一種水產養殖益生菌cw9活菌乾粉製劑及製備方法
2023-07-24 21:23:06
專利名稱:一種水產養殖益生菌cw9活菌乾粉製劑及製備方法
技術領域：
本發明涉及一種用於水產養殖益生菌CW9的活菌乾粉製劑，本發明還涉及該乾粉製劑的製備方法。
背景技術：
中國專利201010572426. 6，公開號CN 102485884A公開了ー種節桿菌CW9及其用
途，該菌可用於提高海水甲殼類幼體的變態率與存活率。對多種甲殼類動物幼體具有益生作用，其生產和儲運方法簡單，使用方法簡便；該益生菌只在甲殼類動物蚤狀一期投放，即可提聞和穩定幼體後期的變態率，從而大幅度提聞苗種廣量。
現有技術中益生菌製劑的製備エ藝較多，但都不適合甲殼類水產養殖動物幼體的使用。例如，有內服的益生菌製劑是固態發酵後単獨或與飼料混合後乾燥、粉碎，這樣的產品顆粒太大，對於濾食的甲殼類水產養殖動物幼體，無法取食。或者是多種益生菌製成片劑潑灑到水體中，又或者更多的是用於調節水質。有的則是將發酵液直接包裝成水劑，或離心後做成濃縮的水劑。無論哪種水劑，都不便於運輸，且保藏周期短，保藏過程死亡率很高並且容易感染雜菌。實驗室規模可以用以用冷凍乾燥的方法生產菌劑，但凍幹菌粉有很多不利，凍乾耗時，價格昂貴，冷凍濃縮轉化和儲藏費用高，解凍過程菌種存貨量減少。
水產養殖益生菌CW9已於2010年10月8日交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏編號為CGMCC NO. 4197。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑及製備方法，可以有效提高活菌乾粉製劑的存活率。
為解決上述技術問題，本發明所採用的技術方案是ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑
以體積計的4份發酵液離心後去上清液，沉澱的菌泥加入I份保護劑，重新懸浮，噴霧乾燥，得到水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑；
所述的保護劑按照以下質量比配製
明月交O. 1-0. 2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80ト3份，司班-60ト3份，水100份。
優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製
明膠O. 15份，脫脂奶粉25份，吐溫-80 3份，司班-60 2份，水100份。
優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製
明膠O. I份，脫脂奶粉25份，吐溫-80 2份，司班-60 2份，水100份。
優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製
明膠O. 2份，脫脂奶粉20份，吐溫-80 3份，司班-60 2份，水100份。
優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製
明膠O. I份，脫脂奶粉30份，吐溫-80 3份，司班-60 3份，水100份。
4[0018]一種製備上述製劑的製備方法，包括以下步驟
一、製備發酵液；
ニ、製備保護劑，所述的保護劑按照以下質量比配製
明月交O. 1-0. 2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80ト3份，司班-60ト3份，水100份，保護劑的配製方法為攪拌混合；
三、以體積計的4份發酵液,7000rpm離心8min後去上清液,沉澱的菌泥加入I份
保護劑，重新懸浮；
四、噴霧乾燥，入口溫度100°C，出口溫度65°C，流量為300_400ml/h，收集噴霧乾燥後的乾粉菌劑；
通過上述步驟，得到水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑。
步驟一中，發酵培養基為葡萄糖8g/L，蛋白腖5g/L，酵母膏3g/L，氯化鈉2g/L，pH7. 0,115°C滅菌20min，種子培養基與發酵培養基相同；
擴大培養，用隔夜培養的斜面接種250ml搖瓶，內置IOOml種子培養基，37°C，搖床180轉/分鐘，培養23小時；
發酵，接種量3%，通氣比I O. 8，攪拌轉速300轉/分鐘，37°C，培養18小時。
步驟ニ中，優化的方案為，所述的保護劑按照以下質量比配製
明膠O. 15份，脫脂奶粉25份，吐溫-80 3份，司班-60 2份，水100份。
乾粉製劑活化時，乾粉製劑與活化液質量體積比I : 10g/ml，活化液中糖的質量-體積濃度20-60g/L，活化溫度32-42 °C。
優化的方案中，乾粉製劑活化時，乾粉製劑與活化液質量體積比I : 10g/ml，即I克乾粉製劑需要10毫升活化液進行活化，活化液中糖的質量-體積濃度為40g/L，活化溫度37。。。
一種用於水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑的保護劑按照以下質量比配製
明月交O. 1-0. 2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80ト3份，司班-60ト3份，水100份。
本發明提供的ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑及製備方法，噴霧乾燥每千克的成本僅為凍幹的1/6 ;且噴霧乾燥粉末運輸成本低；能長期穩定儲存，採用優化的保護劑有效地提高了乾粉製劑中益生菌CW9的存活率，可以達到56. 5%。且實驗結果表明，貯存6個月之後仍然有20%的存活率。
下面結合附圖和實施例對本發明作進ー步說明
圖I為本發明產品的貯存效果曲線圖。
具體實施方式
實施例I : ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑，
以體積計的4份發酵液離心後去上清液，沉澱的菌泥加入I份保護劑，重新懸浮，噴霧乾燥，得到水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑；
所述的保護劑按照以下質量比配製
