哺乳動物細胞因子受體亞單位蛋白、相關試劑及方法

2023-07-20 17:22:36

專利名稱：哺乳動物細胞因子受體亞單位蛋白、相關試劑及方法
技術領域：
本發明涉及影響哺乳動物生理(包括免疫系統功能)的組合物及 方法。本發明特別涉及調節發育和/或免疫系統的方法。還公開了所 述物質的診斷及治療用途。
背景技術：
重組DNA技術一般是指將供體來源的遺傳信息整合入載體， 然後例如導入宿主，因此所轉移的遺傳信息在新的環境中拷貝和/ 或表達。 一般來說，遺傳信息以編碼需要蛋白產物的信使 RNA( mRNA)產生的互補DNA (cDNA)形式存在。載體通常為一種 質粒，能夠導入cDNA,然後在宿主中複製，在某些情況下，實際 上是控制cDNA表達，由此控制編碼產物在宿主中合成。參見例如 Sambrook等，(1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual,(第二 版)，第l-3巻，CSH Press, NY。
一段時間以來，人們知道，哺乳動物免疫反應的基礎是一系列 的複雜細胞相互作用，稱之為"免疫網絡"。最新研究對該網絡的 內部作用機制獲得了新的認識。儘管實際上許多免疫反應均涉及淋 巴細胞、巨噬細胞、粒細胞和其它細胞的網絡樣相互作用，但是免 疫學者目前普遍認為，稱為淋巴因子、細胞因子或單核細胞因子的
可溶性蛋白在控制上述細胞相互作用中起重要作用。因此，細胞調 節因子的分離、鑑定和作用機制非常引人注目，對它們的了解可使 得眾多醫學上的異常例如免疫系統疾病的診斷和治療獲得顯著改善。
顯而易見的是，淋巴因子以多種方式介導細胞活動。參見例如
liPaul(主編,1996) Fundamental Immunology, 第三版，Raven Press, New York; Thomson(主編，1994) The Cytokine Handbook,第二版， Academic Press, San Diego。已經證實，它們促進多能造血幹細胞增 殖、生長和/或分化為數量巨大的祖細胞，包括構成複雜免疫系統的 各種細胞譜系。細胞組分之間的正常平衡的相互作用是健康免疫系 統所必需的。當淋巴因子與其它藥物一起給予時，常常不同細胞i普 系的反應不同。
免疫反應特別重要的細胞譜系包括兩類淋巴細胞B細月包和各 種亞型的T細胞，B細胞產生和分泌免疫球蛋白(免疫球蛋白能夠識 別並結合外源物質，以便消除外源物質)，T細胞分泌淋巴因子並誘 導或抑制B細胞以及構成免疫網絡的各種其它細胞(包括其它T細 胞)。所述淋巴細胞與許多其它細胞類型相互作用。
一般不能在體外維持免疫系統細胞，這阻礙了目的在於更好地 了解和治療各種免疫疾病的研究。免疫學者發現，通過應用包含各 種生長因子(包括許多淋巴因子)的T細胞上清液和其它細胞上清液 可對許多上述細胞進行培養。
存在調節形態發育的各種生長調節因子。已知許多細胞因子受 體。功能受體通常存在至少兩個重要亞單位。參見例如Heinrich等， (1998) Biochem. J. 334:297-314; Gonda和D，Andrea (1997) Blood 89:355-369; Presky 等，(1996) Proc. Nat，l Acad. Sci. USA 93:14002-14007; Drachman和Kaushansky (1995) C亂Opin. Hematol. 2:22-28; Theze (1994) Eur. Cytokine Netw. 5:353-368; Lemmon和 Schlessinger (1994) Trends Biochem. Sci. 19:459-463。
如上所述，顯而易見的是，對於直4妻或間^接涉及例如免疫系統 和/或造血細胞的發育、分化或功能的各種變性性病症或異常病症而 言，發現和研製新的可溶性蛋白及其受體，包括類似於淋巴因子的 可溶性蛋白及其受體，應該可以獲得新的治療方法。具體來說，發 現和了解增強其它淋巴因子有益作用的淋巴樣分子的新型受體，應該是非常有益的。本發明提供與細胞因子樣組合物和相關化合物相 似的配體的新型受體及其使用方法。
發明概述
本發明涉及與細胞因子受體有關的新型受體及其生物活性，例
如靈長類細胞因子受體樣分子結構，稱為DNAX細胞因子受體亞單 位(DCRS)。具體來說，本發明說明稱為DCRS5的一種亞單位。本 發明包括編碼所述多肽本身的核酸及其生產和使用方法。本發明核 酸的特徵部分在於其與本文公開的克隆互補DNA (cDNA)序列同 源。此外，本發明提供匹配的p40/IL-B30配體與受體亞單位DCRS5 和IL-12Rf31,所述受體配體對使得可以了解其直接涉及反應物為基 礎的激動劑和拮抗劑的使用適應症。
本發明提供大致純多肽或重組多肽，該多肽包含SEQ ID NO: 2細胞內部分的至少IO個連續胺基酸。在某些實施方案中，所述多 肽包含SEQIDNO: 2細胞內部分的至少25個連續胺基酸；為重 組多肽，它包含SEQIDNO: 2細胞內部分；還包含SEQIDNO: 2 非細胞內部分的至少10個連續胺基酸；包含SEQ ID NO: 2糹田胞夕卜 部分的至少25個胺基酸；包含成熟SEQIDNO: 2;或者為大致純 天然多肽。在其它實施方案中，所述重組多肽由表l的成熟序列 組成；為非糖基化多肽；為來自人類的多肽；包含SEQ ID NO: 2 的至少40個連續胺基酸；具有SEQ ID NO: 2的至少3個非重疊區 段，每個區段至少15個連續胺基酸；為SEQ ID NO: 2的天然多態 性變異體；其長度為至少約30個胺基酸；具有至少2個非重疊表位， 其為靈長類DCRS5特異性表位；其分子量至少為30kD，天然糖基 化；為合成多肽；為無菌形式；為水性溶液或緩沖溶液；其附著在 固體支持物上；其與另一個化學部分綴合；或者與IL-12Rpi多肽物 理性締合。
本發明其它實施方案提供包含SEQIDNO: 2細胞內部分至
13少2個不同非重疊區段的大致純多肽或重組多肽，每個區段至少6 個連續胺基酸；包含SEQIDNO: 2細胞內部分至少12個連續氨基 酸的大致純多肽或重組多肽；或者包含成熟SEQ ID NO: 2的大致 純天然序列多肽。在具體形式中，包含SEQ ID NO: 2細胞內部分 至少2個不同非重疊區段(每個區段至少6個連續胺基酸)的多肽中， 所述不同非重疊區段 一個區段包含至少12個胺基酸； 一個包含至 少7個胺基酸的區段，以及第二個至少9個胺基酸的區段；包含第 三個至少6個胺基酸的不同區段；或者包含以下其中之一 R355畫L373 、 P378-L405 、 V407-D426 、 K428-D439、 P441-V452、 I454-G460、 I465-T587或N592-606;或者所述多肽還包含SEQ ID NO: 2細胞外部分的至少2個不同非重疊區段，每個區段至少6個 連續胺基酸。或者，包含SEQIDNO: 2細胞內的至少12個連續氨 基酸的多肽中，所述至少12個連續胺基酸區段包含以下其中之一 R355-L373、 P378-L405、 V407-D426、 K428-D439、 P441畫V452、 I454-G460、 I465-T587或N592-606;或者所述多肽還包含SEQ ID NO: 2細胞外部分的至少6個連續胺基酸的至少2個不同非重疊區 段。或者，包含成熟SEQIDNO: 2的純化天然序列多肽還可包含 純化或4企測表位。所述多肽可以由表1成熟序列組成；為非糖基 化多肽；來自人類；包含SEQIDNO: 2的至少40個連續胺基酸； 具有SEQIDNO: 2的至少3個非重疊區段，每個區段至少15個連 續胺基酸；為SEQIDNO: 2的天然多態性變異體；長度至少約30 個胺基酸；具有至少2個靈長類DCRS5特異性非重疊表位；分子量 至少30kD(天然糖基化)；為合成多肽；為無菌形式；為水性溶液或 緩沖溶液；與固體支持物連接；與另一個化學部分綴合；或者與 IL-12卩1多肽物理性締合。
提供各種其它組合物，例如其包含與IL-12pi蛋白混合的大 致純多肽；或在載體中包含所述多肽，其中所述載體為水性化合 物，包括水、鹽水和/或緩沖劑；和/或配製用於口服、直腸、鼻、局
14部、或胃腸外給藥。
提供試劑盒，其包含所述多肽以及包含所述多肽的區室；包 含IL-12pi多肽的區室；包含p40、 IL-B30或p40/IL-B30多肽的區 室；或者試劑盒試劑的使用或處理說明書。
提供特異性結合DCRS5的細胞內部分的抗體和其它結合化合 物，例如包含抗體的抗原結合位點，其中所述結合化合物裝在一 個容器中；所述多肽來自人類；所述結合化合物為Fv、 Fab或Fab2 片段；所述結合化合物與另一個化學部分綴合；或者所述抗體針 對表1成熟多肽的肽序列；針對成熟DCRS5;針對純化的人DCRS5; 為免疫選擇性的；為多克隆抗體；結合變性DCRS5;對抗原的Kd 至少為30與固體支持物連接，包括珠子或塑料膜；為無菌組 合物；或進行可檢測性標記，包括放射性標記或螢光標記。還提供 包含所述結合化合物的試劑盒包含所述結合化合物的區室；包含 p40多肽、IL-B30多肽、DCRS5多肽和/或IL-12R(31多肽的區室； 包含選擇性結合以下物質的抗體的區室p40多肽、IL-B30多肽、 DCRS5多肽和/或IL-12Rpl多肽；或者試劑盒試劑的使用或處理說 明書。
還提供生產抗原抗體複合物的方法，該方法包括在合適條件 下使靈長類DCRS5多肽與抗體接觸，由此形成所述複合物。所述方 法可以從其它細胞因子受體純化所述複合物；從其它抗體純化所 述複合物；所述接觸為與包含幹擾素的樣品接觸；所述接觸允許定 量^r測所述抗原；所述接觸與包含所述抗體的樣品接觸；或者所述 接觸允許定量檢測所述抗體。提供其它組合物，例如包含以下組分 的組合物無菌結合化合物或所述結合化合物和載體，其中所述載 體為水性化合物，包括水、鹽水和/或緩沖液；和/或配製用於口服、 直腸、鼻、局部或胃腸外給藥。
本發明還提供編碼DCRS5多肽的分離或重組核酸，其中 DCRS5來自人類；或者所述核酸編碼表l的抗原肽序列；編碼表1的多個抗原肽序列；至少有13個核苷酸與編碼所述區段的天然 cDNA相同；為表達載體；還包含複製起點；來自天然來源；包含 可檢測標記；包含合成核苷酸序列；小於6kb,優選小於3 kb;來 自靈長類；包含天然全長編碼序列；為編碼DCRS5的基因的雜交探 針；或者為PCR引物、PCR產物或突變引物。提供包含所述重組核 酸的細胞，包括其中所述細胞為原核細胞；真核細胞；細菌細胞； 酵母細胞；昆蟲細胞；哺乳動物細胞；小鼠細胞；靈長類細胞；或 人類細月包。
試劑盒實施方案包括所述核酸和包含所述核酸的區室；包含 編碼以下組分的核酸的區室p40多肽、IL-B30多肽、DCRS5多肽、 和/或IL-12Rpi多肽；包含以下組分的區室p40多肽、IL-B30多 肽、DCRS5多肽、和/或IL-12R(31多肽；包含選擇性結合以下組分 的抗體的區室p40多肽、IL-B30多肽、DCRS5多肽、和/或IL-12R卩1 多肽；試劑盒試劑使用或處理的說明書。
其它核酸實施方案包括在30分鐘、30。C和2M以下鹽的洗 滌條件下與SEQ ID NO: 1編碼細胞內部分的部分雜交；在至少約 30個核苷酸區段上與靈長類DCRS5的細胞內部分相同。優選所述 核酸為這樣的核酸，其中所述洗滌條件為45"和/或500 mM鹽； 或55。C和/或150mM鹽；或者所述區^R為至少55個或75個核苷酸。
治療應用包括調節細胞生理或發育的方法，該方法包括使所述 細胞接觸p40/IL-B30的拮抗劑，所述拮抗劑是包含以下組份的復 合物靈長類DCRS5的細胞外部分和/或靈長類IL-12Rpi細胞外部 分；p40/IL-B30的拮抗劑，為結合包含靈長類DCRS5和/或靈長類 IL-12Rpi的複合物的抗體；p40/IL-B30的拮抗劑，為結合DCRS5 的抗體；p40/IL-B30的拮抗劑，為抗IL-12Rf31的抗體；p40/IL-B30 的拮抗劑，為DCRS5或IL-4R(31的反義核酸；或p40/IL-B30的激 動劑，為結合包含靈長類DCRS5和/或靈長類IL-12Rpl的複合物的 抗體。在一種類型的方法中，所述接觸為與拮抗劑接觸，而且所述接觸為與IL-12、 IL-18、 TNF和/或IFNy的拮抗劑混合；或者所述細 胞來自這樣的宿主，所述宿主表現出慢性TH1介導性疾病的體徵 或症狀；表現出多發性硬化、類風溼性關節炎、骨關節炎、炎症性 腸病、糖尿病、牛皮癬或膿毒病的症狀或體徵；或者接受同種異體 移植。相反，所述方法可與激動劑接觸，而且所述接觸與IL-12、 IL-18、 TNF或IFNy混合；或者所述細胞來自這樣的宿主表現出 慢性Th2型反應的體徵或症狀；存在胂瘤、病毒生長或真菌生長； 接受疫苗；存在變態反應。
優選實施方案詳述
大綱
I. 總論
II. 活性
III. 核酸
A. 編碼片段、序列、探針
B. 突變、嵌合體、融合體
C. 製備核酸
D. 細胞包含的載體
IV. 蛋白質、肽
A. 片段、序列、免疫原、抗原
B. 突變蛋白
C. 激動劑/拮抗劑、功能等同物
D. 製備蛋白
V. 製備核酸、蛋白
A. 合成
B. 重組
C. 天然來源
VI. 抗體
17A. 多克隆抗體
B. 單克隆抗體
C. 片段；Kd
D. 抗同種型抗體
E. 雜交瘤細月包系
VII. 試劑盒、診斷及定量檢測
A. ELISA
B. 檢測編碼的mRNA
C. 定量/定性
D. 試劑盒
VIII. 治療組合物、方法
A. 組合組合物
B. 單位劑量
C. 使用方法
IX. 篩選
I.總論
本發明提供哺乳動物(本文為靈長類)細胞因子受體樣亞單位分 子的胺基酸序列和DNA序列，所述細胞因子受體樣亞單位分子稱 為DNAX細胞因子受體亞單位5(DCRS5)，其具有特別定義的結構 及生物特性。編碼上述分子的各種cDNA得自靈長類(例如人 類)cDNA序列文庫。其它靈長類或其它哺乳動物的相應物質也是所 要求的。
此外，本發明提供匹配的p40/IL-B30和受體亞單位DCRS5和 IL-12RP1,所述配對可了解基於其涉及試劑的激動劑和拮抗劑的應 用適應症。
某些適用的標準方法可參見例如Maniatis等(1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook 等(1989) Molecular Cloning: ALaboratory Manual,(第二版)，第13巻，CSH Press, NY; Ausubel等， Biology, Greene Publishing Associates, Brooklyn, NY; 或Ausubel等 (1987 和定期增刊)Current Protocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, New York;各參考文獻通過引用結合到本文中。
靈長類(例如人類)的DCRS5的編碼區段的核苷酸序列(SEQ ID NO: l)及相應胺基酸序列(SEQIDNO: 2)見表1。標示出了預期的 信號序列，但是所述信號序列可能取決於細胞類型，或者可能為任 一方向的數個殘基。潛在的N糖基化位點為天冬醯胺殘基6、 24、 58、 118、 157、 209和250。 二石》建可能存在於位置29和78的半胱 氨酸之間；保守的C—CXW基元存在於位置110/121/123。位置219 的色氨酸以及281-285的WxxWS基元是值得注意的。約1-101區段 為Ig結構域；約102-195為細胞因子結合結構域1;約196-297為 細胞因子結合結構域2;約298-330為接頭；約329-354為跨膜區段； 約356-606為細胞內結構域。細胞內特徵包括Y374-1377、Y461-Q464 和Y588-Q591的推定SH2結合位點；潛在重要的406、 427、 440 和453酪氨酸殘基。這些位點和邊界是值得注意的。
ORF包含推定的信號序列，如上所述，預期信號序列 於...(3 10/01丁...切割。預期的328個胺基酸的細胞外結構域之後為 推定的跨膜區段，最後為約252個胺基酸的胞質結構域。
表2提供反向翻譯的核酸序列。表1: DNAX細胞因子受體亞單位樣實施方案(DCRS5)的核苷 酸及多肽序列。靈長類，例如人類實施方案(見SEQ ID NO: 1和 2)。標示出了預期的信號序列，但是可能在幾個位置有變化而且取 決於細胞類型。鑑定的變異位置變異為核苷酸127和563;為配對 的G和C(翻譯為Q和G組合)或者T和A(翻譯為H和R)。
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MN (p/H) VTIOWDAVIALYIIjFSWCHGGITNINCSGHIWVEPATIFKMGMNISIYCOAAIKMCOPRKLHF YKNGIKERFQITRINKTTARLWYKNFIjEPHASMyCTAECPKHFQETLICGKDISSGYPPDIPDEVTCVIY EYSGNMTCTWNA (G/R) KLTYIDTKYWHVKSLETEEEQQYLTSSYINISTDSLQGGKKyLVWVQAANAL G旭ESKQIiQIHriDDIV工PSAAVTSRAET工NATVPKT工I飾SQTTIEKVSCEMRYKATTNfQTWNVKEPDT NFTYVQQSEFYLEPN工lOfVFQVRCQETGKRYWQPWSSPFFHKrPETVPQVTSKAFQHDTWNSGI/rVASIS TOHLTSDMRGDIGLIiLGMIVFAVMLSIIiSLIGIFmSFRTGIKRRILLLIPKWLygPJPMMKNSNVVKML QENSELMNNNSSEQVLYVDPMITEIKBIFIPEHKPTDYKKBNTGPLETRDYPQUSIiFDNTTVVYIPDLNT GjrXPOISNPLPEGfSHLSNNNEITSLTLKPPVDSLDSGNNPRLQKHPNPAFSVSSVNSIjSNTIFLGELSIiI IiNQGECSSPDIQNSVEEETTMLLKNDSPSETIPEQTLLPDEFVSCIiGIVNEEliPSINTyFPCNILESHFN RISIiIjEK表2:反向翻譯的靈長類(例如人類)DCRS5(SEQIDNO: 3):
ATC3AAYCAYGTNACNATHCARTGC3GAYGaroTNATHGCNYTNTAYATHYTNTTyWSNTGGTGYCAYGGNGGNAT HACNAAYATHAAYT(3YWSNGGlTCAYATHTGGGTNGARCCHGCNACNATHTTYAAIiATCGGNATOAAYATHWSlIA THTAYTGYCAR(3CN(3CNATHAARAAYTGYCARCCNM咖AARYTNCAYTTyTAYAABAAYGGNATHAARGARM(aJ TxyCARAXHACHMGNATHftAYAARACNACNGCHMGKYTHTGGTAyAARAAYTTyYTNGAECCNCAYGCNWSNAT GTAyTGYACNGCNGARTGYCCNAARCAYTTYCARGARACNYTNATHTGyGGNAAR(3AYATHWSNWSira(3NTAYC
MQHAARYTNACNTAYATHGAYACNAARTAYGTKGTNCMfGTNAARWSNYTKGARACNGARGARGARCARCARTA YYTKAQIWSNWSNTMATHRAYATHWSNACNGAYWSNyTNCARGGNGGNAARAARTAYYTNGTNTOGGTNCARG CNGCNAAYGCNYrM加KATGGARGARWSNAARCARYTNCARATHCAYyTKGAYGAYATHGTNATHCCNWSNGCN GCNGTNATHWS鵬OI(3CNaASACNATHAATOCNACNGTNCCNAARAaiATHATHTAYTGGGAyWSWCARACNAC NATHOARAARGTNWSNTOyOARATOMCaiTAYAARGCNACNACKAAYCARACNTGGAAYGTNAARGARTTYGAYA CKAAYTTYACNTAYGTNCARCARWSiraARTTYTAYYTNGARCaiAAYATHAARTAYGTNTTYCARGTNMGKTGy CARGARACNGONAARMGNTAYIGGCARCCNTGGWS麗SNCCNrmTYCAYAARACNCCNGARACNGTNCCKCA RGTNACNWSlTAARGCNTTyCARCAYGAYACNTGGAAYWSNGGNyTNACNGTNGCNWSNATHWSNACNGCarcAYy TKAC麗SNQAyAAYMGNC3QN(3AyATHGGNYTNYTNYTNGGNATGATHGTNTTYGCNGTNATGYTNWSUATHyTN WSNYTNAraGGKATHTTYAAyMGNWSWTTYMGNACiraGNATHAARMGNMGNATHYTNYTNYTNATHCCNAARTG GyTNTAYGARQAYATHCCNAAYATOAARAAyWSNAAYGT加THAARATGYTNCARGARAAYWSNGARYTNATGA AYAAYAAYWSNWSNGARCAR(3XNYTN'TAYGTNGAYCCNATGATHACNGARATHAARGARATHTTYATHCCNGAR CAYAARCCNACKGAyTAYAARAARCJARAAYACNGGNCCNyTNGARACNMGKrGAYTAYCCNCARAAYWSNyTNTT YGAYAAYACMACNGTNGTNTAYATHCCNGAWTNAAYACNGGNTAYAARCCNCARATHWSNAAnTyyTMCCNG ARGG麗SUCAYYTNWSHAAYAAYAAYGARATHAOIWSNYTNACKYTNAARCCNCCNGTHGAYWSNyTiraAYWSN Q咖AAYAAYCCNMaNrraCARAARCAYCCNAAYm"GCNTryWSNGTHWSNWSNGTNAAYWSNYTNWSNAAyAC NATHTTYYTNGI咖GARyTNWSNYTNMHyTNAAyCARGGNGARTGYWSNWSlICCNGAYATHCARAAYWSlIGTira ARGARGARACNACNATGYT TYTNGARAAYGAyWSNCCNWSNGARACNATHCCNGRRCASACNYTNYTNCCNGAY. GARTTY(3TNWSNT(3YYTNGGNATHGTNAAYGARGARYTNCCNWSNATBaAYACNTArrTYCCNCAKAAyATHyT NGARWSNCAYTTYAAYMGNATHWSNYTNYTNGARAAR
