無毒棉花籽提取物,其提取方法,含它們的藥物組合物及其作為神經系統藥物的用途的製作方法

2023-08-05 21:50:21

專利名稱：無毒棉花籽提取物,其提取方法,含它們的藥物組合物及其作為神經系統藥物的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及無毒棉花籽提取物，其提取方法，含有它們的藥物組合物及其作為神經系統藥物的用途。
無毒棉花是錦葵科(Malvaceve)植物通過基因工程改造得到的一種新型植物，無毒棉花籽是無毒棉花的成熟果實的種子，其可以作為牲畜的飼料。但到目前為止，有關無毒棉花籽的活性成份及其生物活性未見有極道。
本發明的目的在於尋找並開發無毒棉花籽的新用途。
本發明人經研究現已發現通過下面方法得到的無毒棉花籽提取物顯示出優良的神經系統生物活性，尤其是抗焦慮、抗抑鬱作用，本發明基於以上發現得以完成。
根據本發明，本發明的提取物是如下得到的將無毒棉花籽用有機溶劑，含水有機溶劑或水提取。所用的有機溶劑選自醇類如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇等；滷代烷類如二氯甲烷，氯方等；醚類如石油醚或乙醚等，酯類如乙酸甲酯、乙酸乙酯或乙酸丙酯等。
根據本發明，本發明的無毒棉花籽提取物具有下面的定性反應a)將1％吲哚醌丙酮溶液與10ml醋酸配成顯示劑。將棉花籽提取物點在濾紙上，往該濾紙上噴灑上述顯示劑，用吹風機吹乾，待酸味不太濃時，將濾紙放入100℃烘箱中烘5-10分鐘，則濾紙上顯出紅、黃等顏色。
b)顯示劑的配製A液，將0.5克三氯化鐵溶解於50ml水中得到；B液，將0.5克鐵氰化鉀溶解於50ml水中得到，臨用時，將A、B兩液等體積混合。將棉花籽提取物樣品點在紙上，噴灑上述溶液，立即呈明顯藍色斑點。
c)將乾燥的棉花籽提取物樣品溶解或懸浮於0.5ml醋酐中，滴加1滴濃硫酸，溶液呈紫紅色，並且溶液的上層逐漸變為綠色。
d)將棉花籽的提取物點在濾紙片上，噴灑0.05％螢光素水溶液，將紙片暴露在溴蒸氣中(或碘蒸氣中)斑點顯黃色、背景很快就變為淡紅色。
e)將棉花籽提取物溶解，放置到10ml試管內，加入10％的α-萘酚乙醇液。搖勻，再沿著試管滴加少量濃硫酸，試管中液體與濃硫酸接觸的界面有紫色的花環產生。
根據本發明，本發明第一方面涉及無毒棉花籽提取物，該提取物對人類神經系統顯示出良好的生物活性，尤其是抗焦慮和抗抑鬱活性。
根據本發明，本發明還涉及製備無毒棉花籽提取物的方法，其包括將無毒棉花籽用有機溶劑，含水有機溶劑或水提取。
根據本發明，本發明還涉及藥物組合物，其包括作為活性成份的本發明無毒棉花籽提取物及一種或多種藥用載體或賦形劑。
根據本發明，本發明還涉及無毒棉花籽提取物用於製備治療神經系統疾病如焦慮、抑鬱的藥物的用途。
根據本發明，本發明無毒棉花籽提取物可單獨或以藥物組合物形式使用，其給藥方式可根據具體情況而定，但優選口服。給予本發明無毒棉花籽的劑量一般為1-300mg/kg體重/日，優選5-150mg/kg體重/日。
下面通過實施例及生物實驗進一步說明本發明，但這不意味著對本發明的任何限制。
實施例1無毒棉花籽石油醚提取物的製備將無毒棉花籽5kg粉碎過100目篩，然後用石油醚提取，每次用10升，提取三次，合併提取液，減壓蒸發至幹，得320g石油醚提取物，其具有前述的定性反應特徵。
實施例2無毒棉花籽乙醇的取物的製備將實施例1中藥渣用乙醇提取，每次用15升，提取三次，合併提取液，蒸發至幹，得510g乙醇提取物，其也具有前述的定性反應特徵。
實施例3無毒棉花籽正丁醇和水提取物的製備將實施例2中乙醇提取物溶於水，過濾，濾液於正丁醇和水之間分配提取，得20g正丁醇提取物和490g水提取物，它們皆具有前述的定性反應特徵。
