抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及製備方法
2023-07-20 03:27:06
專利名稱：：抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及製備方法
技術領域：
：本發明屬於飼料和醫藥鄰域，特別涉及一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及製備方法。
背景技術：
：羊傳染性膿皰病是膿皰病毒引起的羊的一種接觸性傳染病，又稱羊口瘡。該病世界各地都有發生，凡是有羊的地方都有此病。對成年羊危害輕，對義羊危害重，死亡率在1%-15%之間，康復發育受阻。病羊和帶毒羊是該病的傳染源。健康的羊主要是通過接觸傳染，被傳染的圈舍、祠草、用具等可間接傳染，多為群發，只要有一隻羊發病將迅速波及全群。在草料缺乏、羊只瘦弱、羔羊缺奶，抗病力降低的情況下，容易發病且病情嚴重。該病潛伏期為4-7天。發生部位主要在嘴唇、口角、鼻孔周圍，其次是乳房、外陰及蹄部。發病後首先出現丘滲，繼而形成水泡，膿皰，破潰流黃水，最後結痂。痂皮為褐色或黑色的疣狀物，揭開痂皮出現黃水或膿樣物質。病羊患部發癢，嘴頭不斷在建築物或樹木上強行磨擦，嚴重時採食困難，精神不振，體溫升高，採食和反芻減少，最後因^幾體衰竭而死亡。藍舌病病毒是一種急性傳染病，主要見於綿羊。臨床上以發熱、白細胞減少，口和唇糜爛性炎症，蹄冠炎和肌炎為特徵。由於病羊發育不良，並帶來死亡、羊毛損壞，往往造成很大的經濟損失。本病病原是藍舌病病毒病毒。病羊是主要傳染來源，通過庫蠓傳播。綿羊感染不分品種、性別和年齡，以l歲左右的綿羊最易感，哺乳期,氛羊有一定的抵抗力。病初體溫高達40.5-41.5。C,稽留2-3天。在體溫升高後不久，表現厭食，精神沉鬱，落群。上唇肺脹、水腫可延至面耳部，口流涎，口腔黏膜充血、呈青紫色，隨即可顯示唇、齒齦、頰、舌黏膜糜爛，致使吞咽困難。口腔黏膜受潰瘍損傷，局部滲出血液，唾液呈紅色。病程一般為6-14天，至6-8周後蹄部病變可恢復。發病率30%-400/0，病死率2°/。-30%,高者達90%。在該病流行區，每年4妾種疫苗。對病羊可用石黃胺類藥或抗毒素等進行對症治療，控制繼發的細菌感染。口蹄疫病毒是偶蹄家畜的急性傳染病，山羊、綿羊都可患此病，有時還可以傳染給人。病原體為口蹄疫病毒病毒，主要傳染來源為患病家畜，其次為帶毒的野生動物(如黃羊)。主要是通過消化道和呼吸道傳染，也可以經眼結膜、鼻黏膜、乳頭及皮膚傷口傳染。綿羊和山羊病的潛伏期為l-7天，平均2-4天。主要症狀是體溫升高，食慾廢絕，精神沉鬱，跛行。口腔的水泡多發生在口膜，舌上水泡少見。哺乳,氛羊特別容易得病，多發生出血性胃腸炎。也可能發生惡性口蹄疫病毒，由於急性心臟麻痺而死亡。死亡率可達20%-50%。用當地流行毒抹同型的口蹄疫病毒弱毒疫苗或滅活疫苗接種動物。羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒引起的病毒病沒有有效的治療藥物。目前，有關用抗羊傳染性膿皰、羊藍舌病和羊口蹄疫卵黃抗體的製備方法還未見報導。因此，提供一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及製備方法，有效預防和治療羊病毒病，是該
技術領域：
科研人員急需開發的新課題之
發明內容本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及製備方法。本發明解決其技術問題所採取的技術方案是一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑，其特徵在於以羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒、羊口蹄疫病毒製備的單苗，或羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒製備的聯苗疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃並提取、製備。一種抗羊病毒性疾病卯黃抗體祠料添加劑的製備方法，其特徵在於(1)分離羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口3帝疫病毒進行增殖培養，當具有抗原性後製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗；(2)利用製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗免疫非免疫產蛋母雞，第一輪次免疫注射時免疫劑量呈1.0ml;IO天后進行第二輪次免疫注射，免疫劑量為首免的2倍；再過10天後進行第三輪次免疫注射，免疫劑量為首免的4倍；以後每隔一個月再以首免的4倍劑量進行免疫；誘導產蛋母雞持續性產生羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗體；(3)第三輪次免疫結束後10天，經卵黃抗體效價測定後收集免疫卵，無菌獲取卵黃，用0.01M無菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙甲基纖維素、鄰苯二甲酸鹽處理，真空抽濾，棄渣，抽濾液噴霧乾燥，即得本發明的抗羊病毒5性疾病卵黃抗體飼料添加劑。一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑，其特徵在於以羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒、羊口蹄疫病毒製備的單苗，或羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒製備的聯苗疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃並提取、製備。