吡啶-2-胺衍生物及其製法和藥物組合物與用途
2023-07-09 22:35:51
吡啶-2-胺衍生物及其製法和藥物組合物與用途
【專利摘要】本發明涉及式I所示的3-（2,6-二氯-3-氟苄氧基）-5-（1-（哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）吡啶-2-胺，其可藥用鹽，其水合物和溶劑化物，及其製備方法，含有一個或多個這化合物的組合物，和該類化合物在治療與蛋白激酶有關的疾病如腫瘤疾病方面的用途。I
【專利說明】吡啶-2-胺衍生物及其製法和藥物組合物與用途 發明領域
[0001] 本發明涉及式I所示的3-(2, 6-二氯-3-氟苄氧基)-5-( 1-(哌啶-4-基)-1Η-吡 唑-4-基）批啶-2-胺，其可藥用鹽，其水合物和溶劑化物，其多晶和共晶，其同樣生物功能 的前體或衍生物，及其製備方法，含有一個或多個這化合物的組合物，和該類化合物在治療 與蛋白激酶有關的疾病如腫瘤疾病方面的用途。
[0002] 發明背景 最近幾年，由於對酶和其它一些與疾病相關的生物分子的認識的提高，極大地促進了 治療疾病的新藥的發現或發展，蛋白激酶就是一種廣泛研究的重要的一類，它是一個大家 族，與細胞內各種信號轉導過程的控制有關。由於它們的結構和催化功能的保守性它們被 認為從一個共同的祖先基因進化而來。幾乎所有激酶都含有一個相似的250-300個胺基酸 催化域。這些蛋白激酶按照磷酸化底物的不同被分成多個家族，如蛋白酪氨酸激酶，蛋白絲 氨酸/蘇氨酸激酶，類脂等。一般，蛋白激酶通過影響一個磷醯基從一個核苷三磷酸轉移到 一個與信號轉導途徑相關的蛋白受體來介導細胞內信號轉導。這些磷醯化事件作為分子 開關調節靶蛋白的生物功能，最終被激發對各種細胞外和其它刺激作出反應。激酶存在於 多層信號轉導路徑中，受體酪氨酸激酶位於腫瘤血管生成信號轉導路徑的上遊及腫瘤細胞 信號轉導路徑的上遊。絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶位於腫瘤及腫瘤血管生成細胞的信號轉導 路徑的下遊。研究表明通過在上遊阻滯VEGFR及TOGF受體，在下遊阻滯Raf / MEK / ERK， 能夠同時減少腫瘤的血管生成並抑制腫瘤細胞的複製，從而阻礙腫瘤的生長。
[0003] Raf激酶是由原癌基因 raf編碼的蛋白產物，由648個胺基酸組成，分子量為70 000?74 000 D，其結構中含有3個保守區，分別為CR1(61?194D)、CR2(254?269D)、 CR3 (335?627D)。CR1位於其分子氨基端，富含半胱氨酸，含有鋅指樣結構，與蛋白激酶C 的配體結合區結構相似，是活化的Ras與Raf-Ι蛋白激酶結合的主要部位。CR2亦靠近氨基 端，富含絲氨酸和蘇氨酸。CR3位於其分子的羧基端，是蛋白激酶的催化功能區。作為Ras / Raf / MEK / ERK通路中的一個關鍵激酶，Raf可通過依賴或不依賴Ras的方式發揮其信號 傳導調節作用。作為Raf激酶的下遊底物，激活的MEK磷酸化ERK，調節各種細胞功能。一 旦該通路發生過度激活，則引起細胞增殖加速與細胞生存期延長，從而導致腫瘤的生成。
[0004] 研究表明，80%以上的癌基因和原癌基因存在於人的癌編碼蛋白酪氨酸激酶 (PTK)中，人類各種癌症的產生和發展是和來自於蛋白酪氨酸激酶的異常細胞信號傳導有 關的，惡性細胞的一個主要特點是酪氨酸激酶活性的增加。因此，抑制酪氨酸激酶的活化或 阻斷其信號傳導路徑成為控制腫瘤的新途徑。