24表3:各種細胞因子受體亞單位對比。人IL-6受體蛋白gpl30 為SEQ ID NO: 4(GenBank M57230);人IL-12受體|32亞單位為 SEQ ID NO: 5(GenBank U64198)。
imllj-12R 2 1 MAHTFRGCSIiAFMF工ITWLLIKAKIDACKRGDVTVKPSHV工LLGS， 48 hugpl3 0 1 MLTIiQTWWQALFIFIiTTESTGEIiliDPCG—YISPESPWQLHSNFT 45
huDCRS5 1 MNHVTIQWDAVIALYILFSWCHGGITlTINCS-GHIWVEPATrFKMGMN工S 49
huIIi-12R 2 43 ITCSIiKPRQGCFHYS，KLIIiYKFDRRINFHHGHSLNSQVTGIj] IjG—— 35 hugpl30 46 AVCVLKEKCMDYFHVNAKYIVWKTNHETIPKEQYTI工NRTASSVTFTDIA 35
huDCRS5 50 IYCQAAIKN-國CQP…RKLHFYKNGIKER-FQITRINKTTARLWYKNFIi' 93
huIL-12R 2 36 —TTLFVCKLAC工WSD-E工QICGAE工FVGVAPEQPQNLSC;rQKGEQGTVA 142 hugpl30 96 SLNIQLTCNIIaTPGQIi-EQNVYG工TIISGIiPPEKl KNLSC工VN-EGKKMR 143
lluDCRSS S4 'EPHASMYCTAECPKHF(3ETLICGKDISSGYPPD工PDEVTCVIYEYSGNMT 143
hU工L-12R 2 143 CrWERGRDTHLYT^!YTIjQIiSGPKNLTWQKQCKD工YCDYriDFGINLTPESP 132
hugpl30 144 CEWDGGRETHLETNFTLKS—BWATHKPADCKMCRDTPTSCTVDYS-TVY 190
huDCRS5 144 CTWNARKLTYIDTIOrVVHVKSLETEEEQQyLTSSYINISTDSLQGG----189
hU工L-12R 2 193 ESUFTAKVTAVNSIi(3SSSSliPSTn;FLDIVRPLPPTOD工R工KFQKASVSRC 242
hugpl30 191 FVNIBVWVBAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNIiSVIKTSEEIiSSIIi 240
25huDCRS5
190 -KKYJjVWVQAANALGMEESKQIiQIHLDD工VIPSAAV工SRAET工NATVPKT 238
huIIi-12R 2 243 TLiYWRD----即IjVLIiNRLRYRPSNSRIjWNMVN---VTKAKGRHDLIjDLK 2 85
hugpl30 241 KLTWTNPS工KSVI工LKYN工C3YRTKDASTWSQ工PPEDTASTRSSFrVQDLK 290 huDCRS523S工工YWDS--QTT工EK7SCEMKYKATTNQTWNVKEFD—TNFTYVQQSEFYIj2 285
hu工:L-:L2R 2 28S PFTEYEFQISSKLHLYKGSWSrJWSESLRAQTPEEEPTGMLDVWYMKRinD 335 hugpl3 0 291 PFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSDWSEEASGITYEDRPSKAPSFWYKIDPSH 34 0 286 PN工KYVFQWCQ-ETGKRYWQPWSSPFFHKTPETVP--------------32 0
huDCRS5
hu工Ij-12R 2 33 6 YS-RQQISIiFWKNLSVSEARGIQIjHYQVTIiQEIiTGGKAMTQNITGHTSWT 3 84 hugpl30 341 TQGyRTVQIiVWKTLPPFEANGKILDYEVT…LTRWICSHIiQNYTVNATKIi 387 huDCRS5321-----QVTSKAFQHDTWNSGLTVASISTG------HLTSDN--RGD工GLIj 357
huIL-12R 2 385 TVIPRTGNWAVAVSAANSKGSSLPTRINIMNLCEAGIiLAPRQVSANSEGM 434 hugpl3 0 388 TVNtiTNDRYIATLTVRNIiVGKSDAAVIiTIP-ACDFQATHPVMDIjKAFPKD 43 6 huDCRS5358 LGMIVFAVMIjSIIjSIj工G工FNRSFRTGIKRR-------------.....— 387
hu工L-12R 2 435 DNILVTWQPPRKDPSAVQEYWEWRELHPG-GDTQVPLNWIjRSRPYNVSA 483
hugpl30437 MMIjWVEWTTPRE---SVKKYILEWCVLS——DKAPCITDWQQEDGTVHRT 480
huDCRS5388 --......--------IIjIjIjIPKWIjYEDIPNMKNSNVVKMIjQEN----se 417
hu工L-12R 2 4 84 L工SENIKSY工CYE工RVYALSGDQ-GGCSSILGNSKHKAPLSGPHINAITE 532 hugpl30 481 YIiRGNIiAESKCYLITVTPVYADGPGSPESIKAYIjKQAPPSKGPTVRTKKV 530 huDCRS5418 LMKTNWSSE---.....QVLYVDP.....MITE工KE工FIPEHKPTDYKKE- 453
hu工L-12R 2 533 EKGSIJJlSWKTSIPVQEQM(3CI/IiHra工YWKERr SNSQPQIiCE工PYRVSQNS 582
hugpl30 531 GKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTIIGN----ETAVNVDSSHTE 576
huDCRS5 454 —NTGPtiETRDYP---QNSIjFDUTTWyiPDLNTG------YKPQISN-- 490
, , * ★ ， ， ， *
hu工L-12R 2 583 HPINSIiQPRVTYVLWMTALTAAGESSSGNEREFCIjQGKAN-WMAFVAPSI 531
hu卯130 577 YTIiSSI/TSDTIjyMVRMAAYTDEG-GKDGPEFTFTTPK:FAQG邁工EAIWPV 625
huDCRS5 491----.....——.....一FLPEG---------------------------495
hu工Ij-12R 2 632 CIA工工MVGIFSTHYFQQKVFVLLAALRP------.....QWCSRE工PDPA 670
hugpl30 626 CL^FIiljTTIiIiGVLFCFNKRDIjIKKHIWPNVPDPSKSHIAQWSPHTPPRHN 675
huDCRS5 496----.....—SHLSNNN-EITSLTLKP--------------PVDSIjDSG 519
huIL-12R 2 671 NSTCAKKyP工AEEKTQLPLDRLLID-WPTP笠DPEPLV工S--EVLHQVTPV 717
hugpl3 0 676 FNSKDQMYSDGNFTDVSWEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEGHS 725
huDCRS5 520 NNPRLQKHPN-FAFSVSSVNSLSNT--........---工---FLGEIjSIi工552
huIIj-12R 2 718 FRHPPCSNWPQREKGIQGHQASEKDMMHSASSPPPPRALQAESRQLjVDIjY 767 hugpl3 0 726 SG工GGSSCMSSSRPS工SSSDENESSQNTSSTVQYSTWHSGYRHQVPSVQ 775 huDCRS5 553 LNQGECS——S--PDIQNSVEEETTMLIiENDSP----------.......580huIL-12R 2 768 KVLESRGSDPKPENPACPWTVLPAGDIiPTHDGYIjPS1T…IDDI^SHEAP 814 hugpl30 775 VPSRSESTQIPIjLDSEERPEDIjQIjVDHVDGGDGIIjPRQQYFKQNCSQHESS 825 huDCRS5 581 —SET工PEQT:L:LPDEFVSCI)G:i:VNEEKPS面YFPQN…IIjESHFNR— 623
huIIj-12R 2 S15 LADSIjEELEPQH工SIjS.....VFPSSSLHPIiTFSCG…一一.......845
hugpl30 826 PDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAAD 875 huDCRS5 S24 --ISLLEK 623
huIL-12R 2 846----------DKLTLDQLKMRCDSLML 8S2
hugp 130 8 7 S. AFOPGTEGQVERFBTVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGG預PQ 918 huDCRS5 530 ■ 62 9
"IL-30R"細胞外結構域最相關的是IL-6信號轉導物gpl30和 IL-12RP2。略微相關的是GCSF受體、苗條蛋白受體、白血病抑制 因子受體和CNTF受體。因此，"IL-30R"是I類細胞因子受體超 家族成員，與IL-6R/IL-12R家族密切相關。
表3比較了現有的靈長類受體亞單位序列和靈長類例如人類 DCRS5(IL-30R)。 DCRS5與IL-6受體亞單位gpl30(例如IL-6R亞單 位)和IL12-R(32亞單位相似。DCRS5具有P亞單位特徵，但是蛋白 互作及信號轉導的真正序列仍然不清楚。
本文使用的術語DCRS5用以描述包含表1所示胺基酸序列的 蛋白。大多數情況下，其主要片段在功能或結構上相同，包括例如 額外細胞外結構域區段。本發明還包括相應DCRS5等位基因的序列 已知的蛋白變異體，例如突變蛋白或其它結構物。通常，所述變異 體與目標區段的序列差異約10%以下，通常具有1-11倍取代，例如 2、 3、 5、 7倍取代等。還包括所述蛋白的等位基因變異體和其它變 異體，例如天然多態性。 一般它結合其相應生物配體，其可能為具 有a受體亞單位的二聚體狀態，其結合親和力高，例如至少約100 nM,通常約30 nM以上，優選約10 nM以上，更優選約3 nM以上。 所述術語在本文還用來指相關天然形式，例如等位基因、多態性變 異體，以及哺乳動物蛋白代謝變異體。所述受體複合物的優選形式 以適合配體-受體相互作用的親和選4奪性結合適當的配體。
本發明還包括與表1胺基酸序列具有顯著胺基酸序列同一性的
27各種蛋白或肽的組合。包括具有較少取代(例如最好約3-5個以下取 代)的序列變異體。
主要多肽"片段"或"區段"為一個胺基酸殘基節段，其具有
約8個胺基酸， 一般至少10個胺基酸，更通常至少12個胺基酸， 通常至少14個胺基酸，更常見至少16個胺基酸，通常至少18個氨 基酸，更通常至少20個胺基酸，通常至少22個胺基酸，更常見至 少24個胺基酸，優選至少26個胺基酸，更優選至少28個胺基酸， 特別優選的實施方案中，至少約30個或30個以上的胺基酸。不同 蛋白區段序列在合適長度節段上可彼此比較。多數情況下，各種片 段可能具有完整亞單位的功能特性，例如跨膜受體的細胞外結構域 可保持所述配體的結合特性，可用以製備可溶性受體樣複合物。
通過優化殘基匹配測定胺基酸序列同源性或序列同一性。在某 些比較中，可以根據需要引入空隙。參見例如Needleham等，(1970) J, Mol. Biol. 48:443-453; Sankoff等，(1983) Time Warps， String Edits, and Macromolecules: The Theory and Practice of Sequence Comparison, 第 一章,Addison-Wesley, Reading, MA; IntelliGenetics 的軟體包,Mountain View, CA; the University of Wisconsin Genetics Computer Group (GCG), Madison, WI;各文獻通過引用結合到本文 中。當把保守取代當成匹配時，序列同源性改變。保守取代通常包 括以下類別中的取代甘氨酸，丙氨酸；纈氨酸，異亮氨酸，亮氨 酸；天冬氨酸，穀氨酸；天冬醯胺，穀氨醯胺；絲氨酸，蘇氨酸； 賴氨酸，精氨酸；苯丙氨酸，酪氨酸。同源胺基酸序列包括細胞因 子序列的天然等位基因變異體和種間變異體。通常同源蛋白或肽與 表1胺基酸區段的同源性為50-100%(如果可以引入空隙的話)、 60-100%(如果包括保守取代)。同源性檢測至少約70%, —般至少 76%,更通常至少81%,常常至少85%,更常見至少88%, —般至 少90%，更一4殳至少92%,通常至少94%,更通常至少95%,優選 至少96%，更優選至少97%，在特別優選的實施方案中，至少98%或98°/。以上。同源性程度因所比較區段的長度不同而不同。同源蛋 白或肽，例如等位基因變異體，具有表1所述實施方案的最大生物 活性，特別是細胞內部分。
本文使用的術語"生物活性，，用以描述(但不限於)細胞因子樣 配體對信號轉導、炎症反應、天然免疫和/或形態發育的影響。例如 上述受體應該介導磷酸酶或磷酸化酶活性，所述酶活性容易用標準
方法測定。參見例如Hardie等(主編，1995) The Protein Kinase FactBook,第I和II巻，Academic Press, San Diego， CA; Hanks等 (1991) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter等(1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61:743-752; Pines等(1991) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 56:449-463; Parker等(1993) Nature 363:736-738。 所述受體或其部分可用作磷酸標記酶，標記普通或特異性底物。所 述亞單位也可以為激發識別抗體的功能免疫原，或者為能夠結合抗 體的抗原。
術語例如DCRS5的配體、激動劑、拮抗劑和類似物呈現配體-受體相互作用的特性，例如其中所述受體為天然受體或抗體。細胞 反應可能通常通過受體酪氨酸激酶途徑介導。
此外，配體為所述受體或其類似物結合的天然配體分子，或者 為天然配體的功能類似物分子。功能類似物可以為結構修飾的配體， 或者可為完全不相關分子，所述分子具有作用於合適配體結合決定 簇的分子形狀。配體可用作激動劑或拮抗劑，參見例如Goodman等 (主編,1990) Goodman & Gilman，s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, Pergamon Press, New York。
也可以#4居受體或抗體以及其它效應物或配體的分子形狀的結 構研究進行合理藥物設計。參見例如Herz等(1997) J. Recept. Signal Transduct. Res. 17:671-776; Chaiken等(1996) Trends Biotechnol. 14:369-375。效應物可以為在配體結合作用時介導其它功能的其它蛋 白，或者為通常與所述受體相互作用的其它蛋白。 一種測定什麼位點與特異性其它蛋白相互作用的方法是物理結構測定法，例如x-射
線晶體照相術或二維NMR技術。它們可指示什麼胺基酸殘基構成 分子接觸區。關於蛋白結構測定的詳述介紹參見例如Blundell和 Johnson (1976) Protein Crystallography, Academic Press, New York, 其通過引用結合到本文中。 II.活性
細胞因子受體樣蛋白具有許多不同生物活性，例如細胞內信號 轉導(例如通過STAT4的細胞內信號轉導)、調節細胞增殖或者磷酸 代謝(在通常為蛋白質的特異性底物上添加磷酸根或從其去除磷酸 根)。所述作用的結果通常是調節炎症功能、其它天然免疫反應或形 態效應。所述亞單位可能對所述配體具有特異性低親和結合。
DCRS5具有通過JAK途徑轉導信號的受體的特徵基元。參見 例如Ihle等(1997) Stem Cells 15(增刊1):105-111; Silvennoi廳等 (1997) APMIS 105:497-509; Levy (1997) Cytokine Growth Factor Review 8:81-90; Winston和Hunter (1996) Current Biol. 6:668-671; Barrett (1996) Baillieres Clin. Gastroenterol. 10:1-15; Briscoe等(1996) Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 351:167-171。特別引人注目 的是上述SH2結合基元。
細胞因子受體亞單位的生物活性與在底物上添加或去除磷酸根 有關，通常為特異性方式，但是偶爾為非特異性方式。可以用例如 以下文獻所述的標準方法鑑定底物，或者分析酶活性條件Hardie 等(主編，1995) The Protein Kinase FactBook，第I和II巻，Academic Press, San Diego, CA; Hanks等(1991) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter等(1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61:743-752; Pines 等(1991) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 56:449-463; Parker等 (1993) Nature 363:736-738。
受體亞單位可以締合形成功能複合物，例如其可用於結合配體 或製備抗體。它們具有顯著診斷用途，包括檢測或定量測定。所述受體與p40/IL-B30配體的功能性連接對於了解所述受體可應用的適 應症具有重要作用。因此，拮抗劑和激動劑將具有預測作用。
III.核酸
本發明設想應用例如編碼上述蛋白或密切相關蛋白或其片段的 分離核酸或片段用於例如編碼相應多肽，優選所述多肽具有生物活 性。此外，本發明包括分離或重組的DNA,所述DNA編碼具有特 徵序列的所述蛋白或多肽的組合，所述特徵序列是單獨DCRS5的特 徵序列、或者是DCRS5特徵序列與其它例如IL-12Rpi亞單位特徵 序列的組合(參見Showe等(1996) Ann. N.Y. Acad. Sci. 795:413-425; Gately等(1998) Ann. Rev. Immunol. 16:495-521; GenBank U03187, NM—005535)。通常，所述核酸在合適條件下與表1所示的核酸序列 區段雜交，但是優選不與表3所示其它受體的相應區段雜交。所述 生物活性蛋白多肽可以是全長蛋白或片段，而且具有與表1所示序 列具有高度同源性的胺基酸序列區段，例如相同的重要區段。此外， 本發明還包括分離核酸或重組核酸或其片段的應用，所述核酸或其 片段編碼具有DCRS5蛋白等同片段(例如細胞內部分)的蛋白。所述 分離核酸可在5'和3，側具有相應的調節序列，例如啟動子、增強子、 poly-A添加信號和來自天然基因的其它調節序列。還提供如上所述 的組合物(如DCRS5與IL-12Rpi)或它們的細胞外配體結合部分(酉己 體拮抗劑)。此外，顯然多態性或其它變異體的診斷應用也是重要的。 "分離的"核酸是指大致純的例如RNA、 DNA或混合型聚合 物的核酸，例如它與天然伴隨的天然序列的其它組分(例如核糖體、 聚合酶和原物種的側翼基因組序列)分離開。該術語包括從其天然環 境取出的核酸序列，而且包括重組或克隆DNA分離物C因此與天然 存在組分不同)，以及包括化學合成的類似物或異源系統生物合成的 類似物。大致純分子包括完全純或大致純的分離型分子。
分離核酸通常為均質組分分子，但是在某些實施方案中，包含不同組分、優選微小差異的不同組分。這種差異通常見於聚合物末 端或對需要生物功能或活性不重要的部分。
"重組"核酸通常用其製備方法或其結構定義。涉及其製備方 法時，例如一種方法製備的產品，所述方法應用重組核酸技術，例 如涉及人為幹預核苷酸序列。通常這種幹預涉及體外操作，然而在 某些條件下可能涉及更經典的動物繁殖技術。另一方面，它可以是
如下製備的核酸產生包含非天然彼此鄰接的兩種片段的融合物的
