用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片及其試劑盒的製作方法

2023-07-08 07:17:51 1

專利名稱：用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片及其試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種蛋白晶片，具體涉及用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，以及相應的蛋白晶片檢測試劑盒。
背景技術：
鐵是人體內必需的微量元素。鐵缺乏會導致成年人生理活力減低，兒童大腦發育受損。人體嚴重鐵缺乏會導致缺鐵性貧血。目前，全球約有20億人群貧血，鐵缺乏人群比例更高。評估機體鐵狀況，判別是否存在鐵缺乏具 有重要的臨床意義，同時也是亟待解決的技術問題。選擇具有特異、靈敏的早期鐵缺乏的監測指標，將有助於及時發現並治療缺鐵人群和潛在貧血患者，同時也有助於人群營養調查，為制訂控制預防鐵缺乏及缺鐵性貧血的公共衛生政策提供科學依據。目前，對鐵營養狀況進行監測的指標主要包括血清鐵蛋白(serum ferritin,簡稱 SF),可溶性轉鐵蛋白受體(soluble transferrin receptor,簡稱sTfR), C-反應蛋白(C reactive protein,簡稱 CRP),血清鐵(serum iron，簡稱 SI)，轉鐵蛋白飽和度(transferrin saturation,簡稱TS)、血紅蛋白(haemoglobin,簡稱Hb)和血液鋅原卩卜啉(zinc protoporphyrin,簡稱ZPP)(葛可佑.中國營養科學全書(上、下冊)[M].第一版.北京人民衛生出版社，2004 :129.);後四種指標曾經一度與血清鐵蛋白一同做為評價鐵儲量耗損與貧血發展之間關係的綜合指標，但由於血清鐵蛋白和轉鐵蛋白的生理學變異較大，且正常人和缺鐵人群這兩個指標的範圍有重疊，故轉鐵蛋白不是判定缺鐵與否的有效指標(Κ0ΝΙΙΝ AM等.BrJ Haem, 1977, 37 :7-16.);血紅蛋白主要用於功能性鐵缺乏的判斷，其在判斷機體缺鐵方面不具有特異性，在使用時也需要聯合其他指標對貧血原因進行分析才能得出相應結果，其並不是早期發現鐵缺乏的靈敏指標(Brugnara C等.J AMA,1998，281 =2225-2230);鋅原卟啉雖是識別成人鐵缺乏的靈敏指標，但由於鉛中毒、慢性病貧血、慢性感染及炎症等原因也會引起鋅原卟啉的升高，所以鋅原卟啉也不是特異性判斷鐵缺乏的指標，而且正常人群ZPP與缺鐵人群的ZPP有很大範圍的重疊、不同試驗ZPP分析方法不統一，結果表示方法也不一致，這些原因都限制了鋅原卟啉作為檢測指標的應用(LABBE R F等.Clin Biochem, 2004，37 :165-174)。因此，目前主要以血清鐵蛋白、可溶性轉鐵蛋白受體作為判斷鐵營養儲量的標誌物。以C-反應蛋白做為質量控制，用以判斷是否確實存在鐵缺乏(Iron Deficiency, ID)或缺鐵性貧血(iron-deficiency anemia, IDA)。目前，對血清鐵蛋白、可溶性轉鐵蛋白受體和C-反應蛋白的檢測方法主要有酶聯免疫法與比濁法。但這兩種方法對血清的需要量大，且不能實現對兩種標誌物的同時快速檢測，存在檢測成本高、檢測效率低等問題(殷繼永等.衛生研究.2011，40 (2)，266-269)。另外的方法是利用蛋白質晶片技術進行檢測，如利用蛋白晶片技術對可溶性轉鐵蛋白受體(殷繼永等.衛生研究，2011,40(1) 91-94.)和血清鐵蛋白(殷繼永等.營養學報，2011，33(2)，182-187.)進行檢測。此種方法具有檢測特異性強、靈敏度高、且檢測所需的樣品用量少等優點，但是由於每次僅能進行單一指標檢測，多指標需要進行多次檢測，仍然存在著需要多次取樣，不僅影響結果的判斷，還會因多次取樣造成受檢者痛苦，其次，還存在檢測成本高，檢測效率低、檢測速度慢等問題。如果能將三種檢測指標置於同一個蛋白晶片上，從而實現對它們同時進行檢測，則可克服上述缺點。經檢索，未發現有關用多指標檢測人體鐵儲量的蛋白晶片的報導。

發明內容
