溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布的製作方法

2023-08-09 12:27:16

專利名稱：溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫用生物敷料，具體涉及一種溶葡萄球菌複合酶(高科複合溶菌酶漱口水)殺菌紗布，目前，在臨床上使用的敷料，如醫用紗布，一般有以下幾種①普通型無菌紗布，常用作為包紮材料；②抗粘型紗布，由於經過特殊處理，可防止傷口粘連，但無殺菌作用；③抗菌型紗布，因添加了抗生素，有一定的殺菌作用，但對一些大面積的傷口，殺菌作用差，並因長期使用，易產生抗藥菌株。因此，臨床上尚無有效的殺菌紗布。
本發明的目的在於克服上述足之處，設計一種不易產生耐藥性，具有高效、廣譜殺菌作用的紗布。
本發明提供了一種溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布(溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布)，該紗布是由溶葡萄球菌複合酶及藥用輔料與紗布組成的，其中溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布原液為溶葡萄球菌酶(lysostaphin)0.008～0.01％和溶菌酶(lysozyme)10～20％；輔料為磷酸鉀7～15％、氯化鈉0.5～1％、抑菌肽2～3％和蒸餾水60～80％。
由於溶葡萄球菌複合酶中的一種成分溶葡萄球菌酶是一種革蘭氏陽性菌的溶菌素。組成該類革蘭氏陽性菌(例如金黃色葡萄球菌)細胞壁肽聚糖的四肽側鏈的胺基酸，依次為L-丙氨酸，D-穀氨酸，L-賴氨酸，D-丙氨酸；而首位的L-丙氨酸通過一個醯胺鍵與胞壁酸相連，該聚糖鏈四肽側鏈第3位的L-賴氨酸，通過五肽(五個甘氨酸)交聯橋聯結到相鄰聚糖鏈四肽側鏈D-丙氨酸羧基上。由此縱橫交叉，左右聯結構成十分堅韌的三維立體多孔結構，並聚合成較厚的肽聚糖層。溶葡萄球菌酶可切斷肽聚糖中的Gly-Gly鍵，而溶葡萄球菌複合酶中另一種生物酶可切斷N-乙醯胞壁酸和N-乙醯葡萄糖胺之間的鍵，從而使殺菌活性更強，達到溶解並殺死細菌的目的，並可避免細菌耐藥性的產生。
由於溶葡萄球菌複合酶獨特的殺菌機理，使其不同於一般抗生素，常用抗生素是抑制細菌生長，而該酶則是裂解細菌殺死細菌。上海市華山醫院抗生素研究所、第二軍醫大學長海醫院檢驗科、上海市第六人民醫院檢驗科、上海市第九人民醫院檢驗科等單位曾將臨床各科收集到的400多株細菌進行了溶葡萄球菌複合酶的抑殺菌實驗。實驗結果表明溶葡萄球菌複合酶對革蘭氏陽性菌，如臨床上常見的金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、D群腸球菌、四聯球菌、產單核李斯特菌、鏈球菌以及胃幽門螺旋桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等均有明顯的抑殺作用。
實驗還證明溶葡萄球菌酶對耐藥性菌株，如目前醫學臨床上最感棘手的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，耐藥性肺炎雙球菌、嗜麥芽窄食單孢菌的效果更優於常用抗生素。
本發明的溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布，經上海市預防醫學研究院檢測毒性、皮膚刺激殺菌試驗及穩定性試驗結果如下一、急性經口毒試驗試驗目的檢測短時間經口染毒時的毒性，其結果可作為毒性分級和確定亞慢性毒性等試驗劑量的依據。(一)材料與方法1、受試樣品性狀白色紗布配製方法將樣品擠出液作為原液，取5g原蒸餾水至20ml，充分混勻後作為受試樣品。