序列，但是它不包括天然產物，例如天然狀態存在的天然突變體。 因此，包括通過用非天然載體轉化細胞製備的產物，同樣包括用任 何合成寡核苷酸的方法獲得的序列的核酸。這種方法通常用於例如 用編碼相同胺基酸或保守胺基酸的豐餘密碼子取代另一種密碼子， 而通常引入或去除限制酶序列識別位點，或者用於某種結構功能分 析。或者，所述方法用於將所需功能的核酸區段連接在一起，產生 通常天然形式不存在的具有所需功能組合的單一遺傳實體，例如編 碼融合蛋白。限制酶識別位點通常為所述人工操作的目標，但是可
以設計引入其它位點特異性靶，例如啟動子、DNA複製位點、調節 序列、控制序列或其它有用的特徵。相同的原理用於重組多肽，例 如融合多肽。這包括DCRS5和IL-12Rpl亞單位的二聚體重複物或 融合物。具體來說包括合成核酸，所述合成核酸因為遺傳密碼豐餘 性而編碼DCRS5片段的等同多肽以及各種不同相關分子(例如其它 細胞因子受體家族成員)的序列融合物。
核酸的"片段"為核香酸連續節段，它包含至少約17個核苷酸， 一般至少約21個核苷酸，更一般至少25個核苷酸，通常至少30個 核苷酸，更一般至少35個核苷酸，通常至少39個核苷酸，更通常 至少45個核苷酸，通常至少50個核苷酸，更常見至少55個核苷酸， 常常至少60個核苷酸，更通常至少66個核苷酸，優選至少72個核 普酸，更優選至少79個核苷酸，特別優選實施方案為至少85個核 苷酸或更多核苷酸，包括卯、100、 120、 140、 160、 180、 200個核段，例如下述結構域)上彼此比較。
編碼DCRS5的核酸特別用於鑑定編碼DCRS5本身或密切相關 蛋白的各種基因、mRNA和cDNA，以及用於鑑定編碼例如不同個 體或相關物種的多態性、等位基因或其它遺傳變異體的DNA。這種 篩選的優選探針為不同多態性變異體之間保守的受體區段，或者所 述區段包含非特異性核香酸，優選它為全長序列或幾乎為全長序列。 在其它情況下，多態性變異體特異性序列更有用。也可以診斷組合 的DCRS5多態性變異體和IL-12R(31變異體。
本發明還包括具有與本文所述分離DNA相同或高度同源的核 酸序列的重組核酸分子和片段。具體來說，所述序列通常與控制轉 錄、翻譯和DNA複製的DNA節段有效連接。這些額外區段通常有 助於表達目的核酸區段。
同源或高度相同的核酸序列在相互比較時，例如與DCRS5序 列比較時，表現出顯著相似性。核酸同源性標準為本領域一般使用 的序列比較或根據雜交條件的同源性測量結果。下面更詳細地描述 比較雜交條件。
核酸序列比較的大致同一性是指在引入適當核苷酸插入或缺失 的情況下優化排列對比時，所比較的區段或其互補鏈相同核苦酸至 少約60%， 一4殳至少66%,普通至少71%，通常至少76%，更常見 至少80%,通常至少84%,更常見至少88%,常常至少91%,更常 見至少93%,優選至少約95%,更優選至少約96-98%或更高，在具 體實施方案中，高達約99%或更高的相同核香酸，包括例如編碼結 構域的區段或其它所述區段。或者，當通常使用表1衍生序列在選 擇性雜交條件下所述區段與另 一條鏈或其互補鏈雜交，則所比較的 區段大致相同。通常，當在至少約14個核苷酸的節段上至少約55% 同源，更常見至少約65%同源，優選至少約75%同源，更優選至少 約90%同源時，則發生選擇性雜交。參見Kanehisa (1984) Nucl. Acids
33Res. 12:203-213，其通過引用結合到本文中。上述同源性比較的長 度可以為更長的節段，在某些實施方案中，比較節段長度為至少約 17個核香酸，一^:至少約20個核苷酸，通常至少約24個核苷酸， 常見約28個核苷酸，通常至少約32個核苷酸，更常見至少約40個 核苷酸，優選至少約50個核苷酸，更優選至少約75-100個核苷酸 或更多核苷酸。包括125、 150、 175、 200、 225、 250、 275、 300、 325、 350個核普酸等以及其它長度。
雜交同源性有關的嚴格條件是鹽、溫度、有機溶劑和雜交反應 中通常控制的其它參數的嚴格綜合條件。嚴格溫度條件通常包括超 過約3(TC溫度，更常見超過約37。C，通常超過約45。C，更常見超 過55°C，優選超過約65°C,更優選超過約70°C。嚴格鹽條件一般 低於約500 mM，通常低於約400 mM,更常見低於約300 mM，常 見低於約200mM,優選低於約100mM,更優選低於約80mM，甚 至低於約50或20 mM。然而，參數綜合比任何單一參數量值重要 得多。參見例如Wetmur和Davidson (1968) J. Mol. Biol. 31:349-370, 其通過引用結合到本文中。
分離DNA可容易地通過核苷酸取代、核苷酸缺失、核苷酸插 入和核香酸節段倒置進行修飾。修飾產生編碼該蛋白或其衍生物的 新的DNA序列。修飾序列可用於產生突變蛋白或增強變異體表達。 表達增強可能涉及基因擴增、轉錄增強、翻譯增強和其它機制。 DCRS5可如上所述產生這樣的突變DCRS5,但是無論是因為缺失、 取代還是插入，其胺基酸序列不同於天然存在的其它細胞因子受體 蛋白。具體來說，"位點特異性突變DCRS5"包括與表l蛋白具有 大致序列同 一性的蛋白，而且通常具有本文公開形式的大多數生物 活性或作用。還鑑定了各種天然多態性變異體序列。
儘管預定了位點特異性突變位點，但是突變不一定是位點特異 性的。在表達偶聯的基因中產生胺基酸插入或缺失可實現哺乳動物 DCRS5突變。可產生取代、缺失、插入或許多組合以獲得最終構建物。插入包括氨基或羧基末端融合。可對目標密碼子進行隨機誘變，
然後可對表達的哺乳動物DCRS5突變體篩選目的活性，獲得某一方 面的結構活性關係。在已知序列DNA的預定位點產生取代突變的 方法，例如應用M13引物突變，是本領域眾所周知的。另見Sambrook 等(1989)和Ausubd等(1987和定期出版的增刊)。特別有用的構建物 為與IL-12RJ31節段有關的DCRS5細胞外部分。
DNA突變通常不使編碼序列置於讀框外，優選不產生能夠雜交 產生二級mRNA結構如環或髮夾結構的互補區。
Beaucage和Carruthers (1981) Tetra. Letts. 22:1859-1862介紹的 氨基磷酸酯法可產生合適合成DNA片段。通常通過合成互補鏈和 在合適條件下使所述鏈退火在一起，或者通過使用DNA聚合酶和 合適引物序列加上互補鏈，獲得雙鏈DNA片段。
聚合酶鏈式反應(PCR)技術常常用於誘變。或者，誘變引物是常 用的在預定位點產生規定突變的方法。參見例如Innis等(主編，1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, San Diego， CA; Dieffenbach和Dveksler (1995;主編)PCR Primer: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press, CSH， NY。
本發明某些實施方案涉及包含所述受體序列的組合組分。在其 它實施方案中，所述序列的功能部分連接在一起編碼融合蛋白。在 其它形式中，所述序列的變異體可以被取代。
IV.蛋白質、肽
如上所述，本發明還包括靈長類DCRS5,例如其序列公開於表 ，而且見上文介紹。也設想了等位基因變異體和其它變異體，包括 例如綜合所述序列的各部分和其它序列(包括例如IL-12R(31 、表位標 記和功能結構域)的融合蛋白。
本發明還提供重組蛋白，例如使用上述靈長類或嚙齒類蛋白的 區段的異源融合蛋白。異源融合蛋白是天然情況下通常不以相同方 式融合在一起的蛋白或區段融合物。因此，DCRS5和其它細胞因子
35受體的融合產物通常為連續蛋白分子，其序列以典型肽鍵融合在 一起，通常製成單一翻譯產物而且表現各個來源肽的各種特性，例 如序列或抗原性。相似原理可用於異源核酸序列。還提供各種設計 蛋白組合成的複合物。
另外，通過組合其它相關蛋白(例如細胞因子受體或Toll樣受 體，包括種變異體)的相似功能結構域或結構結構域可製備新的構建 物。例如，配體結合或其它區段可在不同新的融合多肽或片段之間
"互換，，。參見例如Cunningham等(1989) Science 243:1330-1336; 0，Dowd等(1988) J. Biol. Chem. 263:15985-15992，各文獻通過引用 結合到本文中。所以，具有新的綜合特異性的新型嵌合多肽可得自 受體結合特異性的功能結合。例如，可將其它相關受體分子的配體 結合結構域加入這種蛋白或相關蛋白中或取代這種蛋白或相關蛋白 的其它結構域。獲得的蛋白通常具有雜合功能和特性。例如，融合 蛋白可包含靶向結構域，靶向結構域的作用是使所述融合蛋白限定 於特定亞細胞器。
可從各種序列資料庫選擇候選融合配偶體和序列，例如 GenBank, c/o IntelliGenetics, Mountain View, CA; BCG, University of Wisconsin Biotechnology Computing Group, Madison, WI， 其均通過 引用結合到本文中。具體來說，特別優選表1和3中提供的多肽序 列的組合物。上述組合物可代替變異體型所述蛋白。
本發明特別提供結合細胞因子樣配體和/或信號轉導涉及的突 變蛋白。DCRS5與所述細胞因子受體家族的其它成員的結構排列對 比顯示出保守特徵/殘基。見表3。人DCRS5序列與所述細胞因子受 體家族其它成員的排列對比表明各種結構和功能共同特徵。另見 Bazan等(1996) Nature 379:591; Lodi等(1994) Science 263:1762-1766; Sayle和Milner-White (1995) TIBS 20:374-376; G顏enberg等(1991) Protein Engineering 4:263-269。
特別優選以小鼠或人序列的取代。相反，遠離配體結合互作區的保守取代可能保存大多數信號轉導活性；遠離細胞內結構域的保守取代可能保存大多數配體結合特性。
靈長類DCRS5的"衍生物"包括胺基酸序列突變體、糖基化變異體、代謝衍生物和與其它化學部分的共價或聚集綴合物。例如應用本領域眾所周知的方法使官能團與DCRS5胺基酸側鏈或N末端存在的基團鍵合可製備共價衍生物。這些衍生物包括但不限於羧基末端的脂族酯或醯胺、或者包含羧基側鏈的殘基的脂族酯或醯胺、含羥基殘基的O醯基衍生物、氨基末端胺基酸或含氨基殘基(例如賴氨酸或精氨酸)的N醯基衍生物。醯基選自烷基部分基團，包括C3-C18常見烷基，因此形成烷醯基芳醯基物質。
具體來說，包括糖基化改變，例如在其合成和加工過程中或在進一步的加工步驟中改進多肽的糖基化類型。特別優選的改變糖基化方法是使所述多肽暴露於得自通常進行所述加工的細胞的糖基化酶，例如哺乳動物糖基化酶。也設想了去糖基化酶。還包括各種形式具有其它微小修飾的相同一級胺基酸序列，包括磷酸化胺基酸殘基，例如磷酸酪氨酸、磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸。
主要的一組衍生物為所述受體或其片段與其它多肽蛋白的共價綴合物。這些衍生物可在諸如N末端融合的重組物培養中合成，或者利用本領域已知的、其作用是通過活性側基交聯蛋白的物質合成。交聯劑的優選衍化位點為游離氨基、糖部分和半胱氨酸。
還提供所述受體與其它同源或異源蛋白的融合多肽。同源多肽可以為不同受體的融合物，獲得例如對多個不同細胞因子配體具有結合特異性的雜合蛋白或底物作用特異性增強或減弱的受體。同樣，
可構建具有所述衍生蛋白綜合特性或活性的異源融合物。典型實例有報導多肽(例如螢光素酶)與一種受體的一個區4爻或結構域(例如配體結合區段)融合，使得可以容易地測定目的配體的存在或位置。參見例如Dull等的美國專利號4,859,609,其通過引用結合到本文中。其它基因融合配偶體包括穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)、細菌P-半乳糖苷酶、trpE、 A蛋白、(3-內醯胺酶、ot-澱粉酶、乙醇脫氫酶和酵母oc接合因子。參見例如Godowski等(1988) Science 241:812-816。所述組合蛋白常常可代替標記蛋白。如上所述，DCRS5與IL-12R(31締合特別有意義。
Beaucage和Carruthers (1981) Tetra. Letts. 22:1859-1862介紹的
氨基磷酸酯法可產生合適合成DNA片段。通常通過合成互補鏈並在合適條件下使所述鏈退火在一起，或者通過使用DNA聚合酶和合適引物序列加上互補鏈，獲得雙鏈片段。
所述多肽也可以含有通過磷酸化、石黃化、生物素化或添加或去除其它部分而化學修飾的胺基酸殘基，尤其是含有與磷酸根基團類似的分子形狀的胺基酸殘基。在某些實施方案中，所述修飾為有用的標記試劑或者用作純化靶例如親和配體。
融合蛋白通常用重組核酸法或合成多肽法製備。核酸操作表達的技術在例如以下文獻中有全面介紹Sambrook等(1989) MolecularCloning: A Laboratory Manual (第二版),第13巻,Cold Spring HarborLaboratory,以及Ausubel等(主編，1987和定期出版的增刊)CurrentProtocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, New York, 均通過引用結合到本文中。多肽合成4支術在例如以下文獻中有介紹Merrifield(1963) J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2156; Merrifield (1986) Science232:341-347; Atherton等(1989) Soid Phase P印tide Synthesis: APractical Approach, IRL Press, Oxford;均通過引用結合到本文中。關於製備更大的肽另見Dawson等(1994) Science 266: 776-779。
本發明還設想了胺基酸序列變化或糖基化以外的DCRS5衍生物的應用。這種衍生物包括與化學部分共價或聚合締合。這樣的衍生物一般分為三類(1)鹽類，(2)側鏈和末端殘基共價修飾，(3)吸附複合物，例如吸附於細胞膜。這種共價或聚合衍生物可用作免疫原、免疫測定試劑，或者用於純化方法，例如受體或其它結合分子(例如抗體)的親和純化方法。例如，為了檢測或純化細胞因子受體、抗體或其它類似分子，細胞因子配體可應用本領域眾所周知的方法通
過共價鍵合固定在固體支持物上，例如溴化氰活化Sepharose,或者使用或不使用戊二醛交聯結合吸附到聚烯烴表面上。為了用於診斷測定，也可用可4企測基團標記所述配體，例如用氯胺T方法進行放射性碘化標記、與稀土螯合劑共價結合或與另 一種螢光部分綴合。
本發明的組合物，例如包含DCRS5的組合物，可用作產生特異性針對所述組合物的抗血清或抗體，所述抗血清或抗體例如能夠區分其它細胞因子受體家族成員。所述複合物用於篩選通過用各種含所述蛋白的不純製品免疫製備的單克隆抗體或抗原結合片段。術語"抗體"還特別包括天然抗體的抗原結合片段，例如Fab、 Fab2、Fv等。純化DCRS5也可用作檢測試劑，檢測在DCRS5表達升高作用下產生的抗體，或檢測導致產生抗內源性受體抗體的免疫疾病。另外，DCRS5片段也可用作免疫原產生本發明抗體，見緊接著的下文介紹。例如本發明設想了對表1所示的胺基酸序列、其片段或各種同源肽具有結合親和力的抗體或者針對它們產生的抗體。具體來說，本發明設想了預期或實際對暴露在天然DCRS5蛋白外的特異性
組合蛋白的複合物也是有用的，而且可製備其抗體製劑。
在某些實施方案中，例如DCRS5細胞外配體結合區段與IL-12RP1的可溶性構建物可以是所述配體的結合組合物，其可用作配體拮抗劑或者抗原以阻斷配體介導的信號轉導。所述構建物在診斷或治療上有用，例如對配體的i貪斷性組織學標記，或者治療性用作配體拮抗劑。
對所述受體配體生理反應的阻斷可能原因是對抑制所述配體與所述受體的結合，可能是通過竟爭性抑制。因此，在本發明體外測
建物或與固相支持物結合的片段。這些檢測也可診斷性確定配體結合區突變和修飾或者例如影響信號轉導或酶功能的其它突變和修飾
39的作用。
本發明還設想了竟爭性藥物篩選測定的應用，例如其中抗所述 受體複合物或片段的中和抗體與受試化合物竟爭性結合配體或其它 抗體。這樣，中和抗體或片段可用於檢測對受體具有一個或多個結 合位點的多肽的存在，也可用於佔據受體上可能另外結合配體的結
合位點。DCRS5細胞外結構域或配體結合結構域與IL-12Rpl組合 的可溶性受體構建物可能是竟爭性結合p40/IL-B30配體的有用拮抗劑。
V.製備核酸和蛋白質
編碼所述蛋白或其片段的DNA可以通過化學合成、篩選cDNA 文庫或者篩選用各種細胞系或組織樣品製備的基因組文庫而獲得。 可使用標準方法和本文例如表1提供的序列分離天然序列。可以用 雜交技術或各種PCR技術、聯合應用或者單獨應用篩選序列文庫(例 如GenBank)或者通過篩選序列文庫(例如GenBank)，鑑定其它類型 的相應物。
這種DNA可以在各種宿主細胞中表達，以便合成全長受體或 片段，它們再用於例如製備多克隆抗體或單克隆抗體；用於結合研 究；用於構建和表達修飾配體結合結構域或激酶/磷酸酶結構域；用 於結構/融合研究。變異體或片段可在用合適載體轉化或轉染的宿主 細胞中表達。除了來自重組宿主的蛋白或細胞雜質之外，上述分子 基本上不含蛋白或細胞汙染物，因此，特別可用於與藥學上可接受 的載體和/或稀釋劑組合的藥用組合物。所述蛋白或其部分可表達為
其它蛋白的融合蛋白。所述蛋白或其編碼核酸的組合物特別引人注 目。
表達載體通常為含有目的受體基因、其片段或組合基因的自我 複製的DNA或RNA構建物，所述目的受體基因、其片段或組合基 因通常與在合適宿主細胞中被識別的合適遺傳控制元件有效連接。 所述控制元件能夠在合適宿主中實現表達。多個基因可協調表達，而且可位於多順反子信使上。實現表達所必需的特異型控制元件取 決於所用的最終宿主細胞。 一般來說，所述基因控制元件包括原核 啟動子系統或真核啟動子表達控制系統，通常包含轉錄啟動子、控
制轉錄發生的選擇操縱子、升高mRNA表達水平的轉錄增強子、編
碼合適核糖體結合位點的序列和終止轉錄和翻譯的序列。此外，表 達載體常常含有使載體獨立於所述宿主細胞複製的複製起點。 本發明載體包含編碼所述多種蛋白組合物或者生物活性等同多
肽的組合物的DNA。所述DNA處於病毒啟動子控制之下，而且它 可編碼選擇標記。本發明還設想了能夠在原核或真核宿主中表達編 碼所述蛋白的真核cDNA的所述表達載體的應用，其中所述載體與 所述宿主匹配，而且所述真核cDNA插入所述載體，使得包含所述 載體的宿主生長表達所述cDNA。通常，設計表達載體在其宿主細 胞中穩定複製或者在其宿主細胞中擴增而顯著增加每個細胞的目的 基因總拷貝數。並不總是需要表達載體在宿主細胞中複製，例如可 能使用不含所述宿主細胞識別的複製起點的載體在各種宿主中瞬時 表達所述蛋白或其片段。也可使用使所述蛋白的編碼部分重組整合 入所述宿主DNA的載體。
本文使用的載體包括質粒、病毒、噬菌體、整合型DNA片段 以及其它能夠使DNA片段整合入宿主基因組的載體。表達載體是 含有實現有效連接基因表達的基因控制元件的特化載體。質粒為最 常用形式的載體，但是在功能上等同而且本領域已知或者將為本領 域所知的所有其它形式載體也適用本發明。參見例如Pouwels等 (1985和增刊)Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., Rodriguez等(主編，1988) Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Buttersworth, Boston,它們的內容通過引用 結合到本文中。
轉化細胞為用重組DNA技術構建的載體轉化或轉染的細胞(最 好是哺乳動物細胞)。轉化宿主細胞通常表達目的蛋白，但是對於克
41隆、擴增和操作其DNA的目的，不需要表達所述目的蛋白。本發 明還設想了在營養培養基中培養轉化細胞，因此允許累積所述蛋白。 可從培養物回收所述蛋白，或者在某些情況下，從培養基中回收所
述蛋白。
對於本發明目的而言，當核酸序列在功能上彼此相關時，它們
有效連接。例如，如果前序列或分泌前導序列的DNA表達為前蛋 白或它參與引導所述多肽至細胞膜或參與所述多肽的分泌時，則它 與多肽有效連接。如果啟動子控制所述多肽的轉錄，則啟動子與編 碼序列有效連接；如果核糖體結合位點的位置使得可以進行翻譯， 則它與編碼序列有效連接。通常，有效連接是指連續而且符合讀框 的連接，但是，某些遺傳元件如阻抑基因不是連續連接，但是仍然 約束操縱基因序列，操縱基因序列再控制表達。
合適宿主細胞包括原核細胞、低等真核細胞和高等真核細胞。 原核細胞包括革蘭氏陰性和陽性生物，例如大腸桿菌和枯草桿菌(B. subtilis)。低等真核細胞包括酵母，例如釀酒酵母(S. cerevisiae)和畢 赤酵母屬(Pichia),以及網柄菌屬(Dictyostelium)物種。高等真核細胞 包括用動物細胞建立的組織培養細胞系，所述動物細胞為非哺乳動 物來源，例如昆蟲細胞和鳥類細胞，以及哺乳動物來源，例如人類、 靈長類和嚙齒類。
原核宿主載體系統包括用於許多不同物種的各種載體。本文使 用的大腸桿菌及其載體一般包括在其它原核細胞中使用的等同載 體。用於擴增DNA的典型載體為pBR322或其許多書t生物。可以用
體lac啟動子(pUC系列)；trp啟動子(pBR322 trp); Ipp啟動子(pIN 系列)；人pP或pR啟動子(pOTS);或者雜合型啟動子如ptac (pDR540)。參見Brosius等(19S8)"應用X及Ipp衍生啟動子的表達 載體'，，載於Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, (Rodriguez和Denhardt主編)，Buttersworth， Boston,第IO章,pp. 205-236，其內容通過引用結合到本文中。