[0005] 內皮生長因子受體（EGFR)是一種蛋白酪氨酸激酶受體（RTK)，位於第7號染色 體pl3?q22區，全長200 kb,由28個外顯子組成，編碼1 186個胺基酸，其糖蛋白分子 量約170 kDa，廣泛分布於除成熟骨骼肌細胞、體壁內胚層和造血組織以外的所有組織細 胞。EGFR 家族有 4 個結構相似的受體分子：ErbBl(EGFR)、ErbB2(HER2)、ErbB3(HER3)、 ErbtM(HER4)，同屬於受體酪氨酸激酶（RTKS)。它們都含有1個胞外配體結合結構域，1個 跨膜結構域和1個具有酪氨酸激酶活性的胞漿結構域。其胞內區域與erbB癌基因產物高 度同源。EGFR的活化可以通過配體誘導的受體二聚化作用實現。ErbB受體家族中，除了 HER2外，其他成員都有其相應配體，各種各樣的配體是由對應的跨膜蛋白前體經過蛋白水 解而來的，都有1個EGF樣結構域。與EGFR特異性結合的配體包括表皮生長因子（EGF)、 轉化生長因子a (TGFa)、雙向調節蛋白（AR)、i3-細胞素（BTC)、肝素結合EGF樣生長因子 (ΗΒ-EGF)、表皮調節素（EPR)等。胞外配體EGF(內皮生長因子）與ErbB2特異性結合後引 起ErbB2構型改變，導致受體二聚化從而活化它們的胞漿位點。ErbB2的胞內區域酪氨酸 磷酸化後進而活化第二信使轉導，通過MAPK(絲裂原蛋白激酶）途徑誘導細胞外信號的活 化（調節激酶Erkl和Er 1):通過TOK (磷脂醯肌醇激酶）途徑活化信號轉導子JAK ;進一步 啟動STATUSTATS3的轉錄活化子；另一方面，細胞內信號通過Grb2(生長因子受體結合蛋 白）活化下遊的ERK (細胞外調節蛋白激酶），進而介導ATF，NF-kB，Ap-1，C-f〇s和C-Jun的 轉錄活化。這些都是EGFR所介導的生長作用或致癌的基本下遊途徑。異常的EGFR活化機 制包括受體本身的擴增、受體配體的過表達、活化突變以及負性調節途徑的缺乏，因此EGFR 誘導癌症至少通過3種機制：EGFR配體的過表達，EGFR的擴增或EGFR的突變活化。在這3 種機制中，EGFR的突變活化是導致腫瘤細胞異常生物學行為的最主要因素。EGFR基因的某 些突變會導致受體效果增強和持續時間的延長。Lynch等證明變異受體並不影響受體蛋白 質的穩定性，通過Tyrl068磷酸化測定EGFR活化發現，野生型受體的活化15 min即下調， 而變異受體表現出比正常EGFR高2倍的效應，且超過3 h的持續活化。
[0006] EGFR突變並沒有影響腫瘤細胞與TKI (酪氨酸激酶抑制劑）結合的能力。TKI對那些因突 變而導致EGFR活化的原因可以通過oncogeneaddiction模型來解釋。通過Ras. Raf-MEK. ERK1/ ERK2、PI3K. Akt、STAT3/STAT5通路，EGFR突變高度激活下遊信號，啟動EGFR調節抗凋亡和 生存信號，導致癌症細胞變得依賴此信號以維持其生存一即具有癌基因（突變的EG依賴 的特徵；當使用特異性TKI阻斷EGFR信號後，將消除其增殖性影響和輸出生存信號，導致腫 瘤細胞死亡。因此認為，癌症細胞中信號轉導通路的變異是出現藥物高敏感的基礎。相反， 正常細胞或非EGFR依賴的腫瘤細胞（對Gefitinib、Erlotinib無反應）不受影響。因為 生存還受其他基因驅使，或者在EGFR抑制後能被其他的RTK所彌補。在癌基因依賴模型中， 細胞癌症依賴的癌基因可以同時產生凋亡和生存2個信號的輸出。一般隋況下，癌基因被 激活。