積雪草酸及其衍生物在製備抗抑鬱藥物中的應用的製作方法

2023-07-20 14:12:41 2

專利名稱：積雪草酸及其衍生物在製備抗抑鬱藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及烏蘇烷型五環三萜類化合物的新用途，具體地說涉及積雪草酸及其衍生物的一種新用途，更具體說涉及積雪草酸及其衍生物在製備抗抑鬱藥物中的新用途。
背景技術：
當今世界危害人類健康的五大疾病之一的情感性精神障礙，已經給人類社會帶來沉重的負擔。情感性精神障礙中的抑鬱症是以顯著而持久的情緒低落、行為木僵和悲觀厭世為主要特徵的一組疾病。實際上它很普通，以至被稱為精神疾病中的「普通感冒」，同時它還是嚴重的、威脅生命的疾病，折磨著世界上數以千萬計的人。因此，迫切需要安全、高效、低廉的抗抑鬱藥。
目前用於治療抑鬱症的藥物主要有三環類抗抑鬱劑、單胺氧化酶抑制劑和5-羥色胺重吸收抑制劑，但是均有不同程度的不良反應，如嗜睡、視物模糊、高血壓、驚厥和性慾低下等，從而限制了其廣泛使用。因此，尋找新型、不良反應作用小的抗抑鬱藥仍然勢在必行。
積雪草總苷主要由積雪草苷(asiaticoside)和羥基積雪草苷(madecassoside)組成，是從傘形科植物積雪草(Centella asiatica)中提取分離得到的，對抑鬱具有治療作用(參見中國專利CN1387868A和CN1377649A)。而積雪草酸(asiatic acid)和其衍生物羥基積雪草酸(madecassic acid)分別是積雪草苷和羥基積雪草苷的苷元，也是由傘形科植物積雪草中提取分離得到。
眾所周知，在植物體內苷和苷元是共存的，苷元是苷去掉糖的部分，而苷的活性與苷元的活性之間沒有必然的聯繫。苷有活性，苷元有可能無活性，如許多皂苷有溶血活性，但其相應的苷元則沒有此作用；苷有活性，苷元也可能有活性，如甘草主要有效成分甘草甜素(glycyrrhizin)及其苷元——甘草次酸(glycyrrhetinic acid)均具有活性(參見金建軍，夏德全.國外醫學·中醫中藥分冊.1994；16(1)13-15)。
有研究資料表明，積雪草酸及其衍生物有治療創傷、皮膚潰瘍、抗癌、保肝、痴呆和識別紊亂的作用(參見國外專利WO96/17819、WO98/23575、WO98/23278、WO98/23574、WO98/37899)。但是迄今為止尚未見積雪草酸及其衍生物用於製備抗抑鬱疾病藥物的報導。

發明內容
本發明需要解決的技術問題是公開積雪草酸及其衍生物在製備抗抑鬱藥物中的應用，以滿足人們的需要。
在篩選具有抗抑鬱作用的天然活性成分過程中，發明人發現積雪草的化學成分中除揮髮油和極性較大的苷類成分外，非揮發性脂溶性部分(氯仿萃取部分)也具有很強的抗抑鬱作用，對該部分進行分離，發現活性部位是積雪草總苷元，進一步分離得到積雪草酸和羥基積雪草酸，均顯示強抗抑鬱作用。同時，發明人對積雪草酸的其他衍生物進行了大量研究，證實均具有抗抑鬱活性，並在實施例中公布了部分實驗數據和分析結果。