低等真核細胞，例如酵母和網柄菌屬，可用包含DCRS5序列 的載體轉化。對於本發明目的，最常用低等真核宿主為麵包酵母， 即釀酒酵母。 一般用其代表低等真核細胞，但是也可用許多其它菌 抹和種類。酵母載體的典型組成如下複製起點(整合型例外)、選 擇基因、啟動子、編碼所述受體或其片段的DNA、以及翻譯終止序 列、聚腺苷酸序列和轉錄終止序列。用於酵母的合適表達載體包括 組成型啟動子，例如3-磷酸甘油酸激酶和各種其它糖酵解酶基因啟 動子，或者誘導型啟動子，例如醇脫氫酶2啟動子或金屬硫蛋白啟 動子。合適載體包括以下類型的衍生物自主複製低拷貝數載體(例 如YRp系列)，自主複製高拷貝數載體(例如YEp系列)；整合型載 體(例如YIp系列)，或者^H、染色體(例如YCp系列)。
高等真核組織培養細胞通常是用於表達功能活性白介素或受體 蛋白優選宿主細胞。原則上，許多高等真核組織培養細胞系無論是 來自無脊推動物還是脊推動物，均可使用，例如昆蟲杆狀病毒表達 系統。然而，優選哺乳動物細胞。所述細胞的轉化或轉染以及繁殖 已成為常規方法。有用的細胞系實例包括HeLa細胞、中國蒼鼠卵 巢(CHO)細胞系、幼齡大鼠腎臟(BRK)細胞系、昆蟲細胞系、鳥細胞 系和猴(COS)細胞系。用於所述細胞系的表達載體通常包括複製原 點、啟動子、翻譯起始位點、RNA剪接位點(如果使用基因組DNA)、 聚腺苷酸位點和轉錄終止位點。這些載體還常常含有選擇基因或擴 增基因。合適表達載體可以是質粒、病毒或反轉錄病毒，它們含有 例如衍生自腺病毒、SV40、細小病毒、痘苗病毒或巨細胞病毒的啟 動子。合適表達載體的典型實例包括pCDNAl; pCD,參見Okayama 等(19S5) Mol. Cell Biol. 5:1136-1142; pMClneo PolyA，參見Thomas 等(1987) Cell 51:503-512;杆狀病毒載體，例如pAC 373或pAC 610。
對於分泌蛋白和某些膜蛋白，讀框通常編碼由其N-末端共價連 接信號肽的成熟或分泌產物組成的多肽。所述信號肽在所述成熟或活性多肽分泌之前切除。根據經驗法則可非常準確地預測切割位點，
例如窗-Heijne (1986) Nucleic Acids Research 14:4683-4690和 Nielsen等(1997) Protein Eng. 10:1-12;信號肽的確切胺基酸組成對 其功能似乎不重要，例如Randall等(1989) Science 243:1156-1159; Kaiser等(1987) Science 235: 312-317。 4吏用標準方法可容易地確定 本發明的成熟蛋白。
常常需要在提供特異性或規定糖基化類型的系統中表達上述多 肽。在這種情況下， 一般糖基化類型為表達系統天然提供的糖基化 類型。然而，所述糖基化類型可如下修飾使所述多肽(例如非糖基 化型)暴露於已經引入異源表達系統的合適糖基化蛋白。例如，所述 受體基因可以與 一種或多種編碼哺乳動物糖基化酶或其它糖基化酶 的基因共轉化。使用這種方法，某些哺乳動物糖基化類型可在原核 細胞或其它細胞中實現。原核細胞表達通常產生非糖基化型蛋白。
如上所述，DCRS5的來源可以為表達重組DCRS5的真核宿主 或原核宿主。所述來源也可以是細胞系，但是本發明也設想了其它 哺乳動物細胞系，優選細胞系來自人類。
既然已知所述序列，可用合成肽的常規方法製備靈長類 DCRS5、其片段或衍生物。包括下列文獻介紹的方法Stewart和 Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, IL; Bodanszky和Bodanszky (1984) The Practice of Peptide Synthesis, Springer Verlag, New York; Bodanszky (1984) The Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag, New York; 所有文南大 均通過引用結合到本文中。例如，可以使用疊氮化物法、醯基氯法、 酸酐法、混合酐法、活性酯法(例如對硝基苯基酯、N-羥基琥珀醯亞 胺酯或氰基曱基酯)、碳二咪唑法、氧化還原法或二環己基碳二亞胺 (DCCD)加成法。前面方法可以使用固相合成以及液相合成。可以將 相似4支術用於部分DCRS5序列。
44段或衍生物，通常是利用包括使胺基酸逐個按順序與末端胺基酸縮 合的所謂的逐步法，或者使肽片段與末端胺基酸偶合。在偶合反應 中不使用的氨基通常必須進行保護，以便防止在不正確的位置進行 偶合。
如果使用固相合成，則使C末端胺基酸通過其羧基與不溶性載 體或支持物結合。不溶性載體沒有特別限制，只要它能與反應性羧 基結合則可。這樣的不溶性載體實例包括卣代曱基樹脂(例如氯曱基 樹脂或溴曱基樹脂)、羥基曱基樹脂、苯酚樹脂、叔烷氧基羰基肼化 樹脂等。
氨基保護的胺基酸按順序通過其活化羧基與預先形成肽或鏈的 反應氨基縮合結合，從而逐步合成所述肽。合成完整序列後，從不 溶性載體分離出所述肽，從而生產出所述肽。這種固相法在
Merrifield等(1963), J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2156中有全面介紹， 其通過引用結合到本文中。
製備的蛋白及其片段可通過肽分離(例如萃取、沉澱、電泳、各 種形式的層析、免疫親和等)從反應混合物中分離純化。根據所需要 的用途，可獲得不同程度純度的本發明受體。可應用本文公開的(見 下文)蛋白純化技術或者應用本文在免疫吸收親和層析法中描述的 抗體完成純化。這種免疫吸收親和層析如下進行首先，使所述抗 體結合到固體支持物上，然後所連接的抗體與合適細胞的溶解裂解 物、表達所述受體的其它細胞裂解物或因為DNA技術而產生所述 蛋白的細胞裂解物或上清液接觸，參見下文。
一般來說，純化蛋白的純度至少約40%, —般至少約50%，通 常至少約60%，常見至少約70%，更常見至少約80。/。，優選至少約 90%，更優選至少約95%，在特別實施方案中，為97%-99%或更高。 純化通常為重量純度，但是也可以為摩爾純度。可適當應用不同測 定。可純化各種蛋白，然後將其混合。VI.抗體
可製備針對各種哺乳動物例如靈長類DCRS5蛋白及其片段的 抗體，所述蛋白及其片段可以為天然原型和其重組形式，差別在於 針對所述活性受體的抗體更可能識別僅在天然構象中存在的表位。 還設想了識別DCRS5與IL-12R(31的組合物(例如官能團組合)呈現 的表位的抗體。變性抗原檢測例如在蛋白質印跡中也是有用的。也 設想了抗獨特型抗體，其可用作天然受體或抗體的激動劑或拮抗劑。
可通過用所述片段與免疫原性蛋白的綴合物免疫動物，製備抗 所述蛋白預定片段的抗體，包括結合片段和單鏈型抗體。用分泌目 的抗體的細胞製備單克隆抗體。篩選其中結合正常蛋白或缺陷蛋白 的抗體，或者篩選激動劑活性或拮抗劑活性的抗體。單克隆抗體結 合的KD通常約1 mM,更常見至少約300 |uM,常常至少約100 nM， 更常見至少約30 ^M，優選至少約10 ^M，更優選至少約3 pM或更 低。
本發明的抗體，包括抗原結合片段，具有重要診斷或治療價值。 它們可為結合所述受體並抑制與配體結合或抑制所述受體引發生物 反應(例如作用於其底物)的能力的有效拮抗劑。它們也可用作非中 和抗體，它們可與毒素或放射性核素偶合，所述毒素或放射性核素 結合生產細胞或局限於白介素來源的細胞。此外，上述抗體可與藥 物或其它治療藥物直接綴合或通過接頭間接綴合。
本發明抗體在診斷應用中也是有用的。作為捕獲抗體或非中和 抗體，它們可結合所述受體而不抑制配體或底物結合。作為中和抗 體，它們可用於竟爭性結合測定。它們還可用於檢測或定量配體。 它們可用作蛋白質印跡分析、或者免疫沉澱或免疫純化相應蛋白的 試劑。同樣，核酸和蛋白質可固定在固體支持物上，以進行親和純 化或檢測方法。所述支持物可以是例如固體樹脂珠或塑料片。
蛋白片段可與其它物質、尤其是多肽結合，作為用作免疫原的 融合或共價結合多肽。哺乳動物細胞因子受體和片段可與各種免疫原融合或共價結合，所述免疫原例如鑰孔蜮血藍蛋白、牛血清白蛋 白、破傷風類毒素等。關於製備多克隆抗血清方法的介紹參見
Microbiology, Hoeber Medical Division, Harper 和 Row 1969; Landsteiner (1962) Specificity of Serological Reactions, Dover Publications, New York; Williams等(1967) Methods in Immunology and Immunochemistry,第1巻,Academic Press, New York;所述文 獻均通過引用結合到本文中。典型方法包括用抗原超免疫動物。然 後在重複免疫後立即收集動物血液，分離Y球蛋白。
在某些情況下，需要從各種哺乳動物宿主例如小鼠、嚙齒類、 靈長類、人類等製備單克隆抗體。製備所述單克隆抗體的方法介紹 見例如Stites等(主編)Basic and Clinical Immunology (第四版)， Lange Medical Publications, Los Altos, CA,以及其中的參考文獻； Harlow和Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, CHS Press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (第二版) Academic Press, New York;尤其是Kohler和Milstein (1975), Nature 256:495-497，它論述了 一種製備單克隆抗體的方法。所有這些參考 文獻均通過引用結合到本文中。簡而言之，這種方法包括用一種免 疫原注射免疫動物。然後處死動物，從其脾臟取出細胞，然後將其 與雜交瘤細胞融合。獲得能夠體外增殖的雜交細胞或"雜交瘤"。 之後，篩選雜交瘤細胞以分離單個克隆，每種克隆分泌一種抗所述 免疫原的抗體。這樣，獲得的各種抗體為在免疫原物質上的被識別 的特異性位點作用下產生的免疫動物的永生化單個克隆B細胞的產 物。
其它合適技術包括使淋巴細胞暴露於抗原性多肽或者選擇噬菌 體或相似載體的抗體文庫。參見Huse等(1989) "Generation of a Large Combinatorial Library of the Immunoglobulin Repertoire in Phage Lambda," Science 246:1275-1281; Ward 等(1989) Nature 341:544-546，均通過引用結合到本文中。本發明多肽和抗體可以修 飾後使用或者不經修飾即使用，包括嵌合抗體或人源化抗體。所述
47多肽和抗體常常通過共價或非共價與提供可檢測信號的物質結合而 標記。各種各樣的標記及結合技術是已知的，而且在科學及專利文 獻中有廣泛報導。合適標記物包括放射性核素、酶、底物、輔助因 子、抑制劑、螢光部分、化學發光部分、磁粒等。指出所述標記物
的應用的專利包括美國專利號3,817,837、 3,850,752、 3,939,350、 3,996,345、 4,277,437、 4,275,149和4,366,241。此外，可生產重組或 嵌合免疫球蛋白，參見Caliblly，美國專利號4,816,567;或者應用 轉基因小鼠製備，參見Mendez等(1997) Nature Genetics 15:146-156。 這些文獻通過引用結合到本文中。
本發明抗體還可用於分離DCRS5蛋白或肽的親和層析。製備 層析柱，其中所述抗體與固體支持物結合，例如顆粒(例如瓊脂糖、 Sephadex等)，其中使細胞裂解物通過層析柱，洗柱，然後增加溫和 變性劑濃度，因此釋放出純化蛋白。或者，所述蛋白可用於純化抗 體。可使用合適交叉吸收或去除。
所述方法的抗體進行標記，標記部分使得通過抗體結合可以容易地 才全測抗原的存在。
們用於檢測或診斷與所述蛋白表達或表達所述蛋白的細胞有關的各 種病症。它們還可用作所述配體的激動劑或拮抗劑，其為竟爭性受 體抑制劑或代替天然配體。某些受體亞單位或組合物的抗體可用作 激活抗體，它可影響信號轉導，因此用作例如配體激動劑。
特異性結合針對特定免疫原(例如由SEQIDNO: 2的胺基酸序
細胞因子受體蛋白通常以免疫測定進行測定。免疫測定通常採用例 如針對例如SEQ ID NO: 2蛋白產生的多克隆抗血清。選擇對其它 細胞因子受體家族成員(例如IL-12RP2受體亞單位或IL-6受體亞單 位gpl30,優選來自相同物種)交叉反應性低的抗血清，在用於免疫為了製備用於免疫測定的抗血清，如本文所述分離例如SEQ ID NO: 2的蛋白。例如可在哺乳動物細胞系中產生重組蛋白。通常使 用標準佐劑例如弗氏佐劑以及標準小鼠免疫接種方案(參見Harlow 和Lane,同上)，用選定蛋白免疫合適宿主，例如小鼠近交系(如 Balb/c)。或者，得自本文公開序列而且與載體蛋白綴合的合成肽可 用作免疫原。收集多克隆抗血清，用免疫測定(例如免疫原固定在固 體支持物上的固相免疫測定)對免疫原蛋白進行滴定。選擇滴度104 或更高的多克隆抗血清，使用竟爭性結合免疫測定，例如Harlow和 Lane,同上，第570-573頁介紹的一種方法，測試其對其它細胞因子 受體家力矣成員如gpl30或IL-12Rpi的交叉反應性。優選在該測定中 使用至少兩種細胞因子受體家族成員。這些細胞因子受體家族成員 可生產為重組蛋白，使用本文介紹的標準分子生物學及蛋白質化學 技術進行分離。
竟爭性結合形式的免疫測定可用於測定交叉反應性。例如，SEQ ID NO: 2蛋白可固定在固體支持物上。加入所述測定中蛋白與抗血 清竟爭性結合固定抗原。上述蛋白與抗血清竟爭性結合固定蛋白的 能力與例如gpl30或IL-12RP2蛋白進行比4交。^吏用標準計算方法計 算上述蛋白的交叉反應百分率。選擇並合併與以上所列各蛋白的交 叉反應性百分率低於10%的抗血清。然後用上述蛋白通過免疫吸收 ,人合併抗血清中去除交叉反應抗體。
然後免疫吸收的合併抗血清用於上述竟爭性結合免疫測定，以 比較第二種蛋白與所述免疫原蛋白(例如SEQ ID NO: 2的DCRS5 樣蛋白)。為了進行這種比較，分別分析廣泛濃度的兩種蛋白，確定 抑制50%抗血清與固定蛋白結合需要的各蛋白量。如果第二種蛋白 的需要量是選定蛋白需要量的三分之一以下，則認為第二種蛋白特 異性結合針對所述免疫原產生的抗體。
當然，這些細胞因子受體蛋白是包括許多鑑定基因的同源蛋白 家族成員。對於特定基因產物來說，例如DCRS5，該術語不僅指本文公開的胺基酸序列，而且指為等位基因、非等位基因或種變異體 的其它蛋白。還應該理解的是，該術語包括使用常規重組技術如單 一位點突變的精細突變引入的非天然突變，或者通過切除編碼相應
蛋白的DNA的糹艮短部分、或取代新的胺基酸、或加入新的胺基酸
而引入的非天然突變。所述細微改變通常基本上保持原分子的免疫
特性和/或其生物活性。因此，這些改變包括與指定天然DCRS5蛋 白特異性免疫反應的蛋白。改變蛋白的生物特性可如下測定在合 適細胞系中表達所述蛋白，然後檢測對例如轉染淋巴細胞的合適作 用。被認為是微小改變的特定蛋白修飾包括相似化學性質胺基酸的 保守取代，見以上對整個細胞因子受體家族的論述。通過使一種蛋 白與所述細胞因子受體蛋白優化排列對比，以及使用本文介紹的常 規免疫測定測定免疫特性，人們可確定本發明的蛋白質組成。
而且，抗受體亞單位的抗體可用以空間性阻斷配體結合功能受 體。所述抗體可只針對其中任何一個亞單位或針對DCRS5和 IL-12Rpi組合結構而產生。可得到抗體拮抗劑。
VII.試劑盒、診斷及定量
本發明的天然和重組形式的細胞因子受體樣分子特別可用於試 劑盒和4僉測方法。例如，這些方法還可用於篩選例如配體對這些蛋 白的結合活性。近年來開發了若干自動檢測方法，以便每年可篩選 成千上萬的化合物。參見例如BIOMEK自動工作站，Beckman Instruments, Palo Alto, California, 以、及 Fodor 等(1991) Science 251:767-773,它們均通過引用結合到本文中。後者介紹了通過在固 體支持物上合成的多個規定聚合物的結合測試方法。提供大量純化 活性可溶性細胞因子受體(例如本發明提供的細胞因子受體)可大大 促進開發篩選配體或激動劑/拮抗劑同源蛋白的合適方法。
純化DCRS5可直4妻包被在板上，以用於上述配體篩選技術。 然而，上述蛋白的非中和抗體可用作捕獲抗體，以使相應的受體固
50定在用於例如it斷用途的固體相上。本發明還設想了 DCRS5、其片段、肽及其融合產物在檢測所述蛋白或其配體的存在的各種診斷試劑盒以及方法中的應用。或者， 抗所述分子的抗體可加入所述試劑盒和方法中。通常試劑盒具有含DCRS5肽或基因節段或者識別一種或另一種物質的試劑的區室。如 果為肽，識別試劑通常為受體或抗體，如果為基因節段，則識別試 劑通常為雜交探針。其它試劑盒組分可包括與配體/受體對的p40、 IL-B30或IL-12Rpl相關的其它蛋白或試劑。測定樣品的DCRS5濃度的優選試劑盒通常包括對DCRS5具有 已知結合親和性的標記化合物如配體或抗體、作為陽性對照的 DCRS5源(天然或重組DCRS5)和分離結合標記化合物與游離標記化 合物的手段，例如固定試樣中的DCRS5的固相體。通常提供包含試 劑的區室和說明書。還提供包含合適核酸或蛋白的試劑盒。哺乳動物DCRS5或肽片段或者受體片段特異性抗體(包括抗原 結合片段)可用於診斷用途，以便檢測升高水平的配體和/或其片段的 存在。診斷檢測可以是均相檢測(沒有游離試劑和抗體抗原複合物的 分離步驟)或非均相(具有分離步驟)。存在各種商業測定法，例如放 射免疫測定(RIA)、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、酶免疫測定(EIA)、 酶方丈大免疫分析糹支術(EMIT)、底物標記的螢光免疫測定(SLFIA)等。 例如，可以如下^吏用未標記抗體使用標記而且識別所述抗體的第 二種抗體，前一種抗體針對細胞因子受體或其特定片段。這些檢測 還在文獻中有深入的i侖述。參見例如Harlow和Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, CSH.,以及Coligan (主編，1991和 定期增刊)Current Protocols In Immunology Greene/Wiley, New York。抗獨特型抗體具有用作細胞因子受體的激動劑或拮抗劑的相似 用途。它們在合適條件下可用作治療藥物。一般來說，用於診斷測定的試劑以試劑盒供應，以便優化所述測定的敏感性。對於本發明目的，根據測定、方法和標記物的性質， 提供標記或未標記抗體、或者提供標記配體。通常結合提供其它添 加劑，例如緩沖劑、穩定劑、信號產生必需的物質如酶的底物等。試劑盒具有各有用試劑的區室，而且包含正確使用以及試劑處理的 說明書。最好，所述試劑以乾燥凍乾粉提供，其中試劑可重新配製 為含有合適濃度的水性溶液，從而進行測定。可以勿須改進直接使用所述診斷測定的上述組分，或者可以以 多種方式進行改進。例如，可通過共價或非共價連接直接或間接提 供檢測信號的部分而完成標記。在其中許多測定中，可直接或間接 標記受試化合物、細胞因子受體或其抗體。可用於直接標記的標記物包括》文射性標記物如1251、酶(美國專利號3,645,090)如過氧化物 酶和鹼性磷酸酶、以及能夠監測螢光強度、波長位移或螢光極化變 化的螢光標記物(美國專利號3,940,475)。兩個專利均通過引用結合 到本文中。可間接標記的標記物包4舌一種組分的生物素化，然後結 合與一種上述標記物偶合的抗生物素蛋白。此外，有許多分離結合配體與游離配體、或者分離結合受試化 合物或游離受試化合物的方法。細胞因子受體可固定在各種基體， 然後洗滌。合適基體包括塑料如ELISA板、濾膜和珠。使受體固定 在基體上的方法包括但不限於直接粘附到塑料上、應用捕獲抗體、 化學偶合和生物素抗生物素蛋白。這種方法的最後一步包括通過若干方法中的任何一種方法沉澱抗體/抗原複合物，包括應用例如有機 溶劑如聚乙二醇或者鹽如硫酸銨。其它合適的分離技術包括但不限 於Rattle等(1984) Clin. Chem. 30(9):1457-1461介紹的螢光素抗體磁 粒方法和美國專利號4,659,678介紹的雙抗》茲粒分離法，它們均通過 引用結合到本文中。連接蛋白或片段與各種標記物的方法在文獻中有廣泛報導，在 此不需要詳細論述。其中許多技術涉及應用活化羧基通過碳二亞胺52或活性酯形成肽45t、疏基與活化卣素(如氯乙醯基)反應形成碌^醚、 或者活化烯烴如馬來醯亞胺，以進行連接等。融合蛋白也具有這些 用途。本發明的另 一個診斷方面涉及取自細胞因子受體序列的寡核苷 酸或多核苷酸序列的應用。這些序列可用作檢測懷疑患有免疫疾病的患者的相應細胞因子受體水平的探針。製備RNA和DNA核苷酸 序列，對其進行標記，所述的序列的優選大小均在文獻中有大量介 紹和論述。通常寡核苷酸具有至少約14個核苷酸，常常至少約18 個核苷酸，多核普酸探針可多至數千個鹼基。可使用各種標記物， 最常用放射性核素，特別是"P。然而，也可使用其它技術，例如生 物素修飾的核苷酸引入多核苷酸。然後，生物素用作結合抗生物素 蛋白或抗體的位點，所述抗生物素蛋白或抗體可用各種標記物標記， 例如放射性核素、螢光、酶等。或者，可使用能夠識別特異性雙鏈 體(包括DNA雙鏈體、RNA雙鏈體、DNA RNA雜合雙鏈體或DNA 蛋白質雙鏈體)的抗體。然後，再標記所述抗體，進行;險測，其中所 述雙鏈體結合在表面上，這樣當在表面形成雙鏈體時，可4全測結合 所述雙鏈體的抗體的存在。