1640培養基(Sigma)中，所述培養基是在保持在37X:的增溼的含5%0)2的空氣的氣氛的Hereus培養箱(FischerScientific,Manchester,UK)中。使用的L1210細胞是從ATCC(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,VA)獲得，在收穫時生長成約6x107ml密度的懸浮液，以確保指數生長。用作質量控制樣品的lxlO6細胞的等分部分再懸浮於1ml的添加10%(v/v)DMSO和10y。(v/v)胎牛血清的培養基中並在-80TC下冷凍。腫瘤異種移植樣本的製備腫瘤離體，在液氮中快速冷凍，在-80'C下儲存，直至勻漿化用於分析。樣品在水上解凍，記錄下溼重。組織在3體積(即，lmg加上3等滲緩沖液-7mMHepes、26mMKCl、0.1mM葡聚糖、Q.4mMEGTA、0.5mMMgCl2、45rnM蔗糖，pH7.8)使用Pro2000i殳備(ProScientificInc，Monroe,CT，USA)來勻漿化，獲得總稀釋度為四分之一的勻漿。貫穿此過程，保持勻漿就緒，在10秒鐘內突發完成勻漿化以防止樣品的過度的受熱。測定之前，用等滲緩沖液進一步稀釋樣品，其中["P]NAD結合測定需要獲得四十分之一的最終稀釋度，或者免疫印跡測定需要獲得千分之一的最終稀釋度。PBL和胂瘤樣品的製備全部的血液收集在EDTAvacutainer中，根據生產說明書通過淋巴製備獲得人PBLs。從手術室採集的腫瘤活組織檢查放入無菌容器並立即放置冰上。在30分鐘內，腫瘤樣品在液氮中快速冷凍並在-8(TC下儲藏，直至經過勻漿化用於分析。樣品在冰上解凍，記錄下溼重。重量超過100mg的組織在3體積(即，1mg加上3jil等滲緩衝液-7mMHepes、26mMKCl、0.1mM葡聚糖、0.4mMEGTA、0.5mMMgCl2、45mM蔗糖，pH7.8)使用Pro2000設備(ProScientificInc，Monroe,CT，USA)來勻漿化，獲得總稀釋度為四分之一的勻漿。當獲得較少的樣品時，稀釋成99或999體積時勻漿化，分別獲得百分之一和千分之一的總稀釋度。貫穿此過程，保持勻漿就緒，在10秒鐘內突發完成勻漿化以防止樣品的過度的受熱。除非樣品在勻漿化的當天進行測定，樣品再冷凍至-80X:並在此溫度下儲藏直到分析。測定之前，樣品用用等滲緩沖液進一步稀釋，這裡需要得到千分之一的最終稀釋度。使用["P]NAD摻合的PARP測定如在CalabreseCR，AlmassyR，BartonS，BateyMA，CalvertAH,Ca訓-KochS，DurkaczBW,HostomskyZ,K卿fRA，KyleS，LiJ，MaegleyK，NewellDR，NorthM，NotarianniE，StratfordIJ，SkalitzkyD，ThomasHD，WangL-Z，WebberSE，WilliamsKJ和CurtinNJ.Preclinicalevaluationofanovelpoly(ADP-ribose)polymerase-l(PARP-l)inhibitor,AG14361,withsignificantanticancerchemo-andradio-sensitizationactivity./#679656-67(2004)以及BowmanKJ，NewellDR，CalvertAH和CurtinNJ.Differentialeffectsofthepoly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitorNU1025ontopoisomeraseIandIIinhibitorcytotoxicity.Ar./Ca/7cer84106-112(2001).basedonpreviouslypublishedmethods(HalldorssonH.，GrayD.A.，和ShallS.(1978).poly(ADP-ribose)polymeraseactivityinnucleotidepermeablecells.瑯"eHe"85:349-352，Grube，K.，Kiipper，J.H.&Btirkle，A.Directstimulationofpoly(ADP-ribose)polymeraseinpermeabilisedcellsbydouble—strandedDNAoligomers.Anal.Biochemistry.1991;193:236-239)中描述的。PARP抑制是在用外加的12-mer平端的DNA雙鏈寡核苷酸(2.5pg/ml)刺激的毛地黃皂苷(0.15mg/ml)-滲透的細胞(8x105-lxlO6/反應)中，通過測量75NAD++[32P]NAD+(Amersham)的抑制來測定，在25'C孵育的6分鐘內摻入細胞大分子再用如先前所述的水冷的10%TCA、10%NaPPi(w/v)沉澱。簡言之，細胞以1.5x107ml懸浮於低滲的緩沖劑(9mMHEPESpH7.8，4.5%(v/v)葡聚糖，4.5mMMgCl2和5mMDTT)中30分鐘就緒，然而加入9體積的等滲緩衝液(40mMHEPESpH7.8、130mMKCl、4%(v/v)葡聚糖、2mMEGTA、2.3mMMgCl2、225mM蔗糖和2.5mMDTT)。把300pi的細胞加入至100pi的300nM的含[3屮]-^0+(Amersham,UK)的NAD+中開始反應，加入2ml水冷的10%(w/v)TCA+10%(w/v)焦磷酸鈉終止。30分鐘之後，沉澱的"P-標記的ADP-核糖聚合物用過WhatmanGC/C濾器(WhatmanInternationalLtd,Kent,UK)過濾，用1%(v/v)TCA/1%(v/v)焦磷酸鈉洗5次，乾燥並計數。PARP抑制的ICs。值是通過計算機-擬合的曲線計算(GraphPadSoftware,Inc.,SanDiego,CA)。以相似的方法測定肺瘤的勻漿；然而，勻漿化使足夠的DNA損傷經歷最高刺激的PARP活性，因此不需要寡核苷酸。結果是以皮摩爾PARformer/mg腫瘤的方式表達。PARP測定使用單克隆抗體如在Plu咖erER，MiddletonMR,JonesC,OlsenA，HicksonI，McHughP，MargisonG,McGownG，ThorncroftM，WatsonAJ，BoddyAV，CalvertAH，HarrisAL，NewellDR，CurtinNJ.Temozolomidepharmacodynamicsinpatientswithmetastaticmelanoma:DNAdamageandactivityofrepairenzymesATaseandPARP-l.C72./72'ca/Ca"ceriesearc力.113術一3409(2005)basedonmodificationofpreviouslypublishedmethods(PfiefferR，BrabeckC，BurkleA:Quantitativenonisotopici邁muno-dot-blotmethodfortheassessmentofcellularpoly(ADP-ribosyl)ationcapacity."