用於保持婦女健康的植物雌激素和益生菌的製作方法

2023-07-20 05:49:56

專利名稱：用於保持婦女健康的植物雌激素和益生菌的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的組合物，該組合物可以片劑、膠囊或臨時配製成混懸液的粉末形式口服給藥，其用於增進骨胳的生理機能以及更年期和絕經婦女的健康。
背景技術：
由於卵巢激素分泌不足而導致的絕經後骨質疏鬆是婦女骨質流失最常見的原因。這種紊亂通過施用外源雌激素，即，通過適當的激素替代療法(HRT)而得到預防。用於這種目的的合成雌激素類激素藥效強並且，如果不正確使用的話，可能導致副作用，特別是長期給藥時。
亞洲國家的由骨質疏鬆所致的骨折發生率要低於西方國家。這種差異是由於在亞洲國家大豆食品被廣泛食用[1]以及特別是由於大豆中存在的某些異黃酮的作用。事實上，大豆異黃酮(SIs)對絕經後婦女的骨胳具有營養作用的功效在若干臨床研究中已被證明[2，3，4，5]而且在對卵巢切除的大鼠的研究中得到證實[6]。
大豆主要含有兩種異黃酮，即染料木苷和黃豆苷。染料木苷(MW 432.22)是染料木苷原(MW 270.24)的β-葡糖苷。黃豆苷(MW 416.23)是黃豆苷原(daidzin)(MW 254.24)的β-葡糖苷。染料木苷和黃豆苷是相對較大的分子；它們水溶性好，極性大。這些性質妨礙了它們的胃腸道吸收以及雌激素部分的生物利用度。
為了可被吸收和變得可生物利用，SIs必須被水解成糖苷配基，也就是與葡糖苷組分分離[7]。這可通過特殊酶即糖苷酶的作用完成。然而，人類以及許多哺乳動物的胃腸道並不分泌糖苷酶，因此異黃酮並不能被水解進而變得生物可利用。相反，腸道菌群的某些微生物，特別是某些乳酸菌，可產生上述水解反應所必需的糖苷酶，該糖苷酶對SIs的吸收是必需的[8，9]。因此胃腸道中產生糖苷酶的細菌的存在是SIs吸收以及發揮功效的先決條件。
腸道菌群在個體之間的變化很大，甚至在相同的受試者體內，腸道菌群的功能也隨著食物、氣候、藥物治療、疾病，等等的不同而改變。因而，在很多受試者中，通過腸道菌群產生的糖苷酶可能很少或者甚至沒有，從而危及SIs的吸收。
本發明的目的是提供可口服給藥的，特別是作為食品添加劑的組合物，用於減輕、消除、和/或預防困擾絕經前、絕經期以及絕經後婦女的更年期以及絕經後機能紊亂，包括骨的新陳代謝紊亂，其可導致增加骨折風險的骨質流失以及骨組織改變。
本發明概述本發明提供用於緩解和預防更年期以及絕經後機能紊亂的組合物，其包含有效量的大豆異黃酮和活性乳酸菌，該組合物以適用於口服的劑量形式提供。
本發明的組合物包括具有雌激素活性的大豆異黃酮和可在腸道內產生糖苷酶的乳酸菌，其目的是將攝取的異黃酮葡糖苷裂解成可被吸收的糖苷配基並確保所服用的SIs在所有個體內的生物利用度。
本發明還提供該組合物用於製備藥物或食品添加劑的用途，通過在需要的個體中口服有效量的上述組合物，用於消除和預防更年期以及絕經期機能紊亂。
原則上，任意類型的乳酸菌都適合於本發明的組合物。事實上，乳酸菌是具有諸多益處的益生菌，原因在於●乳酸菌可產生乳酸，其可酸化腸道內容物，為諸多致病微生物(大腸桿菌，念珠菌等)的生長創造了不利的條件，而且，相反地，為鈣、鐵、磷以及其他營養素的吸收創造了有利的條件。
●通過這些機理，以及通過由於乳酸的產生而導致的pH降低，乳酸菌改善並均衡了腸道菌群。這是非常有用的，特別是在由於不正確的飲食、藥物(特別是抗生素)、氣候應激反應、消化紊亂或營養缺乏而導致的腸道菌群不足或失衡時。事實上，由於腐敗菌群比發酵菌群佔優勢而產生毒素，這些情況可導致腹瀉、便秘、氣脹、消化不良、衰弱及不適。
●乳酸菌產生蛋白酶和脂肪酶，其完成蛋白質和脂肪的消化並且還削減腸道菌群微生物的這些營養物質，它們會產生有毒物質，例如在厭氧的腐敗過程所產生的物質。
●乳酸菌可產生維生素K，其是血液凝固所必需的因子；而且可產生B族的幾種維生素，其對維持活躍的新陳代謝是必需的。
●還因為乳酸菌可產生特殊的抗菌物質細菌素，其可阻止「有害」菌群的生長。因此它們可消除腸道的不良微生物作用。
●另外，乳酸菌在腸壁上生長和繁殖，從而形成抵禦致病微生物的一層屏障，這些致病微生物是例如白色念珠菌、沙門氏菌族、埃希氏桿菌族、葡萄球菌、梭狀芽孢桿菌，等等，其可產生毒素而且可致腸道感染。
●最後，乳酸菌可激活胃腸道的免疫防禦，其有助於使我們的機體抵禦感染以及毒物過敏。
為了實現本發明的目的，特別優選乳酸桿菌孢子(凝固芽孢桿菌)，下文縮寫為Ls，任選地與其他乳酸菌結合，因為Ls的孢子在一般環境條件下是穩定的，並不需要在冰箱中保存而且可在能殺滅大部分其他乳酸菌的胃和膽的分泌物中保持活性。
特別要指出的是，Ls通過同型發酵反應產生L-乳酸。L-乳酸，也就是進入我們的代謝途徑中的乳酸的異構體，因其不引起全身酸中毒而為世界衛生組織所推薦。
為了生產乳酸，Ls利用未消化的糖的碎片，削減腸菌群中有害種類的這些底物，因而抑制了它們的生長而且還有助於保持身體健康。
因為上述的這些原因，乳酸菌，特別是Ls，是非常有益的益生素，它們除了可提高SIs的生物利用度之外，還對保持身體健康提供諸多益處。
骨骼的進一步強化可通過加入其他對骨骼和關節有益的物質來實現。其中之一就是木賊(問荊)，其可提供單矽酸的有機鹽，其為矽的可溶性本體，在胃腸道容易吸收而且因此易被生物利用。矽，與磷、氟化物、鎂、以及硼一起，與羥基磷灰石晶體在膠原原纖維上的沉積過程(也就是骨礦物質成分累積在器官結構上)有關係，木賊還含有木賊寧，其為具有溫和的利尿作用的物質，可用於調整水瀦留，這種情況在絕經期經常發生並導致下肢腫脹以及體重增加。另外還應當補充鈣(與維生素D一起使用以促進鈣的吸收和在骨骼上沉積)，因為絕經時對鈣的需求總是增長。
實驗實驗部分的目的是調查不同成份在預防切除卵巢的大鼠的骨質流失中的作用，切除卵巢的大鼠是廣泛應用的絕經後骨質疏鬆模型[6]。
簡要地說，就是在以3ml/kg體重的量進行equitesin(equitesin是戊巴比妥、乙醇、水合氯醛、丙二醇、硫酸鎂水溶液的混合物)腹膜麻醉的情況下，切除95天齡的Sprague-Dawley大鼠的卵巢。每8隻大鼠一組，共分為4組。第5組的8隻大鼠進行假手術並且作為未切除卵巢的對照組。大鼠可自由飲水並且隨意餵食針對嚙齒類動物的添加碳酸鈣(0.1g/kg食物)和維生素D3(1μg/kg食物)的Harlan食品。SIs和Ls混懸於0.5％的羥丙基甲基纖維素水溶液(下文稱為載體)中，然後每天以10ml/kg體重的劑量用胃管給藥。
各組進行如下處理。
