乳酸菌治療和/或預防賈第鞭毛蟲病的製作方法

2023-08-02 16:40:16

專利名稱：乳酸菌治療和/或預防賈第鞭毛蟲病的製作方法
技術領域：
本發明涉及能夠防止腸賈第鞭毛蟲小腸細胞定殖的乳酸菌，或其培養上清，分別用於治療和/或預防與腸賈第鞭毛蟲胃腸定殖相關的疾病。本發明還涉及具有上述特徵的雙歧桿菌菌株和應用乳酸菌製備可吸收載體，如食物或藥物組合物，治療和/或預防腸賈第鞭毛蟲對小腸的感染的用途。
腸賈第鞭毛蟲是有鞭毛的原生動物，它對個體胃腸道的感染可以導致疾病，如腹痛、稀軟便甚或嚴重腹瀉。它的生活周期有兩個階段，包囊期和滋養體期，這些不同的形式可以使微生物在不同的甚至惡劣的環境中存活。
包囊是處於靜息狀態的四核卵形細胞，是賈第鞭毛蟲病傳播的原因。個體攝入包囊後，通過接觸胃酸和/或消化酶而激發脫囊反應。然後被稱為滋養體的寄生蟲出現了，它是雙核半梨形細胞，大約10um大小，前端寬而後部窄。其腹側大部分被腹盤覆蓋，相信腹盤至少可以部分解釋滋養體對小腸表面的粘附作用。
脫囊後，滋養體可能持續存在於感染個體的小腸中，甚至長達數年。如果滋養體在腸液的衝擊下被帶到下遊，它們又開始形成包囊以適應新的環境。
包囊隨糞便排出，可以忍受多種極端環境條件，包括不同的溫度、pH和張力條件。一個感染個體每天可能排出9×108個包囊，而已經證實，低達10個包囊就足以導致另一個個體的感染。腸賈第鞭毛蟲的傳播有多種不同途經，但主要傳播途經為汙染的水源和食物。人與人之間直接播散已經通過一些日護中心和醫院爆發得到支持。此外，還發現野生動物也是腸賈第鞭毛蟲的感染儲存宿主，可能對病原體的播散起一定作用。
賈第鞭毛蟲病與其他腸道疾病一樣，在嬰兒和兒童中更加嚴重。感染通常與腹瀉和吸收不良有關，導致兒童生長發育遲緩，可能最終導致新生兒死亡。
但是，大約一半的感染者沒有症狀，並成為病原體播散的根源，因為缺乏任何可甄別的症狀，沒有得到相應的治療。
儘管對腸賈第鞭毛蟲的研究已經傾注了大量努力，但賈第鞭毛蟲病的發病機理仍然不能僅用單一的毒力因素來解釋，迄今為止，也沒有分離到毒性化合物。
業已發現，賈第鞭毛蟲定殖的胃腸道在光學顯微鏡下形態各異，從黏膜結構正常到幾乎全部絨毛萎縮。電子顯微鏡研究結果發現存在超微結構改變，如微絨毛的縮短和斷裂(Chavez et al.，Experimental Parasitol.80(1995)，133-138)。
業已發現，這些結構異常通常伴隨微絨毛膜內乳糖酶、蔗糖酶和麥芽糖酶活性的降低，以及小腸轉運功能的損害(Buret et al.，Gastroenterology 103(1992)，506-513；Roberts-Thomson et al.，Gastroenterology.71(1976)，57-61)。
除了上述兩種形式，腸賈第鞭毛蟲還發生了表面結構的極端變化，並進化了保護性蛋白家族，所述蛋白覆蓋所有暴露表面(Aley et al.，Infect.Agents Dis.4(1995)，161-166；Muller，et al.，Infect.Immun.64(1996)，1385-1390；Nash et al.，J.Euk.Microbiol.42(1995)，604-609)。這些變異的表面蛋白(VSPs)可以保護滋養體避免免疫和環境因素的侵害，這樣賈第鞭毛蟲可以逃避宿主的防禦系統攻擊，並可在高度降解環境中存活，如在哺乳動物腸道中繁殖。VSPs的修飾大約每6-13代發生一次，使宿主免疫系統很難或幾乎不可能針對病原體產生特異性免疫應答。免疫和環境壓力還可以選擇不同的VSP表型。而且，還有報導，在脫囊後可以發生VSPs抗原轉換(Gillin et al.，Annu.Rev.Microbiol.50(1996)，679-705)。
人賈第鞭毛蟲病與固有層和上皮內淋巴細胞數量的增加相關，提示T細胞激活可能是微絨毛損害的原因。但是，與沒有沒有抑制的動物相比，在小鼠中誘導免疫抑制卻導致對微絨毛相關酶更加嚴重的影響，提示在腸賈第鞭毛蟲感染過程中，上皮損傷似乎不僅僅依賴於免疫功能。
對賈第鞭毛蟲病的常見治療是給予抗生素，如屬於硝基咪唑類的藥物。但是，在流行地區對治療的反應卻非常不一致(Katelaris et al.，Aliment.Pharmacol.Ther.8(1994)，187-192)。而且，由於小腸天然菌群的至少部分損傷，應用這些抗生素通常伴隨嚴重的副反應，如長期腹瀉甚或其他致病微生物，如酵母菌導致的胃腸道感染。
因此，在本領域存在這樣一種需求，即為賈第鞭毛蟲病尋找其他治療方法，或者預防病原體對個體的感染。
因此本發明將問題定為提供治療或預防腸賈第鞭毛蟲感染的其他方法。
這一問題可通過下述方法解決，即應用能夠防止腸賈第鞭毛蟲粘附小腸細胞的乳酸菌乳酸菌或雙歧桿菌上清液製備可吸收載體，治療和/或預防與腸賈第鞭毛蟲胃腸定殖相關的疾病。
根據本發明一個優選實施方案，分別提供了新型乳酸菌和雙歧桿菌，能夠防止腸賈第鞭毛蟲粘附小腸細胞，所述細菌選自NCC90(I-2332)，NCC189(I-2333)或NCC200(I-2334)。根據布達佩斯條約，這些微生物業已於1999年11月30日保藏在巴斯德研究所，並獲得上述保藏號。本發明還涉及含有這些微生物的食物和藥物組合物。
載體中包括的微生物數量大約為106-1012pfu(空斑形成單位)。包含的微生物可以就是這樣的，也可任選在從培養基中基本純化後。此外，載體還可以包括這些微生物的培養上清，在製備載體之前，優選通過本領域眾所周知的方法進行濃縮。
可吸收載體可以是食物，也可以是藥物組合物，如奶、酸奶、凝乳、奶酪、發酵奶、基於奶的發酵產品、冰淇淋、基於發酵穀物的產品、奶粉、嬰兒配方或其他類型的寵物食品。這些載體可以，例如通過應用具有相應特徵的微生物發酵起始物質來容易地生產。此外，微生物或其任選濃縮培養上清可以分別以液體或固體的形式加入載體。藥物組合物可以通過標準技術進行製備，包括將微生物和/或其任選濃縮培養上清加入載體，所述藥物組合物如片劑、液體細菌懸液、幹的或溼的口服添加劑、幹的或溼的管飼製劑。根據給藥方式，經驗豐富的技術人員可以選擇相信是適宜的劑型。
附圖中，

圖1顯示了添加105滋養體/cm2後，Portland-1菌株對Caco-2細胞的粘附作用；圖2顯示了應用未分化HT-29細胞進行粘附試驗的結果；圖3顯示了UNO菌株粘附於分化Caco-2細胞的掃描電鏡圖；圖4顯示了腸賈第鞭毛蟲在上皮細胞刷狀緣導致的微絨毛損害；圖5A顯示了賈第鞭毛蟲、乳酸菌和Caco-2細胞共同孵育的結果；圖5B顯示了Caco-2單層細胞與乳酸菌預孵育的結果；
圖6A顯示了一個粘附實驗的結果，其中Portland-1和WB與本發明乳酸菌中和上清接觸；圖6B顯示了一個粘附實驗的結果，其中WB和CIDCA與本發明乳酸菌中和上清接觸；圖7A顯示了WB菌株在酸性上清(pH4)(DMEM∶上清＝1∶1)中孵育1個小時獲得的結果；圖7B顯示，上清的中和(pH7)消除了抑制效果；圖8A顯示了WB菌株在不同pH La10菌株上清中孵育獲得的結果；圖8B顯示了應用MRS稀釋酸性上清的結果；圖9顯示應用流式細胞儀分析菌株WB1在37℃酸化處理的MRSpH5(DMEM∶MRS＝1∶1)中孵育1小時的上清。
圖10顯示了寄生蟲在內含100uCi3H腺嘌呤pH4或7的TYI-S-33培養基中預孵育後的孵育結果。
在導致本發明的研究過程中，發明者假定，治療和/或預防賈第鞭毛蟲病的病因學方法可能是，應用可能拮抗寄生蟲的細菌在小腸定殖。
相信腸賈第鞭毛蟲滋養體對上皮細胞的粘附是在人類和動物中感染的關鍵步驟。儘管賈第鞭毛蟲的粘附機制還沒有徹底闡明，有證據支持腹盤、滋養體能收縮的元件、水力和機械力、以及血凝素涉及介導連接。
考慮到乳酸是賈第鞭毛蟲生活周期的重要因素，因此應用培養的消化道細胞樣細胞研究了腸賈第鞭毛蟲與乳酸菌的相互作用。
為了這一目的，應用了下述微生物寄生蟲菌株和培養基微生物菌株細菌菌株La1(約氏乳桿菌)(I-1225)和La10(嗜酸乳桿菌)(I-2332)來自Nestec的收藏(洛桑，瑞士)。菌株CIDCA 536(兩岐雙岐桿菌)和CIDCA 538(嬰兒雙歧桿菌)來自Centro de Investigaciony Desarrollo enCriotecnologia de Alimentos的收藏(Universidad Nacional de La Plata，阿根廷)，並根據布達佩斯條約保藏，分別獲得保藏號I2333和I-2334。
腸賈第鞭毛蟲菌株Portland-1(ATCC 30888)，UNO/04/87/1(ATCC50184)，New Orleans-1(ATCC 50137)和WB(ATCC 30957)從美國類型培養收藏處(Rockville，USA)購得。
細菌在添加了0.05％半胱氨酸鹽酸(Sigma)的MRS肉湯中37℃生長24小時。孵育在無氧條件下進行(BBL GasPak Plus)。
原生動物在Keister改良TYI-S-33培養基中生長，所述培養基包括(每升)胰酶消化物(Difco)，20g；酵母提取物(BBL)，10g；葡萄糖(Merck)，10g；牛膽鹽(Difco)，0.75g；NaCl(Difco)，2g；L-半胱氨酸鹽酸(Sigma)，2g；抗壞血酸鈉鹽(Fluka)，0.2g；K2HPO4(Merck)，1g；KH2PO4(Merck)，0.6g；檸檬酸銨鐵(Sigma)，22.8mg；成熟牛血清(Sigma)，100ml；青黴素/壯觀黴素(Gibco，1000IU/ml，1000ug/ml)，15ml。還測試了用馬血清(Gibco)取代牛血清的結果。在濾器滅菌(濾孔0.22um)前應用1N NaOH將pH調整到6.9。添加了10％馬血清的Keister改良培養基不支持Portland-1菌株的生長，儘管孵育時間延長到11天，也不論曾經出現過滋養體開始粘附到試管壁上的事實。在孵育的前5天，觀察到高比例的能動寄生蟲。但之後，觀察到滋養體的膠著和能動細胞的顯著減少。向這些損傷細胞中添加牛血清(10％)在24小時後又有生長。為了增加賈第鞭毛蟲的可粘附面積，應用25cm2的組織培養瓶(塑料瓶)。培養基一直加到瓶頸部位，以保持無氧條件。該過程導致在2-3天孵育後，可以收穫大約107滋養體/瓶，並且寄生蟲在瓶壁形成匯合的單層。