所說的積雪草酸及其衍生物的化學結構通式如下 其中，R1為氫或羥基；R2為氫、含1～4個碳原子的直鏈或支鏈低級烷基、鹼金屬元素、鹼土金屬元素、銨或含1～6個碳原子的有機銨中的一種；所說的1～4個碳原子的直鏈或支鏈低級烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基或仲丁基中的一種；所說的1～6個碳原子的有機銨包括甲銨、乙銨、二乙銨、三乙銨、丙銨、異丙銨、丁銨、異丁銨、叔丁銨或仲丁銨中的一種；優選的包括積雪草酸、積雪草酸甲酯、積雪草酸乙酯、積雪草酸丙酯、積雪草酸鈉、積雪草酸鉀、積雪草酸鈣、積雪草酸鎂、積雪草酸銨、積雪草酸甲銨、積雪草酸乙銨、積雪草酸二乙銨、積雪草酸三乙銨、羥基積雪草酸、羥基積雪草酸甲酯、羥基積雪草酸乙酯、羥基積雪草酸丙酯、羥基積雪草酸鈉、羥基積雪草酸鉀、羥基積雪草酸鈣、羥基積雪草酸鎂、羥基積雪草酸銨、羥基積雪草酸甲銨、羥基積雪草酸乙銨、羥基積雪草酸二乙銨或羥基積雪草酸三乙銨中的一種。上述化合物的基團如表1。
表1、積雪草酸及其相關的衍生物

本發明所說的積雪草酸及其衍生物羥基積雪草酸是從傘形科植物積雪草中提取的，有文獻[J.E.Bontems，Bull.Sci.Pharmacol.1941；(49)186-91.]報導積雪草酸及羥基積雪草酸的提取方法，國外專利(WO00/63148、WO96/17819)公開了積雪草酸衍生物的製備方法，並對積雪草酸及其衍生物的理化數據進行了詳細的報導，本發明不再贅述。
上述有關化合物的製備方法如下上述鹽類衍生物的製備方法是，將積雪草酸或羥基積雪草酸溶解在一定濃度的乙醇溶液中，在一定溫度下，與相應的鹼溶液反應，再回收溶劑，並在一定濃度的乙醇中進行重結晶，即得到積雪草酸、羥基積雪草酸的鹽類衍生物，參見國外專利WO00/63148。
上述酯類衍生物的製備方法，參見文獻Shim，P.-J.；Park，J.-H.；Chang，M.-S.；Lim，M.-J.；Kim，D.-H.；Jung，Y.-H.；Jew，S.-s.；Park，E.-H.；Kim，H.-D.Bioorg.Med.Chem.Lett.1996，6，2937.和Singh，B.；Rastogil，R.P. Phytochemistry 1968，7，1385.及國外專利WO96/17819。
研究表明，積雪草苷與其苷元積雪草酸分子結構不同，因此儘管積雪草苷的抗抑鬱活性已有報導，但未見積雪草酸抗抑鬱活性的報導。眾所周知，藥物代謝可以使藥物失活，也可以使其轉化為活性形式。有研究資料表明，積雪草苷在體內被轉化成其苷元——積雪草酸[參見Rush WR，Murray GR，Graham DJ.Eur J Drug Metab Pharmacokinet.1993Oct-Dec；18(4)323-6；以及Grimaldi R，De Ponti F，D′Angelo Leg.J Ethnopharmacol.1990Feb；28(2)235-41]。
發明人對積雪草酸及其衍生物進行了大量的研究，發現所述及的積雪草酸的衍生物均具有抗抑鬱活性，進而證實積雪草酸是積雪草苷在胃腸道內代謝的活性形式。直接使用積雪草酸，無須經過胃腸道細菌的代謝，使作用更直接，避免個體之間的胃腸道菌群活性有差異造成代謝產物的差異而產生藥效上的差異，從而克服了積雪草苷給藥劑量難以控制的問題，並提高了生物利用度。
此外，積雪草苷、羥基積雪草苷容易水解，其製備的製劑穩定性難以控制，使其工業化生產受到限制；本發明積雪草酸及其衍生物化學性質穩定，抗抑鬱效果明顯，故其更適於抗抑鬱藥物的工業化生產。