生存信號佔主導地位，而凋亡信號處於相對低水平，使癌症細胞維持生長和增殖。當 癌基因急性失活後，在關鍵的窗口期，首先是生存迅速大幅度減弱。而凋亡信號緩慢下降。 因此導致信號不平衡（凋亡信號佔主導），啟動細胞發生不可逆的凋亡。研究發現用酪氨酸 激酶抑制劑吉非替尼（gefitinib) /厄洛替尼（Erlotinib)治療NSCLC患者，大約10%患 者表現出迅速而滿意的臨床效果，進一步研究發現這些患者絕大部分存在EGFR基因突變。 在目前已知與EGFR - TKI (內皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑）有關的基因突變局限於 如下幾種：G719X (18外顯子），E746-A450缺失（19外顯子），L858R (21外顯子），L861Q (21 外顯子），T790M(20外顯子）和D770-N771 (20外顯子）。其中E746-A450缺失和L858R的 突變與TKI的療效高度相關。Mitsudomi T，Yatabe Y對568例非小細胞肺癌患者的分析結 果：在所有非小細胞肺癌患者中大約90%的EGFR基因突變集中於19或21外顯子中，其中 19外顯子的缺失突變及21外顯子中的點突變的患者服用EGFR-TKI的有效率均達到70% 以上。近來的研究提示，EGFR外顯子20的插人性突變（D770-N771)可以使受體對EGFR- TKI的敏感性降低100倍，臨床上也發現具有此突變的患者對EGFR - TKI治療反應不明顯。 對外顯子20的擴增產物進行亞克隆分析發現，T790M突變是一個鹼基對發生從胞嘧啶核 苷（C)到胸腺嘧啶核苷⑴的改變，在蛋白水平就是EGFR酪氨酸激酶功能域790位點的蘇 氨酸被蛋氨酸取代（T790M)，這種突變可使EGFR重新處於被激活狀態，從而導致TKI的獲得 性耐藥，耐藥的原因是突變導致EGFR結構發生變化，使TKI與其結合出現位阻效應。
[0007] 有研究提示KRAS突變可能是Gefitinib、Erlotinib原發耐藥的原因 。Helena linardou的Meta分析中總結了 1 008例NSCLC患者的TKI治療效果，在發生K-ras突變的 165名患者中，94%的患者對TKI治療無明顯反應。一般來講，KRAS和EGFR突變NSCLC是 相互排斥的.在不同的腫瘤亞型中存在明顯差異：EGFR突變主要見於不吸菸者，而KRAS突 變更常見於吸菸相關的癌症。因為KRAS突變總是發生於具有野生型EGFR的NSCLC中，所 以難以區分對EGFR-TKI不敏感到底是因為KRAS突變，還是因為無 EGFR突變。
[0008] 血管內皮生長因子受體（vascular endothelial growth factor receptor， VEGFR)家族包含有3種亞型，即：VEGFR-1 (同時也可以寫作Flt-l)、VEGFR-2 (KDR/ Flk-1)和VEGFR-3(Flt - 4)，此外，還有神經菌毛蛋白（neuropilin)l和2兩個協同 受體。其中VEGFR-1主要分布在血管內皮細胞、造血幹細胞、巨噬細胞和單核細胞，可與 VEGF-A、VEGF-B和P1GF結合，主要與造血幹細胞的生長調節有關。VEGFR-2主要分布在血 管內皮細胞和淋巴內皮細胞中，可以與VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E結合。VEGF刺激 內皮細胞增殖、增加血管通透性和新血管生成的作用主要通過結合和激活VEGFR-2來實現 .與VEGFR-2相比，VEGFR-1與VEGF的親和力高10倍，但調節內皮細胞的活性低很多，可能 是對VEGFR-2活性具有負向調節作用。VEGFR-3主要表達在淋巴管內皮細胞，能與VEGF-C 和VEGF-D結合，調控淋巴內皮細胞的生長。