亞培養通過下述步驟進行，在冰浴中冷卻培養物(5-10分鐘)，分離粘附的滋養體，然後在新鮮培養基中孵育0.2ml如此獲得的懸液。孵育在37℃進行72小時，並使用不同的容器(玻璃或塑料)。腸賈第鞭毛蟲菌株的保存如上所述分離滋養體，並懸浮於TYI-S-33培養基中。將在TYI-S-33培養基中製備的兩倍濃縮防凍液(DMSO，蔗糖)分成三等分，以2分鐘的間隔添加到懸液中。防凍液的終濃度為DMSO 12％(v/v)，蔗糖4％(w/v)。在開始冷凍循環前，將懸液(大約1×106滋養體/ml)在室溫平衡20分鐘。
用聚苯乙烯(壁厚4cm)隔熱分裝小瓶，置於-80℃。冷凍滋養體的再激活在37℃水浴中解凍分裝小瓶，並以寄生蟲懸液/新鮮培養基＝0.5/7的比率在TYI-S-33培養基中立即孵育。培養物在37℃暗室孵育。
本發明還通過實施例的方式進行說明。
作為小腸細胞模型，應用了Caco-2和HT29細胞系。對這些消化道細胞樣細胞的粘附作用通過下述方法進行檢測實施例1滋養體的放射標記寄生蟲在YTI-S-33培養基中孵育，並加入2.6-7.1uCi/ml的2-3H腺嘌呤(2Ci/mmol，1mCi/ml，Amersham Life Science)，或甲基-3H胸腺嘧啶(2Ci/mmol，1mCi/ml，Amersham Life Science)。在37℃孵育48-72小時。
滋養體在含有7.1uCi/ml的3H腺嘌呤或3H胸腺嘧啶的培養基中生長，DPM/寄生蟲比率差異非常大(表1)。儘管胸腺嘧啶的濃度比腺嘌呤高10倍，但整合卻非常低，結果分別為0.08和2.8DPM/寄生蟲。
表1加入7.1uCi/ml放射標記鹼基後賈第鞭毛蟲Portland-1菌株對3H的整合
表2顯示了腸賈第鞭毛蟲整合腺嘌呤的結果。通過應用濃度低達2.5uCi/ml的腺嘌呤，可以獲得適宜的放射標記。在這些條件中，DPM/寄生蟲範圍從Portland-1菌株的0.3到UNO菌株的1.6。
表2不同賈第鞭毛蟲菌株對2-3H腺嘌呤的整合結果是至少兩次測定的平均值
實施例2細胞培養Caco-2細胞在DMEM培養基中生長，所述培養基添加了非必需胺基酸，青黴素(12IU/ml)，壯觀黴素(12ug/ml)，慶大黴素(47ug/ml)和未激活胎牛血清(20％v/v)。通過每孔接種2×105個細胞，在6孔組織培養板上製備單層細胞。孵育在37℃，10％CO2/90％空氣的條件下進行。在每個培養雙日更新培養基。應用49-51代細胞進行粘附試驗，只應用匯合後晚期的單層細胞(至少培養2周)。
未分化HT-29細胞(美國類型培養收藏處，Rockville，MD)在DMEM培養基中生長，所述培養基包括4.5g/l葡萄糖(Seromed，Biochrom KG，柏林，德國)，並添加了Glutamax 1(0.01％v/v；L-丙氨醯-穀氨醯胺200mM，GIBCO，巴塞爾，瑞士)，慶大黴素(0.57mg/ml，GIBCO，巴塞爾，瑞士)和胎牛血清(10％v/v，GIBCO，巴塞爾，瑞士)。細胞在52代時應用。實施例3粘附試驗在獲得匯合的單層滋養體後，棄去培養基，這樣可以清除沒有粘附到表面的寄生蟲。如述收穫寄生蟲，並用含有11.4mM半胱氨酸HCl的DMEM(Gibco)洗滌3次。應用1％聚甲醛稀釋寄生蟲(1∶2)，然後應用血球計數器計數。