本發明所述及的積雪草酸及其衍生物還可以以組合物的形式施用於需要治療的患者，所說的組合物包括治療有效量的積雪草酸及其衍生物和醫藥學上可接受的載體；所說的載體包括賦形劑，如澱粉、水等；潤滑劑，如硬脂酸鎂等；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如乳糖等；粘接劑，如預膠化澱粉、糊精等；優選含有重量百分比為0.1～99.9％的積雪草酸及其衍生物；積雪草酸及其衍生物的藥物組合物可以採用本領域公知的方法製成各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、注射劑等，採取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射、皮下注射)、黏膜透析等給藥途徑進行抑鬱症的治療。
用於患者時，劑量為0.6～60mg/kg·d天，該劑量通常根據患者的年齡和體重以及症狀的狀況決定。
積雪草酸是積雪草苷在胃腸道生物轉化中的活性形式，直接使用積雪草酸，藥物的生物利用度高，可以準確控制用藥劑量。積雪草酸性質穩定，使用積雪草酸製備的製劑質量穩定。
實驗證明，本發明的積雪草酸及其衍生物，以及藥物組合物是一種安全、高效、穩定、價廉的預防和治療抑鬱症的藥物，均具有較高的活性，尤其是積雪草酸、積雪草酸鈉等化合物的活性更高，優於多塞平。
具體實施例方式
下面通過實施例具體說明本發明的內容。在本發明中，以下所述的實例是為了更好地闡述本發明，並不是用來限制本發明的範圍。
實施例1、積雪草總苷元片劑的製備處方積雪草總苷元30g澱粉30g乳糖40g羧甲基澱粉鈉5g澱粉漿(7％) 適量硬脂酸鎂1％(1.25g)製成1000片工藝取處方量積雪草總苷元，粉碎過100目篩，再將處方量的澱粉、乳糖粉碎過100目篩，混勻。將積雪草酸、羧甲基澱粉鈉加入混勻的澱粉和乳糖中，混勻。加入適量7％澱粉漿拌勻，經16目鐵篩絲網制粒，60℃以下乾燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，分析含量後壓片。可製成1000片每片含30mg積雪草總苷元的片劑。
實施例2、積雪草酸膠囊劑的製備處方積雪草酸 30g
澱粉 160g澱粉矽膠 10g製成1000粒工藝取處方量積雪酸，粉碎過100目篩，加入處方量的澱粉、澱粉矽膠中，混勻，直接裝入膠囊，可製成1000粒每粒含30mg積雪草酸的膠囊劑。
實施例3、積雪草酸鈉注射劑的製備處方積雪草酸鈉 10g乙醇(95％) 4000g丙二醇(C.P.)1000g注射用水加至10000ml製成1000支工藝取20℃乙醇(95％)5000g，加入活性炭5g攪拌，經砂芯組減壓過濾，備用。取處方量積雪草酸鈉加入上述乙醇4000g中，加熱至約50℃，充分攪拌，使之溶解澄明，然後加入處方量丙二醇，再加入新鮮注射用水使全量成10000ml，充分攪拌，混勻，加入活性炭3g，經砂芯組減壓過濾澄明，合併前後濾液，再以專用砂芯精濾澄明。檢查含量及澄明度合格後灌封，100℃流通蒸氣滅菌30min，即得每隻10ml含積雪草酸鈉10mg的注射劑。
實施例4、積雪草總苷元混懸劑的製備處方積雪草總苷元 300g羧甲基纖維素鈉(CMC)100g蒸餾水 加至100000ml製成1000瓶工藝取處方量積雪草總苷元粉碎至200目，加入到已經溶脹好的處方量的CMC中，攪拌均勻，加入蒸餾水至100000ml，攪拌成混懸，即得每毫升含積雪草總苷元3mg的混懸劑。實施例5、積雪草總苷元的抗抑鬱作用實驗積雪草總苷元的主要成分包括積雪草酸和羥基積雪草酸。積雪草總苷元的抗抑鬱作用採用獲得性小鼠絕望模型(小鼠懸尾實驗和小鼠強迫遊泳實驗)進行檢測和驗證。