一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑的製備方法，其特徵在於(1)分離羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒進行增殖培養，當具有抗原性後製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗；(2)利用製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗免疫非免疫產蛋母雞，第一輪次免疫注射時免疫劑量呈1.0ml;IO天后進行第二輪次免疫注射，免疫劑量為首免的2倍；再過10天後進行第三輪次免疫注射，免疫劑量為首免的4倍；以後每隔一個月再以首免的4倍劑量進行免疫；誘導產蛋母雞持續性產生羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗體；(3)第三輪次免疫結束後10天，用1°/。新潔爾滅消毒蛋殼，在無菌條件下收集卵黃，用無菌蒸餾水對倍稀釋，置組織搗碎機中用3000r/min勻漿lmin,勻漿後加入乳酸液，在l-4。C溫度下靜止3-4h或過夜，去除雜蛋白，收集上清液，上清液中加入硫酸銨至飽和度20-40鹽析，4000r/min離心20min，收集沉澱，加入生理鹽水，調整IgY的濃度分裝，該注射劑內含有效價^1:256的抗羊相應病原糹鼓生物的卵黃抗體，即得本發明的抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑。本發明的有益效果是抗羊病毒性疾病卵黃抗體是治療羊病毒性疾病的特異性生物製品，是一種被動免疫製劑，同時還有鑑別診斷和緊急預防接種等作用，具有較高的推廣應用價值。卵黃抗體的使用，在免疫學理論中可成為被動免疫。當免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失敗時，可利用卵黃抗體注射、口服替代主動免疫接種，發揮抗病作用。卵黃抗體作為替代抗生素的新型飼料添加劑，正在引起人們的關注。卵黃抗體取代抗生素用作生長促進劑，不會產生藥物殘留，是一種安全的綠色添加劑。抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑都是通過提高羊機體對抗羊病毒性疾病卵黃抗體的抗體水平來防治羊病毒性疾病的。抗羊病毒性疾病卯黃抗體飼料添加劑餵食羊，既使用筒便，又特適宜羊使用。由羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒毒引起的病毒病，可直接給羊祠餵本發明產品，有效率可達86.7%以上。也可添加於飼料中用於預防病毒病。抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑治療病毒病，l-3天見效，臨床治癒率可達82.7%以上。使用本發明的卵黃抗體注射治療羊病毒性疾病，試驗組臨床症狀比對照組明顯減輕，且試驗組的死亡率顯著低於對照組，具有明顯的防治病毒病作用。本發明的抗羊病毒性疾病卵黃抗體銅料添加劑和注射劑防治羊病毒性疾病效果顯著。該方法成本低，見效快，無副作用，不會產生耐藥性菌株，製備工藝簡單，原料來源廣泛，使用方便，易於在基層推廣。具體實施例方式以下結合實施例，對依據本發明提供的具體實施方式詳述如下實施例l一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體伺料添加劑，其特徵在於以羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒、羊口蹄疫病毒製備的單苗，或羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒製備的聯苗疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃並提取、製備。抗羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒卯黃抗體飼料添加劑的製備方法(1)分離羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒進行增殖培養，當具有抗原性後製備成羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口^帝疫病毒三聯疫苗。'(2)利用製備成羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒三聯疫苗免疫非免疫產蛋母雞，第一輪次免疫注射時免疫劑量呈1.0ml;IO天后進行第二輪次免疫注射，免疫劑量為首免的2倍；再過10天後進行第三輪次免疫注射，免疫劑量為首免的4倍；以後每隔一個月再以首免的4倍劑量進行免疫。誘導產蛋母雞持續性產生羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口^帝疫病毒三耳關疫苗抗體。(3)第三輪次免疫結束後10天，經卵黃抗體效價測定後收集免疫卵，無菌獲取卵黃，用0.01M無菌磷酸鹽緩衝液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二甲酸鹽處理，真空抽濾，棄渣，抽濾液噴霧乾燥，即得本發明的抗羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黃抗體飼料添加劑。將粉劑封裝保存。實施例2一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑，其特徵在於以羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒、羊口蹄疫病毒製備的單苗，或羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒製備的聯苗疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃並提取、製備。抗羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒卵黃抗體注射劑的製備方法(1)分離羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒進行增殖培養，當具有抗原性後製備成羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒二聯疫苗。