作為抗氧化劑的(-)-橄欖脂素的製作方法

2023-07-05 09:17:16 6

專利名稱：作為抗氧化劑的(-)-橄欖脂素的製作方法
技術領域：
本發明涉及由新的植物來源，羽葉楸屬(Stereospermum)的Stereospermum Personatum，以令人滿意的收率分離出化合物(-)-橄欖脂素。它被證明是有效的且優於目前使用的重要的醫用親脂性抗氧化劑普羅布考和α-生育酚的抗氧化劑分子。它在炎性疾病症狀、動脈粥樣硬化、糖尿病併發症、癌症、肝臟毒性和各種通過由自由基生成增加或在自由基的清除下所導致的氧化應激和/或明顯的氧化負載所介導或促進的疾病症狀中可能具有更好的治療效果。
背景技術：
大量流行病學證據表明，在食用豐富的水果和蔬菜與降低心血管疾病和某些癌症形成的危險之間存在聯繫。人們通常假定促進這些保護效應的有效成分主要為植物化學抗氧化劑。
過去幾十年的研究積累了足夠的證據，顯示出自由基清除劑/抗氧化劑作為抗誘變、抗炎藥、抗amerosclerotic、抗糖尿病、抗肝毒性、抗老化劑和在各種神經系統紊亂中的有益效果。因此，尋找新的抗氧化劑要素變得很重要，以改善由於自由基/氧化性損傷或由於抗氧化劑/氧化劑動態平衡之間的不平衡導致的有關的病理學症狀比如白內障、風溼性疾病、動脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病及其它神經退行性症狀的藥理學治療。
因此，藥理學研究集中在尋找富含抗氧化劑要素的潛在的資源。為此，富含抗氧化劑要素部分的重要的醫學植物變成了熱門貨。
Stereospermum personatum是一種用於傳統印度醫藥學派的藥用植物，廣泛地用於製備利尿劑，溶石藥，祛痰劑，強心劑，春藥，開胃食品，抗炎藥，抗菌劑，消化不良，腹瀉，腎和膀胱結石，咳嗽，哮喘，劇渴，痔和胃酸過多症的疾病症狀(Indian Medicinal Plants，第5卷，192頁)。進一步報導了其具有抗菌、抗真菌、低血糖的活性，和抗p388淋巴細胞白血病的細胞活性(Ind.Jour，of Exp.Biol.，1971，9，100)。因此，尋找具有這樣重要的生物學特性的分子成為相關的內容。在這一點上，已經進行了Stereospermum personatum的植物化學研究。申請人經過努力以令人滿意的收率分離出(-)-橄欖脂素。
已知(-)-橄欖脂素具有某些活性，如表1所示。
表1

發明目的本發明的主要目的是提供一種用作抗氧化劑的新的含有(-)-橄欖脂素和添加劑的組合物。
本發明的另一目的是提供一種以良好的收率獲得(-)-橄欖脂素的新來源。
本發明還有一個目的是提供一種由植物來源即Stereospermumpersonatum製備(-)-橄欖脂素的方法。
本發明的另一目的涉及(-)-橄欖脂素作為抗氧化劑的應用。
發明概述相應地，本發明提供一種含有(-)-橄欖脂素的新組合物，和其作為抗氧化劑的應用。本發明進一步提供了一種由新的植物來源即Stereospermum Personatum分離(-)-橄欖脂素的方法。
根據本發明，已經發現(-)-橄欖脂素可由一種新的來源，Stereospermum Personatum以高收率分離出來，且已經發現(-)-橄欖脂素顯示出抗氧化劑性質。
發明的詳細描述近來抗氧化劑化合物由於它們在多重起因的障礙即冠心病、癌症、糖尿病、風溼病和炎症性症狀(其中自由基起重要的作用)中的廣譜性活性而吸引了人們的注意。現在許多注意力都集中在來自自然資源的抗氧化劑化合物的利用和獲得。
化合物(-)-橄欖脂素是以純的形式使用的。因此，比目前所用的具有類似性質的化合物混合物的利用更為有利。值得注意的是分離(-)-橄欖脂素的方法相當經濟也是重要的。
本發明提供一種含有抗氧化劑要素的有用來源，StereospermumPersonatum，其中(-)-橄欖脂素是以純的和有效的抗氧化劑分子被分離。將(-)-橄欖脂素與現有的藥理學/治療上可接受的抗氧化劑普羅布考和α-生育酚進行比較，發現(-)-橄欖脂素優於上述的參考藥物，因此可與藥學/治療學可接受的添加劑一起使用。