①實驗動物19～22克ICR雄性小鼠，每10隻/籠群養，自由覓食和飲水，室溫(23±2)℃，自然光照。
②藥物配製將被檢測藥物(積雪草總苷元，購於廣西昌洲天然產物開發有限公司，批號20021014，其中積雪草酸佔41％，羥基積雪草酸佔54％)按實施例4所述的方法製成混懸劑，臨用時配成所需濃度。
③實驗方法A、小鼠懸尾實驗空白對照組每組動物10隻，給予與藥物組等體積的0.1％的CMC溶液；陽性對照藥組每組動物10隻，給予藥物多塞平，劑量50mg/kg；試驗藥物組每組動物10隻，給予被檢測藥物(積雪草總苷元)，分低、中、高劑量，分別為30mg/kg，60mg/kg，120mg/kg；每天上午灌胃一次，連續給藥7天。末次給藥後1小時，將動物尾端2釐米部位貼在一水平支撐物上，使動物成倒掛狀態，支撐物放置於一敞口箱內，其頭部離底面約5釐米。記錄小鼠6分鐘內不動時間，各組小鼠平行操作，結果見表2。
表2、積雪草總苷元對小鼠懸尾實驗和強迫遊泳實驗不動時間的影響(x±SD，n＝10)懸尾實驗 強迫遊泳實驗不動時間(秒) 不動時間(秒)空白對照組 138.5±24.3 182.8±23.9多塞平組(50mg/kg) 100.1±41.7*108.5±67.6**小劑量組(30mg/kg) 114.1±23.0*150.6±46.4中劑量組(60mg/kg) 105.8±26.1*147.2±43.8*大劑量組(120mg/kg) 101.7±24.2**140.5±36.4***p＜0.05；**p＜0.01B、小鼠強迫遊泳實驗基本按照Porsolt方法進行。藥物和劑量同小鼠懸尾實驗，小鼠每天上午灌胃一次，連續給藥7天。末次給藥後1小時，將小鼠單獨放入高20釐米、直徑14釐米的圓柱型玻璃缸中，缸內水深10釐米，水溫23～25℃。從小鼠入水後記時6分鐘，記錄後4分鐘內的累計不動時間，各組小鼠平行操作。結果見表2。
從表2結果可以看出，積雪草總苷元的低、中、高3個劑量均能明顯縮短小鼠懸尾和強迫遊泳不動時間，表明積雪草總苷元具有明顯的抗抑鬱作用。
實施例6、積雪草酸的抗抑鬱作用實驗積雪草酸的抗抑鬱作用採用獲得性小鼠絕望模型(小鼠懸尾實驗和小鼠強迫遊泳實驗)進行檢測和驗證。
①實驗動物同實施例5。
②藥物配製積雪草酸購於廣西昌洲天然產物開發有限公司，批號20021014，純度96.20％，藥物配製方法同實施例5。
③實驗方法A、小鼠懸尾實驗空白對照組同實施例5；陽性對照藥組同實施例5；試驗藥物組同實施例5；操作方法同實施例5，結果見表3。
表3、積雪草酸對小鼠懸尾實驗和強迫遊泳實驗不動時間的影響(x±SD，n＝10)懸尾實驗 強迫遊泳實驗不動時間(秒) 不動時間(秒)空白對照組138.5±24.3 182.8±23.9多塞平組(50mg/kg) 100.1±41.7*108.5±67.6**小劑量組(30mg/kg) 104.4±25.7*159.9±24.3*中劑量組(60mg/kg) 87.9±30.1**156.5±28.5*大劑量組(120mg/kg)86.8±22.5**147.5±29.3***p＜0.05；**p＜0.01
B、小鼠強迫遊泳實驗同實施例5，結果見表3。
從表3結果可以看出，積雪草酸的低、中、高3個劑量均能顯著縮短小鼠懸尾不動時間，明顯縮短小鼠強迫遊泳不動時間，表明積雪草酸具有明顯的抗抑鬱作用。