[0009] 研究表明：當腫瘤直徑大於2mm時，需要有新生血管來提供營養物質和排洩代謝 廢物。VEGF / VEGFR信號通路在腫瘤血管的生成中起關鍵性作用，可以通過阻斷或幹擾 VEGF / VEGFR信號通路抑制血管的新生，以達到控制腫瘤的生長的療效。與傳統的細胞毒 性藥物相比，以VEGF / VEGFR-2為靶標的抗腫瘤藥物有很大的優勢.在正常生理條件下， 血管新生只在創傷癒合和月經周期等生理活動中起作用，所以使用抗血管生成藥物治療腫 瘤，對人體毒性作用小，血管內皮細胞與血液直接接觸，使藥物更加容易到達作用位點.通 過目前對VEGF / VEGFR信號通路作用機制的了解，可以得到以下幾種可能的抑制劑研究 方向：a.利用單克隆抗體抑制VEGF或VEGFR，使其不能特異性結合，阻斷信號傳導。當然 也可以利用基因技術抑制它們的表達，減弱其活性。b.設計特定的小分子抑制劑，結合到 VEGFR胞外VEGF結合區域，競爭性拮抗VEGF，同理，也可以是結合到VEGF上VEGFR的特定 結合域，競爭性拮抗VEGFR。c.抑制VEGFR的胞內激酶域，主要是ATP的結合位點，競爭性 地拮抗ATP，使其無法提供磷酸基。d.抑制胞內的VEGFR下遊信號的關鍵性蛋白.考慮到 患者的依從性，能口服的小分子抑制劑可能具有良好的前景。
[0010] 血小板衍生生長因子（platelet, derived growth factor，FOGF)是誘導和促進血 管形成作用最強、最專一的血管生長因子之一。roGF主要通過與roGF受體（PDGFR)結合， 進而激活蛋白激酶信號轉導通路而發揮作用。TOGFR由α和β兩種亞基構成，共有3種 二聚體（PDGFR-α α、α β、β β )，其中β β二聚體受體（PDGFR-β )最為重要，其分子量 約為 180 ?190 ku，屬於酪氨酸激酶受體（receptor tyrosine kinase，RTK)家族。FOGFR 在腫瘤形成和發展過程中也起著重要的作用。PDGFR- β的過度表達或過度活化均能刺激腫 瘤內血管生成，促進腫瘤生長。PDGFR-β是腫瘤血管內皮細胞的分子標誌之一，在腫瘤新生 血管內皮細胞中高表達，並與某些腫瘤的生長、轉移及預後密切相關。所以TOGFR-β是一 個較為理想的腫瘤靶向治療靶標。肝細胞生長因子（HGF)受體（C-MET，或HGFR)酪氨酸激 酶在許多人類癌症中參與腫瘤生成。
[0011] Raf激酶及其介導的Raf / MEK / ERK通路在腫瘤進展及轉移過程中具有顯著作 用，且與諸多生長因子包括表皮生長因子（EGF)、血管內皮生長因子（VEGF)及血小板生長 因子（PDGF)等密切相關。人們想了多種辦法來調節這一條通路，其中包括抑制Ras蛋白的 法尼基化、抑制Rat〃-1激酶（也稱C-RAF激酶）的表達、抑制Raf激酶和MEK激酶的活性。 上述的方法不僅抑制了 ERK的信號轉導而且成功抑制了異種移植腫瘤的生長。此外，現有 證據顯示，大部分腫瘤並非由單一信號傳導通路所支配，針對多靶點進行抑制可能取得更 大療效。
