從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法
2023-07-24 23:33:46
專利名稱：從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法
技術領域：
本發明涉及一種從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。
背景技術：
從60年代起，抗癌新藥的發現主要是從原始植物的代謝產物中尋找，就是目前正在使用的幾種抗癌化療試劑，也都是從高等植物中提取的化合物。比如從長春花中分離出的「長春花類生物鹼」。從盾葉鬼白中分離得到的「表鬼白毒素」類衍生物。從喜樹中分離得到的「喜樹鹼類衍生物」。以至到現在的從紅豆杉中分離得到的「紫杉二帖類」成份等。紫杉醇的分子式為=C47H51NO14是萜類環狀結構的天然次生代謝物。主要由紫杉烷環和側鏈組成。紫杉醇是目前世界上發現的最有效的抗癌物質之一，國外人工合成的紫杉醇價格是天然提取的數百倍。提取的原料紅豆杉屬植物在全世界共有十一種，目前我國共有四個種和一個變種，即雲南紅豆杉、西藏紅豆杉、東北紅豆杉、中國紅豆杉和變種南方紅豆杉。當前，獲得紫杉醇的方法主要有1.天然提取，2.人工合成，3.半人工合成，4.生物發酵。後三種方法大都停留在實驗室階段。例如(I)紫杉醇的生物合成研究其生物合成，對於人為定向的提高合成效率及克隆組合，形成關鍵的酶的基因，提高紫杉醇的產量意義重大。目前的關鍵是能否找到一兩個關鍵酶的發現，並使得其基因純化和基因克隆。克隆紅豆杉基因能否突破還有待於觀察，不過人們已經找到的假想途徑，目前這些技術還處在實驗室階段。(2)紫杉醇的化學合成根據研究及報導從紅豆杉植物中分離得到的10-去乙醯漿果赤黴素IIK巴卡亭III)，顯然活性低 於紫杉醇，但可以從紅豆杉針葉中提取。該物質經過四步化學過程可合成紫杉醇。提供了紫杉醇新來源途徑，具有重大意義。以NIC0LA0U博士為首的美國研究小組在1994年報導通過化學方法全合成紫杉醇的結果。但化學合成從實質意義上說還沒有取得徹底的突破，目前還不具備應用價值。(3)紫杉醇的微生物合成STTERLE等從短葉紅豆杉韌皮部分，分離得到一種寄生真菌taxo myces an dreanae)。可以在特定的培養基中產生紫杉醇及相關烴合物,但由於目前產量極低，所以還不能在生產中得到應用。通過研究還發現根是除樹皮外紫杉醇含量最高的器官。人們利用髮根農桿菌(agrobac terium rhizogenes)浸然紅豆杉植物外植體誘導生根。這一辦法不需外援激素，髮根生長迅速，遺傳性狀穩定而受到重視。如能把尋找合成紫杉醇或其類似衍生物，從微生物合成途徑中，定向得到關鍵酶和克隆紅豆杉相關基因結合起來，可使這一方法得到突破。但目前在工業化生產中，國內外主要從紅豆杉屬植物中提取來獲得紫杉醇。生產成本相對較低，產量也相對較大。目前現有的紅豆杉提取紫杉醇的方法是粉碎，溶劑浸提，浸出液濃縮得深綠色膏狀物，溶劑提取，矽膠柱層析後得到粗產品，再經過重新結晶純化和柱層析分離獲得紫杉醇。但在天然提取的方法中，關鍵是提取分離方法，但由於紫杉醇在植物中化學性質不穩定，在植物中含量低，因此提取難度相當大。
上述提取方法中，在柱層分離時，至少要經過2-3個柱分離用梯度洗脫，梯度洗脫所用溶劑量大，但是樣品被分離成分含量低，分離麻煩，在柱分離的每個流分均要用薄層層析監測成分後，待合併再分離。
發明內容
本發明的主要目的是提供一種操作簡潔，粗產品的獲得率高的從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。為實現上述發明目的，本發明所採用的技術方案是一種從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，步驟包括原料樹皮或根皮或枝葉粉碎，然後用重量比6 12倍量的水滲透浸泡；浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=(0. 8 1. 3) 1 ；然後以石灰水調pH值到7. 0 8. 0，沉澱過濾後；慮液用氯仿為溶劑萃取；萃取液減壓濃縮乾燥得到紫杉醇幹膏。優選的，所述的原料粉碎後用6 8倍量的水浸泡，浸泡溫度28 38°C。優選的，所述的浸膏`稀釋的用水體積比為水浸膏的=1 :1。優選的，所述的萃取液減壓濃縮的壓力為-0.1 -0. 3MPa，溫度60 65°C ;濃縮到含水率20%以下。本發明的有益技術效果本發明的方法操作簡單，不使用複雜的儀器設備，通過在特定濃度和特定酸鹼度條件下進行沉澱過濾可以除去絕大部分雜質；方便了進一步提純或使用。幹膏的純度高，經本發明的方法處理得到的幹膏純度達到70%以上。並且生產過程中除了氯仿沒有添加其它有機物質；而所添加的氯仿沸點低，極易蒸餾除去。所以本發明的幹膏可以直接作為原料使用。也可以進一步純化，滿足更苛刻的場合使用。