明月交O. 1-0. 2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80ト3份，司班-60ト3份，水100份。[0041]作為對比，試驗選用了較多的保護劑進行篩選，選用的保護劑有甘油(4%，6%，8% )、海藻糖(3%，5%，7% )、脫脂奶粉(10%，15%，20%，25%，30% )、吐溫-80 (O. 5%,2%, 3. 5%)、蔗糖(5%，10%，15%)、司班-60 (O. 5%, 2%, 3. 5%)、L_穀氨酸鈉(1%，2%，3% )、明膠)(以上保護劑都是質量分數)。取400ml發酵液，7000rpm離心8min後去上清液，加入IOOml保護劑水溶液將菌泥重新懸浮，取IOml於無菌試管中，65°C水浴保溫30s，測活菌數，計算存活率。
發酵液濃度為5X 109cfu/ml，保溫前總菌數2. OX IO12個。以10_7平板計數菌落，計數按5%的誤差計算，具體數據見表I。
表I單因素保護劑保溫實驗
權利要求
1.ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑，其特徵是 以體積計的4份發酵液離心後去上清液，沉澱的菌泥加入I份保護劑，重新懸浮，噴霧乾燥，得到水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑； 所述的保護劑按照以下質量比配製 明膠O. 1-0. 2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份。
2.根據權利要求
I所述的ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑，其特徵是優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製 明膠O. 15份，脫脂奶粉25份，吐溫-80 3份，司班-60 2份，水100份。
3.根據權利要求
I所述的ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑，其特徵是優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製 明膠O. I份，脫脂奶粉25份，吐溫-80 2份，司班-60 2份，水100份。
4.根據權利要求
I所述的ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑，其特徵是優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製 明膠O. 2份，脫脂奶粉20份，吐溫-80 3份，司班-60 2份，水100份。
5.根據權利要求
I所述的ー種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑，其特徵是優化的方案中，所述的保護劑按照以下質量比配製 明膠O. 15份，脫脂奶粉25份，吐溫-80 3份，司班-60 I份，水100份。
6.ー種製備權利要求
1-5任ー項所述製劑的製備方法，其特徵是包括以下步驟 一、製備發酵液； ニ、製備保護劑，所述的保護劑按照以下質量比配製 明膠O. 1-0. 2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份； 三、以體積計的4份發酵液,7000rpm離心8min後去上清液,沉澱的菌泥加入I份保護劑，重新懸浮； 四、噴霧乾燥，入口溫度100°C，出ロ溫度65°C，流量為300-400ml/h，收集噴霧乾燥後的乾粉菌劑； 通過上述步驟，得到水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑。
7.根據權利要求
6所述的ー種製備方法，其特徵是步驟一中，發酵培養基為葡萄糖8g/L，蛋白腖5g/L，酵母膏3g/L，氯化鈉2g/L，pH7. 0,115°C滅菌20min，種子培養基與發酵培養基相同； 擴大培養，用隔夜培養的斜面接種250ml搖瓶，內置IOOml種子培養基，37°C，搖床180轉/分鐘，培養23小時； 發酵，接種量3%，通氣比I : O. 8，攪拌轉速300轉/分鐘，37°C，培養18小時。
8.根據權利要求
6所述的ー種製備方法，其特徵是步驟ニ中，優化的方案為，所述的保護劑按照以下質量比配製 明膠O. 15份，脫脂奶粉25份，吐溫-80 3份，司班-60 2份，水100份。
9.根據權利要求
6-8任一項所述的一種製備方法，其特徵是乾粉製劑活化吋，乾粉製劑與活化液質量體積比I : 10g/mL，活化液中糖的質量體積濃度20-60g/L，活化溫度32-42。。。
10.一種用於水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑的保護劑其特徵是按照以下質量比配製明膠O. 1-0. 2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份。
專利摘要
一種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑，以體積計的4份發酵液離心後去上清液，加入1份保護劑，將菌泥重新懸浮，噴霧乾燥，得到水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑；所述的保護劑按照以下質量比配製明膠0.1-0.2份，脫脂奶粉20-30份，吐溫-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份。本發明提供的一種水產養殖益生菌CW9活菌乾粉製劑及製備方法，噴霧乾燥每千克的成本僅為凍幹的1/6；且噴霧乾燥粉末運輸成本低；能長期穩定儲存，採用優化的保護劑有效地提高了乾粉製劑中益生菌CW9的存活率，可以達到56.5％。且實驗結果表明，貯存6個月之後仍然有20％的存活率。
文檔編號C12N1/04GKCN102911893SQ201210303517
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月13日
發明者朱明 , 夏振強 申請人:淮海工學院導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan