一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌製劑及其製備方法
2023-07-09 21:41:06 1
專利名稱：：一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌製劑及其製備方法
技術領域：
：一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌製劑及其製備方法，本發明涉及食品安全和酶製劑
技術領域：
。還涉及替代詞料中抗生素，動植物產品的保藏領域，具體說是一種具有廣譜高效殺菌作用酶的組合。
背景技術：
：抗生素是一類應用最廣泛的抗菌藥物，不僅用於臨床，也用於畜禽詞養和農業方面。在過去的50多年中，由於抗生素長期使用導致大量耐藥菌株的產生，且病原菌抗藥性逐年增強，致使療效下降，劑量提高。因此，世界衛生組織於1994年就細菌耐藥性的監測結果給全世界提出了警示細菌對抗生素產生的耐藥性正在以驚人的速度增加，而現有的抗生素藥物正在失去原來的療效。因此尋求廣譜、高效的新一代抗菌藥物己成為迫在眉睫的擺在人類面前的課題。酶廣泛存在於生物體內，參與新陳代謝等多種生理功能，其中對微生物細胞壁具有水解功能的酶類能夠溶解微生物細胞壁而使微生物死亡。由於水解酶的特異性很強，微生物的細胞壁結構和化學組成又存在差異，因此一種酶只能對某一類微生物有水解作用。即使對於某一特定微生物，由於細胞壁化學組成的複雜性，也需要不同類型水解酶的組合，才能有更好的作用效果。水解酶的殺菌作用與傳統的抗生素藥物相比，具有對某一病原菌所有血清型都有效的優點，當幾種酶複合後，對不同類型的病原菌均有效，克服了一種抗生素只能預防一種或其中一種血清型病原菌的不足，更不存在藥物殘留和耐藥性的問題。溶菌酶在醫藥和食品中已開始使用，作為畜禽飼料添加劑則剛剛起步，僅前蘇聯、法國、德國和美國做了一些初步研究，目前，國內也開始進行相關研究。而複合殺菌酶藥物的研究國內外均剛剛起步。
發明內容本發明的目的是提供一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌製劑及其製備方法，是一種光譜高效、無殘留，無汙染、適用範圍廣的殺菌製劑。本發明的技術方案一種酶組合殺菌製劑，以製劑中酶活含量計，按溶菌酶4001000U/g、卩-l，3-葡聚糖酶2000080000U/g、卩-甘露聚糖酶5000~10000U/g和中性蛋白酶80000~140000U/g的配比配製為組合酶，採用海藻糖30%~50%、黃原膠20%~40%、羧甲基纖維素鈉15%~30%和茁黴多糖5°/。~10%的配比配製為包被劑，將組合酶進行包被得酶組合殺菌製劑。所述酶組合殺菌製劑的製備方法1)組合酶的配製根據所用酶的酶活含量換算成質量，按組合酶的配比稱取相應質量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，然後混合均勻為組合酶；2)酶的包被保護按包被劑配比稱取海藻糖、黃原膠、羧甲基纖維素鈉和茁黴多糖，混合均勻為包被劑，用包被劑重量8-10倍量的30-5(TC的水浸泡3-5小時，加入工序l)所得組合酶，用膠體磨研磨兩遍，採用白炭黑吸附製備成粉末顆粒，或採用噴霧乾燥製備成微膠囊。酶組合殺菌製劑的應用，用於飼料中組合酶以粉末形式添加到飼料中直接使用，添加量酶組合殺菌製劑/全價飼料為40-50g/噸；或用於食品保藏將組合酶用適量水溶解後，再用快速濾紙過濾，取濾液使用，酶組合殺菌製劑溶液濃度為0.03%-0.05%。本發明的有益效果1、殺菌譜廣能夠殺滅革蘭氏陽性菌和陰性菌，特別是致病菌，如對沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有很好的殺菌效果，且對真菌也有殺菌作用。