本發明目的在於提供一種用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片。利用該蛋白晶片可同時檢測三種與人體鐵儲量有關的指標，通過一次檢測就可以準確判定人體鐵儲量的存在狀況，具有檢測結果準確、檢測速度快，檢測效率高，成本低、受檢者痛苦少等優點。本發明另一目的在於提供上述蛋白晶片的製備方法。本發明第三目的在於提供含有上述用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片試劑盒。本發明通過下述技術方案實現一種用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，包括固相載體和陣列式分布於同相載體上的抗血清鐵蛋白單克隆抗體、抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體和抗C-反應蛋白單克隆抗體；其中所述的單克隆抗體以共價鍵固定在固相載體的表面；所述的固相載體經醛基化修飾。所述的固相載體是指經過醛基化修飾的載玻片。所述的抗血清鐵蛋白單克隆抗體可以是小鼠抗血清鐵蛋白單克隆抗體(Anti-Ferritin, mitochondrial antibody)。 所述的抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體可以是小鼠抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體(Anti-Transferrin Receptor antibody)。所述的抗C-反應蛋白單克隆抗體可以是小鼠抗C-反應蛋白單克隆抗體(Anti-CReactive Protein Antibody)。所述的單克隆抗體皆可於市場上公開購買得到；如小鼠抗血清鐵蛋白單克隆抗體和小鼠抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體可於abeam公司購買，小鼠抗C-反應蛋白單克隆抗體可於Novus公司購買。上述用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，還包括陽性對照、陰性對照、空白對照；所述的陽性對照、陰性對照分別通過共價鍵固定於經過醛基化修飾的固相載體表面。所述的陽性對照是指兔IgG(兔多克隆抗體)。所述的陰性對照是指小牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)。所述的空白對照是指磷酸鹽緩衝液(PBS，pH7. 4)。所述的陽性對照、陰性對照皆可於市場上公開購買；如兔IgG(兔多克隆抗體)、小牛血清白蛋白、磷酸鹽緩衝液均可自北京中杉金橋公司購買。上述用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片的製備方法，包括選擇醛基化微陣列固相載體，確定點陣的排列方式和點樣位置；配製點樣液，然後用點樣針按點陣的排列方式將抗血清鐵蛋白單克隆抗體、抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體、抗C-反應蛋白單克隆抗體與陰性對照、陽性對照及空白對照分別以接觸式點樣方式直接點印於固相載體上；37°C過夜；以5%小牛血清白蛋白溶液封閉I小時，然後用含有1%。吐溫20的磷酸鹽緩衝液(Phosphate buffer saline Tween 20,PBST,pH7. 4)洗漆3次,室溫晾乾,然後抽真空包裝，4°C保存。
一種用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片試劑盒，包括上述用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片。上述用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片試劑盒，還包括樣本稀釋液、濃縮洗滌液、標準品混合液、空白對照液、抗體檢測液、Cy3螢光標記羊抗兔IgG工作液。所述的樣本稀釋液是指3%小牛血清白蛋白溶液(BSA)。所述的濃縮洗滌液是指含有I %吐溫20的磷酸鹽緩衝液(PBST，pH7. 4)。所述的標準品混合液是指以3%小牛血清白蛋白溶液(BSA)做樣本稀釋液溶解配製的血清鐵蛋白、可溶性轉鐵蛋白受體和C-反應蛋白的混合液。