一種輔助選育玉米自交系的方法及其應用的製作方法
2023-07-26 16:13:56 3
專利名稱：一種輔助選育玉米自交系的方法及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種輔助選育玉米自交系的方法及其應用。
背景技術：
玉米(Zea mays)是當今世界栽培面積最為廣泛的農作物之一，玉米具有產量高、增產潛力大、適應性強、營養豐富等特點。除直接用作飼料和糧食以外，玉米還是醫藥、食品、造紙、化工、釀造等許多行業必不可少的原料，在國民經濟中發揮重要作用。玉米作為天然異花授粉作物，其遺傳基礎的雜合性，以及由此產生的使用自交系間F1代的雜種優勢利用的育種程序，形成了玉米育種的特殊性。
玉米自交系是從玉米品種群體或者各類雜交種經過連續多代自交和選擇分離出的基因型純合、性狀整齊一致的自交後代。自交系不是直接用於生產，而是利用其作為親本配製強優勢雜交種在生產上使用。因此玉米自交系選育是玉米育種的重要基礎工作。
現有玉米自交系選育方法，通常採用傳統的育種程序育種者依據工作經驗，在育種材料表型性狀觀察的基礎上進行選擇。用以選育自交系的基礎材料在自交過程中，隨著基因的分離與重組，表現型會出現大量的分離，在自然鑑定或人工選擇的壓力下，有利基因就會隨著選擇逐漸被積累，一般經過6～8個世代選擇，後代植株的外觀性狀表現就基本一致，結合配合力測定結果，選擇綜合性狀優良的穗行自交留種，完成自交系的選育。
傳統玉米自交系選育是依據工作經驗，在育種材料表型性狀觀察的基礎上進行選擇。這種表型性狀除少部分屬於單基因決定的質量性狀之外，大多數性狀通常為複雜的多基因相互作用且受環境影響所致。這就局限了性狀的選擇。並且傳統方法對基礎材料的選擇至少需要6～8個自交世代，因而育種周期比較冗長，需要耗費較多的人力、財力等資源。且受育種者主觀因素與客觀環境的影響較大。
SSR分子標記以其獨特的優點，可以在植物不同的發育階段、不同的環境條件下、不同的組織中都進行檢測，使得對基因型的早期選擇成為可能。所建立的遺傳標記不僅數量大，而且在後代中表現為顯性或共顯性遺傳。
發明內容
本發明的一個目的是提供一種輔助選育玉米自交系的方法。
本發明所提供的輔助選育玉米自交系的方法，包括以下步驟 (1)篩選對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物至少20個；所述SSR引物序列來自網站www.maizegdb.org. 所述對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物滿足以下條件每對同源染色體(每個連鎖群)上至少2個SSR引物，位於一對同源染色體(位於一個連鎖群)上的每兩個SSR引物位點之間的遺傳距離至少50cM； (2)利用步驟(1)篩選到的對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的的SSR引物中至少6個SSR引物，篩選S1世代群體中在所述至少6個SSR引物位點純合的單株並獲得其自交果穗；每個自交果穗種為單行；所述至少6個SSR引物位於至少6對同源染色體(6個連鎖群)上； (3)利用步驟(1)篩選到的對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物中除去步驟(2)中所用的SSR引物之外的至少14個SSR引物，篩選S2世代群體，得到的在所述至少14個SSR引物位點純合的S2世代群體單株，即為候選玉米自交系。
其中，S0表示玉米自交系選育基礎材料的種子及由它長成的植株，種子用於繁殖後代，植株用於提取DNA進行分析；S1表示由S0植株自交產生的種子及由它長成的植株；S2表示由S1自交產生的種子及由它長成的植株。
所述玉米基礎材料可為單交種、品種間雜交種、品種與自交系間雜交種或綜合雜交種。優選為單交種。
當所述玉米自交系選育基礎材料為單交種，所述單交種的父本和母本已知時，可按照如下方法篩選對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物分別以父本和母本的基因組DNA為模板，利用SSR引物進行PCR擴增，檢測PCR產物的多態性，在父本和母本之間有多態性的PCR產物對應的SSR引物即為對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物。在該種情況下，所述SSR引物位點純合的單株為S1世代群體或S2世代群體中與單交種的父本或母本的該SSR引物擴增產物帶型一致的單株。
