一種分級快速半定量測試排卵膠體金試紙及試劑盒的製作方法

2023-08-05 19:35:11

專利名稱:一種分級快速半定量測試排卵膠體金試紙及試劑盒的製作方法
【專利摘要】本實用新型「一種分級快速半定量測試排卵膠體金試紙及試劑盒」屬於醫用檢測耗材，包括左側試紙和右側試紙，兩側試紙在高度方向上包括基板支撐層、反應試劑載體吸附層，反應試劑載體吸附層固定在基板支撐層上，從加樣端到手持端依次設有樣品纖維墊，金標纖維墊，硝酸纖維素藥膜，手持端吸水材料墊，在金標纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護膜層，在纖維素藥膜上印製有條狀的且與試紙長度方向垂直的檢測線和質控線C線，從手持端到加樣端，左側試紙上的檢測線依次為T3，T1，右側試紙上的檢測線依次為T4,T2。本實用新型試紙可預估不同生理周期的LH濃度，用以預估排卵的時間，根據LH的高低判斷是否為正常LH水平，能否正常排卵。
【專利說明】
-種分級快速半定量測試排卵膠體金試紙及試劑盒
技術領域
[0001] 本實用新型屬於生物檢測領域，設及一種醫用檢測耗材，具體設及一種分級快速 半定量測試排卵膠體金試紙及試劑盒。
【背景技術】
[0002] 目前市面上大多數的排卵試紙都是採用膠體金方法進行檢測的，但均只能告知被 檢者是否在24-48小時內排卵，只能定性檢測尿液中是否含有LH，只有當尿液中LH濃度> 25mIU/ml時T線>0線，用於預測育齡婦女的排卵時間，不能定量檢測尿液中LH的濃度，不能 對育齡婦女的LH濃度和是否能正常排卵作出預判。 【實用新型內容】
[0003] 根據上述領域的需求和不足，本實用新型旨在提供一種分級半定量測試排卵膠體 金試紙，本實用新型試紙用於分級半定量快速檢測人尿液中的LH的濃度，本實用新型方法 利用不同濃度的顯示，一是可W繪製時間-濃度曲線，更精確的預測排卵時間，二是可W檢 測LH的不同濃度，對是否能正常排卵作出預判，可W 了解女性機體激素水平。
[0004] 本實用新型的技術方案如下：
[0005] -種半定量測試排卵膠體金試紙，其特徵在於，包括左側試紙和右側試紙，兩側試 紙在高度方向上包括基板支撐層、反應試劑載體吸附層，反應試劑載體吸附層固定在基板 支撐層上，且從加樣端到手持端依次設有樣品纖維墊，金標纖維墊，硝酸纖維素藥膜，手持 端吸水材料墊，在金標纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護膜層，在硝酸纖維素藥膜 上印製有條狀的且均與試紙長度方向垂直的檢測線和質控線C線，從手持端到加樣端，左側 試紙上的檢測線依次為T3，T1，右側試紙上的檢測線依次為T4，T2。
[0006] 在所述金標纖維墊上包被有膠體金標記的a-LH單抗;在所述1'1、了2、了3、了4線上分 別包被有包被濃度為0.5-lmg/ml，包被濃度為0.1-0.2，包被濃度為0.1-0.2mg/ml，包被濃 度為0 . Ol-O . 02mg/ml的P-LH抗體;所述質控線C線包被有羊抗鼠IgG多抗，其包被濃度為 0.2-lm邑/ml。
[0007] 所述Tl、T2、T3、W線上的P-LH抗體的單位面積包被量比值為50:10:10:1。
[0008] 所述試紙為測試條二合一、雙聯板，或雙聯筆。
[0009] -種分級快速半定量測試排卵膠體金雙聯試劑盒，其特徵在於:包括上述的膠體 金試紙。
[0010] 還包括由盒體和盒蓋構成的兩個並列的盒封閉體，所述盒體內設有安裝膠體金試 紙條的定位槽，所述盒體設有連接裝置，兩個盒體之間通過連接裝置可拆卸式連接。當兩 個試劑盒拆開時可分別單獨使用。
[0011] 所述盒蓋上均設有加樣孔和結果觀察孔;當所述膠體金試紙條放置於盒體內的定 位槽時，對應於盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊;對應於結果觀察孔處為硝酸纖維素藥膜。
[0012] 所述連接裝置為兩個，分別為可拆卸式裝置1和可拆卸式裝置2,並分別設於兩個 盒封閉體的對應於加樣孔和結果觀察孔的邊緣處。