2、殺菌能力強幾種酶的組合殺菌製劑，不但具有殺菌譜廣的特點，而且具有殺菌能力強的優勢，不同酶組合可以增強殺菌效果，比單一使用溶菌酶殺菌能力增加IO倍以上。3、無耐藥性和殘留酶的殺菌機理是裂解細菌的細胞壁，細菌不會產生耐藥性，不會殘留在組織器官中，同時酶是蛋白質，在食品烹調過程中變性失活，有利於保障食品安全，改善人類健康。4、抗逆性強包被成微膠囊的酶組合殺菌劑能夠有效耐受加工過程中的高溫、強氧化劑和低酸，保持高的殺菌活力，可以滿足不同條件下使用的需要。5、實用範圍廣可以替代飼料中的抗生素，作為獸藥用於動物疾病的治療；也可用於食品工業，用於動植物產品的保藏，延長貨架壽命，改善食品品質；在醫療上可以作為消毒劑使用。具體實施例方式下面結合實施例詳述本發明。實施例1酶組合殺菌製劑的配製以製劑中酶活含量計，將溶菌酶400~1000U/g、p-l，3-葡聚糖酶20000~80000U/g、卩-甘露聚糖酶500010000U/g和中性蛋白酶80000-140000U/g組合。採用海藻糖30%50%、黃原膠20%40%、羧甲基纖維素鈉15%~30%和茁黴多糖5%10%的包被劑，將組合酶製備成微膠囊或粉末酶組合殺菌製劑。其製備方法為1)組合酶的配製根據酶的酶活含量，將酶活換算成所需的質量，稱取相應質量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，混合均勻。2)酶活力保護採用海藻糖30%~50%、黃原膠20%~40%、羧甲基纖維素鈉15%~30°/。和茁黴多糖5%10%的包被劑配方，用適量溫水(8-10倍量、30-50°C)溶解浸泡包被劑3-5小時，將組合酶和包被劑按配比混合，用膠體磨研磨兩遍，採用白炭黑吸附製備成粉末顆粒，或採用噴霧乾燥製備成微膠囊。如用於飼料中可直接使用，如用於食品保藏需要將該製劑溶於適量水中，用快速濾紙過濾，取濾液使用，酶組合殺菌製劑溶液濃度為0.03%-0.05%。實施例2沙門氏菌培養5h後，在1號試管加最佳濃度的溶菌酶液0.5mL，2號試管加酶組合殺菌劑液0.5mL(巳將固體殺菌劑配成溶液，其中各酶的酶活在權利要求l所述的範圍內，下同)，3號試管加入磷酸緩衝液0.5mL，每號管做三個重複。再置於水浴中恆溫振蕩培養10分鐘後取出。I號試管稀釋IOOO倍，2號試管稀釋100倍，3號試管稀釋100000倍，各取lmL於無菌培養皿中，倒入營養瓊脂培養基約15mL，冷卻後翻轉置於37'C恆溫培養箱中培養48小時後取出計數。結果見表l。表l沙門氏菌平板計數結果tableseeoriginaldocumentpage5由表1結果可知，酶組合殺菌劑殺菌效果最強，沙門氏菌數目比對照組減少了10000倍，即使與正對照的最佳的溶菌酶組相比，也減少了10倍，這充分證實了酶組合殺菌劑具有更強的殺菌效果。實施例3金黃色葡萄球菌培養5h後，在1號試管加最佳濃度的溶菌酶液0.5mL，2號試管加酶組合殺菌劑液0.5mL，3號試管加入磷酸緩衝液0.5mL，每號管做三個重複。再置於水浴中恆溫振蕩培養10分鐘後取出。I號試管稀釋IOOO倍，2號試管稀釋100倍，3號試管稀釋100000倍，各取lmL於無菌培養皿中，倒入營養瓊脂培養基約15mL，冷卻後翻轉置於37'C恆溫培養箱中培養36小時後取出計數。結果見表2。表2金黃色葡萄球菌平板計數結果tableseeoriginaldocumentpage5由表2結果可知，酶組合殺菌劑殺菌效果最強，金黃色葡萄球菌數目比對照組減少了約100000倍，即使與正對照的最佳的溶菌酶組相比，減少了約IOO倍，這充分證實了酶組合殺菌劑具有更強的殺菌效果。實施例4大腸桿菌(JM109)培養5h後，在1號試管加最佳濃度的溶菌酶液0.5mL，2號試管加酶組合殺菌劑液0.5mL，3號試管加入磷酸緩衝液0.5mL，每號管做三個重複。再置於水浴中恆溫振蕩培養10分鐘後取出。