當所述玉米自交系選育基礎材料為單交種，所述單交種的父本和母本未知時，可按照如下方法篩選對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物分別以S1世代群體單株的基因組DNA為模板，利用SSR引物進行PCR擴增，檢測PCR產物的多態性，在S1世代群體中能產生三種帶型，記作帶型I、帶型II、帶型III，且產生帶型I、帶型II、帶型III的單株數目符合1∶2∶1的比例的SSR引物即為對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物。在該種情況下，所述SSR引物位點純合的單株為S1世代群體或S2世代群體中與所述S1世代群體中的該SSR引物的帶型I或帶型III一致的單株。
所述玉米自交系選育基礎材料為沈單16時，步驟(1)中篩選到的對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物為umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022和bnlg1655；所述步驟(2)中所用的SSR引物為umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887，步驟(3)中所用的SSR引物為umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022和bnlg165。
為了兼顧工作量和篩選效率，所述S0代群體由20個單株組成；所述S1代群體由4100個單株組成；所述S2代群體由167個單株組成。
本發明的另一個目的是提供一種選育玉米自交系的方法。
本發明所提供的選育玉米自交系的方法，是將上述方法獲得的候選玉米自交繫結合S2世代群體的農藝性狀(如株高、穗位、葉片數、抗性等)和/或配合力和/或產量選育自交系。
本發明利用SSR分子標記技術具有的共顯性特點，從DNA分子水平上檢測選擇材料的位點純合度，篩選自交系育種基礎材料的分離世代，在自交系選育早代發現基因位點純合的材料，較傳統玉米育種中育種者依靠育種經驗在表型性狀水平上推測育種材料的基因型純合情況更為科學、直觀。同時結合農藝性狀(如株高、穗位、葉片數、抗性等)和/或配合力和/或產量鑑定，選擇基因型純合，表現型一致，配合力較高的自交系。實現了基因型和表現型雙重選擇，大大提高了純合體的選擇效率，有效縮短自交系的選育周期，加快育種進展。
本發明利用SSR分子標記，實現了高效、快捷的玉米自交系選育新體系的建立。SSR分子標記輔助選育玉米自交系的方法提高了分離世代純合個體的選擇效率，縮短了育種周期。SSR分子標記技術操作簡單，重複性好，試驗成本低等特點。並且SSR標記引物豐富，目前公布於maizegdb.org網站上有2000多對，並且正在不斷增加、更新中。本發明的方法操作簡單，可以顯著縮短自交系選育時間，育種成本較常規方法在人力、財力等方面有明顯降低，有利於在目前的商業育種中推廣和利用。
圖1為篩選在沈單16的母本和父本間具有多態性的SSR引物擴增電泳圖譜 圖2為利用引物umc1228鑑定沈單16的S1群體中umc1228位點純合的部分單株的擴增電泳圖譜 圖3為引物umc2036篩選到的沈單16的S2世代群體中umc2036位點純合的部分單株的電泳圖譜 圖4為沈單16的S2苗期植株長勢圖 圖5為沈單16的S2穗期植株長勢圖
具體實施例方式 下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規方法。
下述實施例中的百分含量，如無特別說明，均為質量百分含量。
下述實施例中所使用的各種SSR引物購自上海生工；Taq DNA聚合酶、dNTP、剝離矽烷、親和矽烷購自鼎國生物公司。
實施例1、以單交種沈單16為基礎材料選育玉米自交系 一、篩選對沈單16S0代群體具有多態性的SSR引物 (一)提取沈單16的母本和父本的基因組DNA 按照CTAB法分別提取沈單16的母本和父本的基因組DNA，具體方法如下 1、分別取沈單16的母本-自交系K12(國家農作物種質保存中心)和父本-自交系沈137(國家農作物種質保存中心)單株的新鮮葉片1g，放入1.5毫升離心管中，然後放入液氮中預冷。