組1.假手術，未切除卵巢的對照組載體組2.切除卵巢的對照組載體組3.切除卵巢的SIs處理組染料木苷0.5mg/kg體重+黃豆苷0.5mg/kg體重組4.切除卵巢的SIs+Ls處理組染料木苷0.5mg/kg體重+黃豆苷0.5mg/kg體重+8百萬/每千克體重的Ls孢子組5.切除卵巢的SIs+Ls+木賊處理組染料木苷0.5mg/kg體重+黃豆苷0.5mg/kg體重+8百萬/每千克體重的Ls孢子+1.5mg/kg體重的木賊莖幹乾燥提取物(以含有7％矽為標準)劑量以對人類使用的通常建議用量為基礎，根據研究中所用的大鼠體重進行調整。
大豆異黃酮通常的日劑量為20-80mg，優選40-60mg。
乳酸桿菌孢子通常的日劑量為0.75億-15億個孢子，優選2.5-10億個。
木賊通常的日劑量為相當於3-10mg二氧化矽。
鈣成年婦女推薦的每日膳食供給量(RDDA)為800mg。對於本發明來說，優選100mg至300mg的日劑量，將其作為在日常飲食中所包含的鈣的補充。
維生素D3成年婦女的RDDA為5μg。對於本發明的組合物來說，優選3-5μg的日劑量。
卵巢切除後六周，大鼠乙醚麻醉後用頸脫位法處死。取出子宮迅速稱量，將股骨從軟組織取出，並用卡尺測量其長度，應用阿基米德原理測量體積和密度，然後在640℃下灰化24h。每一個灰分樣品稱重然後溶於6N的HCl中。在最終的溶液中通過原子吸收光譜法測量鈣，通過比色分析測量磷。
計算不同結果的平均和標準誤差，進而通過t-檢驗估計各個數值間的顯著性差異。
本研究最後得到的結果見表1而且可以總結如下。
1.相對於假手術動物組(組1)，任何卵巢切除動物組在切除卵巢後六周的體重沒有任何顯著性變化。
2.相反地，在卵巢切除對照組(組2)，子宮重量有非常顯著的下降而且股骨在長度、密度、灰分重量、鈣和磷的含量方面下降很明顯，從而顯示雌激素缺乏對骨的營養有負面影響。
3.給予SIs(組3)對體重和子宮的影響(相對於組2)不顯著(對α雌激素受體無刺激作用)，但是可顯著增加股骨長度以及骨骼中的磷，從而顯示對骨的營養有適當的積極作用。
4.添加Ls至SIs中(組4)顯著地和令人驚訝地改善了骨的營養狀況，如通過所有骨營養狀況的標誌(股骨長度、密度、灰分重量、鈣和磷的含量)的顯著增加所示，從而支持了SIs-Ls的組合的理論，即通過SIs-Ls的組合提高了SIs的生物利用度進而增進SIs對骨胳的正面作用。
5.額外添加的木賊提取物(組5)使得所有骨營養狀況標誌(股骨長度、密度、灰分重量、鈣和磷的含量)有了出乎意料的進一步提高，從而證實了這種天然草本植物產品對骨合成代謝的作用。
總之，由於Ls的益生性能所致的SIs的生物利用度以及腸內鈣和磷吸收的提高，Ls顯著強化了SIs對骨合成代謝的作用。木賊提取物的添加則對骨合成代謝有進一步的促進作用。值得注意的是，無論是SIs還是SIs+Ls均對子宮的重量沒有明顯影響，從而表明其對d雌激素受體沒有刺激作用。這與雌激素類激素所產生的作用形成了鮮明的對比，由於雌激素類激素對d雌激素受體的刺激，因而其在促進骨營養的同時可能在一些患者中產生有害作用，特別是長期使用的情況下更是如此。
因此，本研究支持了這一理論，即SIs+Ls的組合是防止大鼠骨質流失的天然的和耐受良好的治療劑，其中大鼠的骨質流失是由於卵巢切除所致的雌激素類激素缺乏所引起的，這一情況也存在於絕經後的婦女當中。添加木賊提取物可增強SIs+Ls組合防止骨質流失的作用。
表1.6周治療後不同組的結果。平均值以及標準誤差體重和子宮數據的數量＝8；股骨數據數量＝16還記錄了相對於組2的卵巢切除對照組的變化百分數數據。顯著性差異(Pt＜0.05)以斜體表示。