將懸浮於DMEM-CYS(DMEM+11.4mM半胱氨酸鹽酸)中的放射標記滋養體加入Caco-2細胞單層中，在37℃，5％CO2/95％空氣的條件下孵育1小時。然後應用DMEM-CYS在37℃洗滌3遍，分離未結合的滋養體。
洗滌後，每孔加入1ml 1N NaOH，室溫孵育平板1小時。將細胞裂解液置於閃爍瓶中，再用PBS洗板。用β計數器(RackBeta Spectral，LKB，Wallac)測定放射活性。實施例4預孵育試驗細菌培養物用PBS洗滌3次。將在DMEM中調整至1×108CFU/ml的懸液加入Caco-2細胞單層中，在37℃孵育平板1小時。在細菌懸液粘附後，加入調整至1×105寄生蟲/ml的放射標記滋養體。實施例5共同孵育試驗在含有Caco-2單層細胞的6孔組織培養平板中，將含有1×105放射標記賈第鞭毛蟲/ml的1ml寄生蟲懸液等分與1ml細菌懸液(1×108CFU/ml)混合。如上所述進行粘附試驗。實施例6乳酸菌上清對腸賈第鞭毛蟲粘附的作用乳酸菌培養物以900g離心15分鐘，並用4N NaOH中和上清(pH6.9-7.4)。在含有Caco-2單層細胞的6孔組織培養平板中，將溶於DMEM-CYS的含有1×105放射標記滋養體/ml的1ml懸液與1ml中和上清混合。如上所述進行粘附試驗。試驗還包括適宜的對照，對照是MRS，或用乳酸將MRS酸化至pH4.5，然後再中和到pH7。
將寄生蟲懸液(DMEM-cys)與等體積上清在37℃孵育1小時，進行預孵育試驗。在另一系列實驗中，寄生蟲在純上清或MRS稀釋的上清中懸浮。孵育後，將賈第鞭毛蟲懸浮於DMEM中，並加入Caco-2細胞。
在40ml培養物中，通過在含有100uCi3H腺嘌呤的TYI-S-33培養基中孵育寄生蟲，進行生長評價。應用籃綠激發光進行流式細胞儀分析(FACScanTM)。實施例7掃描電鏡檢查在24孔組織培養板內，Caco-2細胞生長於圓形玻璃片(直徑10mm)上，然後如示進行滋養體粘附。通過在4℃添加溶於PBS的2.5％戊二醛進行標本固定16小時。室溫應用2％四氧化鋨進行後固定2小時，然後塗片在系列梯度乙醇溶液中(乙醇水溶液30，50，70，90，100％)脫水。最後，在臨界點應用CO2乾燥樣本，金封片，然後應用Philips SEM 505在加速電壓30KV進行檢查。實施例8腸賈第鞭毛蟲滋養體對Caco-2細胞的粘附作用將總計105滋養體加入如實施例2所述的caco-2培養物中。粘附試驗結果如圖1所示。無論單層細胞的生長時間，大約5％獲得粘附。對塑料表面的粘附非常高(21.8±2.4％)。
應用未分化HT-29細胞進行的粘附試驗結果如圖2所示。獲得的菌株Portland-1和WB的值分別為7.0±1.2％和5.5±0.6％。
菌株UNO對分化Caco-2細胞的粘附掃描電鏡圖如圖3所示。絕大多數賈第鞭毛蟲滋養體以腹側粘附於單層細胞。還見到一些寄生蟲以背側面向Caco-2細胞(箭頭)。也許圖4可以更清晰地顯示，滋養體粘附使腸細胞樣細胞刷狀緣產生了損傷痕跡。