2、取出液氮中的離心管快速研磨離心管中的葉片，直到磨成粉末狀為止。
3、將裝有葉片粉末的離心管中加入預熱至95℃的CTAB緩衝液(1.17MNaCl，0.016M EDTA PH＝8.0，0.0835M Tris PH＝7.5，2％CTAB，1％β-巰基乙醇)700μl，720ng/μl RNAase迅速混勻。
4、將離心管置於65℃水浴鍋，溫浴30min。
5、取出離心管待冷至25℃後，加入570μl的氯仿∶異戊醇(24∶1)，慢慢搖動離心管30分鐘，至有機相由無色變為綠色變為暗綠色。
6、於室溫下13krpm離心10min，用剪去尖部的槍頭將上清液轉至另一離心管中，如上清液仍為綠色應重複步驟5。
7、加500μl異戊醇，慢慢搖擺，至DNA成絮狀小團漂在液面上，12krpm離心5分鐘。倒出異戊醇，離心管中加入75％的酒精50μl於4度冰箱保存。
提取的DNA經紫外線分光光度計檢測純度和濃度，稀釋配成50ng/μl的DNA，即可以進行PCR擴增，擴增產物經聚丙烯醯胺凝膠電泳分離獲得擴增指紋圖。
(二)SSR引物擴增 本試驗從隨機抽取分布於玉米染色體上的共69個SSR引物中選擇得到在沈單16的母本和父本間具有多態性的20個引物(每對同源染色體分別取2個SSR引物)umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022或bnlg165。所述SSR引物序列來自網站www.maizegdb.org。
具體的實驗方法如下 (1)預先將PCR擴增儀(GeneAmp PCR System 9100)加熱至94℃(熱啟動可保證得到特異的PCR擴增產物)； (2)在PCR管中依次加入以下組分 ddH2O 12.2μl 10×PCR Buffer2.5μl 2.5mM dNTP0.8μl 5.0U Taq DNA聚合酶0.4μl 0.5mol/μl正向引物0.8μl 0.5mol/μl反向引物0.8μl 50ng/μl基因組DNA 2.5μl 總計 20.0μl (3)按照以下程序進行擴增95℃變性5min；再於95℃變性1min，58℃退火1min，72℃延伸2min，34個循環；然後72℃延伸10min；4℃保持。
(三)電泳、染色、顯影 將PCR反應產物加5×loading buffer 5μl進行6％聚丙烯醯胺凝膠電泳，恆定功率為60W，電泳1.5h。根據聚丙稀醯胺凝膠顯影圖譜選擇譜帶清晰，具有多態性的引物作為本試驗的有效多態性引物。結果在69個SSR引物中選擇得到在沈單16的母本和父本間具有多態性的20個SSR引物(每對同源染色體分別取2個SSR引物)umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022或bnlg165。該20個SSR引物即為對沈單16 S0代群體具有多態性的SSR引物。其中，umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887的聚丙稀醯胺凝膠圖譜如圖1所示。圖1中，♀表示沈單16的母本，♂表示沈單16的父本；No.1、No.2、No.3、No.4、No.5、No.6為對於「沈單16」群體具有多態性的引物對umc1228，umc2008，bnlg1523，bnlg1741，bnlg1306，umc1887的電泳結果。
其中，聚丙烯醯胺凝膠電泳板按照如下方法製備 1、用酒精擦洗淨玻璃板。
2、用剝離矽烷擦洗凹槽玻璃板。
3、用親和矽烷擦洗電泳板。
4、夾子裝緊密玻璃板與凹槽板。
5、60ml 6％丙烯醯胺溶液+300μl20％APS+30μlTEME混勻灌膠，插好梳子。
6、靜置2小時即可凝膠。
其中，染色、顯影程序如下 1、固定 電泳玻璃板置於乙醇150ml，冰醋酸10ml，去離子水1400ml的盒子內，均勻搖蕩20min； 2、水洗 玻璃板用去離子水洗兩遍，每遍2min； 3、染色 玻璃板在盛有2g AgNO3與1500ml去離子水中均勻搖蕩15min； 4、迅速漂洗 玻璃板在盛有1500ml的去離子水中迅速漂洗10sec； 5、顯影 玻璃板在盛有20gNaOH、7g甲醛、1500ml去離子水中均勻搖蕩10min； 6、終止顯影 玻璃板置於盛有5gNa2CO3、1500ml去離子水的溶液中均勻振蕩1min。