/ocAe邊/"iT1999;275:118-122)中描述的。培養的細胞或快速解凍的淋巴細胞製品在冰冷的PBS中洗兩次。細胞的片狀沉澱再懸浮於0.15mg/ml的毛地黃急苷中至約1-2x106個細胞/ml的密度5分鐘來滲透細胞，接著加入9體積的水冷的緩沖液(7mMHEPES、26mMKC1、0.1mM葡聚糖、0.4mMEGTA、0.5mMMgCh、45mM蔗糖，pH7.8)，樣品放置就緒。計數滲透的(即，錐蟲藍染色的)細胞密度，如果需要用上述的緩衝液稀釋細胞懸浮液獲得使每個反應管中加入20，000個滲透的細胞的細胞密度。在含量測定中，最大刺激的PARP活性是通過在261C的擺動的水浴下暴露於存在NAD+底物[25]的平端的寡核苷酸中測量的。5^1的7mMMD+和5pi的200jig/ml的palindromic寡核苷酸(CGGAATTCCG)與滲透的細胞混合，加入反應緩衝液(100mMTrisHCl、120mMMgCl2，pH7.8)至100jil的最終體積。加入過量的PARP抑制劑(400jal的12.5nM的化合物1)6分鐘後停止反應，使用24-孔的多支管把細胞沾在硝酸纖維素膜(HybondN，Amersham)上。純化的PAR標準曲線加載於各個膜(0-25pmol單體當量)使定量化。在41C下用原發抗體(1/500的PBS-MT(PBS+0.05%Tween20+5%奶粉)整夜的培養，接著用PBS-T(PBS+0.051Tween20)洗2次，然後在室溫下在二級抗體(1/1000的PBS-MT)中培養1小時。培養的膜在1小時的時間內用PBS頻繁地洗，再暴露於生產商提供的ECL反應溶液1分鐘。在5分鐘暴露內檢出的化學發光是使用FujiLAS3000UVIlluminator(Raytek，Sheffield,UK)測量並使用成像軟體(FujiLAS成像版本l.1，Raytek)數位化。獲得的圖象是使用Aida圖象分析家(版本3.28.001)分析，結果以LAU/mi^表達。測量曝光汙點上的三個背景區域，從所有結果中扣除背景信號的平均值。PAR聚合物標準曲線是使用結合非線性的回歸模型的無關緊要的一個位點和偏離標準曲線產生的未知讀數來分析。相對於裝載的細胞數然後表示結果。5000L的1210細胞的三份QC樣品採用各個分析，從一個患者得到的所有樣品以相同汙點進行分析。腫瘤勻漿是以類似的方式分析；然而，把足夠的DM損傷引入至最大的刺激PARP活性和寡核普酸的勻漿化過程因此是不需要的。勻漿的蛋白質濃度是使用BCA蛋白分析和TitertekMultiscanMCC/340平板讀數器測量的。結果可以pmolPARformer/mg蛋白質或mg腫瘤的方式表達。在外周血單核細胞(PBMCs)中的的PARP活性分析是以Boulton等人("Potentiationoftemozolomide-inducedcytotoxicity:acomparativestudyofthebiologicaleffectsof聚(ADP-核糖)polymeraseinhibitors."1995.At7〃sA/.Ca/7cer72，849-856)的方法為基礎的。所有過程是在o-4x:下進行。PBMC，s的製備1、採集5ml的血液在LithiumHeparin管中並輕輕地混合。2、在30ml的用完即扔掉的通用管中用PBS稀釋肝素化的血液1:l(終體積10ml)。3、小心地分層30ml的用完扔掉的通用管中的8-10ml預冷凍的淋巴細胞分離劑上的稀釋的血液。務必不要使血液與分離的液體混合。4、在41C下的800xG的轉位式旋轉器(Mistralcentrifuge)中離心分離樣品15分鐘，制動率為0。5、離心分離之後，在界面上應當看到白細胞帶。這個細胞帶應當用玻璃的巴斯德吸管收集並放入30ml的用完扔掉的通用管中。6、用20ml的冰冷PBS稀釋淋巴細胞懸浮液，再在4C、500xG下離心分離細胞10分鐘。7、除去上清夜。8、在20ml的水冷PBS中再懸浮片狀沉澱，在333xG/4C下離心分離5分鐘。9、除去上清夜並再把細胞懸浮於添加10%DMSO的500jul的預冷凍的培養基(RPMI+10%胎牛血清)中。10、轉入貼上標籤的螺旋蓋的埃彭道夫管並冷凍。11、在-701C下儲藏。PBMC，s的PARP測定1、在進行上述實驗的當天新鮮製得32P600iaM的NAD溶液。寡核苷酸原液從儲臧中取出並解凍。2、浴加熱至26n，在70振蕩/分下開始攪動。3、反應試驗管如下調製。tableseeoriginaldocumentpage504、各個PBMC樣品和QC標準品分成三份進行分析，用T0、+oligo和-oligo樣品x3。(每個樣品共9隻管)。5、計算各個懸浮液中的細胞密度。各個細胞懸浮液的10jLil的樣品用錐蟲藍稀釋至l:l，用血球細胞計數器計數每ml的滲透的細胞。6、反應試管和滲透的細胞懸浮液在水浴中加熱至26"持續7分鐘。7、滲透的細胞懸浮液短暫地渦旋，將其300pi(約lxl(T細胞)加入各個反應管中開始反應。8、加入2ml的冰冷的10%TCA+10%NaPPi並渦旋正好在加入細胞後6分鐘停止反應。9、過濾之前，試管於水上孵育至少1小時(在測定的這個階段，沉澱必須存在至少1小時，如果溫度維持在《4。C反應管可以留存整夜)。10、加入滲透的細胞之前，2ml冰冷的10%TCA+10%NaPPi加入T0管，用於校正放射標記對濾器的非特異性結合。腫瘤/組織樣品的製備1、稱重冷凍的腫瘤樣品。2、加上DTT的3體積(即，每1mg組織加入3m1溶液)的等滲緩衝液加入到腫瘤樣品中。其儲藏於冰上，直到和勻漿化的時候。3、樣品於冰上在II號箱裡IO秒鐘快速勻漿化，直至看不到可發覺的組織的肉眼可見部分。4、足量的勻漿用等滲緩沖液+DTT稀釋成十分之一，提供原始樣品的1/40的總稀釋度。3ml的最後量是足以分成三份樣品，接著進行蛋白含量測定。5、稀釋的勻漿儲藏於冰上，如下l小時內進行分析。腫瘤/組織樣品的PARP測定1、在進行上述實驗的當天新鮮製得"P600jliM的NAD溶液。寡核苷酸原液從儲藏中取出並解漆。2、水浴加熱至261c,在70振蕩/分下開始攪動。3、反應試管按照表A進行配製用於QC樣品，並按照表B配製用於勻漿。表Atableseeoriginaldocumentpage51表btableseeoriginaldocumentpage524、各個QC樣品分成三份進行測定，為T0、+oligo和-oligo樣品x3份(每個樣品總計9管，如果忽略低細胞計數-oligo樣品)。