具體實施例方式為使本領域技術人員更加清楚本發明的技術方案和有益技術效果，下面提供本發明的優選實施例，但本發明的技術並不僅限於以前實施例。實施例一雲南紅豆杉樹皮Ikg用粉碎機粉碎,然後用重量比6倍量的水滲透浸泡；浸泡溫度300C ;浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=1 1 ;然後以石灰水調pH值到7.0，沉澱過濾後；慮液用體積比2倍量的氯仿為溶劑萃取；萃取液在-0. 2MPa壓力下減壓濃縮乾燥得到含水率18%的紫杉醇幹膏156g，HPLC分析純度達76%。實施例二雲南紅豆杉樹皮0. 8kg、根皮0. 2kg用粉碎機粉碎，然後用重量比8倍量的水滲透浸泡；浸泡溫度35°C ;浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=1 1 ;然後以石灰水調PH值到7. 5，沉澱過濾後；慮液用體積比1. 5倍量的氯仿為溶劑萃取；萃取液在-0.1MPa壓力下減壓濃縮乾燥得到含水率19%的紫杉醇幹膏191g，HPLC分析純度達73%。實施例三雲南紅豆杉樹枝葉Ikg用粉碎機粉碎，然後用重量比8倍量的水滲透浸泡；浸泡溫度32°C;浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=1 I ;然後以石灰水調PH值到7. 5，沉澱過濾後；慮液用體積比2倍量的氯仿為溶劑萃取；萃取液在-0. 2MPa壓 力下減壓濃縮乾燥得到含水率15%的紫杉醇幹膏132g，HPLC分析純度達71%。
權利要求
1.一種從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，步驟包括 原料樹皮或根皮或枝葉粉碎，然後用重量比6 12倍量的水滲透浸泡； 浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏； 浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=(0. 8 1. 3) :1 ; 然後以石灰水調pH值到7. 0 8. 0,沉澱過濾後； 慮液用氯仿為溶劑萃取； 萃取液減壓濃縮乾燥得到紫杉醇幹膏。
2.根據權利要求1所述的從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特徵在於所述的原料粉碎後用6 8倍量的水浸泡，浸泡溫度28 38°C。
3.根據權利要求1所述的從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特徵在於所述的浸膏稀釋的用水體積比為水浸膏的=1 :1。
4.根據權利要求1所述的從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特徵在於所述萃取液減壓濃縮的壓力為-0.1 -0. 3MPa，溫度60 65°C ;濃縮到含水率20%以下。
全文摘要
本發明涉及一種從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。目的是提供一種操作簡潔，粗產品的獲得率高的從雲南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。步驟包括原料樹皮或根皮或枝葉粉碎，然後用重量比6～12倍量的水滲透浸泡；浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=(0.8～1.3)1；然後以石灰水調pH值到7.0～8.0，沉澱過濾後；慮液用氯仿為溶劑萃取；萃取液減壓濃縮乾燥得到紫杉醇幹膏。本發明的方法操作簡單，不使用複雜的儀器設備，通過在特定濃度和特定酸鹼度條件下進行沉澱過濾何以除去絕大部分雜質。方便了進一步提純。幹膏的純度高，經本發明的方法處理得到的幹膏純度達到70%以上。
文檔編號C07D305/14GK103058961SQ20131002964
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月28日 優先權日2013年1月28日
發明者孫健峰 申請人:普洱市紅寶生物科技有限公司