其中混合液中三種蛋白的濃度分別為血清鐵蛋白(SF)為512. 5ng/ml，可溶性轉鐵蛋白受體(sTfR)625ng/ml，C-反應蛋白(CRP)為200ng/ml。血清鐵蛋白、可溶性轉鐵蛋白受體和C-反應蛋白皆可於市場上購買。所述的空白對照液是指3%小牛血清白蛋白溶液(BSA)。所述的抗體檢測液是指以3%小牛血清白蛋白溶液(BSA)做樣本稀釋液溶解配製的兔抗血清鐵蛋白多克隆抗體、兔抗可溶性轉鐵蛋白受體多克隆抗體和兔抗C-反應蛋白多克隆抗體的混合液；其中混合液中三種多克隆抗體的質量體積濃度(yg/ml)分別為兔抗血清鐵蛋白多克隆抗體5 μ g/ml、兔抗可溶性轉鐵蛋白受體多克隆抗體O. 36 μ g/ml,兔抗C-反應蛋白多克隆抗體為O. 5 μ g/ml。所述的Cy3螢光標記羊抗兔IgG工作液是指Cy3標記的羊抗兔IgG與3%小牛血清白蛋白溶液按I : 1000稀釋成的二抗工作液。所述的樣本稀釋液、濃縮洗滌液、標準品混合液、空白對照液、抗體檢測液、Cy3螢光標記羊抗兔IgG工作液中的各種溶質成份均可公開購買。如小牛血清白蛋白可自中杉金橋購買，吐溫20可自北京市慶盛達化工技術有限公司購買，血清鐵蛋白可自Fitzgerald公司購買，C-反應蛋白可自R&D公司購買，可溶性轉鐵蛋白受體可自ARP-I公司購買，兔抗血清鐵蛋白多克隆抗體可自abeam公司購買，兔抗可溶性轉鐵蛋白受體多克隆抗體可自Nuvos公司購買,兔抗C-反應蛋白多克隆抗體可自Nuvos公司購買，Cy3突光標記的羊抗兔IgG 可自 GE-Amersham Biosciences UK L imited 公司購買。本發明具有的優點和有益效果(I)、本發明可對檢測鐵儲量的三項指標同時進行檢測，與單一指標檢測相比，結果準確性大大提高。(2)本發明特異性強、靈敏度高、檢測速度快，檢測結果穩定；(3)本發明可採用多樣品微陣列技術，可同時對多人樣品同時進行檢測，適於對大規模人群的篩查檢測；(4)與現有檢測方法相比，本發明檢測方法簡單、操作安全、檢測效率高，樣品需要量小，且檢測一次完成，對受檢人群傷害小，已有的檢測方法對三項指標進行檢測時需要將一份樣本分三次檢測才能完成，使得檢測所需血樣量較大，檢 測耗時較長，檢測效率較低，且影響結果的準確性；(5)本發明蛋白晶片生產成本低、檢測成本低。


圖I.蛋白晶片陣列設計示意圖。晶片為12陣列晶片，其中陽性對照兔多克隆抗體(兔IgG)檢測點位；陰性對照小牛血清白蛋白(BSA)檢測點位；空白對照磷酸鹽緩衝液(pH 7. 4 PBS)檢測點位；SF :血清鐵蛋白檢測點位；sTfR :可溶性轉鐵蛋白受體檢測點位；CRP C-反應蛋白檢測點位。圖2.蛋白晶片點樣後掃描圖。圖3 血清鐵蛋白標準曲線圖。圖4.可溶性轉鐵蛋白受體標準曲線圖。
具體實施方式
以下實施例僅用於對本發明做進一步的解釋說明，不應理解為對本發明的保護範圍構成任何限制。如無特別說明，實施例中所用的方法為本領域技術人員常規方法，所涉及的藥品及濃度也是本領域常用試劑和濃度。實施例I用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片的製備按照如下方法進行(I)固相載體的選擇選用醛基化的12點陣形式的三維基片(晶芯高分子三維基片，購自博奧生物有限公司)，確定點陣的排列方式為3X6陣列。(2)配製點樣液a.用含有游離Cy3的50%甘油點樣緩衝液(購自博奧生物有限公司)與pH7. 4的PBS緩衝液按點樣緩衝液PBS :單克隆抗體之間I : I : 2體積比分別配製小鼠抗血清鐵蛋白單克隆抗體(Anti-Ferritin,mitochondrial antibody [F23], abeam 公司)點樣液、小鼠抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體(Anti-Transferrin Receptor antibody [2B6],abeam公司)點樣液和小鼠抗C反應蛋白單克隆抗體(Anti_C Reactive ProteinAntibody [C6]，Novus 公司)點樣液。b.陰性對照點樣液將50%甘油點樣緩衝液、pH7. 4的PBS溶液和12%小牛血清白蛋白溶液之間按I:I:2的體積比配製。c.