勻漿還分成3份測定，為T0和反應樣品x3。(每個樣品總計6管)。5、添加勻漿或細胞之前，向T0管加入2ml冰冷的10%TCA+10%NaPPi，用以校正放射標記與濾器的非特異性結合。6、反應試管的勻漿和QC細胞在水浴中加熱至26。C持續7分鐘。7、各個製劑短暫地渦旋，將其300ul加入各個反應管中開始反應。8、加入2ml的冰冷的10%TCA+10%NaPPi並渦旋正好在加入勻漿後6分鐘停止反應。9、過濾前，試管至少於冰上孵育1小時。10、10p1的QC懸浮液的樣品用錐蟲藍稀釋成1:1，用血球細胞計數器計數每ml的滲透的細胞的數目。11、剩餘的勻漿在4X:下500xG離心分離5分鐘，移去200m1的上清夜，放置於貼上標籤的螺旋蓋的微型管，用於蛋白質測量。如果不是立即分析，上清夜樣品可以在-20X:下儲藏至少l個月。實施例1.聚-ADP-核糖聚合酶的抑制結合抑制的靶向酶的式U匕合物的晶體分析揭示了，藥物結合PARP-1的活性部位，形成3氫鍵。按照美國專利6,495,541中所述的，測定PARP酶抑制式1_化合物的活性。通過純化的全長人PARP-1使用"P-NAD+摻入聚合物測定的Ki是1.4nM(表3)。式L化合物也是有效的PARP-2抑制劑(Ki=0.17nM),而且基於不同PARP族酶類(tankyrase、V-PARP)中胺基酸序列的強的結構相似性，式1_化合物的200580031769.9說明書第48/71頁磷酸鹽(化合物I)也將同樣地以高親和力結合這些酶。表3.式]_化合物和PARP相互作用的動力學常數tableseeoriginaldocumentpage53實施例2.細胞生長的抑制如美國專利6,495,541所述的在A549、LoVo和SW620細胞系中測定式1_化合物在5天連續暴露後，其內在的生長抑制活性(表4)。GI5。值(抑制生長50%所需的濃度)的範圍是7-12^M。相似地，測定了增加替莫唑胺和託泊替康的生長抑制潛能的0.4nM的式i/f匕合物(即，<5%的ICs。)的能力(表2)。IC5。濃度時的增強因子；PF5。，計算為僅是Gl5。單獨的替莫唑胺或託泊替康/GI5。替莫唑胺或託泊替康+0.4mM的式1/化合物。當加入0.4一的式1_化合物後，LoVo細胞中替莫唑胺的GIs。有8-倍減少，而A549細胞中替莫唑胺的GIs。有3.5-倍減少。當加入0.4jiM的式l/化合物後，LoVo細胞中託泊替康的GI5。有1.6-倍減少，而A549和SW620細胞中託泊替康的IC5。有2.6-倍的減少。表4.式L化合物抑制細胞生長且0.4nM式1_化合物增強替莫唑胺和託泊替康。tableseeoriginaldocumentpage53實施例3.通過化合物I化學增敏標準化療劑根據美國專利6,495，541所述的操作進行的人腫瘤細胞系的體外研究，已經表明不足微摩爾濃度的式JJ匕合物增強了細胞對於抑制人H460非小細胞肺癌(NSCLC)細胞的替莫唑胺和I型拓樸異構酶抑制劑、託泊替康和SN-38(伊立替康的活性代謝物)的敏感性(表5)。表5.葡萄糖醛酸鹽的式1_化合物對於人H460NSCLC細胞中的標準化疔劑的體外效力的影響tableseeoriginaldocumentpage54apFs產在人H460NSCLC細胞中，GI5。(單藥劑)/GI5。(藥+0.4一的式1_化合物)。b在這些實驗中，式1_化合物葡萄糖醛酸鹽代替化合物I(式L化合物的磷酸鹽)。實施例4.通過式1化合物抑制細胞的NAD耗盡和聚-ADP-核糖聚合物的形成按照Abou-Ela等人(AnalBiochem爭(1988)，174:239-250)所述的釆用如下的較少的改變來確定聚(ADP-核糖)聚合物和NAD+。A549細胞(ATCC，Rockville，MD.)播種在35mm的培養皿中並使其生長至匯合(confluence)。移去培養基，用含20-50jiCim「1[3H]腺嘌呤的新鮮培養基替代。細胞在37C下標記16h。實驗操作之前，培養基用新鮮的培養基取代45分鐘。實驗操作之後，移去培養基，細胞用pHL2的冰冷的磷酸鹽緩沖鹽水漂洗，通過加入1ml的20%的冰冷的三氯乙酸收穫。通過刮除從培養皿中除去酸不溶性物質。培養皿用1ral20%的三氯乙酸洗一次，樣品接受離心分離。上清夜用於匪0+測定。片狀沉澱溶解於0.2ml冰冷的98%的甲酸中，然後用冰冷的去離子水稀釋至10ml。加入兩百微升的10mg/ml牛血清白蛋白，促進沉澱。加入2.55ml的100%三氟乙酸調節三氟乙酸的濃度至20%。離心分離收集酸不溶性的部分。A^iT^浙定.三氟乙酸上清液用pH8.6的250mM的甲酸銨稀釋至10ml，再用濃縮的氫氧化銨調至pH8.6。樣品上到0.5ml的DHB-瓊脂糖柱中，所述柱已經用10ml的pH8.6的250mM曱酸銨預洗過的。柱子用pH8.6的10ml的250mM曱酸銨洗，用pH4.5的4ml的250mM甲酸銨洗脫2ml的H20.NAD+。^/，-裙4^炎合參時鄭定。酸不溶的片狀沉澱溶解於1ml氯化胍、250mM乙酸銨、10mMEDTA，pH6.0和1ml的1MKOH、100mMEDTA中。樣品在37r下孵育2h。樣品用pH9.0的1M氯化胍、250mM乙酸銨、10mMEDTA(緩沖液A)稀釋至10ml，調至pH9.0，上到已經用5mlH力和10ml緩沖液A預洗過的0.5ml的DHBB(BioRad)柱中。上柱後，柱子用25ml的緩衝液A洗，接著用pH9.0的10ml的1M碳酸氫銨、1mMEDTA洗。聚(ADP-核糖)是用0.5ml的H20洗脫。樣品凍幹至乾燥，然後懸浮在pH7.5的2ml的50mMMOPS、5mMMcGin中。懸浮液加入1單位的Snakevenomphophodiesterase1(WorthingtonBiochemicals)和1單位的BAP在371C下煮解3小時。HPLC分析通過5jimBeckmanCI8ODS-反相柱的HPLC進行分析，在1ml/min的流速下使用7mM甲酸銨、7°/。甲醇流動相。各個樣品與10nmol的腺苷和去氧腺苷之一共同注射。收集1毫升的柱的流分，並在5ml閃爍液體中計數。通過式1_化合物的替莫唑胺的體外增強是與抑制烷化基-誘導的細胞NAD消耗和阻斷多聚-ADP-核糖聚合物形成相聯繫的，有效範圍是5-400nM。DNA損傷之後，細胞NAD快速結合成多聚-ADP-核糖聚合物。5nM(PF5。=1.3)的式JJ匕合物大大的減少MNNG-引起的細胞NAD耗竭並抑制89。/。的細胞多聚-ADP-核糖形成(表6)。在低至50nM的濃度時，式1_化合物增加A549中替莫唑胺的潛能至少2-倍，相當於抑制93°/0的MMG-引起的NAD耗竭和抑制95^的多聚-ADP-核糖聚合物的形成。式1_化合物還抑制PARP催化活性，根據MNNG、過氧化氳或Y輻照激活PARP後，P388小鼠白血病細胞和小鼠外周血淋巴細胞中細胞NAD耗竭的抑制來測量(數據沒有顯示)。