實施例7、羥基積雪草酸的抗抑鬱作用實驗羥基積雪草酸的抗抑鬱作用採用獲得性小鼠絕望模型(小鼠懸尾實驗和小鼠強迫遊泳實驗)進行檢測和驗證。
①實驗動物同實施例5。
②藥物配製羥基積雪草酸購於廣西昌洲天然產物開發有限公司，批號20021014，純度93.76％，藥物配製方法同實施例5。
③實驗方法A、小鼠懸尾實驗空白對照組同實施例5；陽性對照藥組同實施例5；試驗藥物組同實施例5；操作方法同實施例5，結果見表4。
B、小鼠強迫遊泳實驗同實施例5，結果見表4。
表4、羥基積雪草酸對小鼠懸尾實驗和強迫遊泳實驗不動時間的影響懸尾實驗 強迫遊泳實驗不動時間(秒) 不動時間(秒)空白對照組 138.5±24.3 182.8±23.9多塞平組(50mg/kg)100.1±41.7*108.5±67.6**小劑量組(30mg/kg)110.5±30.6*161.1±24.4中劑量組(60mg/kg)107.4±37.4*154.9±33.0*大劑量組(120mg/kg) 97.7±25.4**149.6±34.0**p＜0.05；**p＜0.01從表4結果可以看出，羥基積雪草酸的低、中、高3個劑量均能明顯縮短小鼠懸尾和強迫遊泳不動時間，表明羥基積雪草酸具有明顯的抗抑鬱作用。
實施例8、積雪草酸鈉的抗抑鬱作用實驗積雪草酸的鹽類衍生物積雪草酸鈉的製備在室溫和攪拌條件下，將積雪草酸(4.89g，10mmol)的95％乙醇溶液(80ml)分別加入氫氧化鈉(12mmol)的70％乙醇溶液(80ml)中，加入開始15分鐘後，將所得混合物在50～60℃下加熱20分鐘。減壓蒸除溶劑，殘渣水洗2次，用95％乙醇重結晶，得到積雪草酸鈉白色結晶，mp.312-314℃，1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ5.14(1H，brs，H-12)，2.11(1H，d，H-18)，1.05，0.93，0.74，0.54(each3H，s)，0.92，0.82(each3H，d)與積雪草酸1H-NMR圖譜比較δ11.96(1H，brs，-COOH)峰消失說明積雪草酸已經形成相應的鹽。
積雪草酸鈉的抗抑鬱作用採用獲得性小鼠絕望模型(小鼠懸尾實驗和小鼠強迫遊泳實驗)進行檢測和驗證。
①實驗動物同實施例5。
②藥物配製同實施例5。
③實驗方法A、小鼠懸尾實驗空白對照組同實施例5；陽性對照藥組同實施例5；試驗藥物組同實施例5；操作方法同實施例5，結果見表5。
B、小鼠強迫遊泳實驗同實施例5，結果見表5。
表5、積雪草酸鈉對小鼠懸尾實驗和強迫遊泳實驗不動時間的影響懸尾實驗 強迫遊泳實驗不動時間(秒) 不動時間(秒)空白對照組 138.5±24.3 182.8±23.9多塞平組(50mg/kg)100.1±41.7*108.5±67.6**小劑量組(30mg/kg)106.7±24.6*155.3±26.2*中劑量組(60mg/kg)89.5±28.0**151.4±27.1*大劑量組(120mg/kg) 84.3±24.9**148.8±30.7***p＜0.05；**p＜0.01
從表5結果可以看出，積雪草酸鈉的低、中、高3個劑量均能明顯縮短小鼠懸尾和強迫遊泳不動時間，表明積雪草酸鈉具有明顯的抗抑鬱作用。
實施例9、積雪草總苷元、積雪草酸、羥基積雪草酸、積雪草酸鈉、積雪草酸甲酯的利血平對抗實驗①實驗動物ICR雄性小鼠，19～22克。