在本發明的一個實施方案中，可以使用比上述參考藥物更少量的(-)-橄欖脂素而起效。
本發明的一個實施方案涉及一種用作抗氧化劑的組合物，所述組合物包含與藥學可接受的添加劑結合或聯用的有效量的(-)-橄欖脂素。
在本發明的另一實施方案中，藥學可接受的添加劑以不影響或幹擾(-)-橄欖脂素效果的方式進行選擇。
在本發明的另一實施方案中，添加劑選自營養素比如碳水化合物，糖，蛋白質，脂肪和藥學可接受的載體。
在本發明的一個實施方案中，(-)-橄欖脂素與添加劑的比例在0.1∶10到3∶10的範圍，優選為0.4∶10到2∶10的範圍。
在本發明的另一實施方案中，(-)-橄欖脂素的給藥量在每劑量300毫克到400毫克的範圍，至少每天給藥兩次。
在本發明的另一實施方案中，該組合物是通過口服途徑以片劑、膠囊、糖漿或粉末的形式給藥。
在本發明的再一個實施方案中涉及由植物Stereospermumpersonatum分離(-)-橄欖脂素的方法，所述方法包含以下步驟a)用己烷提取Stereospermum Personatum的幹木粉末；b)用氯仿進一步提取步驟(a)的殘餘物；c)將步驟(b)得到的氯仿溶液真空濃縮；d)用矽膠(60-120目)吸附暗褐色提取物並加載在矽膠(60-120目)柱(直徑4釐米，高100釐米)上；
e)將上述柱用氯仿/甲醇梯度洗脫，和f)收集用4％甲醇/氯仿洗脫的餾份並將所述餾份濃縮，獲得純的(-)-橄欖脂素。
在本發明的另一實施方案中，所用的溶劑選自己烷、氯仿和甲醇。
在本發明的另一個實施方案，所獲得的(-)-橄欖脂素的收率為植物乾材的大約0.073％。
還有一個實施方案涉及(-)-橄欖脂素作為用於動物和人的抗氧化劑或自由基清除劑的應用。
在另一實施方案中涉及(-)-橄欖脂素在製造有效用作抗氧化劑的組合物中的應用。
在本發明另一實施方案中，(-)-橄欖脂素是經口服給藥。
本發明又一實施方案涉及自由基清除治療的方法，該方法包括給需要治療的患者以有效量的(-)-橄欖脂素的步驟，優選(-)-橄欖脂素是以300毫克-400毫克/劑，每天兩次給藥。
因此，Stereospermum persorzatum是(-)-橄欖脂素的一種新來源，且因其以高收率存在於此植物中，使得本發明更為重要。在表2中給出了由不同植物得到(-)-橄欖脂素收率的比較。
表2

本發明具體表現為作為來源於新的植物來源的抗氧化劑要素的(-)-橄欖脂素的分離，以及與藥用重要的抗氧化劑藥物分子相比較其自由基清除性質的鑑定。
附圖簡要說明

圖1表示來源於Stereospermum personatum的(-)-橄欖脂素和參考化合物的抗氧化劑(抗自由基，DPPH)活性。
圖2表示(-)-橄欖脂素的結構。
在下面的實施例中進一步對本發明進行描述，這些實施例是以舉例說明的方式給出的，因此將不會被視為以任何方式限制本發明。
實施例1實驗規程分離上述木酚素的方法。在索格利特抽提器上加載Stereospermum personatum(3千克)幹木粉末。首先用己烷提取粉末。用氯仿進一步提取由己烷萃取得到的殘餘物；將氯仿溶液真空濃縮。用矽膠(60-120目)吸附暗褐色提取物(22克)並加載在矽膠(60-120目)柱(直徑4釐米，高100釐米)上。
將上述柱用氯仿/甲醇梯度洗脫。氯仿/甲醇的梯度根據要獲得的特定餾份並由此獲得所需的化合物加以選擇。在此情況下，用4％甲醇/氯仿分別收集洗脫的餾份並濃縮。
將上述餾份進一步地使用矽膠柱(＞200目，直徑2.5釐米，長度50釐米)用氯仿/甲醇梯度純化。用4％甲醇/氯仿洗脫，獲得純的(-)-橄欖脂素(2.2克)。(-)-橄欖脂素的光譜化學數據如下(-)-橄欖脂素1.分子式C20H24O72. 『 HNMRδ2.45(1H，m)，2.9(1H，d)，3.05(1H，d)，3.65(1H，d)，3.95-3.80(3H，m)，3.85(6H，s)，4.7(1H，d)，5.6(Ar-OH，s)，5.65(Ar-OH，s)，6.75-6.90(5H，m)，7.1(1H，s).