陽性對照點樣液將含有游離Cy3的含50%甘油點樣緩衝液、pH7. 4的PBS溶液和兔多克隆抗體(兔IgG,濃度為lmg/ml)(購自中杉金橋公司)按照1:1:2的體積比配製。d.空白對照pH7. 4的PBS溶液。(3)利用蛋白晶片點樣儀(PersonalArrayer 16 Microarray Spotter,博奧生物有限公司)將⑵中配製的各點樣液小鼠抗血清鐵蛋白單克隆抗體點樣液、小鼠抗可溶性鐵蛋白受體單克隆抗體點樣液、小鼠抗C-反應蛋白單克隆抗體點樣液、陽性對照點樣液、陰性對照點樣液、空白對照點樣液分別點樣於步驟(I)中的醛基化的三維基片上。(4)固定、封閉、洗滌在37°C恆溫箱中固定反應16小時；然後以5%小牛血清白蛋白溶液(購自北京中杉金橋公司)封閉I小時，再用含有1%。吐溫20的磷酸鹽緩衝液(PBST) (pH 7. 4)洗滌晶片3次，室溫晾乾，得到本發明用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片(見圖I)。對固定好的晶片抽真空，4°C保存。對所製備的蛋白晶片進行檢測用晶片掃描儀(LuxScan 10K MicroarrayScanner，博奧生物有限公司)掃描上述製備的蛋白晶片，直接觀察點樣結果。結果(見圖2)除了陰性對照點因不含游離Cy3而沒有螢光信號外，其餘各點位因含有游離的Cy3均呈清晰圓潤信號結果，說明所製備的蛋白晶片質量好。實施例2用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片檢測人體鐵儲量的對比試驗
試驗樣品為2010年採自河南省南陽地區成年育齡婦女自願受試者(20 60歲)的血清，隨機選取六例(編號為I、II、III、IV、V、VI)，每例血清樣品分為兩份，一份為200μ I/份，用比濁法分別檢測血清鐵蛋白、可溶性轉鐵蛋白受體和C-反應蛋白含量；另一份為20μ I/份，用於本發明實施例I製備的蛋白晶片同時檢測血清鐵蛋白與可溶性轉鐵蛋白受體和C-反應蛋白含量。(一 )比濁法檢測每例取血清200 μ I用比濁法進行檢測。比濁法檢測按常規方法(Dubois S 等· GIT Labor-Medizin, 1988 ；9 :468-471)進行。結果見表 I。( 二)蛋白晶片檢測按照如下方法進行 (I)雜交反應將實施例I製備的蛋白晶片取出，恢復至室溫後破真空，對晶片中的I 6陣列依次滴加入將標準品混合液(以3%小牛血清白蛋白溶液(BSA)做樣本稀釋液溶解配製的血清鐵蛋白、可溶性轉鐵蛋白受體和C-反應蛋白的混合液；其中混合液中各種蛋白的質量濃度分別為血清鐵蛋白(SF)為512. 5ng/ml，可溶性轉鐵蛋白受體(sTfR)為625ng/ml, CRP為200ng/ml ;從高至低按I : 2倍比稀釋所得的5個梯度的混合液，第六陣列加入空白對照液(30 μ I/陣)；第7 12陣列分別依次加入6份稀釋的血清樣品(30 μ I/陣)(用3%小牛血清白蛋白溶液(BSA)按I : 8稀釋各份血清後配成稀釋的血清樣品)；37°C溫育I小時；(2)將濃縮洗滌液按I : 10稀釋得1%。PBST洗滌液，然後用1%。PBST洗滌液洗滌晶片3次，5分鐘/次，室溫晾乾。(3)向各陣列中加入抗體檢測液(用3%小牛血清白蛋白溶液(BSA)稀釋配製的兔抗血清鐵蛋白多克隆抗體(購自abeam公司)、兔抗可溶性轉鐵蛋白受體多克隆抗體(購自Nuvos公司)和兔抗C-反應蛋白多克隆抗體(購自Novus公司)的混合液。其中混合液中各種兔多克隆抗體的質量體積濃度(μ g/ml)分別為兔抗血清鐵蛋白多克隆抗體5 μ g/ml、兔抗可溶性轉鐵蛋白受體多克隆抗體O. 36 μ g/ml、兔抗C-反應蛋白多克隆抗體
O.5 μ g/ml, 30 μ I/陣，37°C溫育I小時；用I %。PBST洗滌液洗滌晶片3次，每次5分鐘，室溫晾乾。(4)向各陣列中加入Cy3突光標記羊抗兔IgG (購買自GE-Amersham
Biosciences UK L imited公司)與3%小牛血清白蛋白按I : 1000稀釋的Cy3突光標記羊抗兔IgG工作液，30 μ I/陣，37°C溫育I小時；用1%0 PBST洗滌液洗滌晶片3次，每次5