可以用常規技術對新的反義RNA進行探 針，例如核酸雜交，加上或減去篩選，重組探測，雜交體釋放的翻 譯(HRT)和雜交體中止的翻譯(HART)。還包括擴增技術，例如聚合 酶鏈式反應(PCR)。還設想了也測試其它標記的定性或定量存在的診斷試劑盒。診 斷或預後可能取決於用作標記的多個指標的綜合考慮。因此，試劑 盒可測試綜合標記。見，如Viallet等(1989) Progress in Growth Factor Res. 1:89-97。檢測可能反映功能受體信號轉導差異的多態性可用於 決定治療策略。反映對配體的更強或更弱反應的差異可進一步區分 反應/非反應患者亞群。VIII.治療應用本發明提供具有重要治療價值的試劑。參見例如Levitzki (1996) Curr. Opin. Cell Biol. 8:239-244。細胞因子受體(天然或重組)、其片 段、突變蛋白受體和抗體以及經鑑定對所述受體或抗體具有結合親 和力的化合物均可用於治療所述受體或其配體表達異常的病症。所 述異常通常表現為免疫紊亂。參見WO 01/18051,其通過引用結合 到本文中。另外，本發明在各種與異常表達或異常引發對所述配體 的反應有關的疾病或病症方面具有治療價值。例如，已經提出p40/IL B30配體參與細胞介導免疫的產生，例如抗腫瘤活性，建立體液和 細胞免疫以及抗病毒作用。所述配體似乎特別激活NK細胞和T細 胞。治療可與IL-18、 IL-12、 TNF、 IFNy、放射/化療、輔助治療或 抗腫瘤、抗病毒、或抗真菌化合物聯合應用。相反，可與TNF、 IFNy、 IL-18或IL-12拮抗劑、或與IL-IO、 或與類固醇聯合應用的拮抗劑適用於慢性Thl介導性疾病、自身免 疫性疾病、或移植和/或排斥、多發性硬化、牛皮癬、慢性炎症性病 症、類風溼性關節炎、骨關節炎、或炎症性腸病。拮抗劑可以為抗 所述受體亞單位、可溶性受體結構的抗體形式，或者是一種或多種 所述受體亞單位的反義核酸。p40/IL-B30配體與受體亞單位DCRS5 和IL-12Rpi的配對對激動劑和拮抗劑的應用提供了 了解。根據所述p40/IL-B30活性，在治療上，可溶性DCRS5(同時存 在或不存在可溶性IL-12R(31)或任一受體亞單位的抗體可實現所述 細胞因子的拮抗劑作用。拮抗劑可用作不需要免疫反應或炎症反應 的拮抗劑、用以4十對記憶T細胞，或者與IL-12/IL-12R拮抗劑或其 它抗炎劑或免疫抑制劑聯合應用。臨床適應症可以為慢性炎症或移 植。各種多態性可增強或降低受體功能，如果作用明顯的話，可用 作治療藥物。所述變異的鑑定可進一步區分反應或非反應患者亞群。 所述試劑可用作記憶T細胞和/或NK細胞的糹全測或標記試劑或燒蝕 ^i式劑。基因治療可使目的細胞群對p40/IL-B30配體產生反應，例如用作腫瘤免疫治療的輔助治療，以便促進活化腫瘤浸潤淋巴細胞、T 細胞或NK細胞。反義策略可用於例如阻止受體反應。已知RNA印跡分析顯示產生IL-12 p40和/或IL-B30 mRNA的 細胞類型的各種異常病症。參見Berkow(主編)The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Merck & Co., Rahway, N丄；Thorn 等， Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw-Hill, N.Y.; Weatherall等(主編)Oxford Textbook of Medicine, Oxford University Press, Oxford。許多其它醫學病症對本發明提供的激動劑或拮抗劑治 療有效。參見例如Stites和Terr (主編；1991) Basic and Clinical Immunology Appleton and Lange, Norwalk， Connecticut; Samter等(主 編)Immunological Diseases Little, Brown and Co.。其它可能的治療適 應症包括骨重建、性功能異常、預防神經變性性疾病、痴呆、應激 等。這些病症易於應用本發明提供的組合物預防或治療。可以純化重組細胞因子受體、突變蛋白、激動劑或其拮抗劑抗 體、或抗體，然後給予患者。這些藥物可與其它活性成分聯合治療 應用，例如利用常規藥學上可接受的載體或稀釋劑以及生理學上沒 有副作用的穩定劑和賦形劑。這些組合物可以無菌(例如過濾)，用 劑量小瓶凍幹，或者以穩定水性製劑保藏。本發明還設想了抗體或 其非補體結合性的結合片段的應用。利用細胞因子受體或其片段篩選配體，以鑑定對所述受體具有 結合親和性的分子。然後利用生物學測定確定推定配體能否可阻斷 固有刺激活性的竟爭性結合。受體片段可用作阻滯劑或拮抗劑，因 為它阻斷配體的活性。同樣，具有固有刺激活性的化合物可激活所 述受體，因此為激動劑，因為它刺激配體活性，例如誘導信號轉導。 本發明還設想了細胞因子受體抗體用作拮抗劑的治療用途。有效治療必需的試劑量取決於許多不同因素，包括給藥方法、 目標部位、試劑的生理周期、藥理周期、患者的生理狀態和給予的 其它藥物。因此，應該逐漸增加治療劑量以達到最佳安全性和療效。55通常體外使用劑量對於原位給予所述試劑所用的量提供有用的指 導。對特定疾病的有效治療劑量的動物試驗可進一步預示人類劑量。
在例如以下文獻中介紹了對各種因素的考慮Gilman等(主編，1990) Goodman and Gilman，s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 第八版,Pergamon Press; Remington's Pharmaceutical Sciences,第17 片反(1990)， Mack Publishing Co., Easton， Penn.;各文獻均通過引用結 合到本文中。其中以及下文討i侖了給藥方法，例如口服、靜脈內、 腹膜內或肌肉內給藥、透皮擴散等。藥學上可接受的載體包括水、 鹽7K、糹爰衝劑和例如Merck Index, Merck & Co., Rahway, New Jersey 中介紹的其它化合物。因為推定配體和其受體之間的可能的高親和 性結合或者轉換數，預期開始的低劑量的所述試劑應該有效。而且 信號轉導途徑提示，極低劑量的配體可能有效。因此，預期採用合 適載體時，劑量範圍為低於1 mM濃度，通常低於約lOiuM濃度， 常常低於約100 nM,優選低於約10 pM(皮摩爾)，最優選低於約1 艦(費摩爾)。緩釋製劑或緩釋裝置常常用來連續給藥。
細胞因子受體、其片段、及抗體或其片段、拮抗劑、以及激動 劑可直接給予要治療的宿主，或者根據所述化合物的大小，最好在 其給藥前將其與載體蛋白如卵清蛋白或血清白蛋白綴合。治療製劑 可以按照許多常規劑型給藥。儘管所述活性成分可以單獨給藥，但 是優選以藥用製劑給藥。製劑包含至少一種以上定義的活性成分和 其一種或多種合格的載體。每種載體必須在與所述其它成分匹配和 對患者無害的意義上在藥學和生理學上可接受。製劑包含適合口服、 直腸、鼻或胃腸外(包括皮下、肌肉內、靜脈內和皮肉)給藥的載體。 製劑可以常規以單位劑型提供，而且可用藥學領域周知的方法製備。 參見例如Gilman等(主編，1990) Goodman and Gilman，s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 第 8版，Pergamon Press; Remington's Pharmaceutical Sciences, 第 17 版(1990)， Mack Publishing Co.， Easton, Penn.; Avis等(主編,1993) PharmaceuticalDosage Forms: Parenteral Medications Dekker， NY; Lieberman等(主 編，1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets Dekker, NY; Lieberman等(主編,1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, NY。本發明療法可與其它治療藥物、尤其是其它細 胞因子受體家族成員的激動劑或拮抗劑聯合應用或結合使用。
IX.篩選
可用DCRS5或其片段進行藥物篩選，以鑑定對所述受體單位 具有結合親和力的化合物，包括分離結合組分。然後，可應用後續
劑或拮抗劑，因為它阻斷配體的活性。
p40/IL-B30配體與功能受體DCRS3和IL-12R卩1的匹配使得可 篩選拮抗劑和具有正信號轉導控制的激動劑。可進行小分子或抗體篩選。
一種藥物篩選方法利用表達DCRS5和另一種細胞因子受體亞單 位例如IL-12Rpl的重組DNA分子穩定轉化的真核宿主細胞或原核 宿主細胞。據認為信號轉導利用STAT4。分離表達獨立於其它功能 受體的受體的細胞。可將活的或固定的所述細胞用於標準抗體/抗原 或配體/受體結合測定。參見例如Parce等(1989) Science 246:243-247; Owicki等(19卯)Proc. Nat，l Acad. Sci. USA 87:4007-4011 ，該文獻了檢 測細胞反應的敏感方法。竟爭性結合測定特別有用，其中使細胞與對 所述配體具有已知結合親和性的標記受體或抗體接觸溫育，例如'251-抗體，然後測定試樣對結合組合物的結合親和性。之後分離結合與遊 離標記結合組合物，以評價配體結合程度。結合的受試化合物量與標 記受體對已知來源的結合量成反比。許多技術可用來分離結合與游離 配體以評價配體結合程度。分離步驟通常包括的程序例如為粘附至 濾膜上然後洗滌，粘附至塑料上然後洗滌，或離心細胞膜。活細胞也 可用來篩選藥物對細胞因子介導功能的影響，例如STAT4信號轉導等。某些檢測方法可以消除分離步驟，例如近接敏感檢測系統。
參考以下實施例可深入理解本發明的廣泛範圍，而下列實施例 不是用來將本發明限制於具體實施方案。
實施例
I.通用方法
標準方法在例如以下文獻中有介紹或涉及Maniatis等(1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory: Cold Spring Harbor Press; Sambrook等(1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual,(第2版)，第1-3巻，CSH Press, NY;或者Ausubel 等(1987和增刊)Current Protocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, NewYork。蛋白純化方法包括例如硫酸銨沉澱、柱層析、電泳、離心、 結晶等。參見例如Ausubel等(1987和定期出版的增刊)；Coligan等(主 編，1996)和定期出； 反的增刊，Current Protocols In Protein Science Greene/Wiley, New York; Deutscher (1990) "Guide to Protein Purification" , Methods in Enzymology,第82巻，以及該系歹'J的其它 巻號；以及生產商關於蛋白純化產物的應用的文獻，例如Pharmacia, Piscataway, N.J.，或Bio-Rad， Richmond, CA。與重組技術聯合應用寸吏 得可融合至合適節段，例如通過蛋白酶取出序列融合的FLAG序列或 等同4勿。參見例嗩口 Hochuli (1990) "Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent",載於Setlow(主編)Genetic Engineering, Principle and Methods 12:87-98， Plenum Press, N.Y.; Crowe等(1992) QIAexpress: The High Level Expression & Protein Purification System QUIAGEN， Inc., Chatsworth, CA。
例如使用計算機軟體程序進行計算機序列分析，例如GCG( U. Wisconsin)和GenBank來源的程序。公共序列資料庫也可使用，例如 GenBank等資料庫。
適用於IL-10受體的許多方法可用於DCRS5，例如美國專利號 5,789,192(IL-10受體)所述，其通過引用結合到本文中。II. 功能克隆
觀測到抗hIL-12R(31抗體阻斷人T細胞對p40/IL-B30的反應，以 及阻斷p40/IL-30B結合IL-12R(31。提示IL-12R(31是p40/IL-B30的受
體複合物的一個亞單位。
鑑定了對p40/IL-B30反應但是對IL-12不反應的小鼠T細胞群， 以及對IL-12反應但是對p40/IL-B30不反應的另 一種T細胞群。此外， 觀測到表達重組mlL-12R卩l和mlL-12R卩2的Ba/F3細胞對IL-12反應， 但是對p40/IL-B30不反應。綜合上述結果表明，p40/IL-B30的受體復 合物包含IL-12RP1和至少一種非IL-12RP2的其它亞單位。因此，設 計表達克隆策略，以分離所述第二種受體組分。
用從Kit225細胞(對IL-12和p40/IL-B30均反應的IL-2依賴性人 T細胞系)分離的mRNA製備cDNA文庫。用反轉錄病毒表達載體pMX 製備cDNA文庫。用該cDNA文庫感染表達重組hIL-12R|31的Ba/F3 細胞，使其在IL-3中恢復3-4天，然後用含50 ng/ml hyper-hp40/hIL-B30 的培養基洗滌並以約15,000細月包/孔4妄種在96孔板中。見WO 01/18051。培養物每約5天補充額外的hyper-hp40/hIL-B30。約2周後， 5-10%孔細胞生長。從各孔收集細胞，用hyper-hp40/hIL_B30分別進 一步擴大培養，測試對hyper-hp40/hlL-B3 0的生長依賴性。
通過PCR分析p40/IL-B30依賴性生長細胞的反轉錄病毒cDNA 插入片段。分析了其中40個以上的分離物，所有分離物(除1個夕卜) 包含編碼新的受體DCRS5的cDNA。將該候選人cDNA克隆入表達 載體，並轉染入表達hlL-12R(M的Ba/F3糹田月包。這些細胞成為對 p40/IL-B30反應的細胞；因此，我們的結i侖是，新的cDNA編碼目的 DCRS5,它為功能性IL-B30受體亞單位。
III. 全長DCRS5的特徵；染色體定位
DCRS5的胞質結構域整體上不與其它細胞因子受體胞質結構域 (在該家族分子中X!i測到的共有結構域)密切相關。所述胞質結構域包
59含7個tyr殘基，至少其中3個構成可識別的SH2-結合基元YEDI、 YKPQ和YFPQ的組成部分。YEDI基元類似於鑑定的酪氨酸》粦酸 酶shp2的結合位點。後兩個基元分別非常類似於已知結合Statl/Stat3 或Stat3的序列。YKPQ基元與鄰近側翼序列在一定程度上類似於已 知結合Statl-3的Stat4和IL-12Rp2中的基元。這與初步的數據一致， 說明p40/IL-B30如IL-12激活Stat4。
得自DCRS5序列的PCR引物用來探測人cDNA文庫。序列可得 自例如表1 ，優選鄰近序列末端的序列。例如通過XgtlO噬菌體的DNA 雜交篩選克隆靈長類、嚙齒類或其它物種DCRS5的全長cDNA。使 用T. aquaticus Taqplus DNA聚合酶(Stratagene)在合適條件下進行PCR 反應。
比較染色體分布製品。對用培養72小時的植物凝集素刺激的人 淋巴細胞獲得的染色體製品進行原位雜交。在培養的最後7小時加入 5-溴脫氧尿苷(60 pg/ml培養基)，保證雜交後染色體形成良好的帶。
將藉助於引物擴增的PCR片段克隆入合適載體。用SH通過缺口 翻譯標記載體。如Mattei等(1985) Hum. Genet. 69:327-331所述，以 200 ng/ml終濃度的雜交溶液使放射性標記的探針與分開的中期染色 體雜交。
用核示蹤乳液(KODAKNTB2)包被後，使載玻片曝光。為了避免 形成帶方法中的任何銀顆粒滑動，首先用緩衝的姬姆沙溶液將分開的 中期染色體染色，並照相。然後通過螢光染料-光解-姬姆沙(FPG)方法 形成R帶，再照相，然後分析。
相似的合適方法用於其它物種。
IV. DCRS5 mRNA的定位
包含約2嗎poly(A)+RNA/道的人多組織(Cat弁1, 2)和癌細胞系印 跡(Ca說7757-l)購自Clontech (Palo Alto， CA)。例如4吏用Amersham Rediprime隨機引物標記試劑盒(RPN1633)用[oc-32P] dATP放射性標記探針。例如於65。C在0.5 M Na2HP04, 7% SDS， 0.5 M EDTA (pH 8.0) 中進行預雜交和雜交。例如開始於65。C在2 x SSC, 0.1% SDS中洗滌 40分鐘，然後在0.1 x SSC， 0.1% SDS中洗滌20分鐘，從而進行嚴格 洗滌。之後將膜於-70。C對X光膠片(Kodak)在存在增感屏下曝光。用 選定的合適人DCRS5克隆通過cDNA文庫的DNA印跡進4於更詳細的 研究，以;險測其在造血細胞或其它細胞亞群中的表達。
或者，從表1選擇2個合適引物。對根據存在信使RNA選擇的 合適mRNA樣品(例如表達所述基因的樣品)使用RT-PCR以獲得 cDNA。
通過PCR信號預選擇的合適組織的cDNA文庫的雜交分離全長 克隆。可進^f亍RNA印跡。
利用合適技術如PCR、免疫測定、雜交等分析編碼DCRS5的基 因的信息。組織和器官cDNA製品可得自例如Clontech, Mountain View， CA。如上所述，鑑定天然表達的來源是有用的。而鑑定功能受體亞單
體亞單位。
對於小鼠分布，例如可進行DNA印跡分析用合適限制酶消化 第一次擴增的cDNA文庫的DNA (5 )ig)，釋放插入片段，在1%瓊脂 糖凝膠上電泳，然後轉移到尼龍膜上(Schleicher和Schuell, Keene， NY)。
小鼠mRNA分離樣品包括靜止的小鼠成纖維L細胞系(C200); Braf:ER(雌激素受體的Braf融合物)轉染細胞，對照(C201》T細胞， TH1型極化(脾細胞的Mel14亮、CD4+細胞，用IFN-y和抗IL-4極化7 天；T200); T細胞，TH2型極化(脾細胞的Mell亮、CD4+細胞，用 IL-4和抗IFN-y極化7天；T201); T細胞，高度TH1型極化(參見 Openshaw等(1995) J. Exp. Med. 182:1357-1367;用抗CD3活化2、 6、 16小時，合併物；T202); T細胞，高度TH2型極化(參見Openshaw 等(1995)J.Exp. Med. 182:1357-1367;用抗CD3活化2、 6、 16小時，合併物；T203); CD44-CD25+pre T細胞，從胸腺分選出(T204); TH1T細胞克隆Dl.l，最後一次抗原刺激後靜息3周(T205); TH1 T糹田月包克隆Dl,l， 10嗎/ml ConA刺激15小時(T206);TH2T細胞克隆CDC35,最後一次抗原刺激後靜息3周(T207); TH2 T細胞克隆CDC35, 10|ag/ml ConA刺激15小時(T208);脾的Mdl4+原初T細胞，靜息(T209);Mell4+T細胞，用IFN-y/IL-12/抗IL-4極化為Thl 6、 12、 24小時，合併物(T210); Mell4+T細胞，用IL-4/抗IFN-Y極化為Th2 6、 13、 24小時，合併物(T211);未刺激的成熟B細胞白血病細胞系A20(B200);未刺激的B細胞系CH12 (B201);未刺激的脾大B細胞(B202);整個脾的B細胞，LPS活化(B203);曱泛影醯胺富集的脾樹突細胞，靜息(D200);骨髓樹突細胞，靜息(D201);用LPS活化4小時的單核細胞系RAW 264.7(M200);用GM和M-CSF衍生的骨髓巨噬細胞(M201);巨噬細胞系J774，靜息(M202);巨嗟細胞系J774 + LPS +抗IL-10,0.5、 1、 3、 6、 12小時，合併物(M203);巨噬細胞系J774 + LPS + IL-10，0.5、 1、 3、 5、 12小時，合併物(M204);氣霧劑刺激的小鼠肺組織，Th2型激發，氣霧劑OVA刺激7、 14、 23小時，合併物(參見Gariisi等(1995) Clinical Immunology and Immunopathology 75:75-83, X206);曰圓線蟲感染的肺組織(參見Co傷艦等(1989) Science 245:308-310;X200);完整成年肺，正常(O200);完整肺，rag-l (參見Schwarz等(1993)Immunodeficiency 4:249-252; O205); IL-10 K.O.脾(參見Kuhn等(1991)Cell 75:263-274; X201);完整成年脾，正常(O201);完整脾，rag-l(O207); IL-10K.O.集合淋巴結(O202);完整,正常(O210); IL-10K.O.腸繫膜淋巴結(X203);完整腸繫膜淋巴結，正常(0211); IL-10 K.O.結腸(X203);完整結腸，正常(0212); NOD小鼠胰腺(參見Makino等(1980) JikkenDobutsu 29:1-13; X205);完整胸腺，rag-l (O208);完整腎臟，rag-l (O209);完整心臟，rag-l (O202);完整大腦，rag-l (O203);完整睪丸，rag-l (〇204);完整肝臟，rag-l (〇206);大鼠正常關節組織(O300);大鼠關節炎性關節組織(X300人mRNA分離樣品包括外周血單核細胞(單核細胞、T細胞、NK細胞、粒細胞、B細胞)，靜息(T100);外周血單核細胞，用抗CD3活化2、 6、 12小時，合併物(T101); T細胞，TH0克隆Mot72,靜息(T102); T細胞，TH0克隆Mot 72，用抗CD28和抗CD3活化3、 6、12小時，合併物(T103); T細胞，TH0克隆Mot72,用特異性肽無變應性處理7、 12小時，合併物(T104); T細胞，TH1克隆HY06，靜息(T107); T細月包，TH1克隆HY06,用抗CD28和抗CD3活化3、 6、12小時，合併物(T108); T細胞，TH1克隆HY06,用特異性肽無變應性處理2、 6、 12小時，合併物(T109); T細胞，TH2克隆HY935,靜息(T110); T細胞，TH2克隆HY935,用抗CD28和抗CD3活化2、7、 12小時，合併物(T111); T糹田胞CD4+CD45RO:用抗CD28、 IL-4和抗IFNy極化27天的T細胞，TH2型極化，用抗CD3和抗CD28活化4小時(T116); T細胞腫瘤系Jurkat和Hut78，靜息(T117); T細胞克隆，合併物的AD130.2、 Tc783.12、 Tc783.13、 Tc783.58、 Tc782.69,靜息(T118); T細胞隨機y5 T細胞克隆，靜息(T119);脾細胞，靜息(B100);脾細月包，用抗CD40和IL-4活化(B101); B細胞EBV系，合併的WT49、 RSB、 JY、 CVIR、 721.221、 RM3、 HSY，靜息(B102);B細胞系JY,用PMA和離子黴素活化1、 6小時，合併物(B103);合併的NK20克隆，靜息(K100);合併的NK20克隆，用PMA和離子黴素活化6小時(K101); NKL克隆，得自LGL白血病患者的外周血，IL-2處理(K106); NK細胞毒性克隆640-A30-1 ，靜息(K107);造血前體細胞系TF1，用PMA和離子黴素活化1、 6小時，合併物(C100);U937前單核細胞系，靜息(M100); U937前單核細胞系，用PMA和離子黴素活化l、 6小時，合併物(M101);淘洗的單核細胞，用LPS、IFNy、抗IL-10活化1、 2、 6、 12、 24小時，合併物(M102);淘洗的單核細胞，用LPS、 IFNy、 IL-10活化1、 2、 6、 12、 24小時，合併物(M103);淘洗的單核細胞，用LPS、 IFNy、抗IL-10活化4、 16小時，合併物(M106);淘洗的單核細胞，用LPS、 IFNy、 IL-10活化4、