本發明提取物的生物活性抗焦慮作用實驗1．大鼠安全信號撤除(safety signal withdrawol)實驗(1)方法(參見文獻Thiebot MH．等人，精神藥理(Psychopharmacology),1991,103:415-24)實驗用MED大鼠操作箱系統(美國Med公司)進行。雄性Wistar大鼠，初始體重100-130g，實驗結束時體重170～220g。動物隨機分組。分訓練和實驗二個階段。訓練時讓大鼠學會按固定比率(FR)1強化(FR1，即每壓杆一次獲得一粒食丸)，接著過度到FR2、FR4和FR8，每天18分鐘，分為5個連續的時間段1,4分鐘；2,4分鐘；3,3分鐘；4,4分鐘；5,3分鐘。其中，1、3、5為非懲罰期，右燈亮(安全信號)，按FR8強化，2,4為懲罰期，左燈亮(懲罰信號)，按FR1強化的同時，給予隨機比率50％的足電擊。訓練穩定10天進行實驗。實驗程序保留上述前3個時間段(共11分鐘但在2期(即懲罰期)右燈(安全信號)關閉，不給電擊仍按FR1強化，記錄安全期(FR8,7分鐘)和安全信號撤除期(FR1,4分鐘)大鼠獲得食丸強化的次數。結果用ANOVA統計分析，組間比較Dunett’st檢驗。抗焦慮藥在不影響FR8強化的劑量增加FR1強化。結果見表1。
表1．在大鼠安全信號撤除實驗中實施例3的棉籽水提物的抗焦慮作用藥物(mg/kg)n 強化數安全期安全信號撤除期(FR8) (FR1)生理鹽水(對照) n 47±12 20±10地西泮1.0 38 46±833±9*丁螺環酮 1.0 1647±1445±8**實施例3的水提物 100.0 752±1024±13200.014 45±1331±10*400.017 46±1229±12*X±SD，與對照組比，*P＜0.05,**P＜0.01。
(2)討論從表1可以看出，抗焦慮藥地西泮和丁螺環酮在1mg/kg均可顯著增加安全信號撤除期的強化數，而對安全期無影響。實施例3棉籽水提取物100～400mg/kg也有類似作用，並呈一定的劑量關係，表現出抗焦慮作用。
2．大鼠Vogel(衝突實驗)(1)方法實驗用美國Lafayette公司生產的Model-102型焦慮儀，參考文獻張漢霆等，中國藥理學與毒理學雜誌，1995；9(4)254-7。雄性Wistar大鼠，初重180～220g，禁水48小時後體重為155～200g。大鼠隨機分組，禁水24小時後訓練其舔水，不加電擊，3分鐘內舔水不少於300次的繼續禁水48小時後進行實驗，同時足底給予0.3mA的電擊(每舔水20次給1次電擊)。儀器自動記錄3分鐘內舔水次數。抗焦虎藥使這指標增高。統計分析同前。結果見表2。
表2．在大鼠Vogel衝突模型上實施例3水提物的抗焦慮作用藥物(mg/kg) n舔水次數生理鹽水(對照) 9216±151地西泮 3.0 8467±142*實施例3水提物 100.07356±120200.09379±116400.08431±140*X±SD.與對照組比，*P＜0.05。
(2)討論從表2可見，地西泮3mg/kg可明顯增高大鼠衝突期舔水次數，實施例3水提物100～400mg/kg也可劑量依賴性地增加衝突期舔水次數，呈抗焦慮作用。
權利要求
1．無毒棉籽提取物，其中無毒棉籽來自無毒棉花成熟果實的種子。
2．製備無毒棉籽提取物的方法，其包括用有機溶劑，含水有機溶劑或水提取無毒棉籽。
3．權利要求2的方法，其中有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、石油醚或乙醚。
4．藥物組合物，其包括作為活性成份的權利要求1的無毒棉籽提取物和一種或多種藥用載體或賦形劑。
5．用於治療神經系統疾病，尤其是焦慮和/或抑鬱的藥物組合物，其包括作為活性成份的權利要求1的無毒棉籽提取物和一種或多種藥用載體或賦形劑。
6．權利要求1的無毒棉籽提取物用於製備治療神經系統疾病的藥物。
7．權利要求1的無毒棉籽提取物用於製備治療焦慮和/或抑鬱的藥物。
全文摘要
本發明涉及無毒棉籽提取物,其製備方法,含有它的藥組合物及其醫藥用途。
文檔編號A61P25/22GK1232675SQ98106650
公開日1999年10月27日 申請日期1998年4月17日 優先權日1998年4月17日
發明者趙毅民, 張漢庭, 楊明, 羅質璞, 欒新慧 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所