其中，試驗用溶液按照如下方法製備 1)40％丙烯醯胺儲存液 丙烯醯胺 190g N，N-亞甲基雙丙烯醯胺10g 加水至250ml 將溶液加熱至37℃以上溶解，將溶液體積調至500ml，過濾。室溫下4℃儲存於棕色瓶中。
2)6％丙烯醯胺溶液 40％丙烯醯胺儲存液 150ml 5×TBE 100ml 尿素 420.7g 攪拌溶解後，用超純水配成1000ml，漏鬥過濾，4℃保存。
3)5×loading buffer 98％甲醯胺 49ml 0.5M EDTA(pH＝8.0) 1ml 溴酚蘭 0.125g 二甲基苯青FF 0.125g 4)5×TBE(1000ml) Tris鹼54g 硼酸 27.5g 0.5mol/L EDTA(pH＝8.0)20ml 加水至1000ml 5)20％過硫酸銨(APS) 過硫酸銨2g 加水至10ml 溶解，4℃貯存 6)固定液 95％酒精200ml 冰醋酸 10ml 去離子水1800ml 7)染色液 去離子水2000ml 硝酸銀 4g 8)顯影液 去離子水2000ml 甲醛10ml NaOH30g。
二、S1群體中純合體的篩選 利用步驟一篩選到的對沈單16 S0代群體具有多態性的6個SSR引物，篩選S1世代群體中在該6個SSR引物位點純合的單株並獲得其自交果穗。具體方法如下將沈單16的種子按常規方法播種、田間培育收穫自交果穗。將收穫的20穗自交果穗的種子(S1籽粒)按常規方法播種、田間培育，在S1群體植株6片葉時，剪取1g新鮮葉片，冷凍保存。
2、按照步驟一的CTAB法分別提取4100株單株的葉片DNA，所提取的葉片DNA經紫外線分光光度計檢測純度和濃度，稀釋配成50ng/μl的DNA，4℃冰箱保存。
3、以umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6個SSR多態性引物分別逐個對S1群體中的4100株玉米葉片的基因組DNA進行PCR擴增，依據聚丙烯醯胺凝膠電泳譜帶篩選在該6個SSR引物位點均純合的單株。所述SSR引物位點純合的單株為S1世代群體中與沈單16的父本或母本的該SSR引物擴增產物帶型一致的單株。具體篩選方法如下先用umc1228在4100株單株中進行篩選，得到2104株在umc1228位點純合的單株；然後用umc2008在該在umc1228位點純合的2104株單株中篩選，得到1065株在umc1228和umc2008位點均純合的單株；依此類推，共篩選到在umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6個SSR引物位點均純合的單株68株。圖2為利用引物umc1228鑑定S1群體中umc1228位點純合的部分單株的擴增電泳圖譜，注第2、5、8、12、15、16、17、18、21、23、25、26、27、28、31、34、36、38、39、42、44在引物umc1128位點上表現純合，其他植株在此位點表現雜合；第32、33分別為沈單16的父本、母本。
其中SSR引物擴增、電泳、染色、顯影按照步驟一的方法操作。
將在umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6個SSR引物位點均純合的68株單株對應的S1植株進行控制授粉自交，收穫果穗考種保存。
用以分析鑑定的6個SSR引物分別位於6對同源染色體上(umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887分別在No.1、No.2、No.3、No.4、No.5、No.6染色體上)，因此引物位點間在S1代為隨機分離，不受基因連鎖等的影響。根據孟德爾遺傳規律中互相獨立遺傳的n個雜合基因自交後代純合基因(1/2)n的分離規律，可以得出4100份材料6個雜合位點在自交S1代中，純合個體的理論值為64，本試驗S1代群體中獲得純合體植株68株。實際結果與理論數據誤差不大於5％。
三、S2群體中純合體的篩選 利用步驟一篩選到的沈單16的S0代群體具有多態性的20個SSR引物中的除了步驟二中所用的6個之外的14個SSR引物，篩選S2世代群體，得到的在該14個SSR引物位點純合的S2世代群體單株，即為候選玉米自交系。具體方法如下 1、種植上年收穫的於umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6個SSR引物位點均純合的68個果穗(S2籽粒)，每穗種為單行，共68個穗行，共1156個單株。