[0013] 兩個並列的試劑盒均為長方形。生產、安裝、運輸、使用、保存極為方便，簡單大方。
[0014] 技術效果：
[0015] 本實用新型通過四條檢測線實現4種濃度的檢測，左側反應區包被有C、T3、T1 =條 線，Tl為高靈敏度，最低能檢測LH濃度為lmIU/ml，T3最低能檢測L田農度為25mIU/ml，右側反 應區包被有C、T4、T2S條線，T2最低能檢測hLH濃度為5mIU/ml，T4最低能檢測hLH濃度為 65mIU/ml〇
[0016] 本實用新型一是採用包被不同濃度的捕捉抗體可W捕捉不同濃度的LH，來區分不 同的檢測靈敏度，二是採用包被不同位置的捕捉抗體，來區分不同的檢測靈敏度。如果尿液 中含有LH，將與金標a-LH單抗反應形成複合物，在層析作用下，被預先固定在膜上的P-LH單 抗捕獲，在檢測區內形成1-4條紫紅色條帶(T1/T2/T3/T4)，根據尿液中LH的濃度決定與反 應區的1'1^2^3、1'4哪條線反應。
[0017] 本實用新型產品在使用時，同時在兩側試紙的加樣端加入尿液，根據檢測線的顯 色情況從而預測排卵時間，可W檢測LH的不同濃度，對是否能正常排卵作出預判，從而了解 女性機體激素水平。
[001引本實用新型可W根據所檢測的LH情況，預測排卵時間和女性生理周期hLH水平，根 據W下參考值，將測試條設計成四條檢測線：
[0019] LH值參考範圍(單位:IU/L)
[0020] 男：1.5-9.3
[0021] 女:卵泡期 1.9-12.5
[0022] 排卵期8.7-76.3
[0023] 黃體期0.5-16.9
[0024] 絕經期 15.9-54 [002引妊娠期0-1.5
[0026] 血LH的濃度，
[0027] 在排卵前期為2~15mIU/ml
[0028] 排卵期為 30 ~lOOmIU/ml，
[00巧]卵後期為4~lOmIU/ml。
[0030] 一般在非排卵期的正常值是2~25mIU/ml。
[0031] 設計四條檢測線的意義：
[0032] Tl敏感性ImIU/ml: Tl線會顯色，提示有可能未在排卵期。
[0033] T2敏感性5mIU/ml: Tl和T2線會顯色，提示有可能未在排卵期。
[0034] T3敏感性25mIU/ml: Tl、T2和T3線會顯色，提示有可能在排卵期。
[0035] T4敏感性65mIU/ml: Tl、T2、T3和T4線會顯色，提示有可能在排卵期。
[0036] 如果測試結果在女性的生理周期中一直只有Tl顯色或四條線全部顯色考慮異常 情況。
[0037] 本實用新型產品及方法為半定量測試，可W得知女性生理周期尿液中L田農度範圍 值，從而利用不同含量的顯示用於排卵的預測，W及女性生理周期LH水平是否正常。本實用 新型試紙利用不同濃度的顯示用於排卵的預測，可預估女性不同生理周期的不同促黃體生 成素（W下簡稱LH)濃度，用W預估排卵的時間，根據LH的高低可W判斷是否為正常LH水平， 能否正常排卵。
[0038] 在月經周期LH的釋放高峰與卵巢排卵有著密切關係，LH高峰一經出現，預示24-36 小時卵巢排卵，因此可W在月經周期中監測血清LH峰值(排卵期為30~lOOmIU/ml)，W確定 最佳受孕時間。LH可促使女性排卵並且形成黃體分泌孕激素，是受孕的一個條件，但是如果 運個平衡被打破就會出現受孕障礙，那麼，LH都有一個標準值，LH由腺垂體前葉嗜鹼性細胞 所分泌。檢查的時候如果LH不正常，出現偏高或者偏低，就會影響雌激素功能，最終會導致 女性不能正常排卵。LH偏高與機體內分泌素亂有關，出現LH偏高可使卵巢功能失調，使雌孕 激素水平分泌失衡，從而影響卵泡的發育，導致排卵障礙，也可造成不孕症。
[0039] 現有方法學試劑的現狀及局限
[0040] 1、25年前經典傳統的方法學、產品設計和使用理念；
[0041] 2、被人垢病的單一定性主觀性判讀或經驗型猜測結果；
[0042] 3、20多年如一日缺乏創新和研發；
[0043] 4、良莽不齊的廠家，偽劣品質的粗糖亂造，CffiM和假冒品牌，價格貧瘡和市場的混 亂，被作死的產品。