6316小時，合併物(M107);淘洗的單核細胞，用LPS活化1小時(M108);淘洗的單核細胞，LPS活化6小時(M109); DC70% CDla+，得自CD34+GM-CSF 、 TNFa 12天，靜息(D101); DC70% CDla十，得自CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，用PMA和離子黴素活化1小時(D102);DC70%CDla+，得自CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，用PMA和離子黴素活化6小時(D103); DC95%CDla+,得自CD34+GM-CSF、 TNFot12天，FACS分選，用PMA和離子黴素活化1、6小時，合併物(D104);DC95%CDla+,沒有CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，FACS分選，用PMA和離子黴素活化1、 6小時，合併物(D105); DC CDla+CD86+,得自CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，FACS分選，用PMA和離子黴素活化l、 6小時，合併物(K106); DC，得自單核細胞GM-CSF、 IL-4 5天，靜息(D107); DC，得自單核細胞GM-CSF、 IL-4 5天，靜息(D108);DC,得自單核細胞GM-CSF、 IL-4 5天，用LPS活化4、 16小時，合併物(D109); DC，得自單核細胞GM-CSF、 IL-4 5天，用TNFa、單核細胞上清液(supe)活化4、 16小時，合併物(D110);平滑肌瘤Lll良性腫瘤(X101);正常子宮肌層M5(0115);惡性平滑肌瘤GS1 (X103);肺成纖維細胞肉瘤系MRC5，用PMA和離子黴素活化1、 6小時，合併物(C101);腎上皮癌細^^系CHA，用PMA和離子黴素活化1、 6小時，合併物(C102);雄性28周胚胎腎(O100);雄性20周胚胎肺(O101);雄性28周胚胎肝臟(O102);雄性28周胚胎心臟(O103);雄性28周胚胎大腦(O104);雄性28周胚胎膀胱(O106);雄性28周胚胎小腸(O107);雄性28周胚胎脂肪組織(O108);雌性28周胚胎卵巢(O109);雌性28周胚胎子宮(O110);雄性28周胚胎睪丸(Ol 11);雄性28周胚胎脾(0112);成熟28周胎盤(〇113); 12歲齡發炎的扁桃體(XI00)。
可分離其它物種的相似樣品進行評價。V. 克隆DCRS5的物種相應物
各種策略用來獲得DCRS5的種相應物，優選其它靈長類或嚙齒類。 一種方法是使用密切相關的種DNA探針的交叉雜交。該方法可用來作為中間步驟研究進化相似的物種。另 一種方法是使用基於鑑定基因之間的相似或不同區段的特異性PCR引物，例如高度保守或非保守多肽或核苷酸序列區段。
資料庫檢索可鑑定相似序列，可獲得合適探針。
VI. 產生哺乳動物DCRS5蛋白
工程合適的融合構建物(如GST)用於在例如大腸桿菌中表達。例如構建小鼠IGIF pGex質粒，轉化入大腸桿菌。例如在包含50 |ug/ml氨節青黴素的LB培養基中培養新轉化的細胞，用IPTG(Sigma， St.Louis， MO)誘導。誘導過夜後，收穫細菌，分離含DCRS5蛋白的沉澱。例如用2 L TE緩沖液(50 mM Tris-石威pH 8.0， 10 mM EDTA和2 mMpefabloc)勻化沉澱。使其通過微型流化儀(Microfluidics， Newton， MA)3次。液化上清液用Sorvall GS-3轉子以13,000 rpm離心1小時。過濾所得的包含所述細胞因子受體蛋白的上清液，通過用50 mM Tris-石鹹pH 8.0平衡的穀胱甘肽-SEPHAROSE柱。合併含DCRS5-GST融合蛋白的流分，例如用;疑血酶(Enzy me Research Laboratories, Inc., SouthBend， IN)切割。切割的合併物然後通過用50 mM Tris-鹼平衡的Q-SEPHAROSE柱。合併含DCRS5的流分，用冷的蒸餾水稀釋，以降低導電性，再次通過新的Q-Sepharose柱，或者4妻著再通過免疫親和抗體柱。合併含DCRS5蛋白的流分，等分，貯藏於-70。C冷藏機。
比較細胞因子受體蛋白的CD語提示，所述蛋白正確摺疊。參見Hazuda等(1969) J. Biol. Chem. 264:1689-1693。
VII. 製備DCRS5特異性抗體
用重組型所述蛋白，例如純化DCRS5或穩定轉染的NIH-3T3細胞，腹膜內免疫近交Balb/c小鼠。用蛋白在合適時間點加強免疫小鼠，用額外的佐劑或不用額外的佐劑，以便進一步刺激產生抗體。收集血 清，或者用收穫的脾細胞製備雜交瘤。
Balb/c小鼠，或者用富集表達所述抗原的分離膜免疫小鼠。適當時， 通常在進一步給予數次後，收集血清。各種基因治療技術可用於例如 原位產生蛋白，以便產生免疫反應。可交叉吸收或免疫選擇血清或抗 體製品，從而製備特定特異性和高度親和性的大致純抗體。
可製備單克隆抗體。例如使脾細胞與合適融合伴侶融合，在生長 培養基中通過標準方法選擇雜交瘤。通過ELISA或其它測定篩選雜交 瘤上清液中的結合DCRS5的抗體的存在。還選擇或製備特異性識別 具體DCRS5的抗體。
另一種方法中，將合成肽或純化蛋白提呈給免疫系統，以產生單 克隆抗體或多克隆抗體。參見例如Coligan (主編，l"l) Current Protocols in Immunology Wiley/Greene; Harlow 和 Lane (1989) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press。 適當的'l"青 況下，結合試劑或者如上所述用例如螢光或其它方法標記，或者固定 在用於淘選方法的支持物上。核酸也可導入動物細胞產生抗原，抗原 再刺激免疫反應。參見例如Wang等(1993) Poc. Nat，l. Acad. Sci. 90:4156-4160; Barry等(1994) BioTechniques 16:616-619; Xiang等(1995) Immunity 2:129-135。
VIII.產生DCRS5的融合蛋白
用DCRS5製備各種融合構建物，包括組合它與IL-12Rpl序列的 實施方案。將合適基因的一部分與表位標記融合，例如FLAG標記， 或者構建雙雜交系統。參見例如Fields和Song (1989) Nature 340:245-246。
表位標記可用於用抗FLAG抗體檢測的表達克隆方法，以檢測結 合配偶體，例如相應細胞因子受體的配體。雙雜交系統也可用來分離特異性結合DCRS5的蛋白。
IX. 結構活性關係
採用標準方法和分析確定特定殘基的重要信息。例如通過在確定 位點(例如在以上鑑定的位點)產生許多不同變異，評價所述變異體的 生物活性，從而進行標準突變分析。可進行到確定改進活性的位點的 程度，或者集中在特定位點以確定保留、阻斷或改進生物活性的可取 代殘基。
或者，天然變異體分析可揭示什麼位點耐受天然突變。這種結果 得自個體變異的群體分析或跨品系或物種的變異群體分析。分析選定 個體的樣品，例如應用PCR分析和測序。這可評價群體多態性。
X. DCRS5和IL-12RP1的共表達
編碼相應基因的載體可轉染入細胞。優選所述載體含有選擇標 記，以鑑定哪些細胞成功轉化。兩種基因的共表達使兩種基因產物正 確締合形成活性受體複合物。
或者，可用使功能二聚體締合的方法。參見例如0，Shea等(1989) Science 245:646-648; Kostelny等(1992) J. Immunol. 148:1547-1553; Patel等(1996) J. Biol. Chem. 271: 30386-30391。胞外結構域表達和物 理締合，例如Fos/Jun亮氨酸拉鏈式親和力驅動的物理締合，產生配 體結合結構，該結構用作診斷作用或治療作用的結合化合物。
本文中引用的所有參考文獻通過引用結合到本文中，其引用程度 如同各個出版物或專利申請特別具體指出的引用結合。
可在不偏離本發明精神和範圍的情況下對本發明進行許多改進 和改變，這對本發明技術人員而言是顯而易見的。本文所述具體實施 方案僅僅是舉例性提供，本發明由所附權利要求書和所述權利要求主 題的完全等同範圍限定；而本發明不受本文舉例性提供的具體實施方 案限制。
67序列表
先靈公司
〈120>哺乳動物受體蛋白、相關試劑及方法
〈130〉 DX01074
PCT/US01/15057
US 60/203,426 2000-05-10
5
<170〉 Patentln Ver. 2. 0
<210〉 1 <211〉 2859 DNA <213〉未知

未知生物描述:靈長類；推測為人類
<220〉
<221〉 CDS
(119). . (2005) 〈220〉
<221〉成熟肽
(188). . (2005)
<220〉
misc一feature
(1).. (2859)
Xaa根據遺傳密碼翻譯
<400〉 1
gtggtacggg組tccattg tgttgggcag ccaaca鄉g tggcagcctg gctctgaagt 60
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tgg Trp
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cat aaa aca His Lys Thr 290
cct Pro
g朋
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tea aaa Ser Lys
gca ttc caa Ala Phe Gin 305
cat g'sc acs His Asp Thr
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aca gtt Thr Val 315
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1222
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tct Ser
ttg att Leu lie 350
ggg 3"U ttt Gly lie Phe
肌C 3g3 tea Asn Arg Ser 355
ttc Phe
cga act Arg Thr
ggg Gly 360
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1270
3犯aga Lys Arg
郷 Arg
ate tta lie Leu 365
ttg tta ate Leu Leu lie
cc8 aag tgg Pro Lys Trp 370
ctt Leu
tat gaa Tyr Glu 375
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lie
1318
cct aat Pro Asn
Met 380
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gtg ￡133 atg
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cag g肌 Gin Glu 390
sat Asn
Ser
1366g犯ctt atg aat aat aat tec agt gag cag gtc eta tat gtt gat ccc 1414 Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gin Val Leu Tyr Val Asp Pro 395 400 405
atg alt aca gag ata aaa gaa ate ttc ate cca gaa cac aag cct aca 1462 Met lie Thr Glu lie Lys Glu lie Phe lie Pro Glu His Lys Pro Thr 410 415 420 425
gac tac aag犯g gag aat aca gga ccc ctg gag aca已ga gac tac ccg 1510 Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 430 435 440
caa aac tcg eta ttc gac aat act aca gtt gta tat att cct gat etc 1558 Gin Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr lie Pro Asp Leu 445 450 455
aac act gga tat aaa ccc caa att tea aat ttt ctg cct gag gga age 1606 Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gin lie Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 460 465 470
cat etc age aa/t aat aat gaa att act tec tta aca ctt aaa cca cca 1654 His Leu Ser Asn Asn Asn Glu lie Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 475 ■ 485
gtt gat tec tta gac tea gga aat aat ccc agg' tta caa aag cat cct 1702 Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gin Lys His Pro 490 495 500 505
aat ttt get ttt tct g.tt tea agt gtg aat tea eta age aac aca ata 1750 Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr lie 510 515 520
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cct gac ata caa aac tea gta gag gag gaa acc acc atg ctt ttg gaa 化站 Pro Asp lie Gin Asn Ser Val Glu G丄u Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 540 545 550
aat gat tea ccc agt gaa act att cca gaa cag acc ctg ctt cct gat 1894 Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr lie Pro Glu Gin Thr l"eu Leu Pro Asp 555 560 565
gaa ttt gtc tec tgt ttg ggg ate gtg aat gag gag ttg cca tct att. 1942 Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly lie Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser lie 570 575 580 585cgaaggtgga acatgcttca cctcatgtat tttttataga
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aat act tat ttt cca caa aat att ttg gaa age cac ttc aat agg att 1990 Asn Thr Tyr Phe Pro Gin Asn lie Leu Glu Ser His Phe Asn Arg lie 590 595 600
tea etc ttg gaa aag tagagctgtg tggtcaaaat caatatgaga aagctgeett 2045 Ser Leu Leu Glu Lys 605
gcaatctgaa cttgggtttt ccctgcaata gaaattgaat tctgcctctt tttgaaaaaa 2105 atgtattcac atacaaatct tcacatggac acatgttttc atttcccttg gataaatacc 2165 taggtagggg attgetggge catatgataa gcatatgttt cagttctacc aatcttgttt 2225 ccagagtagt gacatttctg tgctcctacc atcaccatgt aagaattccc gggagctcca 2285 tgecttttta attttageca ttcttctgcc tmatttctta aaattagaga attaaggtcc 2345
tggtcacaca tacaggcaca aaaacagcat gtc肌ctatt tcctctttat tttccctcat aaaacagctc tctattgtgt acagaaaggg taaat認tgc aaaatacctg gtagtaaaat 2525 aaatgctgaa aattttcctt taaaatagaa teattaggee aggcgtggtg getcatgett 2585 gtaatcccag cactttggta ggctgaggtr ggtggatcd ctgaggtcag gagttcgagt 2645 ccagcctggc caatatgetg aaaccctgtc tcUictaa肌ttac肌aaat tagccggcca 2705 tgg'tggcagg tgcttgtaat cccagctact tgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa 2765 ccaggaaggc agag-gttgea ctgagctgag attgtgccac tgcactccag cct,gggcaac 2825 aagfigc犯agi ctct.gtctgg犯犯33冊aa 2859
〈210〉 2 〈211〉 629 <212〉 PRT 〈213〉末知
〈400〉 2
Met八sn Xaa Val Thr lie Gin Trp Asp Ala Val -20 -15
lie Ala Leu Tyr工le —10
Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly lie Thr Asn lie Asn Cys Ser Gly
-5 -l 1