分鐘，室溫晾乾。(5)利用晶片掃描分析儀(LuxScan IOK Microarray Scanner,博奧生物有限公司)進行結果的判讀與數據分析。對晶片中1-6陣列檢測信號值與濃度值做六個濃度點的標準曲線(圖3和圖4)並擬合標準回歸方程(公式I、公式2)。血清鐵蛋白標準回歸方程y = -6. 49+0. 014x (公式 I)其中X為檢測信號值，y為樣本血清鐵蛋白濃度值(ng/ml)。可溶性轉鐵蛋白受體標準回歸方程y = 13. 94-0. 005x+4. 38E_007x2 (公式 2)其中X為檢測信號值，y為樣本血清鐵蛋白濃度值(ng/ml)。將7-12陣列中血清樣品檢測信號值代入標準方程後，定量的計算出各例血清中檢測濃度，並按公式3計算各血清鐵儲量。BTSi /K ) -— 1°g(^r)~ 2'8229 (公式 3)
S (mg/Kg) -0.1207其中BIS表示鐵儲量，SF表示血清鐵蛋白含量，sTfR表示可溶性轉鐵蛋白受體含量。根據此公式，當結果為正值時，表示機體儲存鐵的實際含量；當結果為負值時，表示機體缺鐵的量。表I比濁法檢測人體鐵儲量結果
1Λ……血清樣品編號 fe 測 日標
___I II III IV V VI
血清鐵蛋白(ng/ml) 94.8 69.4 97.3 124. 3 47.5 36.8 可溶性轉鐵蛋白受體
2.52 1.91 3. 29 1.84 2.02 2. 32
_( Ug/ml)________
C-反應蛋白(μ g/ml) 2.26 O. 57 O. 28 0. 26 4.97 3.67鐵儲量 BIS (mg/Kg) 丨 11. 59 丨 11. 46 I 10. 72 13. 69 9.89 8.48表2.用本發明蛋白晶片檢測人體鐵儲量結果
仏、、咖士匕士一—血清樣品編號
檢測 日標 ~\__I II III IV V VI
血清鐵蛋白(ng/ml) 89. 7 72.2 111.3 128.6 73.4 32
可溶性轉鐵蛋白受體—~
2.22 2. 17 2.82 1.91 I. 55 2. 25_( U g/ml)_______
_C-反應蛋白(μ g/ml) 2. 23 O. 49 O. 25 O. 27 4.88 3. 45
鐵儲量 BIS (mg/Kg)11. 84 11. 14 IL 78 13. 68 12. 41 8. 09C-反應蛋白(CRP)是反映人體有無炎症和其他可能疾病的指標，如果CRP >
5μ g/ml，則說明人體處於炎症和疾病狀況。而炎症和疾病會導致鐵蛋白不正常上升，從而使鐵儲量計算結果不能真實反映機體鐵狀況。因此通過檢驗CRP來確定血清鐵蛋白值和可溶性轉鐵蛋白受體的值是否可用於鐵儲量的計算。從表I和表2可以看出，本次樣品CRP檢測值均小於5 μ g/ml，說明受檢人機體無炎症和疾病，用所測的血清鐵蛋白和可溶性轉鐵蛋白受體的值計算的人體鐵儲量可以反映人體實際鐵儲量。從表I與表2數據可以看出，兩種方法檢測血清鐵蛋白和可溶性轉鐵蛋白受體含量的結果之間無顯著差異，其六例血清樣品的實際鐵儲量計算結果也無顯著差異(鐵儲量公式COOK J D等.Blood, 2003,101 :3359-3367)，說明用本發明蛋白晶片檢測鐵儲量結果準確可靠。但是，利用本發明蛋白晶片經一次加樣即可同時檢測三個蛋白指標，從而縮短了 三個指標間的檢測時間，使得檢測結果更能反應出三個檢測指標的真實性，並進而更能準確的反應出受檢者鐵儲量的真實值；其次，用本發明蛋白晶片檢測耗時少，本發明方法僅用五小時即可完成對42份血樣各3項檢測指標3次重複的檢測操作，而比濁法則至少需要用時9-10小時；此外，本發明方法檢測用血量低，本方法對每份血樣各3項指標完成3次重複僅需血樣20 Ul/份，而比濁法為至少需血樣200 Ul/份，本發明減少了受檢人的痛苦。因而利用本發明蛋白晶片檢測人體鐵儲量方法是一種高通量、檢測速度快、所需樣品少的檢測方法。
權利要求
1.一種用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，包括固相載體和陣列式分布於固相載體上的抗血清鐵蛋白單克隆抗體、抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體和抗C-反應蛋白單克隆抗體；其中所述的單克隆抗體以共價鍵固定在固相載體的表面；所述的固相載體經醛基化修飾。