(2)利用製備成羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒二聯疫苗免疫非免疫產蛋母雞，第一輪次免疫注射時免疫劑量呈1.0ml;IO天后進行第二輪次免疫注射，免疫劑量為首免的2倍；再過10天後進行第三輪次免疫注射，免疫劑量為首免的4倍；以後每隔一個月再以首免的4倍劑量進行免疫。誘導產蛋母雞持續性產生羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒抗體。(3)第三輪次免疫結束後10天，用1%新潔爾滅消毒蛋殼，在無菌條件下收集卵黃，用無菌蒸餾水對倍稀釋，置組織搗碎機中用3000r/min勻漿lmin,勻漿後加入乳酸液，在l-4。C溫度下靜止3-4h或過夜，去除雜蛋白，收集上清液，上清液中加入吸取上清，加入50%的飽和硫酸銨，搖勾，4。C鹽析2h。4000r/min離心20min，棄上清，沉澱以lml的PBS(pH7.4)完全溶解。用30%的飽和碌u酸銨重複鹽析3次，沉澱用PBS透析24h或過夜，沉澱中加入生理鹽水，同時加青黴素、鏈黴素各2000IU/mL,調整IgY的濃度分裝於滅菌玻璃瓶中，該注射劑內含有效價^1:256的抗羊相應病原微生物的卵黃抗體，即得本發明的抗羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒卵黃抗體注射劑。其lgY的得率達95%以上，一個免疫卵一般可得IgY80-110mg。初診為羊病毒性疾病的羊，按每千克體重0.5-1毫升的劑量確定用量，選擇肌肉豐滿的部位進行多點肌肉注射,嚴重者間隔3-4日可再次注射。同時要^:用白糖水、維生素或葡萄糖水溶液，輔助給予青飼料等含維生素豐富的食物。實施例3抗羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黃抗體注射劑的製備方法(1)分離羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒進行增殖培養，當具有抗原性後製備成羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒三聯疫苗。(2)利用製備成羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒三聯疫苗免疫非免疫產蛋母雞，第一輪次免疫注射時免疫劑量呈1.0ml;IO天后進行第二輪次免疫注射，免疫劑量為首免的2倍；再過10天後進行第三輪次免疫注射，免疫劑量為首免的4倍；以後每隔一個月再以首免的4倍劑量進行免疫。誘導產蛋母雞持續性產生羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒三聯疫苗抗體。(3)第三輪次免疫結束後10天，用1%新潔爾滅消毒蛋殼，在無菌條件下收集卵黃，用無菌蒸餾水對倍稀釋裝於滅菌玻璃瓶中，同時加青黴素、鏈黴素各2000IU/mL，置組織搗碎機中用3000r/min勻漿lmin，勻漿後加入乳酸液，在l-4。C溫度下靜止3-4h或過夜，去除雜蛋白，收集上清液，上清液中加入硫酸銨，在l-4。C溫度下靜止3-4h或過夜，4000r/min離心20min，收集沉澱，加入生理鹽水，調整IgY的濃度分裝，該注射劑內含有效價》1:256的抗羊相應病原微生物的卵黃抗體，即得本發明的抗羊膿皰病毒羊藍舌病病毒卵黃抗體注射劑。其lgY的得率達95。/。以上，一個免疫卵一般可得IgY80-110mg。初診為羊病毒性疾病的羊，按每千克體重0.5-l毫升的劑量確定用量，選擇肌肉豐滿的部位進行多點肌肉注射，嚴重者間隔3-4日可再次注射。同時要飲用白糖水、維生素或葡萄糖水溶液，輔助給予青飼料等含維生素豐富的食物。應用實例l:抗羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黃抗體飼料添加劑防治羊病毒性疾病的試驗研究用添加了抗羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒病毒卵黃抗體詞料添加劑的飼料和普通飼料分別祠餵2-15日齡而且口服攻毒羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒的,氛羊，同時設正常對照組，未攻毒同時飼餵普通飼料。觀察10日療效，實驗結果如下-.表l《卩黃抗體飼料添加劑防治羊病毒性疾病的試驗效果tableseeoriginaldocumentpage9從表l看出，口服攻毒羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒的羔羊飼餵抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑的詞料後，病毒病很快痊癒，有效率達86.7%，死亡率為13.3%，而口服攻毒的,氛羊祠餵普通祠料後，有效率達57.1%,死亡率為42.9%,結論本發明的抗羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黃抗體飼料添加劑防治羊膿皰病毒和羊藍舌病病毒引起的,氛羊病毒性疾病具有良好的治療效果。當前治療動物病毒性疾病，抗病毒藥品種太少，抗羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒和羊口^帝疫病毒卵黃抗體飼料添加劑防治,氛羊病毒性疾病的有效藥物。羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒引起的,氛羊病毒性疾病，嚴重威脅羊的健康，造成了重大經濟損失。當羊發生病毒病時時，可立即口服或皮下注射卵黃抗體，能阻止羊膿皰病毒病毒、羊藍舌病病毒進入細胞，中和病毒數量，經2-10小時就可發現羊精神好轉，食慾增加，減少,氛羊的死亡率。應用實例2:內蒙古某羊場的110隻綿羊相繼發生病毒病，經臨床症狀和實-驗室診斷i貪斷為羊藍舌病病毒病毒感染。對發病羊用實施例2中製備的抗羊病毒性疾病卵黃抗體進行治療。