aPtNS vs.組1bPtNS vs.組2cPt＜0.001 vs.組1dPt＜0.05 vs.組1ePt＜0.001 vs.組2fPt＝0.05 vs.組2gPt＜0.05 vs.組2本發明詳述下列實施例描述了本發明可能的實際應用但並未將本發明的範圍限定於這些實施例實施例1用於口服的片劑下列處方考慮了本發明條件下可用來配製口服片制的活性成份以及賦形劑(和它們的技術功能)。
一片中包含一個日劑量。根據本領域通常的技術常識製備片劑，不需要任何特別或特殊的步驟。總之下列製備步驟是必需的●稱出單個組分；●通過在合適的乾燥粉末混合器中混合處方組份製備壓片混合物；●在合適的自動壓片機中壓制所得的混合物，得到具有所需形狀和大小的片。
所需的組份列於下表。

(*)含有36％m/m鈣(**)還被用作賦形劑

實施例2用於口服的膠囊下列處方考慮了本發明條件下可用來製備口服膠囊的活性成份以及賦形劑(和它們的技術功能)。
兩隻膠囊含有一個日劑量。根據本領域通常的技術常識製備膠囊，不需要任何特別或特殊的步驟。總之下列製備步驟是必需的●稱出單個組分；●在適合於進行乾燥混合操作的混合器中製備用於填充膠囊的混合物；●選用合適尺寸和預期顏色的硬明膠膠囊，在自動封囊機中進行膠囊填充。
所需的組份列於下表。

(*)含有36％m/m鈣

實施例3包含粉末的藥囊(該粉末可臨時配製成口服混懸液)下列處方考慮了本發明條件下可用來配製適合製成口服混懸液的粉末的活性成份以及賦形劑(和它們的技術功能)。
一份粉末包含一個日劑量。這份粉末包含在藥囊中，該藥囊是由外部紙層、鋁中間層、以及內部聚乙烯層組成。根據本領域通常的技術常識來製備藥囊，不需要任何特別或特殊的步驟。總之，下列製備步驟是必需的●稱出單個組分；●在適合於進行乾燥混合操作的混合器中勻化混合組份；●在合適的自動生產線上熱壓成形製備藥囊，該自動生產線其中還包括填充和封閉裝置；●在上述的自動生產線上填充並封閉藥囊，得到所期望的大小和形狀的藥囊，該藥囊含有可供臨時應用的單劑量粉末。
所需的組份列於下表。

(*)含有36％m/m鈣

(*)增甜劑以及調味劑可隨意添加，根據喜好而變。
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權利要求
1.用於緩解和/或預防困擾絕經前、絕經期以及絕經後婦女的更年期以及絕經期機能紊亂的組合物，其特徵在於該組合物含有大豆異黃酮和可促進大豆異黃酮吸收的活性乳酸菌，該組合物以口服給藥的劑量形式提供。
2.根據權利要求1的組合物，其中所述的乳酸菌包含乳酸桿菌孢子(凝固芽孢桿菌)。
3.根據權利要求1或2的組合物，其中還含有問荊乾燥提取物。
4.根據權利要求1至3任一的組合物，其中所說的劑量形式適合於大豆異黃酮以20-80mg，優選40-60mg的日劑量給藥。
5.根據權利要求1至4任一的組合物，其中所說的劑量形式適合於所說的乳酸菌以0.75億-15億個孢子，優選2.5-10億個孢子的日劑量給藥。
6.根據權利要求3的組合物，其中所說的劑量形式適合於問荊乾燥提取物以3.0-10.0mg並且優選5-7mg的日劑量給藥，該劑量以所述乾燥提取物中含有的二氧化矽來表達。
7.根據權利要求1至6任一的組合物，其中還包含藥學上可接受的鈣鹽和/或維生素D3。
8.根據權利要求1至7任一的組合物，其中所述的劑量形式選自片、膠囊或包含可臨時配製成混懸液的粉末的藥囊。
9.權利要求1至8任一項的組合物用於製備藥物或食品添加劑的用途，該藥物或食品添加劑可口服用於治療困擾絕經前、絕經期以及絕經後婦女的更年期以及絕經期機能紊亂。
10.根據權利要求9的用途，其用於預防與絕經或其他形式的卵巢機能不全有關的骨流失。
全文摘要
用於緩解和/或預防困擾絕經前、絕經期以及絕經後婦女的更年期以及絕經期機能紊亂的組合物，其含有大豆異黃酮和可促進大豆異黃酮吸收的活性乳酸菌並優選含有乳酸桿菌孢子。組合物以適合於口服的劑量形式提供。優選該組合物還包含問荊乾燥提取物和藥學上可接受的鈣鹽和/或維生素D
文檔編號A61P19/00GK1781497SQ20041001043
公開日2006年6月7日 申請日期2004年11月29日 優先權日2004年11月29日
發明者P·塞寧, I·塞特尼卡, L·A·羅瓦蒂 申請人:羅塔藥品股份有限公司