2.按照權利要求I所述的用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，其特徵在於所述的固相載體是指經過醛基化修飾的載玻片。
3.按照權利要求I所述的用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，其特徵在於所述的抗血清鐵蛋白單克隆抗體是小鼠抗血清鐵蛋白單克隆抗體；所述的抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體是指小鼠抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體；所述的抗C-反應蛋白單克隆抗體是小鼠抗C-反應蛋白單克隆抗體。
4.按照權利要求I所述的用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，其特徵在於還包括陽性對照、陰性對照、空白對照；所述的陽性對照、陰性對照分別通過共價鍵固定於經過醛基化修飾的固相載體表面。
5.按照權利要求4所述的用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片，其特徵在於所述的陽性對照是指兔IgG ;所述的陰性對照是指小牛血清白蛋白；所述的空白對照是指磷酸鹽緩衝液。
6.權利要求I 5任一所述的用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片的製備方法，其特徵在於包括選擇醛基化微陣列固相載體，確定點陣的排列方式和點樣位置；配製點樣液，然後用點樣針按點陣的排列方式將抗血清鐵蛋白單克隆抗體、抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體、抗C-反應蛋白單克隆抗體與陰性對照、陽性對照及空白對照分別以接觸式點樣方式直接點印於固相載體上；37°C過夜；以5%小牛血清白蛋白溶液封閉I小時，然後用含有1%。吐溫20的磷酸緩衝液洗滌3次，室溫晾乾，然後抽真空包裝，4°C保存。
7.一種用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片試劑盒，其特徵在於包括權利要求I 5任一所述的用於檢測人體鐵儲量的蛋白晶片。
8.按照權利要求7所述的蛋白晶片試劑盒，其特徵在於還包括樣本稀釋液、濃縮洗滌液、標準品混合液、空白對照液、抗體檢測液和Cy3螢光標記羊抗兔IgG工作液。
9.按照權利要求8所述的蛋白晶片試劑盒，其特徵在於所述的樣本稀釋液是指3%小牛血清白蛋白溶液；所述的濃縮洗滌液是指含有1%吐溫20的磷酸鹽緩衝液；所述的空白對照液是指3%小牛血清白蛋白溶液；所述的標準品混合液是指以3%小牛血清白蛋白溶液做樣本稀釋液溶解配製的血清鐵蛋白、可溶性轉鐵蛋白受體和C-反應蛋白的混合液。
10.按照權利要求8或9所述的蛋白晶片試劑盒，其特徵在於所述的抗體檢測液是指以3 %小牛血清白蛋白溶液做樣本稀釋液溶解配製的兔抗血清鐵蛋白多克隆抗體、兔抗可溶性轉鐵蛋白受體多克隆抗體和兔抗C-反應蛋白多克隆抗體的混合液；所述的Cy3螢光標記羊抗兔IgG工作液是指Cy3標記的羊抗兔IgG與3%小牛血清白蛋白溶液按I : 1000稀釋成的二抗工作液。
全文摘要
本發明公開了屬於人體鐵營養檢測領域的用於人體鐵儲量檢測的蛋白晶片，包括固相載體和陣列式分布於固相載體上的抗血清鐵蛋白單克隆抗體、抗可溶性轉鐵蛋白受體單克隆抗體和抗C-反應蛋白單克隆抗體；其中所述的單克隆抗體以共價鍵固定在固相載體的表面；所述的固相載體經醛基化修飾。本發明還公開了基於所述蛋白晶片的檢測試劑盒。與現有技術相比，利用本發明蛋白晶片可實現對評價人體鐵儲量的三項指標進行同時檢測，結果準確可靠；其次，利用本發明蛋白晶片檢測特異性強、靈敏度高、檢測速度快，檢測結果穩定；此外，本發明採用多樣品微陣列技術，適於對大規模人群的篩查檢測；本發明方法需採血樣量小，對受檢人群傷害小，檢測且成本低。
文檔編號G01N33/68GK102621330SQ20121009717
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月5日 優先權日2012年4月5日
發明者孫靜, 李文仙, 殷繼永, 霍軍生, 黃建 申請人:中國疾病預防控制中心營養與食品安全所