按每千克體重l毫升的劑量確定用量，選擇肌肉豐滿的部位進行多點肌肉注射，嚴重者間隔2日可再次注射羊病毒性疾病卵黃抗體。同時要飲用白糖水、維生素或葡萄糖水溶液，輔助給予青菜、水果等含維生素豐富的食物，結果康復91頭，有效率為82.7%。臨床試用表明，患病毒病,氛羊經抗羊病毒性疾病卵黃抗體治療後療效好。製成的抗羊病毒性疾病卵黃抗體，注入動物機體後治療綿羊病毒性疾病，具有療效好、安全可靠、無毒副作用和成本低等優點。上述參照實施例對該抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及製備方法進行的詳細描述，是說明性的而不是限定性的，可按照所限定範圍列舉出若干個實施例，因此在不脫離本發明總體構思下的變化和修改，應屬本發明的保護範圍之內。權利要求1.一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑，其特徵在於以羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒、羊口蹄疫病毒製備的單苗，或羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒製備的聯苗疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃並提取、製備。2、一種根據權利要求l所述的抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑的製備方法，其特徵在於(1)分離羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒進行增殖培養，當具有抗原性後製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗；(2)利用製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗免疫非免疫產蛋母雞，第一輪次免疫注射時免疫劑量呈1.0ml;IO天后進行第二輪次免疫注射，免疫劑量為首免的2倍；再過10天後進行第三輪次免疫注射，免疫劑量為首免的4倍；以後每隔一個月再以首免的4倍劑量進行免疫；誘導產蛋母雞持續性產生羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗體；(3)第三輪次免疫結束後10天，經卵黃抗體效價測定後收集免疫卵，無菌獲取卵黃，用0.01M無菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二曱酸鹽處理，真空抽濾，棄渣，抽濾液噴霧乾燥，即得本發明的抗羊病毒性疾病卯黃抗體飼料添加劑。3、一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑，其特徵在於以羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒、羊口蹄疫病毒製備的單苗，或羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒製備的聯苗疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃並提取、製備。4、一種根據權利要求3所述的抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑的製備方法，其特徵在於(1)分離羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒進行增殖培養，當具有抗原性後製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗；(2)利用製備成羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒聯合疫苗免疫非免疫產蛋母雞，第一輪次免疫注射時免疫劑量呈1.0ml;IO天后進行第二輪次免疫注射，免疫劑量為首免的2倍；再過10天後進行第三輪次免疫注射，免疫劑量為首免的4倍；以後每隔一個月再以首免的4倍劑量進行免疫；誘導產蛋母雞持續性產生羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗體；(3)第三輪次免疫結束後10天，用1%新潔爾滅消毒蛋殼，在無菌條件下收集卵黃，用無菌蒸餾水對倍稀釋，置組織搗碎機中用3000r/min勻漿lmin，勻漿後加入乳酸液，在l-4。C溫度下靜止3-4h或過夜，去除雜蛋白，收集上清液，上清液中加入硫酸銨至飽和度20-40鹽析，4000r/min離心20min，收集沉澱，加入生理鹽水，調整IgY的濃度分裝，該注射劑內含有效價》1:256的抗羊相應病原孩t生物的卵黃抗體，即得本發明的抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑。全文摘要本發明公開了一種抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及製備方法。所述抗羊病毒性疾病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑，分別以羊膿皰病毒、羊藍舌病病毒、羊口蹄疫病毒製備的單苗，或羊膿皰病毒和/或羊藍舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒製備的聯苗疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃並提取、製備。所述抗羊病毒性疾病卵黃抗體都是通過提高羊機體對引起病毒病相應病原微生物的抗體水平來防治病毒病的。本發明的飼料添加劑方便餵食羊，防治效果顯著；抗羊病毒性疾病卵黃抗體注射劑在羊發病後使用，藥效更快。本發明療效顯著，成本低、見效快，無毒副作用，不會產生耐藥性菌株；製備簡單，原料來源廣泛，使用方便，易於推廣。文檔編號A61K39/42GK101259275SQ20081005284公開日2008年9月10日申請日期2008年4月22日優先權日2008年4月22日發明者古長慶申請人:天津生機集團股份有限公司