一種細菌內毒素檢測用分散組合物的製作方法

2023-08-03 03:11:16 1

專利名稱：一種細菌內毒素檢測用分散組合物的製作方法
技術領域：
本發明屬於藥物領域，特別涉及一種細菌內毒素檢測用分散組合物。
背景技術：
細菌內毒素是G_菌細胞壁上的特有結構，其主要成分是脂多糖，具很強的熱原活性。當細菌內毒素通過消化道進入人體時並不產生危害，但內毒素通過注射等方式進入血液時，則可導致不同程度的內毒素血症。因此，對於注射劑及其生產中所用的原輔料都應進行細菌內毒素的控制，以確保產品質量，保障用藥安全。細菌內毒素的檢測常用方法是家兔熱原法和鱟試劑法，目前運用較多的是鱟試劑法。採用該方法進行細菌內毒素檢測之前，須進行幹擾實驗，排除供試品對鱟試劑實驗的幹擾，確保該方法的準確度。對於非水溶性供試品，由於其與細菌內毒素檢測用水不能互溶，混合後一段時間出現分層，導致難以有效檢測。目前多採用的方法是在分層以前取供試品與細菌內毒素檢測用水的混合物，或者通過離心取水相部分進行幹擾實驗，但是取供試品與細菌內毒素檢測用水的混合物進行幹擾實驗需要稀釋更大的倍數才能排除幹擾甚至不能排除幹擾；離心方法存在操作複雜、容易造成二次汙染，出現假陽性，同時不能確保油相中的細菌內毒素完全溶解在水相中，在進行細菌內毒素檢測時，容易出現假陰性等缺點。對於含有這類非水溶性原料的藥品，雖然能夠與水互溶，在採用細菌內毒素檢測用水稀釋時，仍然存在細菌內毒素在供試品中分散不均勻導致幹擾不能成立的情況。商君等，「油劑普魯卡因青黴素注射液細菌內毒素檢查方法的研究」，中國獸藥雜誌2000,34 (1):20 22，採用在樣品中加入適量無菌、內毒素合格的0.lmol/L氫氧化鈉、1%吐溫-80溶液，並用0.lmol/L鹽酸調節樣品液的pH值，解決了油劑普魯卡因青黴素注射液的溶解問題，但是該方法操作複雜，並且經研究，不能廣泛應用於常用的非水溶性藥品。

發明內容
為了解決上述問題，本發明提供了一種新的細菌內毒素檢測用分散組合物。本發明細菌內毒素檢測用分散組合物，它包括如下配比的成分:甘油I 20體積份、陰離子表面活性劑0.5 5重量份，非離子表面活性劑I 10體積份。所述重量份/體積份為g/ml。其中,所述陰離子表面活性劑HLB值為I 20。優選地,所述陰離子表面活性劑的HLB值為12 20。其中，所述陰離子表面活性劑包括油酸、油酸鈉或者油酸三乙醇胺中的一種或者多種。其中，所述非離子表面活性劑的HLB值為I 20。優選地，所述非離子表面活性劑的HLB值為13.3 16 .7。其中，所述非離子表面活性劑包括聚山梨酯類系列中的一種或者多種。
優選地，它包括如下配比的成分:甘油10體積份、陰離子表面活性劑I重量份，非離子表面活性劑10體積份。本發明細菌內毒素檢測用的分散液，它包括前述述細菌內毒素檢測用的分散組合物與注射用水或細菌內毒素檢查用水，其中，甘油的濃度為0.1 2% (v/v)。本發明前述分散液的方法，它包括如下步驟:(I)取甘油，溶於注射用水或細菌內毒素檢查用水中，得甘油濃度為0.1% 2%(v/v)的溶液；(2)分別取陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑溶於步驟(I)的溶液中，它們的濃度分別為0.1 0.4% (w/v)和0.1 1% (v/v)；(3)將步驟(2)得到的溶液用孔徑為IOOnm微孔濾膜過濾，即可。本發明細菌內毒素檢測用分散組合物使內毒素均勻分散在水相中，有效排除非水溶性供試品對鱟試劑實驗的幹擾，提高內毒素檢測方法的準確度，簡化內毒素檢測步驟。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實施例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。·