3.13CNMRδ39.19(C-7』)，55.80(2xOCH3)，59.42(C-8』)，59.91(C-9)，77.79(C-9′)，81.18(C-8』)，83.64(C-7)，109.60(C-2』)，113.50(C-2)，114.46(C-5，)，lI4.60(C-5)，119(C-6，)，I22.83(C-6)，128.56(C-1)，133.64(C-1』)，144.56(C-4，)，145.47{C-4)，146.82(c-3』)，147.18(C-3).
4.MS376(M+)5.IR3401cm-1自由基清除抗氧化劑效力的體外評價由清除廣泛使用的自由基，1，1-二苯基-2-苦基肼基自由基(DPPH)的能力/效力進行化合物的抗氧化劑活性測定。以廣泛可接受和試驗的抗氧化劑即普羅布考和α-生育酚作為參考化合物。製備化合物的1毫克/毫升DMSO濃縮物，隨後用DMSO稀釋到較低的濃度。將200μ1試驗化合物在Tris-HCl緩衝液(pH值7.4)中復原到1毫升。取等體積的500μM DPPH自由基溶於乙醇與其進行反應。在黑暗中孵化45分鐘後，記錄在517nm處的吸光率。相應地計算自由基清除活性百分數。所有的讀數都重複三次。結果(圖1和表3)表明所測定的化合物具有有效的抗氧化劑/自由基清除性質。
表3化合物的50％自由基清除濃度

權利要求書(按照條約第19條的修改)1.用作抗氧化劑的藥物組合物，其中包括有效量的(-)-橄欖脂素和藥學可接受的添加劑。
2.權利要求1的組合物，其中所述的添加劑以不影響或幹擾(-)-橄欖脂素效果的方式選擇。
3.權利要求1的組合物，其中所述的添加劑選自營養素。
4.權利要求3的組合物，其中所用的營養素可以是碳水化合物。
5.權利要求3的組合物，其中所用的營養素可以是糖。
6.權利要求3的組合物，其中所用的營養素可以是蛋白質。
7.權利要求3的組合物，其中所用的營養素可以是脂肪。
8.權利要求3的組合物，其中所用的營養素可以是適宜的藥學可接受的載體。
9.權利要求1的組合物，其中(-)-橄欖脂素與已知的抗氧化劑相比以較低的劑量起效。
10.權利要求1的組合物，其中(-)-橄欖脂素的給藥量在每劑量300毫克到400毫克的範圍，至少每天給藥兩次。
11.權利要求1的組合物，其中所述的組合物是以片劑、膠囊、糖漿或和粉末的形式給藥。
12.一種由植物Stereospermum personatum分離(-)-橄欖脂素的方法，其中所述的(-)-橄欖脂素是構成權利要求1組合物的活性組分，所述方法包括以下步驟a)用己烷提取Stereospermum Personatum的幹木粉末；b)用氯仿進一步提取步驟(a)的殘餘物；c)將步驟(b)得到的氯仿溶液減壓濃縮，獲得暗褐色提取物；d)用矽膠(60-120目)吸附步驟(c)的暗褐色提取物並加載在矽膠(60-120目)柱(直徑4釐米，高100釐米)上；e)用氯仿-甲醇的混合物梯度洗脫步驟(d)的產物，和f)收集用4％甲醇/氯仿洗脫的餾份，並將所收集的餾份濃縮，獲得純的(-)-橄欖脂素。
13.權利要求12的方法，其中所用的溶劑是己烷、氯仿和/或甲醇。
14.權利要求12的方法，其中(-)-橄欖脂素的收率大約為植物乾材的0.073％。
15.權利要求12的方法，其中(-)-橄欖脂素是從一種新的來源Stereospermum personatum獲得的。
16.(-)-橄欖脂素作為動物和人哺乳動物的抗氧化劑或自由基清除劑的應用。
17.(-)-橄欖脂素在製備用作抗氧化劑的組合物中的應用。
18.權利要求17的應用，其中所述含有有效量的(-)-橄欖脂素的組合物經口服給藥。