表6.式JL化合物抑制體外A549細胞內的PARP活性_MNNG濃度式1_化合物NAD聚合物PF5。PF5。的濃度04DMS0')(%MNNGb)(託泊替康)(替莫唑胺)aDMSO對照。bMNNG只是對照。實施例5.式1化合物-替莫唑胺的體內抗腫瘤效力的研究按照Calabrese等人(JNCI(2004)，96:56-67)所述的進行體內實驗。對於這些研究，化合物I(磷酸鹽)劑量和葡萄糖醛酸鹽劑量的計算是以游離鹼為基礎。在這些研究中，化合物I證明無單藥劑抗腫瘤效應。在聯合研究中，化合物I增強了Y輻照、伊立替康和替莫唑胺的劑量效力(dosepotency),在單劑量實驗中，式1_化合物增強了超過SW620人結腸癌異種移植的小鼠中的10-倍無毒劑量的200mg/kg替莫唑胺的抗腫瘤效應(表7)。表7.式1化合物聯合單劑量的替莫唑胺抑制人SW620結腸癌異種NoneNone100'1None44100b0.0005一77401.410.005jiM95111.81.30.059652.12.20.1jiM9742.22.60.4fiM9742.43.5移植的體內活性tableseeoriginaldocumentpage57a替莫唑胺給藥是通過口服管飼法傳送。b式jj匕合物給藥是通過腹膜內注射傳送。°所有組的n-5。d%增強-100x(替莫唑胺+式！J匕合物的延時-只有替莫唑胺的延時)/只有替莫唑胺的延時。延時計算為治療組的RTV(相對腫瘤體積)4時間-對照組RTV4的時間，在此RTV4是等於開始治療時腫瘤體積4倍的胂瘤體積。e單藥劑替莫唑胺(曼-懷二氏檢驗)的顯著差異f由於毒性的死亡2個。在抑制SW620異種移植的重複劑量實驗(每劑，QDx5)中，與68mg/kg替莫唑胺聯合的O.05、0.15和0.5mg/kg的式1_化合物(為葡萄糖醛酸鹽)增強所有3個聯合組(68mg/kg替莫唑胺+0.05、0.15或0.5mg/kg的式jJ匕合物葡萄糖醛酸鹽)中替莫唑胺的活性.在與0.15或0.5mg/kg的式U匕合物葡萄糖醛酸鹽的聯合組中，觀察到100%的完全緩解率。對於式1_化合物葡萄糖醛酸鹽的劑量組合(68mg/kg替莫唑胺+0.05或0.15mg/kg的式1_化合物葡萄糖醛酸鹽)，沒有觀察到體重減輕。用高劑量聯合組(68mg/kg替莫唑胺+0.5mg/kg的式L化合物葡萄糖醛酸鹽)，觀察到一個中毒死亡數。在抑制LoVo異種移植的相似的實驗中，式L化合物葡萄糖醛酸鹽(0.5mg/kg)增強替莫唑胺(68mg/kg)的67%的抗腫瘤活性(表8，圖1)。在LoVo實驗的任何劑量組中沒有觀察到體重減輕。沒有聯合研究觀察到拮抗作用。表8.與葡萄糖醛酸鹽的式L化合物聯合的替莫唑胺抑制SW620和LoVo異種移植的效力tableseeoriginaldocumentpage588替莫唑胺給藥是通過口服管飼法傳送。b式1_化合物給藥是通過腹膜內注射傳送。e式L化合物(游離鹼同等物)給藥為葡萄糖醛酸鹽。d所有組的n=5。e%增強=100x(替莫唑胺+式1_化合物的延時-只有替莫唑胺的延時)/只有替莫唑胺的延時。延時計算為治療組的RTV(相對腫瘤體積)4時間-對照組1074的時間，在此RTV4是等於開始治療時腫瘤體積4倍的腫瘤體積。f藥劑替莫唑胺(曼-懷二氏檢驗)的顯著差異g由於毒性的1個死亡數。實施例7.式1化合物-伊立替康的體內抗腫瘤效力研究按照Calabrese等人(J.Natl.CancerInst.(2004)，96:56-67)所述的進行體內實驗。作為單藥劑拓樸異構酶I抑制劑，伊立替康(25mg/kg，QWx3IP)未顯著地抑制SW620腫瘤生長。25mg/kg伊立替康和以葡萄糖醛酸鹽給藥的式I/f匕合物的組合，產生相當大的抗腫瘤效應並增強所有聯合組(25mg/kg伊立替康+0.05、0.15或0.5mg/kg的式^化合物)中伊立替康的活性(表9)。在伊立替康單藥劑組或含伊立替康和PARP抑制劑的組合的組中，未觀察到顯著的毒性。由於增加式jj匕合物的給藥量，增強了腫瘤生長抑制(增強％)。在抑制LoVo異種移植的相似實驗中，式1_化合物(0.5mg/kg)增強了伊立替康(25mg/kg)86%的抗腫瘤效應(表9)。沒有聯合研究觀察到拮抗作用。表9.與葡萄糖醛酸鹽的式1_化合物聯合的伊立替康抑制SW620和LoVo異種移植的效力tableseeoriginaldocumentpage59'伊立替康給藥是通過腹膜內注射傳送。b式L化合物葡萄糖醛酸鹽給藥是通過腹膜內注射傳送。c所有組的n-5。d%增強=100x(伊立替康+式1_化合物的延時-只有伊立替康的延時)/只有伊立替康的延時，延時計算為治療組的RTV(相對腫瘤體積)4時間-對照組RTV4的時間，在此RTV4是等於開始治療時腫瘤體積4倍的腫瘤體積。6式jj匕合物(游離鹼當量)給藥為葡萄糖醛酸鹽。f單藥劑伊立替康(曼-懷二氏檢驗)的顯著差異。實施例8.式1化合物-替莫唑胺的藥效學具有SW620人結腸癌異種移植的小鼠只用10mg/kg的式U匕合物(QDx5)治療，產生無肺瘤生長延遲，而且無毒性。表10(a)表示腹膜內給藥磷酸鹽(化合物I)之後，式1_化合物的血漿和腫瘤濃度。在抑制SW620異種移植的重複劑量組合實驗中(對於每個藥為QDx5),0.1mg/kg的式1_化合物增強68mg/kg的替莫唑胺的抗腫瘤效應的28%,超過僅用68或136mg/kg的替莫唑胺的抗腫瘤效應(表10(b))。增加式1化合物的劑量至1mg/kg,增強了替莫唑胺(68mg/kg)抗腫瘤效應100%。10mg/kg的式1_化合物和68mg/kg的替莫唑胺的組合是有毒的。在平行研究中，通過HPLC/MS測定法來測量式L化合物的血漿和腫瘤濃度。此外，使用摻入P"-NAD的聚-ADP-核糖聚合物的治療動物的SW620腫瘤的勻漿，評估腫瘤PARP催化能力的抑制程度。在式i化合物的有效劑量(l.Omg/kg)時，在注射後6小時時幾乎檢測不到式1_化合物血漿濃度，而在注射後6和24小時檢測到式1_化合物肺瘤濃度為40-60ng/mL。在6小時抑制了50°/。的PARP催化能力，在24小時抑制了25%。在式1_化合物的毒性劑量(10mg/kg)時，式1_化合物的血漿濃度在6小時處是30ng/mL，但是24小時處幾乎檢測不出。給藥10mg/kg式1_化合物之後，式L化合物的胂瘤濃度大於〉200ng/mL,在直至24小時的所有時間都能檢測到，而且在6小時處抑制了90%的PARP催化能力，在24小時處抑制了75%。表10(a).腹膜內給藥磷酸鹽(化合物1)之後，式L化合物的血漿和腫瘤濃度tableseeoriginaldocumentpage60式L化合物給藥是通過腹膜內注射傳遞。式L化合物(游離鹼當量)給藥為磷酸鹽。BLQ:定量的下限表10(b).