I號試管稀釋IOOO倍，2號試管稀釋100倍，3號試管稀釋100000倍，各取lmL於無菌培養皿中，倒入營養瓊脂培養基約15mL，冷卻後翻轉置於37'C恆溫培養箱中培養36小時後取出計數。結果見表3。表3大腸桿菌平板計數結果tableseeoriginaldocumentpage6由表3結果可知，酶組合殺菌劑殺菌效果最強，大腸桿菌數目比對照組減少了約100000倍，即使與正對照的最佳的溶菌酶組相比，減少了約100倍，這充分證實了酶組合殺菌劑具有更強的殺菌效果。實施例5試驗在江蘇省某家禽試驗場進行，試驗從l日齡開始至49日齡結束，日期為2006年6月25日至2006年8月14日，地面平養、鋸末墊料。對照組添加藥物(包括球蟲藥和抗生素)；試驗組除添加殺菌酶組合外，不添加任何其它藥物。表4肉雞試驗安排及結果tableseeoriginaldocumentpage6實施例6試驗在福建武坪縣某豬場進行，大斷奶仔豬、試驗從斷奶開始用至斷奶後第三周結束，日期為2006年7月15日至2006年8月5日。表5斷奶仔豬試驗安排及結果tableseeoriginaldocumentpage7注在同一豬場共進行兩次類似的試驗，第一次是去掉詞料中的藥物，保留氧化鋅；第二次是去掉藥物和氧化鋅，均沒有發生拉稀和其它疾病。權利要求1、一種酶組合殺菌製劑，其特徵在於以製劑中酶活含量計，按溶菌酶400～1000U/g、β-1，3-葡聚糖酶20000～80000U/g、β-甘露聚糖酶5000～10000U/g和中性蛋白酶80000～140000U/g的配比配製為組合酶，採用海藻糖30％～50％、黃原膠20％～40％、羧甲基纖維素鈉15％～30％和茁黴多糖5％～10％的配比配製為包被劑，將組合酶進行包被得酶組合殺菌製劑。2、一種權利要求1所述酶組合殺菌製劑的製備方法，其特徵在於1)組合酶的配製根據所用酶的酶活含量換算成質量，按組合酶的配比稱取相應質量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，然後混合均勻為組合酶；2)酶的包被保護按包被劑配比稱取海藻糖、黃原膠、羧甲基纖維素鈉和茁黴多糖，混合均勻為包被劑，用包被劑重量8-10倍量的30-5(TC的水浸泡3-5小時，加入工序l)所得組合酶，用膠體磨研磨兩遍，採用白炭黑吸附製備成粉末顆粒，或採用噴霧乾燥製備成微膠囊。3、權利要求l的酶組合殺菌製劑的應用，其特徵是用於飼料中組合酶以粉末形式添加到飼料中直接使用，添加量酶組合殺菌製劑/全價飼料為40-50g/噸；或用於食品保藏將組合酶用水溶解後，再用快速濾紙過濾，取濾液使用，酶組合殺菌製劑溶液濃度為0.03%-0.05%。全文摘要一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌製劑及其製備方法，涉及食品安全和酶製劑
技術領域：
。本發明提供了一種酶組合殺菌製劑，其由溶菌酶、β-1，3-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和中性蛋白酶組合，採用海藻糖、黃原膠、羧甲基纖維素鈉和茁黴多糖的包被劑配方，將組合酶進行包被。本發明通過採用多酶組合和包被技術，將上述酶優化組合，同時採用包被技術對酶進行保護，能夠有效殺滅革蘭氏陽性和陰性菌，殺菌譜廣，效力強，可以有效殺滅沙門氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等病原菌，能夠完全替代豬、禽飼料中抗生素，用於動植物產品的保藏。包被保護提高了酶對溫度、氧化劑和酸的耐受性，提高了酶在不利因素下的殺菌效果，拓展了酶殺菌劑的使用領域。文檔編號A23K1/17GK101199319SQ20071013541公開日2008年6月18日申請日期2007年11月8日優先權日2007年11月8日發明者樂國偉,卉代,鋒史,李永富申請人:江南大學