[0044] 本實用新型產品新方法和試劑特點
[0045] 1、新概念的引領使用，方法學原劑型生命周期的延展和更新；
[0046] 2、科學客觀地實現了從定性到半定量的快速檢測；
[0047] 3、依然是用尿液樣本測試，較比血定量更有實用性、普遍性和經濟性；
[0048] 4、分級區劃可W對比分析預測排卵期天數，甚至到12小時之內；
[0049] 5、輔助性的配件還可W勾畫出排卵期曲線。
【附圖說明】
：
[0050] 圖1本實用新型左側試紙的俯視圖；
[0051 ]圖2本實用新型右側試紙的俯視圖；
[0052] 圖3本實用新型試紙的縱向剖面圖；
[0053] 圖4本實用新型雙聯試劑盒俯視圖；
[0054] 圖5本實用新型雙聯試劑盒仰視圖；
[0055] 其中：1-手持端，2-質控線C線，3-檢測線Tl線，4-MAX標誌線，5-加樣端，6-硝酸纖 維素藥膜層，7-樣品纖維層，8-手持端吸水材料層，9-金標纖維層，10-大無紡布，11-小無紡 布，12-手持端膠帶，13-箭頭膠帶，14-基板支撐層，15-檢測線T3線，16-檢測線T2線，17-檢 測線T4線，18-盒蓋，19-盒體，20-加樣孔，21-結果觀察孔，22-可拆卸連接裝置1,23-可拆卸 連接裝置2。
【具體實施方式】：
[0056] 提供下述實施例是為了更好地進一步理解本實用新型，並不局限於所述最佳實施 方式，不對本實用新型的內容和保護範圍構成限制，任何人在本實用新型的啟示下或是將 本實用新型與其他現有技術的特徵進行組合而得出的任何與本實用新型相同或相近似的 產品，均落在本實用新型的保護範圍之內。
[0057] 根據膠體金檢測的原理，將本實用新型的膠體金試紙條的加樣端浸入尿液中，或 者在加樣端的樣品纖維層滴加尿液，尿液中的物質在纖維層材料的毛細作用下沿著試紙條 從加樣端向手持端移動，當尿液中含有LH時，尿液隨著層析作用先與膠體金標記的a-LH抗 體反應，當爬行至反應區又與P-LH抗體反應，根據尿液中LH的含量決定與反應區的Tl、T2、 T3、T4哪條線反應。
[0058] 實施例1.試劑盒的製備
[0化9] 1試紙條的製備：
[0060] 1.1 包被
[00川 1.1.1準備：用抑7.4 IOmM PBS稀釋P-LH單抗，分別配製成0.5mg/ml (用於Tl), 0.1 mg/ml (用於T2、T3)，0.0 lmg/ml (用於T4);用pH7.4 IOmM PBS稀釋抗鼠 IgG多抗，配製成 0.2mg/ml用於C線的包被。將硝酸纖維素膜裁切成270mm*19mm。
[0062] 1.1.2 包被
[0063] 1.1.2.1左側反應區包被
[0064] 用BIODOT包被機進行包被，左側反應區的包被尺寸為C線上邊緣距膜上邊緣為 6.5111111，1'1下邊緣距膜下邊緣為6.5111111，然後將(：^3、1'1^條線均分，^條線中屯、線間距約為 2.6臟，口'線寬度為0.8±0.1臟，^條線的包被量為0.祉1/畑1，包被速度為70111111/3。包被完畢 後，乾燥6小時，乾燥溫度控制在35-40°C，溼度《35%，乾燥後加乾燥劑4-30°C密封保存。 [00化]1.1.2.2右側側反應區包被
[0066] 用BIODOT包被機進行包被，右側反應區的包被尺寸為C線上邊緣距膜上邊緣為 6.5111111^2下邊緣距膜下邊緣為6.5111111，然後將0^4^2^條線均分，^條線中屯、線間距約為 2.6臟，口'線寬度為0.8±0.1臟，^條線的包被量為0.祉1/畑1，包被速度為70111111/3。包被完畢 後，乾燥6小時，乾燥溫度控制在35-40°C，溼度《35%，乾燥後加乾燥劑4-30°C密封保存。
[0067] 1.2 標記
[0068] 1.2.1膠體金顆粒的製備
[0069] 1.2.1.1準備:所用玻璃儀器為化S角燒瓶，用之前反覆清洗，驚幹後備用。配製 2 %氯金酸40ml和2 %巧樣酸S鋼50ml備用。