與替莫唑胺聯合的葡萄糖醛酸鹽的式]_化合物抑制SW620人結腸癌異種移植的效力和藥效學tableseeoriginaldocumentpage61a式1_化合物給藥是通過腹膜內注射傳遞。b式jj匕合物(游離鹼當量)給藥為葡萄糖醛酸鹽。c替莫唑胺給藥是通過口服管飼法傳遞。di.p.傳送的式JJ匕合物聯合p.o.傳送的68mg/kg的替莫唑胺，給藥。eSD-標準差.f增強計算為((延遲(組合)/延遲(只有替莫唑胺))x100-100)g與單藥劑替莫唑胺(曼-懷二氏檢驗)的顯著差異hN/A，不可適用，由於毒性5/5死亡率。實施例9.動物中藥物代謝動力學的研究IV給藥式i/f匕合物的鹽之後，在CD-1小鼠、Wistar大鼠、Beagle狗和短尾猴中評估式jj匕合物(游離鹼藥物物質)的藥物代謝動力學，並總結在表11中。IV給藥給所有物種導致調節至快速的清除率(34-136mL/min/kg)和大量的分布(7-15L/kg)，表明此化合物在體內是良好分布地。末端半衰期是相對短地而難以調節(2-5小時)。化合物I(磷酸鹽)和替莫唑胺的聯合研究是在小鼠和大鼠中進行，用於調查這種細胞毒素劑對於式1化合物的藥物代謝動力學的潛在的影響。對於小鼠的聯合研究而言，第一組的8隻小鼠接受單個6.5mg/kg的IV劑量的化合物I(等同於5ing/kg的式1_化合物)，而第二組的8隻小鼠接受單個6.5mg/kg的IV劑量的化合物I和單個200rag/kg的口服劑量的替莫唑胺。每個劑量治療組分成4隻小鼠的2個同齡組。採集同齡組血液的原因是因為小鼠物種的血量限制。每隔一藥物代謝動力學採樣時間從每個同齡組採集血液。對於大鼠的聯合研究而言，一組的2隻大鼠接受單個6.5mg/kg的IV劑量的化合物1(5mg/kg)，而第二組的2隻大鼠接受6.5mg/kg的IV劑量的化合物I和50mg/kg的口服劑量的替莫唑胺。由在小鼠和大鼠中的化合物I和替莫唑胺的聯合研究得到的結果表明這種細胞毒素劑對於式1_化合物的藥物代謝動力學分布僅有較少的影響(表12和表13)。類似地，化合物I顯示出對替莫唑胺的藥物代謝動力學分布僅有較少的影響(數據為給出)。此外，在雄性CD-1小鼠和雄性Wistar大鼠中進行化合物I和伊立替康的聯合研究。就小鼠的聯合研究而言，一組的15隻小鼠接受單個6.5mg/kg的IV劑量的化合物I(等同於5mg/kg的式L化合物)，而第二組接受6.5mg/kg的IV劑量的化合物I和45mg/kg的IV劑量的伊立替康。每個劑量組的三隻小鼠在每個採集時間點安樂死。對於大鼠的聯合研究而言，一組接受6.5mg/kg的IV劑量的化合物I,而第二組接受6.5mg/kg的IV劑量的化合物I和45mg/kg的劑量伊立替康。在每個時間點從每隻大鼠採集血液。由此研究得到的結果揭示了在給藥劑量時，化合物I和伊立替康之間不存在導致改變藥物代謝動力學的藥物-藥物相互作用(表14和表15)。表ll.在小鼠、大鼠、狗和猴中單個IV給藥式JJ匕合物的平均藥物代謝動力學參數_物種tableseeoriginaldocumentpage62組平均n=15隻小鼠，所有其他n=2或3(±SD)a小鼠和大鼠的數據來自含有替莫唑胺的聯合研究b式1_化合物(游離鹼當量)給藥為化合物I(磷酸鹽)c式L化合物(游離鹼當量)給藥為葡萄糖醛酸鹽表12.在僅給藥化合物I(磷酸鹽)或聯合替莫唑胺給藥的小鼠中，組平均的式1_化合物的藥物代謝動力學參數化合物I化合物I(+TEM0)給藥途徑IVIV(Oral)劑量(mg/kg)a55(200)AU(formulaseeoriginaldocumentpage63)(mug.h/mL)0.620.95CL(mL/min/kg)13688Vss(L/kg)109t1/2(hours)2.32.2B合物I(式1_化合物的磷酸鹽)；鹽校正的劑量。表13.在僅給藥化合物I(磷酸鹽)或聯合給藥替莫唑胺的大鼠中，組平均的式1_化合物藥物代謝動力學參數。化合物I化合物I(+TEM0)給藥途徑IVIV(Oral)劑量(mg/kg)a55(50)AUC(Vformulaseeoriginaldocumentpage63)(pg'h/mL)1.00.7CL(mL/min/kg)85123Vss(L/kg)1011t1/2(hours)2.81.6化合物I(式1_化合物的磷酸鹽)；鹽校正的劑量。表14.在僅給藥化合物I(磷酸鹽)或聯合給藥替伊立替康的小鼠中，組平均式i/f匕合物IV藥物代謝動力學參數化合物I給藥途徑劑量(mg/kg)'IV5化合物I(+IRIN0)IV(IV)5(45)CL(mL/min/kg)Vss(L/kg)t1/2(h)0.9390112.11.127561.6a化合物I(式l化合物的磷酸鹽)；鹽校正的劑量。表15.在僅給藥化合物I(磷酸鹽)或聯合給藥替伊立替康的大鼠中，平均(SD)式l化合物IV藥物代謝動力學參數化合物I給藥途徑劑量(邁g/kg)'IV5化合物I(+IRIN0)IV(IV)5(45)CL(mL/min/kg)V"(L/kg)t1/2(h)0.70(0.06)119(10.99)16(4.13)2.2(0.28)0,91(0.03)91(2.87)14(0.88)2.3(0.07)化合物I(式L化合物的磷酸鹽)；鹽校正的劑量.實施例10.人類中的效應與每四周給予的五天口服替莫唑胺聯合的靜脈注射PARP抑制劑化合物I的第1階段試驗這是在第2部分中進行的一個標籤公開、多中心、劑量按比例上升的研究。研究的第1部分對於患有進行性腫瘤的病人是開放的。在第7天給予試驗劑量的單藥劑化合物I之後，給予化合物I和替莫唑胺(100mg/ffl7劑量)連續5天的每日IV輸注。在連續的同齡組的病人中，化合物I的劑量按比例上升直到PARP禁止的劑量(PID，參見以下D部分)是通過藥效學和藥物代謝動力學數據確認。PID已經確定是l2mg/m2。在先前的同齡組中評價了較高劑量的安全性之後，病人內按比例上升的化合物I是允許的。第2部分的研究對於患有的轉移性黑素瘤的患者是開放的。除了擴大劑量的替莫唑胺之外，連續的同齡組的患者接受PID的化合物I直到確定了聯合藥物的MTD或替莫唑胺劑量達到200mg/m2的最大值。進入第2部分研究的患者必須同意治療前和治療後的腫瘤活體檢查來測量PARP的抑制。在先前的同齡組中評價了較高劑量的安全性之後，病人內按比例上升的替莫唑胺是允許的。關於17名病人的臨床結果是同意的並在研究的第1部分治療了。表16顯示了這些病人的人口統計。表16.