2、S2代群體苗期植株長勢圖如圖4所示，表明經過位點純合體篩選得到的S2代群體苗期植株穗行內株型性狀較為整齊。苗期第6片葉時，分別剪取所有S2代個體植株新葉片1g，按照步驟一的CTAB法分別提取CTAB法提取葉片DNA，提取的葉片DNA經紫外線分光光度計檢測純度和濃度，稀釋配成50ng/μl的DNA，4℃冰箱保存。
3、S2代群體植株中，依據田間植株表形鑑定結果，選擇株型性狀(株高、葉片數、穗位)較為整齊的9個穗行，共167個單株，將其植株葉片的基因組DNA以umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022、bnlg165等14個SSR多態性引物分別逐個對S2群體中的167株玉米葉片DNA進行PCR擴增，依據聚丙烯醯胺凝膠電泳譜帶篩選在該14個SSR引物位點均純合的單株。所述SSR引物位點純合的單株為S2世代群體中與沈單16的父本或母本的該SSR引物擴增產物帶型一致的單株。具體方法同步驟二。結果在S2代167單株中共得到20對引物位點完全純合的25個單株，該25個單株分布於6個穗行，將該6個穗行作為候選自交系。其中，umc2036篩選到的S2世代群體中umc2036位點純合的部分單株的電泳圖譜如圖3所示，其中第一泳道為沈單16的父本，其餘泳道為umc2036位點純合的單株。
S2代群體穗期植株長勢圖如圖5所示，表明經過位點純合體篩選得到的S2代群體穗期穗行內植株間全株型性狀較為整齊一致。
S0代群體中，20個獨立遺傳的雜合位點不加任何選擇，隨機分離後代在S2代中純合體的概率僅為0.3％。本試驗利用20對SSR多態性引物在S1、S2兩代群體中鑑定純合個體，結果在S2代167單株中共得到20對引物位點完全純合的25個單株，純合體概率達到14.9％。利用SSR分子標記輔助選擇提高選擇效率達到50倍。說明以SSR分子標記結合田間株型鑑定對純合體選擇的效果很明顯。
四、配合力的鑑定 在S2代群體中，選擇步驟三獲得的20對引物位點完全純合的25個單株對應的6個穗行中株型形狀較為整齊的6個穗行與我國玉米優勢群-瑞得優勢群、蘭卡斯特優勢群、旅大紅骨優勢群、塘四平頭優勢群、P優勢群的鄭58、L6515、丹340、黃早四、丹598(自有自交系)等5個骨幹自交系進行雜交組配，以不完全雙列雜交NC II設計，即以鄭58、L6515、丹340、黃早四、丹598(國家農作物種質保存中心)為父本，分別與所選擇的6個穗行中的一個植株為母本進行雜交。共組配30個雜交組合，每個雜交組合34株，進行配合力鑑定。結果表明6個穗行(分別命名為S2-E，S2-35，S2-I，S2-44，S2-28、S2-k)的一般配合力分別是0.03，-0.03，-0.07，0.13，0.21，-0.15。
根據配合力鑑定結果得到產量一般配合力較高(大於0.10)的兩個穗行S2-44，S2-28，作為自交系，其自交果穗(S3代籽粒)保存用以下一步的玉米育種應用。
權利要求
1、一種輔助選育玉米自交系的方法，包括以下步驟
(1)篩選對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物至少20個；所述SSR引物序列來自網站www.maizegdb.org；
所述對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物滿足以下條件每對同源染色體上至少2個SSR引物，位於一對同源染色體上的每兩個SSR引物位點之間的遺傳距離至少50cM；
(2)利用步驟(1)篩選到的對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的的SSR引物中至少6個SSR引物，篩選S1世代群體中在所述至少6個SSR引物位點純合的單株並獲得其自交果穗；所述至少6個SSR引物位於至少6對同源染色體上；
(3)利用步驟(1)篩選到的對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物中除去步驟(2)中所用的SSR引物之外的至少14個SSR引物，篩選S2世代群體，得到的在所述至少14個SSR引物位點純合的S2世代群體單株，即為候選玉米自交系。