[0012] 許多疾病是和蛋白激酶介導事件引發的不正常的細胞反應相關聯的。這些疾病包 括，但不限於，腫瘤，炎症疾病，免疫疾病，骨疾病，代謝疾病，神經疾病，心腦血管疾病，激素 相關的疾病等。因此發現和尋找蛋白激酶抑制劑作為治療藥物是非常必要的。雖然許多發 明對本領域作出了很大貢獻，但為改進藥物治療效果，本領域仍在繼續研究。
[0013]
【發明內容】
[0014] 本發明的目的在於提供通式I所示的3- (2, 6-二氯-3-氟苄氧基）-5- (1-(哌 啶-4-基MH-吡唑-4-基)吡啶-2-胺，其可藥用鹽，其溶劑化物，其前藥，其多晶或共晶。
[0015] 本發明的另一目的在於提供通式I所示的3-(2,6-二氯-3-氟苄氧基)-5-(1-(哌 啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）吡啶-2-胺的製備方法。
[0016] 本發明的再一目的在於提供一種含有通式I所不的3- (2, 6-二氯-3-氟節氧 基）-5- (1-(哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）批啶-2-胺的藥物組合物。
[0017] 本發明的又一目的在於提供該類化合物在抗癌，及與蛋白激酶相關疾病的藥物中 的用途。
[0018] 為了完成本發明之目的，可採用如下技術方案： 本發明是涉及具有式I所示的結構：
【權利要求】
1. 式I所示的3- (2, 6-二氯-3-氟苄氧基)-5- (I-(哌啶-4-基)-1Η-吡唑-4-基） 吡啶-2-胺，其可藥用鹽，其水合物和溶劑化物。
2. 製備權利要求1的所述化合物的方法，包括如下步驟： 路線1
3. 根據權利要求2路線1的製備方法，其特徵在於，步驟（a)中以苄醇1為原料，通過 DEAD在有機磷化合物催化下與酚化合物2間脫水形成醚化合物3。步驟（b)中可通過常用 硝基還原劑如鐵粉或鋅粉將化合物3還原為化合物4。步驟（c)中化合物4通過與溴化劑 如NBS反應生成溴化物5。步驟（d)中溴化物5與硼化合物6通過鈀催化劑催化發生偶聯 生成化合物7。步驟（e)中化合物7通過酸解去除保護基得到目標化合物I。
4. 根據權利要求2路線2的製備方法，其特徵在於，步驟（a)中以胺化合物5為原料， 通過與酸性條件下能夠水解掉的保護劑如二叔丁氧基甲酸酐反應得到氨基保護的化合物 8。步驟（b)中，化合物8,在鈀催化劑存在下與二(頻哪醇基）硼9反應生成硼酯化合物 10。步驟（c)中化合物10在酸性條件下水解脫出叔丁氧甲醯保護基得到化合物11。步驟 (d)中溴化物12與硼化合物11通過鈀催化劑催化發生偶聯生成化合物6,可進一步通過酸 解去除保護基得到目標化合物I。
5. -種藥物的組合物，其特徵在於，含有權利要求1的化合物和製劑學可接受的載體。
6. 權利要求1的化合物在製備預防和治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物中的應用。
7. 權利要求1的化合物在製備預防和治療與酪氨酸激酶有關的疾病的藥物中的應用。
8. 根據權利要求7的應用，其特徵在於，所述的與酪氨酸激酶有關的疾病是腫瘤。
9. 根據權利要求8的應用，其特徵在於，所述的腫瘤疾病是肝癌，腎癌，肺癌、胰腺癌、 胃癌、結直腸癌、膀胱癌、乳腺癌，卵巢癌，扁平細胞癌，神經膠質瘤，頭頸部癌。
【文檔編號】A61P35/00GK104230890SQ201310243728
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年6月19日 優先權日:2013年6月19日
【發明者】不公告發明人 申請人:信諾凱（北京）化工有限公司