第1階段研究的第l部分的病人人口統計學同齡組ID化合物I年齡中值性別％種源％表現狀態體表面積中(#患者)劑量(yr)男性白人(WHO)值(m2)(mg/m2)(Range)0/1%(範圍)1(3)1563310067/331.74(49-62)(1.32-1.82)2(4)25510010075/252.29(32-72)(1.86-2.44)3(3)455671000/1001.80(36-56)(1.71-2.01)4(4)855"10025/751.94(31-68)(1.82-2.10)5(3)126510010033/672.06(59-71)(2.04-2.26)Total567610041/592.01(17)(31-72)(1.32-2.44)這些病人的原發性癌症的診斷，對於進行性疾病的全部是乳房(1)、結腸(2)、腎(l)、肝(l)、胰(2)、前列腺(l)、直腸(l)、黑色素瘤(3)、軟組織肉瘤(3)和胃(2)。12個(71%)患者接受了先前的化療，3個(18。/。)患者沒有接受，而2個(12W沒有信息。A.人中的藥物代謝動力學和產品代謝在與替莫唑胺聯合的IV化合物I的第1階段的開放性、劑量按比例增大研究中，評價了式l化合物的藥物代謝動力學。在第l部分的研究(劑量按比例上升的化合物I)中，在以下時間採集連續的血液樣品用於式1_化合物的測定周期1，第7天(ClD-7、化合物I單劑量)周期1，第1天(C1D1、化合物1+替莫唑胺單劑量)周期1，第4天(C1D4、化合物1+替莫唑胺多劑量)對於開始的中間數據使用額定的採集時間進行PK分析。B.在一直到第4天的所有周期進行PK分析通過使用蛋白質沉澱提取，接著反相HPLC串聯質傳檢測，測定人血漿中的式1_化合物。使用以下的色鐠條件分析柱流動相A成分流動相B成分流速注射量自動採樣器的針頭洗液通常的保留時間'ThermoHypersilKeystoneBetabasicC8，5叫100x2.1mmID含0.1%甲酸的水含O.1%曱酸的乙腈200^L/min10jiL水乙腈甲酸(500:500:1，v:v:v)式1_化合物1.5分鐘式1的d6-化合物1.5分鐘*保留時間是近似的，可以分析批次之間和之內變化。以下是通常的質譜桐故而且可以在儀器之間變化來獲得等效的響應質譜電離Turbo離子噴射離子噴射電壓Turbo加熱器溫度SciexAPI365SciexTurboIonSpray正電性離子模式4000V4501C324.4MassTransitions(額定式1_化合物m/z的)式1的山-化合物m/zm/z293.2330.3—m/z停留時間Nebuliser氣體壓力CurtainGasSetting:CAD:299.1式L化合物350ms式id廣化合物150ms682所有17名患者中的初步的PK參數的總結列在表17中，各個劑量同齡組的式1_化合物的平均血漿濃度-時間分布是如圖3所示。tableseeoriginaldocumentpage67a當外推時，AUC。-inf和CL可能不是精確地反映，因為對某些患者而言AUC。-i。f是萌。的AUC。-2"b未包含在統計分析中。該數值可能不是正確評估的，因為數據不夠。B.1.第l周期第7天的PK分析(ClD-7)單獨IV輸注化合物I30分鐘(ClD-7)之後，式1_化合物的血漿濃度是以多指數的方式降低，具有約6.2-10.7小時的平均末端半衰期。30-分鐘IV輸注單獨給予2-12mg/m2的化合物I時，在AUC詣和C,上是線性劑量比例的。lmg/W時的AUC。-"是沒有包括在劑量比例的評價之內的，因為給藥3個小時後所有患者的濃度是低於分析含量測定的極限值(LLOQ=2ng/mL)。平均總的身體清除率是27L/h(C1D-7)，其大約是肝血流量的30%。分布的平均穩態量是197L(ClD-7)。B.2.第1周期第1天的PK分析(C1D1)單個口服給藥100mg/m2的替莫唑胺和單個給藥1-12mg/m2的化合物I之後，式JL化合物濃度是與單獨給予化合物I的濃度相似的。在ClD-7(單獨給藥I)時式1_化合物的AUC(。-^是與在C1D1(化合物I加上替莫唑胺)所有給藥時相類似的。B.3.第1周期第4天(C1D4)PK分析在每日給藥化合物I加替莫唑胺4天之後，基於對個體血漿濃度-時間分布的真實觀察，在血漿中存在式1_化合物最小量的蓄積。然而，在第l周期第4天給藥和第l周期第1天給藥之間，式L化合物AUC(。—24)有增大(範圍50%-75%)的趨勢(表17)。B.4.病人之間或病人內的差異性(Variability)病人之間的式1_化合物的AUC(。,的差異性是14%-85%,C阻是7%-95%。然而，各個同齡組內病人之間的AUC(。-24)和C,差異性通常是小於60%(表17)。病人內AUC闊和C醒的差異性是通過比較在C1D-7單獨給藥化合物I與在C1D1給藥化合物I+替莫唑胺來評價。病人內AUC(。-")差異性的範圍是74-47、C眼差異性的範圍是3%-44%。C.測定PARP抑制劑量測定方法學PARP活性和抑制的藥效學測定使用單克隆抗體來測量PAR聚合物的量的，PAR聚合物是在透化的外周血淋巴細胞和經過勻漿化的腫瘤樣品中設定的條件下形成的。形成的聚合物的量可以是用作PARP活性的相關量，由此減少聚合物形成是與PARP抑制的程度相關的。PARP活性是表達為基線的百分比，而且通過輸注後形成的PAR聚合物的量除輸注前形成的量計算。在患有轉移性黑色素瘤的病人中單藥劑替莫唑胺的12個病人的第2階段研究中，這個測定的可行性是成功試驗的。這個研究表明單藥劑替莫唑胺不抑制外周血淋巴細胞或腫瘤活組織檢查樣品中的PARP活性。D.從第1階段臨床評價的藥效學在IV與替莫唑胺聯合的化合物I的標籤公開、劑量按比例增大的笫1階段的研究中，該研究的主要目的之一是測定化合物I的PID;PID是定義為劑量，在此劑量時外周血淋巴細胞中PARP活性減少至低於基線的50%，在介於2個化合物I的劑量水平之間的PARP抑制程度上存在一個高線(+/-10%絕對的)。定義是基於在第l天給藥化合物I後24小時觀察到的PARP活性。使用以上C段公開的PARP活性的藥效學測定，外周血淋巴細胞和腫瘤組織中的PARP抑制是在第1階段的臨床試驗中評價。如上指出的，第l階段第2部分研究中的登記是限於患有biopsiable疾病的轉移性黑色素瘤的病人。所有病人需要同意治療前和治療後的活組織檢查，以便可以評估腫瘤中的PARP活性。在第1階段的研究中，在給予化合物I試驗劑量的那天(通常是Day-7)、以及第1天和4天從所有病人釆集的全部的血液樣品。採集的定時是輸注化合物I前、輸注結束後、輸注後的4-6小時，輸注後的24小時(下一天輸注前)。化合物I是在30分鐘內IV輸注給藥。從血液樣品中收集外周血淋巴細胞，可能時，樣品分成三分進行分析。在表18中，總結了在第1天給藥化合物I之後的外周血淋巴細胞中PARP活性。顯著的PARP抑制(中值PARP活性減少至少5(W在所有的病人中表現出，與在第l天完成化合物I的30-分鐘輸注無關。取決於病人，在O.5和4-至6-小時的時間點觀察到最大的抑制。在同齡組4和5中證明了PARP活性的持久抑制，其中PARP活性大於50%的中值減少是在它們第1天給藥化合物I後24小時觀察到。如表19中所示，在第2部分的研究中，在其第一周期的第l、4或5天給藥12mg/m2的式I化合物4-6小時之後，在從6位病人取得的胂瘤樣品中PARP活性被抑制50%-93%。