[0070] 1.2.2.2量取2000ml電阻18MQ W上超純水於S角燒瓶中，並量取2%氯金酸溶液 40ml也加入=角燒瓶中，此時溶液為黃色，將其加熱至沸騰後再加入2%巧樣酸=鋼溶液 50ml，沸騰後溶液變成紫紅色，繼續煮沸後5分鐘停止加熱，並加上蓋，室溫中自然冷卻備 用。
[0071] 1.2.3膠體金標記a-LH單抗
[0072] 1.2.3.1首先取膠體金35ml，先加入0.2M K2C03調節抑，加入量為祉1/ml，然後加 入口-LH單抗與膠體金結合，蛋白濃度為20μg/ml，反應15分鐘，然後加入牛血清白蛋白20山/ ml進行封閉，再反應15分鐘後，進行1000化pm，30分鐘離屯、，棄上清液，沉澱用IOmM化is緩 衝系統(含有巧樣酸S鋼0.3%，1.2%。日36111，0.05%?￥?40,0.7%1胖20,2.5%薦糖，1%葡 萄糖，0.1 % NaN3) 10 %復溶，即得膠體金標記a-LH單抗原液3.5ml。
[0073] 1.3金標墊的製備
[0074] 量取IOmM Tris緩衝溶液（含有巧樣酸立鋼0.3%，1.2%casein，0.05%PVP40， 0.7%TW20，2.5%薦糖，1 %葡萄糖，0.1 %化N3)31.5ml，與膠體金標記a-LH單抗原液3.5ml 混合均勻，鋪在30cm*30cm玻璃纖維上，乾燥6小時，乾燥溫度控制在35-40°C，溼度《35%， 乾燥後加乾燥劑4-30°C密封保存。
[00巧]1.4樣品墊的製備：首先配製pH 9.0的IOmM Tris緩衝液，並同時加入0.5% casein，1 %PVP40，0.1 % tritonlOO，0.05%化N3混勻，量取35ml液體鋪在30*30cm玻璃纖維 上，乾燥6小時，乾燥溫度控制在35-40°C，溼度《35%，乾燥後加乾燥劑4-30°C密封保存。
[0076] 1.4產品貼板、裁測
[0077] 將1.1-1.3W上組分分別貼在帶有背膠的塑料板上，切成規定條寬的測試條，用 PBS進行在線檢測，合格後送QC進行半成品檢測。
[007引 1.5包裝
[0079] 將QC檢測合格的測試條組裝成條型、板型或筆型，裝入侶錐袋中，裝乾燥劑，封口， 裝盒，裝箱，然後送QC進行成品檢測。
[0080] 2.使用方法：
[0081 ]條型：
[0082] 1.待測樣品、檢測試紙或其他檢測用材料等均在室溫I(rc-3(TC平衡，然後將侶錐 袋沿切口撕開，取出試紙。
[0083] 2.將測試紙有箭頭的一端插入尿液標本容器中，5秒鐘後取出平放，5分鐘觀察顯 示結果。
[0084] 3.測試紙插入尿液深度不可超過MAX標誌線。
[0085] 板型；
[0086] 1.待測樣品、檢測試板或其他檢測用材料等均在室溫I(rc-3(TC平衡，然後將侶錐 袋沿切口撕開，取出測試板及滴管。
[0087] 2.將測試板平放，用滴管垂直加2-3滴尿樣於各加樣孔中。5分鐘在觀察孔中觀察 顯不結果。
[008引筆型；
[0089] 1.待測樣品、測試筆或其他檢測用材料等均在室溫i(Tc-3(rc平衡，然後將侶錐袋 沿切口撕開，取出測試筆。
[0090] 2.將筆帽拔開，拿住測試筆手持端將尿液直接淋在測試筆採集端約5秒。5分鐘在 觀察孔中觀察顯示結果。
[0091] 3.判讀結果
[0092] 3.1.1 陽性
[0093] 有W下兩種情況：
[0094] 3.1.1.1 C線、Tl、T2和T3線顯色，提示：25mIU/ml《LH濃度65mIU/ml，有可能在排卵期。
[0096] 3.1.2 陰性
[0097] 有W下S種情況：
[0098] 3.1.2.1僅在質控線位置(C)顯色，提示LH濃度< ImIU/ml，有可能未在排卵期。
[0099] 3.1.1.2 C線、Tl線顯色，提示濃度<5mIU/ml，有可能未在排卵期。
[0100] 3.1.1.3 C線、Tl和T2線顯色，提示：5mIU/ml《LH濃度<25mIU/ml，有可能未在排 卵期。
[0101] 3.1.3 無效
[0102] 質控線不顯色，或僅在檢測線位置(T1-T4)顯色，表明實驗失敗或產品失效。
[0103] 根據個人生理周期計算有可能排卵的日期，測試5-7天，根據測試濃度繪製曲線， 確定LH峰值。