2、實驗動物昆明種小鼠，體重18-22克，由上海醫科大學實驗動物部提供，合格證號02-22-1。
實驗動物飼養室溫度20±2℃，相對溼度40-70％，動物房合格證號02-28，小鼠飼養料，由蘇杭實驗動物科技發展公司提供。
3、劑量和分組將動物分為雌雄各一組，每組10隻，劑量為5g/kg體重。
4、試驗步驟動物禁食16小時後，根據不同體重，用灌胃針一次經口灌服受試樣品，給樣容量按0.2ml/10g體重。觀察給樣後動物的症狀及死亡情況，觀察期為二周。
5、LD50計算方法用最大劑量限量法得出LD50，並確定急性經口毒性分級。(三)試驗結果；給樣後，動物未見中毒症狀和死亡。
受試樣品對小鼠急性經口毒性試驗結果動物性別劑量動物數死亡數死亡率(g/kg)(只) (只) (％)雌 510 0 0動物性別 劑量 動物數死亡數死亡率(g/kg)(只)(只) (％)雄 510 0 0LD50值雌性動物LD50＞5g/kg雄性動物LD50＞5g/kg(四)結論按急性經口毒分級，屬實際無毒級。
二、皮膚刺激試驗目的觀察受試物對動物一次接觸皮膚後可能產生的炎性反應。
1、樣品性狀白色紗布2、受試樣品處理將樣品剪成2.5×2.5cm2小塊作為受試樣品。
3、受試動物紐西蘭種家兔，體重2.0-3.0kg，由上海醫科大學實驗動物部提供，合格證號02-52-1。
4、測試依據消毒技術規範第三版(衛生部1999.11)5、試驗方法試驗前將動物背部兩側毛剪掉，去毛範圍左右各約3×3cm2，選左側完好皮膚劃出2.5×2.5cm2試驗區，右側皮膚作對照。將受試樣品貼敷在試驗區皮膚上，用一層油紙，膠布固定，貼敷4小時後，除去覆蓋物，用溫水清洗除去殘留物，並於除去受試樣品後1、24、48小時分別觀察皮膚反應按消毒技術規範第三版(衛生部1999.11)皮膚反應積分和刺激強度評價。
6、試驗結果受試樣品對家兔皮膚刺激反應積分表
7、結論試驗結果表明受試物一次接觸動物皮膚未引起皮膚刺激反應，積分均值為0，按皮膚刺激強度評價屬無刺激性。
三、1、殺菌試驗(1)對大腸桿菌(8099)的殺滅率不同作用時間(min)殺滅率％25 10 2099.9899.98100100注對照菌數為1.7×104cfu/片。(2)對金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)的殺滅率不同作用時間(min)殺滅率％25 10 2099.4799.96100 100注對照菌數為2.1×104cfu/片。(3)對白色念珠菌(ATCC 10231)的殺滅率不同作用時間(min)殺滅率％2 510 2099.20 99.92 100 100注對照菌數為2.0×104cfu/片。
2、穩定性試驗樣品經54℃水浴二周後，再次檢測其對大腸桿菌的殺滅情況不同作用時間(min)殺滅率％2 5 10 2099.94 99.42 100100注對照菌數為2.6×104cfu/片。中和劑試驗中和劑3％吐溫-80+0.5％卵磷脂菌株大腸桿菌(8099)組別 殘留菌數(cfu/片)樣品染菌+中和劑 5.37×102染菌對照片+中和劑1.60×104樣片+中和劑+染菌對照片 1.41×104染菌對照片+PBS 1.60×104染菌樣片+PBS 0培養基對照 03、無菌試驗檢測指標 結果 標準值需氧菌 未檢出 不得檢出厭氧菌 未檢出 不得檢出黴菌 未檢出 不得檢出4、評價
該樣品經檢測，作用2分鐘對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌均有殺菌作用；樣品經54℃水浴二周後，再次檢測，作用2分鐘對大腸桿菌仍有殺菌作用；無菌試驗檢測結果符合GB15980-1995。