賈第鞭毛蟲、乳酸菌和Caco-2細胞的共同孵育並未改變粘附(圖5A)。而且，Caco-2單層細胞與乳酸菌的預孵育也沒有幹擾寄生蟲的粘附(圖5B)。實施例9乳酸菌培養物上清對腸賈第鞭毛蟲粘附Caco-2細胞的影響根據本發明，菌株Portland-1和WB與中和的乳酸菌上清共同孵育，可以使Portland-1菌株對Caco-2細胞的粘附降低19％(La1菌株)-40％(La10菌株)(圖6A)。對於菌株WB，數值範圍為20％(菌株CIDCA536)-40％(菌株La10)(圖6B)。儘管菌株之間的差異尚不能建立，但菌株La10與對照MRS相比，無論對Portland-1(P＝0.06)還是WB(P＝0.04)菌株均顯示了顯著差異。
考慮到應用Caco-2細胞進行共同孵育實驗的兼容pH範圍非常狹窄，試驗通過下述步驟進行，包括應用上清預孵育寄生蟲，然後在進行粘附試驗前，再把它們懸浮於DMEM-半胱氨酸中。菌株WB與酸性上清(pH4)(DMEM∶上清＝1∶1)孵育1小時，可以使粘附降低15％(MRS)-大約3％(研究的所有菌株)(圖7A)。上清的中和(pH7)可以消除這種抑制作用，並發現粘附增加(圖7B)。
WB菌株與不同pH La10菌株上清孵育獲得的結果如圖8A所示。在pH4和5，沒有發現與對照MRS相比存在任何差異，但在pH6和7，發現粘附更高。
應用MRS稀釋酸性上清可以導致pH的上升，上清稀釋1/8時粘附下降(相對濃度0.125，pH4.07，圖8B)。
應用流式細胞儀分析菌株WB1懸液發現存在大小(FSC)和胞漿複雜性(SSC)差異，所述菌株WB1懸液在酸化到pH5的MRS(DMEM∶MRS＝1∶1)中37℃孵育1小時(圖9)。將預孵育寄生蟲在pH4或7含有100uCi3H腺嘌呤的TYI-S-33培養基中進行孵育，顯示了整合差異(圖10)。無論在MRS還是上清樣本中孵育28小時，pH4時檢測的腺嘌呤整合率都很低。儘管有些寄生蟲粘附到瓶壁上，但它們都不活動。酸化到pH4.05然後又中和的MRS肉湯顯示的DPM值比對照值低20％。菌株La10中和上清的值大約是對照值的80％，在0.09水平差異顯著。在pH7的MRS和上清中，均發現大量聚合的寄生蟲。
賈第鞭毛蟲對不同細胞系的粘附結果(圖1和2)提示，非特異性粘附似乎是該系統的一個重要特徵，因為在分化細胞(培養不同時間的Caco-2)和未分化細胞(HT-29)間未發現顯著差異。而且，對塑料表面的粘附也非常高。滋養體對Caco-2單層細胞的粘附顯然導致了微絨毛損傷(圖4)。
在細菌粘附後，通過洗滌步驟去除寄生蟲的實驗導致單層細胞損傷，使排除值似乎並不可信。損傷的程度有賴於洗滌溶液，從DMEM-cys對微絨毛的抹除(掃描電鏡圖)到PBS對細胞的分離。考慮到上述發現，試驗如下進行，其中單層細胞與懸浮於DMEM-cys的細菌預孵育，但在加入寄生蟲前不進行洗滌步驟。通過將寄生蟲、細菌和Caco-2細胞共同孵育，進行另一序列實驗。獲得的結果(圖5)與鞭毛運動和可收縮元件介導的滋養體「活性」粘附一致。不能運動的乳酸菌不能與寄生蟲競爭粘附。
關於乳酸菌培養物上清的作用，業已顯示，它們能夠抑制賈第鞭毛蟲粘附。沒有任何理論支持，目前認為這種抑制作用可能主要是由於乳酸菌分泌的特定有機酸。
應用乳酸酸化的MRS預孵育寄生蟲顯示了細胞大小和胞漿複雜性的顯著變化，而且無論上清還是MRS對照，對Caco-2細胞的粘附均下降。在這些條件下，寄生蟲的活力受到高度影響，與下述實驗所示一樣，所示實驗中經處理寄生蟲在新鮮TYI-S-33培養基中孵育。