[0104] 包被及檢測情況如表1:
[0105] 表1如下
[0106]
[0107] 結果分析:通過W上結果可知，包被濃度和最低檢測濃度呈反向關係，包被濃度越 高，所能檢測的濃度越低;捕捉抗體先後和最低檢測濃度呈反向關係，先和T線反應的靈敏 度較高，也就是所能檢測的濃度較低。
[0108] 實施例2.本實用新型產品的效果性能驗證。
[0109] 表2
[0110]
[01
[0112] 結果分析：
[0113] 通過對育齡婦女排卵前後尿液的檢測，可W看出Tl-W檢測線的逐漸顯色，能夠找 到LH峰值，用來預測排卵時間。
[0114] 實施例3.本實用新型產品與現有技術的產品的對比試驗
[0115] 表3
[0116]
[0117]結果分析：
[011引根據W上結果得知，現有技術只能區分陰性和陽性，而本實用新型產品可W根據 不同檢測線的出現判斷育齡婦女尿液中L田農度，可W找出更準確的LH峰值，更準確的推算 排卵時間。
[0119] 實施例4.本實用新型產品的效果驗證
[0120] 表4型式檢驗報告
[0121]
[0122]
[0123]
[0124] 結果分析：
[0125] 根據W上結果得知，本實用新型產品的物理性狀、最低檢測限、特異性、重複性、穩 定性、批間差均滿足目前國家標準，而且在此基礎上區分了女性不同生理周期的LH濃度。
【主權項】
1. 一種半定量測試排卵膠體金試紙，其特徵在於，包括左側試紙和右側試紙，兩側試紙 在高度方向上包括基板支撐層、反應試劑載體吸附層，反應試劑載體吸附層固定在基板支 撐層上，且從加樣端到手持端依次設有樣品纖維墊，金標纖維墊，硝酸纖維素藥膜，手持端 吸水材料墊，在金標纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護膜層，在硝酸纖維素藥膜上 印製有條狀的且均與試紙長度方向垂直的檢測線和質控線C線，從手持端到加樣端，左側試 紙上的檢測線依次為T3，T1，右側試紙上的檢測線依次為T4，T2。2. 根據權利要求1所述的半定量測試排卵膠體金試紙，其特徵在於，在所述金標纖維墊 上包被有膠體金標記的〇-1^單抗;在所述1'1、12、13、14線上分別包被有包被濃度為0.5_ 1 · Omg/ml，包被濃度為0 · 1-0 · 2mg/ml，包被濃度為0 · 1-0 · 2mg/ml，包被濃度為0 · 01-0 · 02mg/ ml的β-LH抗體;所述質控線C線包被有羊抗鼠 IgG多抗，其包被濃度為0.2-lmg/ml。3. 根據權利要求1所述的半定量測試排卵膠體金試紙，其特徵在於，所述T1、T2、T3、T4 線上的β-LH抗體的單位面積包被量比值為50:10:10:1。4. 根據權利要求1所述的半定量測試排卵膠體金試紙，其特徵在於，所述試紙為測試條 二合一、雙聯板，或雙聯筆。5. -種分級快速半定量測試排卵膠體金雙聯試劑盒，其特徵在於:包括權利要求1-4任 一所述的膠體金試紙。6. 根據權利要求5所述的半定量測試排卵膠體金雙聯試劑盒，其特徵在於，還包括由盒 體和盒蓋構成的兩個並列的盒封閉體，所述盒體內設有安裝膠體金試紙條的定位槽，所述 盒體設有連接裝置，兩個盒體之間通過連接裝置可拆卸式連接。7. 根據權利要求6所述的半定量測試排卵膠體金雙聯試劑盒，其特徵在於，所述盒蓋上 均設有加樣孔和結果觀察孔；當所述膠體金試紙條放置於盒體內的定位槽時，對應於盒蓋 加樣孔處為樣品纖維墊;對應於結果觀察孔處為硝酸纖維素藥膜。8. 根據權利要求7所述的半定量測試排卵膠體金雙聯試劑盒，其特徵在於，所述連接裝 置為兩個，分別為可拆卸式裝置1和可拆卸式裝置2,並分別設於兩個盒封閉體的對應於加 樣孔和結果觀察孔的邊緣處。9. 根據權利要求8所述的半定量測試排卵膠體金雙聯試劑盒，其特徵在於，兩個並列的 試劑盒均為長方形。
【文檔編號】G01N33/558GK205720253SQ201620118770
【公開日】2016年11月23日
【申請日】2016年2月6日
【發明人】聶麗芳, 祝明, 張學敏, 劉曉翠
【申請人】藍十字生物藥業（北京）有限公司