本發明的另一目的是提供了上述溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布的製備方法，該方法是在無菌室中，按處方量將溶葡萄球菌酶(從美國Sigma公司購買)，溶菌酶，磷酸鉀，氯化鈉，按比例依次加入潔淨的玻璃或不鏽鋼盛具中，輕輕攪拌，充分混和均勻後，再加入所示比例的抑菌肽和蒸餾水，充分混勻，即為原液。將無菌紗布置於原液中，浸透，靜置10分鐘，將紗布包裝於無菌塑本發明的溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布為含溶葡萄球菌酶和另一種溶菌酶、增效劑、穩定劑輔酶複方新型殺菌紗布，作用物體表面2-10分鐘可迅速殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌等，殺滅率達99.9％。廣泛適用於燒傷及灼傷皮膚創口的敷貼和手術中的腹腔及腸道黏膜消毒等，具有對創口和黏膜無任何刺激，殺菌效果好使用方便等特點，有很高的臨床使用價值。
溶葡球菌複合酶殺菌紗布在使用過程中，由於其作用成分為酶製劑，是一類蛋白質，不會對皮膚產生任何刺激，溶葡球菌酶有一定的組織修復作用，可促進傷口的癒合。因其作用機理是直接溶解細菌細胞壁而致細菌死亡，不易產生耐藥性菌株。又因該酶的殺菌活性高，又有促進組織黏膜生長的作用可減輕病人的痛苦。
實例1、每製造1片溶葡球菌複合酶殺菌紗布的配製方法(每片殺菌紗布需原液10克)。分別將溶葡萄球菌酶0.0008克，溶菌酶2克，磷酸鉀1.4克，氯化鈉0.1克，混勻再加入抑菌肽0.2克和蒸餾水6.3ml，混合均勻，放入一片無菌紗布靜置10分鐘，包裝封口。
實例2、分別將溶葡萄球菌酶0.00085克，溶菌酶1.5克，磷酸鉀6.3克，氯化鈉0.1克，混勻再加入抑菌肽0.2克和蒸餾水6.9ml，混合均勻，放入一片無菌紗布靜置10分鐘，包裝封口。
實例3、分別將溶葡萄球菌酶0.0009克，溶菌酶1.5克，磷酸鉀1.3克，氯化鈉0.1克，混勻再加入抑菌肽0.2克和蒸餾水6.9ml，混合均勻，放入一片無菌紗布靜置10分鐘，包裝封口。
權利要求
1.一種溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布，其特徵在於該紗布是由溶葡球菌複合酶及藥用輔料與紗布組成的，其中溶葡球菌複合酶為溶葡萄球菌酶0.008～0.01％和溶菌酶10～20％；輔料為磷酸鉀7～15％、氯化鈉0.5～1％、抑菌肽2～3％和蒸餾水60～80％。
2.一種如權利要求1所述的溶葡球菌複合酶殺菌紗布的製備方法，其特徵在於該方法是在無菌室中，按處方量將溶葡萄球菌酶，溶菌酶，磷酸鉀，氯化鈉，按比例依次加入潔淨的玻璃或不鏽鋼盛具中，輕輕攪拌，充分混和均勻後，再加入所示比例的抑菌肽bacitracin和蒸餾水，充分混勻，即為原液，將無菌紗布置於原液中，浸透，靜置10分鐘，將紗布包裝於無菌塑膠袋中，封口。
全文摘要
本發明提供了一種溶葡萄球菌複合酶殺菌紗布。該紗布為含溶葡萄球菌酶和另一種溶菌酶的複方新型殺菌紗布,作用物體表面2～10分鐘可迅速殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌等,殺滅率達99.9%,並且對創口和黏膜無任何刺激,有很高的臨床使用價值。
文檔編號A61L15/16GK1360949SQ0013720
公開日2002年7月31日 申請日期2000年12月28日 優先權日2000年12月28日
發明者陸婉英 申請人:上海高科生物工程有限公司