2、根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述玉米自交系選育基礎材料為單交種，所述單交種的父本和母本已知，按照如下方法篩選對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物分別以父本和母本的基因組DNA為模板，利用SSR引物進行PCR擴增，檢測PCR產物的多態性，在父本和母本之間有多態性的PCR產物對應的SSR引物即為對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物。
3、根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述玉米自交系選育基礎材料為單交種，所述單交種的父本和母本未知，按照如下方法篩選對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物分別以S1世代群體單株的基因組DNA為模板，利用SSR引物進行PCR擴增，檢測PCR產物的多態性，在S1世代群體中能產生三種帶型記作帶型I、帶型II、帶型III，且產生帶型I、帶型II、帶型III的單株數目符合1∶2∶1的比例的SSR引物即為對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物。
4、根據權利要求2所述的方法，其特徵在於所述SSR引物位點純合的單株為S1世代群體或S2世代群體中與所述單交種的父本或母本的該SSR引物擴增產物帶型一致的單株。
5、根據權利要求3所述的方法，其特徵在於所述SSR引物位點純合的單株為S1世代群體或S2世代群體中與所述S1世代群體中的該SSR引物的帶型I或帶型III一致的單株。
6、根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特徵在於所述玉米自交系選育基礎材料為沈單16，步驟(1)中篩選到的對玉米自交系選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物為umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bn11149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022或bnlg165
7、根據權利要求6所述的方法，其特徵在於所述步驟(2)中所用的SSR引物為umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887，步驟(3)中所用的SSR引物為umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、uc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022和bnlg165。
8、根據權利要求1-7中任一所述的方法，其特徵在於所述S0代群體由20個單株組成；所述S1代群體由4100個單株組成；所述S2代群體由167個單株組成。
9、一種選育玉米自交系的方法，是將權利要求1-8中任一所述的方法獲得的候選玉米自交繫結合S2世代群體的農藝性狀和/或配合力和/或產量選育自交系。
全文摘要
本發明公開了一種輔助選育玉米自交系的方法及其應用。該輔助選育玉米自交系的方法，包括以下步驟(1)篩選對選育基礎材料S0代群體具有多態性的SSR引物至少20個；每對同源染色體上至少2個SSR引物，位於一對同源染色體上的每兩個SSR引物位點之間的遺傳距離至少50cM；(2)利用步驟(1)中的至少6個SSR引物，篩選S1群體中在所述至少6個SSR引物位點純合的單株；所述至少6個SSR引物位於至少6對同源染色體上；(3)利用步驟(1)中除去步驟(2)中所用的SSR引物之外的至少14個SSR引物，篩選S2世代群體，得到的在所述至少14個SSR引物位點純合的S2代單株，即為候選玉米自交系。可將該候選自交繫結合S2世代群體的農藝性狀和/或配合力和/或產量選育玉米自交系。
文檔編號A01H1/04GK1922982SQ20061011299
公開日2007年3月7日 申請日期2006年9月14日 優先權日2006年9月14日
發明者王建華, 王國英, 孫振耀 申請人:中國農業大學