圖1內毒素檢測報告，其中，管號1-8:標準曲線；9_10:離心法製備供試品溶液；11-12:陽性對照；13-14:實施例1分散液作為溶劑製備的供試品溶液I ;15-16:實施例1分散液對照樣品的製備I ;17_18:實施例2分散液作為溶劑製備的供試品溶液2 ； 19-20:實施例2分散液對照樣品2 ；21-22:實施例3分散液作為溶劑製備的供試品溶液3 ；23~24:實施例3分散液對照樣品3 ；25-26:實施例4分散液作為溶劑製備的供試品溶液4 ；27~28:實施例4分散液對照樣品4 ；29-30:實施例5分散液作為溶劑製備的供試品溶液5 ;31_32:實施例5分散液對照樣品5。
具體實施例方式本發明細菌內毒素檢查法，指《中華人民共和國藥典》(2010版第二部附錄XI E)規定的細菌內毒素檢查法。實施例1本發明分散液的製備及應用一、製備方法(I)試劑選擇陰離子表面活性劑選擇油酸鈉，其HBL值為18 ;非離子表面活性劑選擇聚山梨酯-80，其HBL值為15。(2)實驗器具及試劑熱原的去除所有用的實驗器具，包括碘量瓶、容量瓶、藥匙、燒杯在250°C下幹烤2h，去除其中的熱原；油酸鈉放置於除去熱原的碘量瓶中，在150°C下幹烤2h。(3)分散液的配製稱取已經在150°C幹烤2h的油酸鈉0.lg，用細菌內毒素檢測用水配製的1%甘油溶液在已經去除熱原的燒杯中溶解，配製成濃度為0.1%的油酸鈉溶液，然後加入1%聚山梨酯-80，使得整個體系各原料的配比為:油酸鈉0.1% (w/v)，甘油1% (v/v)、聚山梨酯-801%(v/v),最後用細菌內毒素檢測用水配製的0.lmol/L HCl溶液調節pH在6_8左右。(4)分散液溶液的內毒素去除將得到的溶液用孔徑為IOOnm微孔濾膜將溶液過濾到已除熱原的碘量瓶中。(5)分散液溶液細菌內毒素驗證實驗按照細菌內毒素檢測用水的要求將該分散液溶液的細菌內毒素限值定為0.015EU/ml。採用兩個不同生產廠家的鱟試劑對該溶液進行細菌內毒素幹擾實驗，建立該分散液細菌內毒素驗證方法為採用靈敏度為0.015EU/ml的鱟試劑對該溶液進行細菌內毒素檢測。a、細菌內毒素限值的確定按照細菌內毒素檢測用水的要求將該分散液溶液的細菌內毒素限值定為0.015EU/ml。b、供試品的幹擾試驗鱟試劑靈敏度覆核試驗按《中國藥典》2010年版二部附錄XI E 「細菌內毒素檢查法」，對所用兩個廠家鱟試劑的靈敏度進行覆核。根據鱟試劑靈敏度的標示值(X )，將細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水溶解，在旋渦混合器上混勻15分鐘，然後製成2入、A ,0.5A ,0.25 A四個濃度的內毒素標準溶液，每稀釋一步均在旋渦混合器上混勻30秒鐘。按檢查法項下試驗，每一濃度平行做4支，同時，用細菌內毒素檢查用水做2支陰性對照管，如最大濃度2.0 A管均為陽性，最低濃度0.25 X管均為陰性，陰性對照管均為陰性，按下式計算反應終點濃度的幾何均值，即為鱟試劑靈敏度的測定值(、C)。A c=lg_1( E X/4)式中X為反應終點濃度的對數值(lg)。反應終點濃度是系列濃度遞減的內毒素溶液中最後一個呈陽性結果的濃度。覆核結果見表I。表I鱟試劑靈敏度覆核結果
權利要求
1.一種細菌內毒素檢測用分散組合物，其特徵在於:它包括如下配比的成分:甘油I 20體積份、陰尚子表面活性劑0.5 5重量份,非尚子表面活性劑I 10體積份。
2.根據權利要求1所述分散組合物，其特徵在於:所述陰離子表面活性劑HLB值為I 20。
3.根據權利要求2所述分散組合物，其特徵在於:所述陰離子表面活性劑的HLB值為12 20。
4.根據權利要求1所述分散組合物，其特徵在於:所述陰離子表面活性劑包括油酸、油酸鈉或者油酸三乙醇胺中的一種或者多種。
5.根據權利要求1所述分散組合物，其特徵在於:所述非離子表面活性劑的HLB值為I 20。
6.根據權利要求5所述分散組合物，其特徵在於:所述非離子表面活性劑的HLB值為13.3 16.7。
7.根據權利要求1所述分散組合物，其特徵在於:所述非離子表面活性劑包括聚山梨酷類系列中的一種或者多種。
8.根據權利要求1所述分散組合物，其特徵在於:它包括如下配比的成分:甘油10體積份、陰離子表面活性劑I重量份，非離子表面活性劑10體積份。
9.一種細菌內毒素檢測用分散液，其特徵在於:它包括權利要求1 7任意一項所述細菌內毒素檢測用的分散組合物與注射用水或細菌內毒素檢查用水，其中，甘油的濃度為0.1 2% (v/v)0
10.一種製備權利要求9所述分散液的方法，其特徵在於:它包括如下步驟: (1)取甘油，溶於注射用水或細菌內毒素檢查用水中，得甘油濃度為0.1% 2% (v/v)的溶液； (2)分別取陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑溶於步驟(I)的溶液中，它們的濃度分別為 0.1 0.4% (w/v)和 0.1 1% (v/v)； (3)將步驟(2)得到的溶液用孔徑為IOOnm微孔濾膜過濾，即可。
全文摘要
本發明公開了一種細菌內毒素檢測用分散組合物，它包括如下配比的成分甘油1～20體積份、陰離子表面活性劑0.5～5重量份，非離子表面活性劑1～10體積份。本發明還公開了一種細菌內毒素檢測用分散液及其製備方法。本發明細菌內毒素檢測用分散組合物可以有效提高內毒素檢測方法的準確度，簡化內毒素檢測步驟，具有良好的經濟效益。
文檔編號G01N33/579GK103245786SQ20131011698
公開日2013年8月14日 申請日期2013年4月7日 優先權日2013年4月7日
發明者楊秋豔, 朱雪梅, 楊軍, 王利春, 王晶翼, 梁隆, 沈鑫, 程志鵬 申請人:四川科倫藥業股份有限公司