5His lie Trp Val Glu Pro Ala Thr lie Phe Lys Met Gly Met Asn lie 10 15 20 25
Ser lie Tyr Cys Gin Ala Ala lie Lys Asn Cys Gin Pro Arg Lys Leu 30 35 40
His Phe Tyr Lys Asn Gly lie Lys Glu Arg Phe Gin lie Thr Arg lie 45 50 55
Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His 60 65 70
Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gin Glu Thr 75 80 85
Leu lie Cys Gly Lys Asp lie Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp lie Pro 90 95 100 105
Asp Glu Val Thr Cys Val lie Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys 110 115 120
Thr Trp Asn Ala Xaa Lys Leu Thr Tyr lie Asp Thr Lys Tyr Val Val 125 130 135
His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu G丄u Gin Gin Tyr Leu Thr Ser 140 145 150
Ser Tyr lie Asn lie Ser Thr Asp Ser Leu Gin Gly Gly l'ys Lys Tyr 155 160 165
Leu Val Trp Val Gin Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys 170 175 180 185
Gin Leu Gin lie His Leu Asp Asp lie Val lie Pro Ser Ala Ala Val 190 195 200
工le Ser Arg Ala Glu Thr lie Asn Ala Thr Veil Pro Lys Thr lie lie 205 210 215
Tyr Trp Asp Ser Gin Thr Thr lie Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg 220 225 230
Tyr Lys Ala Thr Thr Asn G]n Thr Trp Asn Val Lys (;lu Phe Asp Thr 235 240 245
Asn Phe Thr Tyr Val Gin Gin Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn工]e 250 255 260 265
73Lys Tyr Val Phe Gin Val Arg Cys Gin Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp 270 275 280
Gin Pro Trp Ser Ser Pro Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro 285 290 295
Gin Val Thr Ser Lys Ala Phe Gin His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu 300 305 310
Thr Val Ala Ser lie Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly 315 320 325
Asp lie Gly Leu Leu Leu Gly Met lie Val Phe Ala Val Met Leu Ser 330 335 340 345
lie Leu Ser Leu lie Gly lie Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly lie 350 355 360
Lys Arg Arg lie Leu Leu Leu lie Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp lie 365 370 375
Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gin Glu Asn Ser 380 385 390
Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gin Val Leu Tyr Val Asp Pro 395 400 405
Met lie Thr Glu lie Lys Glu lie Phe lie Pro Glu His Lys Pro Thr 410 415 420 425
Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 430 435 440
Gin Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr Tie Pro Asp Leu 445 450 455
Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gin lie Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 460 465 470
His Leu Ser Asn Asn Asn Glu lie Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 475 480 485
Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gin Lys His Pro 490 495 500 505
Asn Phe Ala Phe Ser Vsl Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr Tie 510 515 520
Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu lie Leu Asn Gin Gly Glu Cys Ser Ser525 530 535
Pro Asp lie Gin Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 540 545 550
Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr lie Pro Glu Gin Thr Leu Leu Pro Asp 555 560 565
Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly lie Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser lie 570 575 580 585
Asn Thr Tyr Phe Pro Gin Asn lie Leu Glu Ser His Phe Asn Arg lie 590 595 600
Ser Leu Leu Glu Lys 605
3 1887 DNA 〈213〉反向翻譯

<221〉 misc一feature
(1).. (1887)
n可為a， c， g成t
3
Eitg肌ycayg tn;acn3thc3 rtgggaygcn gtnathgcny tntayathyt nttywsntgg 60
tgycsyggng grmthacnaa yath肌ytgy wsnggncayei thtgggtnga rccngcnacn 120
athttyaara tgggnatgaa yathwsnath taytgycarg cngcnathfia raaytgycar 180
ccnmgnaary tncayttyta yaaraayggn athaargarm gnttycarat hacnmgnath 240
aayaaracna cngcnmgnyt ntggtayaar aayttyytng arccncaygc nwsnatgtay 300
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wsnggnta,yc cnccngayat hccngaygar gtnacntgyg tnathtayga rtaywsnggn 420
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〈210〉 4 〈211〉 918 〈212〉 PRT <213〉未知
carathcayy tngaygayat hgtnathccn 660 3thaaygcna cngtnccrma racimthath 720 gtnwsntgyg aratgmgnta yaargcnacn 780 gayacnaayt tyacntaygt ncaxcarwsn 840 gtnttycarg tnmgntgyc3 rgaracnggn 900 ttyttycaya aracnccnga racngtnccn 960 acntggaayw snggnytnac ngtngcnwsn 1020 mgnggngaya thggnytnyt nytnggnatg 1080 wsnytnathg gnathttyaa ymgnwsntty 1140 ytnathccna artggytnta ygaxgayath 1200 atgytncarg araaywsnga rytnatgaay 1260 gayccrmtga thacngarat haargarath 1320 肪raargara ayacnggncc nytnga_racn 1380 aayacrmcng tngtntayal: hccngayytn 1440 ttyytnccng arggnwsnca yytnwsnaay 1500 ccnccngtng aywsnytnga ywsnggnaay 1560 gcnttywsng tnwsnwsngt naaywsnytn 1620 ytnathytna aycaxggnga rtgywsnwsn 1680 acnacnatgy tnytngaraa ygaywsnccn 1740 ccngaygart tygtnwsntg yytnggrmth 1800 tayttyccnc araayathyt ngarwsncay 1860
1887
76
<223〉未知生物描述:靈長類；推測為人類 4
Met Leu Thr Leu Gin Thr Trp Val Val Gin Ala Leu Phe lie Phe Leu 5 10
1
15
Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr lie Ser
20 25
30
Pro Glu Ser Pro Val Val Gin Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys
35 40 45
Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr
50 55 60
lie Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr lie Pro Lys Glu Gin Tyr Thr
65
70
75 80
lie lie Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp lie Ala Ser
85 90
95
Leu Asn lie Gin Leu Thr Cys Asn lie Leu Thr Phe Gly Gin Leu Glu
100 105
110
G丄n Asn Val Tyr Gly lie Thr lie lie Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys
115
120
125
Pro Lys Asn Leu Ser Cys Tie Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys
130
135
140
Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr llis Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu
145
150
155 160
Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg'
165 170
175
Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val
180 185
190
Asn lie G]u Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr
195
200
205
Ser Asp His lie Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro
210
215
220
Pro His Asn匕eu Ser Val lie Asn Ser Glu G]u Leu Ser Ser I]e Leu
225 230
235 240Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser lie Lys Ser Val lie lie Leu Lys 245 250 255
Tyr Asn lie Gin Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gin lie 260 265 270
Pro Pro Glu Asp Thr Als Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Vsl Gin Asp 275 280 285
Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg lie Arg Cys Met Lys Glu 290 295 300
Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly lie 305 310 315 320
Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys lie 325 330 335
Asp Pro Ser His Thr Gin Gly Tyr Arg Thr Val Gin Leu Val Trp Lys 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys lie Leu Asp Tyr Glu Val 355 360 365
Thr Leu Thr Arg Trp I,ys Ser His l,eu Gin Asn Tyr Thr Val Asn Ala 370 375 380
Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu 385 390 395 400
Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr lie 405 410 415
Pro Ala Cys Asp Phe Gin Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala 420 425 430
Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu 435 440 445
Ser Val L,ys Lys Tyr lie Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala. 450 455 460
Pro Cys lie Thr Asp Trp Gin Gin Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr 465 470 475 480
Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu lie Thr Val 485 490 495Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser lie Lys Ala 500 505 510
Tyr Leu Lys Gin Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys 515 520 525
Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gin Leu Pro Val 530 535 540
Asp Val Gin Asn Gly Phe lie Arg Asn Tyr Thr lie Phe Tyr Arg Thr 545 550 555 560
lie lie Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu 565 570 575
Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met 580 585 590
Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe 595 600 605
Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gin Gly Glu lie Glu Ala lie Val Val Pro 610 615 620
Val Cys Leu Ala Phe L.eu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val L.eu Phe Cys 625 630 635 640
Phe Asn Lys Arg Asp Leu lie Lys Lys His lie Trp Pro Asn Val Pro 645 650 655
Asp Pro Ser Lys Ser His lie Ala Gin Trp Ser Pro His Thr Pro Pro 660 665 670
Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gin Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe 675 680 685
Thr Asp Val Ser Val Val Glu lie Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe 690 695 700
Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys l丄e Asn 705 710 715 720
Thr Glu Gly His Ser Ser Gly ].]e Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser 725 730 735
Ser Arg Pro Ser lie Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gin Asn 740 745 750Thr Ser Ser Thr Val Gin Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg 755 760 765
His Gin Val Pro Ser Val Gin Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gin
770 775 780
Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gin Leu Val Asp 785 790 795 800
His Val Asp Gly Gly Asp Gly lie Leu Pro Arg Gin Gin Tyr Phe Lys 805 810 815
Gin Asn Cys Ser Gin His Glu Ser Ser Pro Asp lie Ser His Phe Glu 820 825 830
Arg Ser Lys Gin Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu 835 840 845
Lys Gin Gin lie Ser Asp His lie Ser Gin Ser Cys Gly Ser Gly Gin 850 855 860