②實驗方法對利血平所致小鼠眼瞼下垂的影響按文獻方法。小鼠每組10隻，分成7組空白對照組給予與藥物組等體積的0.1％CMC溶液；陽性對照藥組給予藥物多塞平，劑量50mg/kg；積雪草總苷元組劑量60mg/kg；積雪草酸組同上；羥基積雪草酸組同上；積雪草酸鈉組同上；積雪草酸甲酯組同上；小鼠尾靜脈注射利血平2mg/kg後，立即靜脈給藥，60分鐘後將動物單個豎放15秒，觀察出現眼瞼下垂的動物數，計算拮抗率，結果見表6。
拮抗率(％)＝(每組實驗動物數-眼瞼下垂的動物數)/每組實驗動物數；表6、積雪草總苷元、積雪草酸、羥基積雪草酸、積雪草酸鈉、積雪草酸甲酯利血平對抗作用組別劑量小鼠眼瞼下垂數(只)拮抗率(％)空白對照0 0多塞平組 50mg/kg 6 40積雪草總苷元組 60mg/kg 3 70積雪草酸組 60mg/kg 3 70羥基積雪草酸組 60mg/kg 4 60積雪草酸鈉 60mg/kg 2 80積雪草酸甲酯 60mg/kg 3 70從表6結果可以看出，積雪草總苷元、積雪草酸、羥基積雪草酸、積雪草酸鈉、積雪草酸甲酯對利血平所致小鼠眼瞼下垂具有拮抗作用，表明積雪草總苷元、積雪草酸、羥基積雪草酸、積雪草酸鈉、積雪草酸甲酯均具有明顯的抗抑鬱作用。
權利要求
1.積雪草酸及其衍生物在製備抗抑鬱藥物中的應用。
2.含有積雪草酸及其衍生物的藥物組合物在製備抗抑鬱藥物中的應用。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特徵在於，所說的積雪草酸及其衍生物的化學結構通式如下 其中，R1為氫或羥基；R2為氫、含1～4個碳原子的直鏈或支鏈低級烷基、鹼金屬元素、鹼土金屬元素、銨或含1～6個碳原子的有機銨中的一種；所說的1～4個碳原子的直鏈或支鏈低級烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基或仲丁基中的一種；所說的1～6個碳原子的有機銨包括甲銨、乙銨、二乙銨、三乙銨、丙銨、異丙銨、丁銨、異丁銨、叔丁銨或仲丁銨中的一種。
4.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於，所說的積雪草酸及其衍生物包括積雪草酸、積雪草酸甲酯、積雪草酸乙酯、積雪草酸丙酯、積雪草酸鈉、積雪草酸鉀、積雪草酸鈣、積雪草酸鎂、積雪草酸銨、積雪草酸甲銨、積雪草酸乙銨、積雪草酸二乙銨、積雪草酸三乙銨、羥基積雪草酸、羥基積雪草酸甲酯、羥基積雪草酸乙酯、羥基積雪草酸丙酯、羥基積雪草酸鈉、羥基積雪草酸鉀、羥基積雪草酸鈣、羥基積雪草酸鎂、羥基積雪草酸銨、羥基積雪草酸甲銨、羥基積雪草酸乙銨、羥基積雪草酸二乙銨或羥基積雪草酸三乙銨中的一種。
全文摘要
本發明涉及積雪草酸及其衍生物在製備抗抑鬱藥物中的新用途。實驗證明，積雪草酸及其衍生物，以及藥物組合物是一種安全、高效、穩定、價廉的預防和治療抑鬱症的藥物，均具有較高的活性，尤其是積雪草酸、積雪草酸鈉等化合物的活性更高，優於多塞平。
文檔編號A61K31/56GK1543964SQ20031010885
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月25日 優先權日2003年11月25日
發明者李鐵軍, 陸波, 邱彥, 毛俊琴, 徐亞敏, 芮耀誠 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學