在pH4與乳酸接觸後，寄生蟲的生長基本停止，儘管一些寄生蟲仍能粘附到瓶壁上。在這些條件下，乳酸對於賈第鞭毛蟲似乎是致死性的。在pH7，乳酸的抑制作用仍然存在，酸化MRS和La10菌株上清之間的差異可以這樣解釋，即假定由於新鮮MRS和失去效能的上清間緩衝能力的差異導致乳酸濃度不同。
在應用上清預孵育寄生蟲過程中，形成賈第鞭毛蟲聚合，這可能是在pH6和7粘附值非常高的原因(圖8)。如前所述，賈第鞭毛蟲粘附的主要機制懸液寄生蟲活力，儘管在應用pH4的上清處理滋養體後顯示，死的原生動物也可以粘附。但這些寄生蟲不能繁殖，因此不能有效導致寄生蟲病。而且，中和的乳酸菌培養上清減緩了賈第鞭毛蟲的生長，並導致聚合，不能粘附。
考慮到上述實驗結果，已經很清楚，根據本發明應用的乳酸菌可能成功用於治療或預防賈第鞭毛蟲病。
權利要求
1.能夠防止腸賈第鞭毛蟲粘附小腸細胞的乳酸菌或雙歧桿菌培養上清在製備用於治療和/或預防與腸賈第鞭毛蟲胃腸道定殖相關疾病的可吸收載體中的用途。
2.選自NCC533(I-1225)，NCC90(I-2332)，NCC189(I-2333)，NCC200(I-2334)的乳酸菌或雙歧桿菌在製備用於治療和/或預防與腸賈第鞭毛蟲胃腸道定殖相關疾病的可吸收載體中的用途。
3.權利要求2或權利要求3的用途，其中載體中包括的微生物數量為106-1012cfu/g。
4.前述任意權利要求的用途，其中可吸收載體是食物組合物或藥物組合物。
5.權利要求4的用途，其中食物組合物選自奶、酸奶、凝乳、奶酪、發酵奶、基於奶的發酵產品、冰淇淋、基於發酵穀物的產品、奶粉、嬰兒配方或寵物食品。
6.權利要求4的用途，其中藥物組合物的形式是片劑、液體細菌懸液、幹的口服添加劑、溼的口服添加劑、幹的管飼製劑或溼的管飼製劑。
7.選自NCC90(I-2332)，NCC189(I-2333)，NCC200(I-2334)的乳酸菌。
8.食物或藥物組合物，其中含有選自NCC533(I-1225)，NCC90(I-2332)，NCC189(I-2333)，NCC200(I-2334)或雙歧桿菌NCC189(I-2333)或NCC200(I-2334)的微生物，用於治療和/或預防與腸賈第鞭毛蟲胃腸道定殖相關的疾病。
9.食物或藥物組合物，包括能夠防止腸賈第鞭毛蟲粘附小腸細胞的乳酸菌上清，用於治療和/或預防與腸賈第鞭毛蟲胃腸道定殖相關的疾病。
10.權利要求8或9的組合物，是奶、酸奶、凝乳、奶酪、發酵奶、基於奶的發酵產品、冰淇淋、基於發酵穀物的產品、奶粉、嬰兒配方或寵物食品，或者其形式是片劑、液體細菌懸液、幹的口服添加劑、溼的口服添加劑、幹的管飼製劑或溼的管飼製劑。
全文摘要
本發明涉及能夠防止腸賈第鞭毛蟲小腸細胞定殖的乳酸菌或雙歧桿菌上清液在製備用於治療和/或預防與腸賈第鞭毛蟲胃腸定殖相關的疾病的可吸收載體中的用途。本發明還涉及具有上述特徵的雙歧桿菌特異菌株和可吸收載體,如含有這樣的上清液或微生物的食物或藥物組合物。
文檔編號A61K35/74GK1382056SQ00814779
公開日2002年11月27日 申請日期2000年10月13日 優先權日1999年10月26日
發明者E·施夫林, P·佩雷茨 申請人:雀巢製品公司