Met Lys Met Phe Gin Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly 865 870 875 880
Thr Glu Gly Gin Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala 885 890 895
Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gin Thr Val Arg Gin 900 905 910
G]y Gly Tyr Met Pro Gin 915
<210〉 5 <211〉 862 〈212〉 PRT 未知

<223〉未知生物描述:靈長類；推測為人類 5
Met Ala His Thr Phe Arg Gly Cys Ser Leu Ala Phe Met Phe l丄e lie 15 10 15
Thr Trp Leu Leu lie Lys Ala Lys lie Asp Ala Cys Lys Arg Gly Asp 20 25 30Val Thr Val Lys Pro Ser His Val lie Leu Leu Gly Ser Thr Val Asn 35 40 45
lie Thr Cys Ser Leu Lys Pro Arg Gin Gly Cys Phe His Tyr Ser Arg 50 55 60
Arg Asn Lys Leu lie Leu Tyr Lys Phe Asp Arg Arg lie Asn Phe His 65 70 75 80
His Gly His Ser Leu Asn Ser Gin Val Thr Gly Leu Pro Leu Gly Thr 85 90 95
Thr Leu Phe Val Cys Lys Leu Ala Cys lie Asn Ser Asp Glu lie Gin 100 105 110
lie Cys Gly Ala Glu lie Phe Val Gly Val Ala Pro Glu Gin Pro Gin 115 120 125
Asn Leu Ser Cys lie Gin Lys Gly Glu Gin Gly Thr Val Ala Cys Thr 130 135 140
Trp Glu Arg Gly Arg Asp Thr His Leu Tyr Thr Glu Tyr Thr Leu Gin 145 150 155 160
Leu Ser Gly Pro Lys Asn Leu Thr Trp Gin Lys Gin Cys Lys Asp丄le 服 170 175
Tyr Cys Asp Tyr Leu Asp Phe Gly lie Asn Leu Thr Pro Glu Se:r Pro 180 185 190
Glu Ser Asn Phe Thr Ala Lys Val Thr Ala Val Asn Ser Leu Gly Ser 195 200 205
Ser Ser Ser Leu Pro Ser Thr Phe Thr Phe Leu Asp lie Val Arg Pro 210 215 220
Leu Pro Pro Trp Asp lie Arg lie Lys Phe Gin Lys Ala Ser Val Ser 225 230 235 240
Arg Cys Thr Leu Tyr 丁rp Arg Asp G]u Gly Leu Val l.eu I,eu Asn Arg 245 250 255
Leu Arg Tyr Arg Pro Ser Asn Ser Arg Leu Trp Asn Met Val Asn Val 260 265 270
Thr Lys Ala Lys Gly Arg His Asp Leu Leu Asp Leu Lys Pro Phe Thr 275 280 285
81Glu Tyr Glu Phe Gin lie Ser Ser Lys Leu His Leu Tyr Lys Gly Ser 290 295 300
Trp Ser Asp Trp Ser Glu Ser Leu Arg Ala Gin Thr Pro Glu Glu Glu 305 310 315 320
Pro Thr Gly Met Leu Asp Val Trp Tyr Met Lys Arg His lie Asp Tyr 325 330 335
Ser Arg Gin Gin lie Ser Leu Phe Trp Lys Asn匸eu Ser Val Ser Glu 340 345 350
Ala Arg Gly Lys lie Leu His Tyr Gin Val Thr Leu Gin Glu Leu Thr 355 360 365
Gly Gly Lys Ala Met Thr Gin Asn lie Thr Gly His Thr Ser Trp Thr 370 375 380
Thr Val lie Pro Arg Thr Gly Asn Trp Ala Val Ala Val Ser Ala Ala 385 390 395 400
Asn Ser Lys Gly Ser Ser Leu Pro Thr Arg lie Asn lie Met Asn Leu 405 410 415
Cys Glu Ala Gly Leu Leu Ala Pro Arg G丄n Val Ser Ala Asn Ser Glu 420 425 430
Gly Met Asp Asn lie Leu Val Thr Trp Gin Pro Pro Arg Lys Asp Pro 435 440 445
St'r A丄a Val Gin Glu Tyr Val Val Glu Trp Arg Glu Leu His Pro Gly 450 455 460
Gly Asp Thr Gin Va.l Pro Leu Asn Trp Leu Arg Ser Arg Pro Tyr Asn 465 470 475 480
Val Ser Ala Leu lie Ser Glu Asn lie Lys Ser Tyr lie Cys Tyr Glu 485 490 495
lie Arg Val Tyr Ala Leu Ser Gly Asp Gin Gly Gly Cys Ser Ser lie 500 505 510
Leu G]y Asn Ser Lys His Lys Ala Pro !」eu Ser Gly Pro His lie Asn 515 520 525
Ala lie Thr Glu Glu乙ys Gly Ser lie Leu lie Ser Trp Asn Ser lie 530 535 540
Pro Val Gin Glu Gin Met Gly Cys Leu Leu His Tyr Arg lie Tyr Trp545
550
555
560
Lys Glu Arg Asp Ser Asn Ser Gin Pro Gin Leu Cys Glu lie Pro Tyr 565 570 575
Arg Val Ser Gin Asn Ser His Pro I'le Asn Ser Leu Gin Pro Arg Val 580 585 590
Thr Tyr Val Leu Trp Met Thr Ala Leu Thr Ala Ala Gly Glu Ser Ser 595 600 605
His Gly Asn Glu Arg Glu Phe Cys Leu Gin Gly Lys Ala Asn Trp Met 610 615 620
Ala Phe Val Ala Pro Ser lie Cys lie Ala lie lie Met Val Gly lie 625 630 635 640
Phe Ser Thr His Tyr Phe Gin Gin Lys Val Phe Val Leu Leu Ala Ala 645 650 655
Leu Arg Pro Gin Trp Cys Ser Arg Glu lie Pro Asp Pro Ala Asn Ser 660 665 670
Thr Cys Ala Lys Lys Tyr Pro lie Ala Glu Glu乙ys Thr Gin Leu Pro 675 680 685
Leu Asp Arg Leu Leu I丄e Asp Trp Pro Thr Pro Glu Asp Pro Glu Pro 690 695 700
Leu Val lie Ser Glu Val Leu His Gin Val Thr Rro Val Phe Arg His 705 710 715 720
Pro Pro Cys Ser Asn Trp Pro Gin Arg Glu Lys Gly lie Gin Gly His 725 730 735
Gin Ala Ser Glu Lys Asp Met Met His Ser Ala Ser Ser Pro Pro Pro 740 745 750
Pro Arg Ala Leu Gin Ala Glu Ser Arg Gin Leu Val Asp l」eu Tyr Lys 755 760 765
Val Leu Glu Ser Arg Gly Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys 770 775 780
Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr 785 790 795 800
Leu Pro Ser Asn lie Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala 805 810 815Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gin His lie Ser Leu Ser Val Phe 820 825 830
Pro Ser Ser Ser Leu His Pro Leu Thr Phe Ser Cys Gly Asp Lys Leu 835 840 845
Thr Leu Asp Gin Leu Lys Met Arg Cys Asp Ser Leu Met Leu 850 855 860
8權利要求
1.一種大致純或重組多肽，它包含SEQ ID NO2胞內部分的至少10個連續胺基酸。
2. 權利要求1的多肽，其中a) 所述多肽包含SEQIDNO: 2胞內部分的至少25個連續氨 基酸；b) 所述多肽為重組多肽，它包含SEQIDNO: 2的胞內部分；c) 所述多肽還包含SEQIDNO: 2非胞內部分的至少10個連 續胺基酸；d) 所述多肽包含SEQ ID NO: 2胞外部分的至少25個胺基酸；e) 所述多肽包含成熟SEQIDNO: 2，或者f) 所述多肽為大致純天然多肽。
3. 權利要求1的重組多肽，它a) 由表1的成熟序列組成；b) 為非糖基化多肽；c) 來自人類；d) 包含SEQ ID NO: 2的至少40個連續胺基酸；e) 具有SEQIDNO: 2的至少3個非重疊區段，每個區段至 少15個連續胺基酸；f) 為SEQ ID NO: 2的天然多態性變異體；g) 具有至少約30個胺基酸的長度；h) 具有至少2個靈長類DCRS5特異性非重疊表位；i) 其分子量至少30kD的天然糖基化多肽； j)為合成多肽；k)為無菌形式；1)為水性溶液或緩衝溶液；m)與固體支持物結合；n)與另一種化學部分綴合；或者0) 與IL-12R(31多肽物理締合。
4. 一種《且合物，它包含的物質選自a) 包含SEQIDNO: 2胞內部分的至少2個不同的非重疊區 段、每個區段至少6個連續胺基酸的大致純或重組多肽；b) 包含SEQIDNO: 2胞內部分的至少12個連續胺基酸的大 致純或重組多肽；或者c) 包含成熟SEQ ID NO: 2的大致純天然序列多肽。
5. 權利要求4的多肽，其中1) 權利要求4a多肽，其中a) 所述不同的非重疊區段i) 包括至少12個胺基酸的一種區段；ii) 包括至少7個胺基酸的一種區段和至少9個胺基酸的 第二種區段；iii) 包括至少6個胺基酸的第三種不同區段；或iv) 包含以下之一R355-L373、 P378-L405、 V407-D426、 K428誦D439、 P441畫V452、 I454-G460、 I465-T587或 N592掘；或b) 所述多肽還包含SEQIDNO: 2胞外部分的至少2個不 同的非重疊區段，每個區段至少6個連續胺基酸；2) 權利要求4b的多肽，其中a) 所述至少12個連續胺基酸區段包含以下之一 R355-L373、 P378-L405、 V407-D426、 K428-D439、 P441-V452、 I454-G460、 I465-T587或N592-606;或b) 所述多肽還包含SEQIDNO: ^9包外部分的至少2個不同 的非重疊區段，每個區段至少6個連續胺基酸；3) 權利要求4c的多肽，它還包含純化或檢測表位。
6. 權利要求4的多肽，它a) 由表1的成熟序列組成；b) 為非糖基化多肽；c) 來自人類；d) 包含SEQ ID NO: 2的至少40個連續胺基酸；e) 具有SEQ ID NO: 2的至少3個非重疊區段，每個區段至 少15個連續胺基酸；f) 為SEQIDNO: 2的天然多態性變異體；g) 具有至少約30個胺基酸的長度；h) 具有至少2個靈長類DCRS5特異性非重疊表位；i) 其分子量至少30kD的天然糖基化多肽； j)為合成多肽；k)為無菌形式；1)為水性溶液或緩衝溶液；m)與固體支持物結合；n)與另一種化學部分綴合；或者o)與IL-12R)M多肽物理締合。
7. —種《且合物，它包含a) 與IL-12R(31組合的大致純的權利要求4多肽；或b) 權利要求4的所述多肽和載體，其中所述載體為i) 水性化合物，包括水、鹽水和/或緩沖液；和/或ii) 配製用於口服、直腸、鼻、局部或胃腸外給藥。
8. —種試劑盒，它包含^5l利要求4的多肽和a) 包含所述多肽的區室；b) 包含IL-12RP1多肽的區室；c) 包含p40、 IL-B30或p40/IL-B30多肽的區室;或者d) 所述試劑盒試劑的使用或處理說明書。
9. 一種包含抗體抗原結合位點的結合化合物，它特異性結合權利 要求1所述多肽的所述胞內部分，其中a) 所述結合化合物裝在一個容器中；b) 所述多肽來自人類；c) 所述結合化合物是Fv、 Fab或Fab2片段；d) 所述結合化合物與另一種化學部分綴合；或者e) 所述抗體i) 是針對表1成熟多肽的肽序列產生的抗體；ii) 是針對成熟DCRS5產生的抗體；iii) 是針對純化的人DCRS5產生的抗體；iv) 為免疫選擇性抗體；v) 為多克隆抗體；螢光標記；vi) 結合變性DCRS5;vii) 對抗原的Kd至少30 juM;viii) 與固體支持物結合，包括珠子或塑料膜；ix) 為無菌組合物；或者x) 為檢測性標記的抗體，包括放射性標記或螢光標記。
10. —種試劑盒，包含權利要求9所述結合化合物和a) 包含所述結合化合物的區室；b) 包含以下組分的區室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL畫12Rpi多肽；c) 包含選擇性結合以下組分的抗體的區室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12Rpi多肽；或者d) 所述試劑盒試劑使用或處理的說明書。
11. 一種生產抗原抗體複合物的方法，該方法包括在合適條件 下使靈長類DCRS5多肽與權利要求9的抗體接觸，由此形成所述復 合物。
12. ;f又利要求11的方法，其中a) 所述複合物純化自其它細胞因子受體；b) 所述複合物純化自其它抗體；c) 所述接觸是與包含幹擾素的樣品接觸；d) 所述接觸使得可定量檢測所述抗原；e) 所述接觸是與包含所述抗體的樣品接觸；或者f) 所述接觸使得可定量檢測所述抗體。
13. —種組合物，它包含a) 權利要求9的無菌結合化合物，或b) 權利要求9的所述結合化合物和載體，其中所述載體為i) 水性化合物，包括水、鹽水和或緩沖液；和/或ii) 配製用於口服、直腸、鼻、局部或胃腸外給藥。
14. 一種分離或重組核酸，它編碼包含SEQIDNO: 2的胺基酸 1-606的多肽。
15. —種細胞或組織，它包含權利要求14的所述重組核酸。
16. 權利要求15的細胞，其中所述細胞是a) 原核細胞；b) 真核細月包；c) 細菌細月包；d) 酵母細胞；e) 昆蟲細胞；f) 哺乳動物細月包；g) 小鼠細胞；h) 靈長類細胞；或者i) 人類細月包。
17. —種試劑盒，它包含權利要求14的所述核酸和a) 包含所述核酸的區室；b) 包含編碼以下組分的核酸的區室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12Rpi多肽;c) 包含以下組分的區室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12R(31多肽；d) 包含選擇性結合以下組分的抗體的區室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12R(31多肽；或者f)所述試劑盒試劑使用或處理的說明書。
18. —種調節細胞生理或發育的方法，該方法包括所述細胞與以 下組分接觸a) p40/IL-B30的拮抗劑，該拮抗劑為包含以下組分的複合物:i) 靈長類DCRS5胞外部分；和/或ii) 靈長類IL-12R(31胞外部分；b) p40/IL-B30的拮抗劑，它為結合包含以下組分的複合物的 抗體i) 靈長類DCRS5;和/或ii) 靈長類IL-12R(31;c) p40/IL-B30的拮抗劑，它為結合DCRS5的抗體；d) p40/IL-B30的拮抗劑，它為抗IL-12Rpi的抗體；e) p40/IL-B30的拮抗劑，它為DCRS5或IL-12Rpi的反義核 酸；或者f) p40/IL-B30的激動劑，它為結合包含以下組分的複合物的抗體i) 靈長類DCRS5;和/或ii) 靈長類IL-12R(31。
19. 權利要求18的方法，其中所述接觸為與拮抗劑接觸，而且a) 所述接觸與以下組分的拮抗劑混合i) IL-12;ii) IL-18;iii) TNF;或iv) IFNy;或者b) 所述細胞來自宿主，所述宿主i) 表現出慢性Thl介導性疾病的體徵或症狀；ii) 表現出多發性硬化、類風溼性關節炎、骨關節炎、炎 症性腸病、4唐尿病、牛皮瘈或膿毒病的症狀或體徵；或 者iii) 接受同種異體移植。
20. 權利要求18的方法，其中所述接觸是與激動劑接觸，而且a) 所述接觸與以下組分混合i) IL-12;ii) IL-18;iii) TNF;或iv) IFNy;或者b) 所述細胞來自宿主，所述宿主i) 表現出慢性TH2反應的體徵或症狀；ii) 罹患胂瘤或存在病毒或真菌生長；iii) 接受疫苗；或者iv) 存在變態反應。
21. 權利要求14的核酸，它包含SEQIDNO: 1的核普酸188-2005。
22. —種大致純或重組SEQIDNO: 2抗原性多肽。
23. 權利要求22的多肽，其中所述多肽包含a) SEQIDNO: 2的殘基1-101;b) SEQ ID NO: 2的殘基102-195c) SEQ ID NO: 2的殘基196-297;d) SEQ ID NO: 2的殘基l-328;或e) SEQ ID NO: 2的殘基1-606。
24. —種異源二聚體組合物，它包含權利要求22的多肽和IL誦12Rf31。
25. 權利要求24的組合物，它能夠結合IL-B30/p40。
26. —種試劑盒，它包括權利要求22的多肽和使用說明書。
27. 權利要求26的試劑盒，其中所述試劑盒還包括a) IL-12(31多肽；b) p40、 IL-B30或IL-B30/p40多肽。
28. —種結合組合物，它特異性結合權利要求22的多肽。
29. 權利要求28的結合組合物，其中所述結合組合物為a) 多克隆抗體；b) 單克隆抗體；或c) Fab、 Fab2或Fv片段。
30. 權利要求28的結合組合物，它特異性結合權利要求23的多肽。
31. 權利要求30的結合組合物，其中所述結合組合物為a) 多克隆抗體；b) 單克隆抗體；或c)Fab、 Fab2或Fv片段。
32. —種試劑盒，它包括權利要求28的結合組合物和使用說明書。
33. —種生產抗原抗體複合物的方法，該方法包括在適合形成所述複合物的條件下接觸權利要求29的抗體。
34. —種分離或重組多核香酸，它編碼權利要求22的多肽。
35. 權利要求34的多核苷酸，它編碼權利要求23的多肽。
36. 權利要求34的多核苷酸，它包含SEQIDNO: 1。
37. —種表達載體，它包含權利要求34的多核苷酸。'
38. —種宿主細胞，它包含權利要求37的表達載體。
39. 權利要求38的宿主細胞，其中所述宿主細胞為a) 哺乳動物細月包；b) 昆蟲細月包；c) 細菌細胞；或d) 酵母細胞。
40. —種生產SEQIDNO: 2抗原性多肽的方法，該方法包括a) 在適合表達所述多肽的條件下培養權利要求38的宿主細胞；b) 分離或純化所述多肽。
41. 一種調節細胞生理或發育的方法，該方法包括使所述細胞與SEQ ID NO: 2的激動劑或拮抗劑接觸。
全文摘要
本發明提供編碼哺乳動物(例如靈長類)受體的核酸、純化受體蛋白及其片段。還提供多克隆抗體和單克隆抗體。描述了使用所述組合物進行診斷及治療的方法。
文檔編號A61K45/06GK101654479SQ200910159449
公開日2010年2月24日 申請日期2001年5月10日 優先權日2000年5月10日
發明者C·L·帕哈姆, K·W·穆爾, M·基裡卡, R·A·卡斯特萊恩 申請人:先靈公司