19.權利要求17的應用，其中所述的組合物含有選自營養素的添加劑。
20.權利要求19的應用，其中所述的營養素可以是碳水化合物。
21.權利要求19的應用，其中所述的營養素可以是糖。
22.權利要求19的應用，其中所述的營養素可以是蛋白質。
23.權利要求19的應用，其中所述的營養素可以是脂肪。
24.權利要求19的應用，其中所述的營養素可以是藥學可接受的載體。
25.權利要求17的應用，其中含有有效量(-)-橄欖脂素的組合物以每劑量300毫克到400毫克的範圍給藥，至少每天給藥兩次。
關於條約19(1)的聲明本發明涉及用作抗氧化劑活性的(-)-橄欖脂素從新的來源Stereospermum personatum的分離，以及含有橄欖脂素和任選添加劑的組合物。
權利要求
1.藥物組合物，該組合物含有有效量的用作抗氧化劑的(-)-橄欖脂素和添加劑或與添加劑聯用。
2.權利要求1的組合物，其中所述藥學可接受的添加劑以不影響或幹擾(-)-橄欖脂素效果的方式選擇。
3.權利要求1的組合物，其中所述的添加劑選自營養素如碳水化合物、糖、蛋白質、脂肪和藥學可接受的載體。
4.權利要求1的組合物，其中(-)-橄欖脂素以較低的量起效。
5.權利要求1的組合物，其中所述(-)-橄欖脂素的給藥量在每劑量300毫克到400毫克的範圍，至少每天給藥兩次。
6.權利要求1的組合物，其中該組合物是以片劑、膠囊、糖漿和粉末的形式給藥。
7.一種由植物Stereospermum personatum分離(-)-橄欖脂素的方法，所述方法包括以下步驟a)用己烷提取Stereospermum Personatum的幹木粉末；b)用氯仿提取步驟(a)的殘餘物；c)將步驟(b)得到的氯仿溶液真空濃縮；d)用矽膠(60-120目)吸附暗褐色提取物並加載在矽膠(60-120目)柱(直徑4釐米，高100釐米)上；e)用氯仿/甲醇對上述柱梯度洗脫，和f)收集用4％甲醇/氯仿洗脫的餾份並將該餾份濃縮，獲得純的(-)-橄欖脂素。
8.權利要求7的方法，其中所述的溶劑是己烷、氯仿和甲醇。
9.權利要求7的方法，其中(-)-橄欖脂素的收率大約為植物乾材的0.073％。
10.(-)-橄欖脂素作為用於動物和人的抗氧化劑或自由基清除劑的應用。
11.(-)-橄欖脂素在製備用作抗氧化劑的組合物中的應用。
12.權利要求11的應用，其中(-)-橄欖脂素經口服給藥。
13.權利要求11的應用，其中所述的組合物包括選自營養素如碳水化合物、糖、蛋白質、脂肪和藥學可接受的載體的添加劑。
14.一種用於自由基清除治療的方法，該方法包括給需要治療的患者施用有效量的(-)-橄欖脂素的步驟。
15.權利要求14的方法，其中的(-)-橄欖脂素以每劑量300毫克到400毫克的範圍，至少每天兩次進行給藥。
全文摘要
本發明涉及一種用作抗氧化劑的藥物組合物，其中含有有效量的(－)－橄欖脂素和添加劑；由植物Stereospermum personatum分離(－)－橄欖脂素的方法；以及涉及活性餾份(－)－橄欖脂素作為抗氧化劑和自由基清除劑的應用。
文檔編號C09K15/08GK1536996SQ01823499
公開日2004年10月13日 申請日期2001年8月20日 優先權日2001年7月27日
發明者亞納斯瓦米·馬德胡蘇達納·拉奧, 阿肖克·庫馬爾·蒂瓦裡, 厄帕拉帕利·薩姆帕斯·庫馬爾, 傑希盧·辛格·亞達夫, 孔達普拉姆·維賈雅·拉加萬, 庫馬爾 蒂瓦裡, 辛格 亞達夫, 亞納斯瓦米 馬德胡蘇達納 拉奧, 帕利 薩姆帕斯 庫馬爾, 拉姆 維賈雅 拉加萬 申請人:科學和工業研究委員會