表18.tableseeoriginaldocumentpage70PARP=聚(ADP-核糖)聚合酶；BLD=檢測下限a僅對於第l個同齡組而言，樣品不在第l天採集。數據是來自試驗劑量的化合物I(通常是第7天)之後釆集樣品的數據。表19.腫瘤中PARP抑制tableseeoriginaldocumentpage71治療的活組織檢查是指出天治療後的4-6小時進行，例外*:在第1天治療後的24小時進行(第2天治療之前).實施例ll.人中的效應在患有進行性結腸直腸癌的病人中的與"FOLFIRI"給藥法聯合的靜脈內注射PARP抑制劑化合物I的階段1/2的試驗，所述病人在第一線轉移性發作(MetastaticSetting)的"FOLFOX"給藥法失敗了引入第1階段部分的研究確定了在第2階段部分所用的與伊立替康，5-FU和亞葉酸聯合的化合物I的劑量。第2階段部分是與FOLFIRI聯合的化合物I的標籤公開的多中心研究，FOLFIRI是用於已接受先前的第一線轉移的結腸直腸癌的FOLFOX化療病人。試驗的第1階段部分是分成2部分。第1部分是標籤公開的劑量按比例增大的研究，評價化合物I與伊立替康組合的安全性和耐受性(參見表20-l部分)。2部分是向1部分已經評價的組合中加入5-FU+亞葉酸(參見表20-2部分)。病人在2-周的周期內給藥，來促進轉變成第2階段的FOLFIRI給藥方案。病人具有組織學上和細胞學上證實的結腸直腸癌，對病人而言其是難治，或者其在第一線轉移性發作中具有失敗的FOLFOX，至少18歲，具有良好的行為狀態(WHO0或1)，具有常規血試驗確定的足夠的骨髄、肝和腎功能，提供徵得同意，而且滿足多種其他的進入標準。病人接受PARP抑制劑量的化合物I(如早前的第1階段研究和這個試驗的第1部分確定的)和F0LFIRI。在第2階段，周期數涉及每2-周的周期的F0LFIRI，其以標準方式給予。伊立替康(基於第1階段的劑量)在第1天90分鐘內靜脈給藥。亞葉酸(LV200mg/mO輸注與伊立替康同時開始，在第1天進行了2小時。5-FU推注(400mg/m"和46小時5-FU輸注(2400mg/m2)緊跟亞葉酸輸注。在如表20所示的一系列病人的同齡組中，化合物I以升高的劑量加入伊立替康。在各個伊立替康給藥前1小時以及又24小時之後，化合物I最初以12mg/V的起始劑量靜脈輸注30分鐘。伊立替康的起始劑量是150mg/m2(約是F0LFIRI給藥法中所用的伊立替康全部劑量的8(W。在第1周期採集血液樣品用以測定化合物I、伊立替康和SN-38PK分布。劑量限制毒性(DLT)是用於測定最大耐受劑量(MTD)，而且在最初的4周評估。最初，3個病人參與各個劑量水平。如果在任何同齡組的最初的3個病人中的1個觀察到DLT，另外的3個病人被登記。MTD是定義為最高劑量水平，在此水平下的最初的4周內《1/6的病人經歷DLT。沒有使化合物I的劑量升高到18fflg/fflS以上。一旦6個病人在MTD下的治療完成4周後，第2階段部分開始。MTD定義為低於使超過30%(2-6個病人)的同齡組由於在治療的開始21天內的藥物組合經歷了劑量限制毒性的劑量的劑量。由於除了治療有關的毒性之外任何原因，沒有完成評價DLTs的前提時間的病人被替換。MTD推薦為第2階段試驗的起始劑量。表20-第1階段劑量tableseeoriginaldocumentpage73目標應答率是第2階段研究的首要的終末點。病人評價了FOLFIRI的每3個周期的腫瘤應答。化合物I和FOLFIRI聯合的目標應答率(RR)是使用實體瘤反應評價標準(RECIST)測定。Therasse等人，Newguidelinestoevaluatetheresponsetotreatmentinsolidtumors./#a〃"/cerZnW,2000年，第92巻，第205-216頁。實施例12.通過式1的化合物的輻射敏化在體內對輻射抵抗起作用的因素是休眠細胞修復潛在致死性損傷(PLD)的能力(Weichselbaum，R.R.andLittle,J.B.Thedifferentialresponseofhumantumorstofractionatedradiationmaybeduetoapost-irradiationrepairprocess.Ar./.Cancer1982;46:532-537)。在PLD測量的體外模型中，延遲集落形成的平板接種後，受輻射的生長受阻的細胞的存活率增加。在體外使用LoVo細胞測量潛在致死性損傷的修復，通過生長匯合至模擬腫瘤裡的抗輻射的休眠細胞群所述LoVo細胞在d階段已經停止。細胞暴露於8Gy的y-輻射(Gammacel1000Elite,NordianInternationalInc.Canada),立即進行用於集落形成測定的收穫和平板接種，或者在用於集落形成測定的收穫和平板接種之前，維持如生長停止的融合培養物24-小時修復期。當指明時，放射前30分鐘加入0.4|nM式1_化合物，並存在於修復孵育的整個過程。如表21中所示的，在對照培養基中修復了24小時之後，細胞存活率提高了約7-倍。在修復時期加入式i化合物的孵育抑制了64.9%的PLD修復。tableseeoriginaldocumentpage74%PLDR是計算為100x(24小時處的存活率-0時的存活率)/0時的存活率%修復的抑制是計算為100-((存在式L化合物下的PLDR/對照的PLDR)xlOO)c3個獨立試驗的均值作為放射增強劑的式1_化合物的體內效力已經使用兩個獨立的方法進行了評估離體的克隆原細胞測定和腫瘤生長延遲分析。就第一種方法而言，在5Gy劑量的腫瘤局限性輻射之前，確定的LoVo異種移植是用式1_化合物(15或30mg/kg;母體化合物)治療30分鐘.腫瘤離體24小時之後，分解獲得單個細胞懸浮液並放在平板上用於集落形成測定。如表22所示的，與只用輻射的治療的腫瘤細胞相比，用式JL化合物和5Gy治療的腫瘤細胞的存活因素(SF)是提高的。15mg/kg和30mg/kgIR組合的SF等同於使用8Gy或9.5Gy輻射劑量取得的，分別獲得1.6和1.9的劑量改變係數(DMF)。表22.通過式1_化合物的離體輻射增強tableseeoriginaldocumentpage75a集落形成效率(％平板接種的細胞)b存活因素集落形成率(CFE)作為未治療的對照肺瘤的函數。e劑量改變係數將需要獲得如式1+輻射的組合相同水平的克隆形成的存活的輻射劑量的倍數增加。對於腫瘤生長延遲研究而言，約250mn^體積的LoVo異種移植是用10Gy輻射治療，每天給予2Gy的部分連續5天。在聯合組中，在每次2GY的部分30分鐘之前，以15或0.15mg/kg的劑量給予式i化合物(再次使用母體化合物)。實驗的終點確定是相對腫瘤體積增加至開始治療時測量的體積(RTV4)的4倍所需的時間。生長延遲是由IR/式1治療的腫瘤和未治療腫瘤取得RTV4的需要的時間(天)的差異計算的，如表23所示，兩個劑量的式JL化合物導致抑制LoVo異種移植的輻射活性的顯著的(36%)增強。表23.式i/化合物聯合的X-輻射抑制LoVo異種移植的效率tableseeoriginaldocumentpage75局部的腫瘤輻射。式L化合物劑量是通過腹膜內注射傳送。全部組的n=5。增強計算為％增強=100x(IR+式1_化合物的生長延遲-單獨IR的生長延遲)/單獨IR的生長延遲。e單獨IR的顯著差異p=0.015(曼-懷二氏檢驗)f單獨IR的顯著差異p=0.009(曼-懷二氏檢驗)所有引用參考文獻的公開內容在以其全文併入作為參考。權利要求1、一種給藥於哺乳動物的劑型，所述劑型包含式1化合物:其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或混合物，以有效量給藥於哺乳動物後至少24小時提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持續的血漿濃度值。2、一種劑型，其包含式l化合物formulaseeoriginaldocumentpage2其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或混合物，以在外周血淋巴細胞中有效地抑制至少5(^的聚(ADP-核糖)聚合酶至少24小時的量。3、一種給藥遭受癌症的哺乳動物的劑型，所述劑型包含含式1化合物其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或混合物，以有效地抑制至少50%的癌聚(ADP-核糖)聚合酶的酶的量。4、權利要求1-3任一項的劑型，包含以表示為式L化合物的等量游離鹼的1-48mg/m2的量的式1化合物。5、權利要求1-3任一項的劑型，包含以表示為式1_化合物的等量游離鹼的2-96mg的式1_化合物。6、權利要求1-5任一項的劑型，其中所述劑型是注射用凍乾粉。7、權利要求l-6任一項的劑型，其中藥學上可接受的鹽是磷酸鹽。8、一種組合物，其包含式l化合物其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或混合物，為表示為式]_化合物的等量游離鹼的約2-約96mg的量，和治療有效量的至少一種選自替莫唑胺、伊立替康、託泊替康、順鉑、卡鉑和多柔比星的抗癌劑.9、權利要求8的組合物，包含式l化合物、伊立替康、5-氟尿嘧啶和亞葉酸。10、權利要求8或9的組合物在製備治療哺乳動物的癌症的藥劑中的用途。11、權利要求10的用途，其中癌症是選自肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚黑色素瘤或眼內黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛區癌、胃癌、結腸癌、乳腺癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、曱狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統的新生物(CNS)、原發性中樞神經的淋巴瘤、脊推腫瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤及其組合。12、一種試劑盒(a)在第一單位劑型中的一定量的式1化合物formulaseeoriginaldocumentpage4其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或混合物，以及一種藥學上可接受的載體或稀釋劑；(b)在第二單位劑型中的一定量的至少一種抗癌劑和一種藥學上可接受的載體或稀釋劑；和(c)包含第一和至少第二劑型的容器。13、一種治療哺乳動物癌症的方法，所述方法包括向哺乳動物給予(a)式1化合物1其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或混合物，以給藥哺乳動物後有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持續的血漿濃度值至少24小時的量；和(b)治療有效量的至少一種抗癌劑。14、權利要求13的方法，其中抗癌劑是給藥式1化合物之後1小時內給藥。15、一種治療哺乳動物癌症的方法，所述方法包括向哺乳動物給予(a)式l化合物H1其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或混合物，以給藥哺乳動物後有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持續的血漿濃度值至少24小時的量；和(b)—定計量的有效消滅癌症的放射。16、權利要求13-15任一項的方法，其中癌症是選自肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚黑色素瘤或眼內黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛區癌、胃癌、結腸癌、乳腺癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統的新生物(CNS)、原發性中樞神經的淋巴瘤、脊推腫瘤、、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤及其組合。全文摘要本發明通常涉及式1表示的8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氫-6H-氮雜並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮作為增強細胞中毒類藥或放射治療的效力的化學增敏劑的應用。如右式1，本發明提供了8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氫-6H-氮雜並[5，4，3-cd]吲哚-6-酮或或其藥學上可接受的鹽和至少一種另外的治療劑的藥物組合，含有這樣組合的試劑盒，使用這樣的組合治療遭受如癌症的疾病的患者的方法。文檔編號A61K31/282GK101384264SQ200580031769公開日2009年3月11日申請日期2005年9月9日優先權日2004年9月22日發明者A·H·卡爾沃特,C·瓊斯,D·R·紐維爾,E·R·普魯莫爾,H·D·湯姆斯,H·M·斯坦菲爾德特,I·J·斯特拉特福德,K·J·克拉莫爾斯,K·J·威廉士,M·R·德沃基,N·J·科汀,R·考弗曼,S·D·雷奇,T·J·伯裡茨基,Z·豪斯湯姆斯基申請人:輝瑞大藥廠;癌症研究技術有限公司